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Developing Custom Chinese Hamster Ovary-host Cell Protein Assays using Acoustic Membrane Microparticle Technology

Custom assays for unique proteins are often limited to time consuming manual detection and quantitation techniques such as ELISA or Western blots due to ...

BioScale, Inc.

&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x5F00;&#x653E;&#x9605;&#x8BFB;&#x6846;&#x67B6; yfcX &#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x8868;&#x8FBE;&#x9700;&#x8981;&#x4E2D;&#x7B49;&#x94FE;&#x957F;&#x5EA6;&#x70F7; (PHA(MCL)) &#x4ECE;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; fadB &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E2D;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x5F00;&#x653E;&#x8BFB;&#x6846;&#x7F16;&#x7801;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;YfcX&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5927;&#x578B;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD; beta-oxidation &#x9176;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x91CD;&#x5927;&#x76F8;&#x4F3C;&#x3002;&#x4FEE;&#x6539;&#x5305;&#x542B; yfcX &#x706D;&#x6D3B;&#x7684;&#x526F;&#x672C;&#x5E76;&#x8868;&#x793A;&#x4E2D;&#x7B49;&#x94FE;&#x957F;&#x5EA6;&#x5408;&#x9176;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; fadB &#x83CC;&#x682A;&#x4E0D;&#x80FD;&#x5F62;&#x6210; PHA (MCL) s &#x5728;&#x573A;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x957F;&#x5927;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8D28;&#x7C92;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; yfcX FadB(-) YfcX(-) PhaC(+) &#x5E94;&#x53D8;&#x4E2D;&#x8FD8;&#x539F;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;YfcX &#x662F;&#x8BC1;&#x660E;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x9176;&#x8FDB;&#x884C;&#x5FAE;&#x7F16;&#x7801;&#x6C34;&#x5408;&#x9176;&#x548C;&#x8131;&#x6C22;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;YfcX &#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x4E0B;&#x6E38;&#x4ECE; yfcY&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801;&#x786B;&#x89E3;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x63D2;&#x5165;&#x5931;&#x6D3B;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5728; PHA &#x5355;&#x4F53;&#x5355;&#x4F4D;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; fadB &#x7A81;&#x53D8;&#x682A; yfcX &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x9700;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A; YfcX &#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4E2D;&#x7684;&#x81EA;&#x7136;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

YfcX &#x4F7F;&#x4E2D;&#x7B49;&#x94FE;&#x957F;&#x5EA6; poly(3-hydroxyalkanoate) &#x4ECE;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; fadB &#x4E2D;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;

Expression of Escherichia coli open reading frame yfcX is shown to be required for medium-chain-length polyhydroxyalkanoate (PHA(MCL)) formation from fatty acids in an E. coli fadB mutant. The open reading frame encodes a protein, YfcX, with significant similarity to the large subunit of multifunctional beta-oxidation enzymes. E. coli fadB strains modified to contain an inactivated copy of yfcX and to express a medium-chain-length synthase are unable to form PHA(MCL)s when grown in the presence of fatty acids. Plasmid-based expression of yfcX in the FadB(-) YfcX(-) PhaC(+) strain restores polymer formation. YfcX is shown to be a multifunctional enzyme that minimally encodes hydratase and dehydrogenase activities. The gene encoding YfcX is located downstream from yfcY, a gene encoding thiolase activity. Results of insertional inactivation studies and enzyme activity analyses suggest a role for yfcX in PHA monomer unit formation in recombinant E. coli fadB mutant strains. Further studies are required to determine the natural role of YfcX in the metabolism of E. coli.

YfcX enables medium-chain-length poly(3-hydroxyalkanoate) formation from fatty acids in recombinant Escherichia coli fadB strains.

L&#x26;#39;expression de Escherichia coli ouvrir le cadre de lecture yfcX est d&#xE9;montr&#xE9; &#xEA;tre n&#xE9;cessaire &#xE0; moyen longueur de cha&#xEE;ne polyhydroxyalcanoate (PHA (MCL)) la formation d&#x26;#39;acides gras dans un E. coli FADB mutant. Le cadre de lecture ouvert code pour une prot&#xE9;ine, YfcX, avec similarit&#xE9; significative &#xE0; la grande sous unit&#xE9; de multifonctionnels b&#xEA;ta-oxydation enzymes. FADB souches de E. coli modifi&#xE9;s pour contenir une copie de inactiv&#xE9; yfcX et d&#x26;#39;exprimer une synthase &#xE0; cha&#xEE;ne moyenne longueur sont incapables de former PHA (MCL) s lorsqu&#x26;#39;elle est cultiv&#xE9;e en pr&#xE9;sence d&#x26;#39;acides gras. &#xC0; base de plasmide d&#x26;#39;expression de yfcX dans le FADB (-) YfcX (-) de l&#x26;#39;ASPC (+) souche restaure la formation de polym&#xE8;re. YfcX se r&#xE9;v&#xE8;le &#xEA;tre une enzyme multifonctionnelle qui encode peu hydratase et les activit&#xE9;s d&#xE9;shydrog&#xE9;nase. Le YfcX g&#xE8;ne codant est situ&#xE9; en aval de yfcY, une activit&#xE9; thiolase g&#xE8;ne codant. Les r&#xE9;sultats des &#xE9;tudes d&#x26;#39;inactivation insertionnelle et des analyses d&#x26;#39;activit&#xE9; enzymatique sugg&#xE8;rent un r&#xF4;le pour yfcX dans la formation de PHA unit&#xE9; monom&#xE8;re en souches recombinantes de E. coli mutantes FADB. D&#x26;#39;autres &#xE9;tudes sont n&#xE9;cessaires pour d&#xE9;terminer le r&#xF4;le naturel de YfcX dans le m&#xE9;tabolisme de E. coli.

YfcX Permet &#xE0; moyen longueur de cha&#xEE;ne poly (3-hydroxyalcanoate) Formation d&#x26;#39;acides gras dans les souches recombinantes d&#x26;#39;Escherichia Coli FADB

YfcX erm&#xF6;glicht mittlerer Kettenl&#xE4;nge Poly (3-hydroxyalkanoat) Bildung von Fetts&#xE4;uren in rekombinanten Escherichia coli-St&#xE4;mme fadB.

Espressione di Escherichia coli open reading frame yfcX &egrave; indicato per essere richiesto per medio-lunghezza catena polyhydroxyalkanoate (formazione di PHA(MCL)) dagli acidi grassi in un mutante fadB e. coli. Open reading frame del codifica per una proteina, YfcX, con notevole somiglianza con la subunit&agrave; grande di enzimi multifunzionali metaboliti. E. coli fadB ceppi modificati per contenere una copia inattivata di yfcX e di esprimere una sintasi di media-lunghezza catena sono in grado di formare s PHA (MCL) Quando coltivate in presenza di acidi grassi. Espressione basata su plasmide di yfcX nel ceppo di FadB(-) YfcX(-) PhaC(+) Ripristina la formazione del polimero. YfcX &egrave; dimostrato di essere un enzima multifunzionale che minimamente codifica attivit&agrave; idratasi e deidrogenasi. Il gene che codifica per YfcX si trova a valle da yfcY, un gene codifica tiolasi attivit&agrave;. Risultati di studi di inattivazione inserzionale e analisi attivit&agrave; enzimatica suggeriscono un ruolo per yfcX nella formazione di unit&agrave; monomeriche PHA in e. coli ricombinante fadB ceppi mutanti. Sono necessari ulteriori studi per determinare il ruolo naturale di YfcX nel metabolismo di e. coli.

YfcX consente la formazione di media-lunghezza catena poly(3-hydroxyalkanoate) dagli acidi grassi in ceppi di fadB ricombinante Escherichia coli.

&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;yfcX&#x3092;&#x8AAD;&#x3093;&#x3067;&#x958B;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x9396;&#x9577;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30CE;&#x30A8;&#x30FC;&#x30C8;&#xFF08;PHA&#xFF08;MCL&#xFF09;&#xFF09;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;fadB&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x304B;&#x3089;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x5B98;&#x80FD;&#x6027;&#x3B2;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x5927;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;YfcX&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; yfcX&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x3092;&#x683C;&#x7D0D;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x4E2D;&#x9396;&#x9577;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x6539;&#x5909;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;fadB&#x682A;&#x306F;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x5897;&#x6B96;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;PHA&#xFF08;MCL&#xFF09;S&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; FadB&#x3067;yfcX&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#xFF08; - &#xFF09;YfcX&#xFF08; - &#xFF09;PhaC&#xFF08;+&#xFF09;&#x682A;&#x304C;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; YfcX&#x306F;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x30D2;&#x30C9;&#x30E9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x8131;&#x6C34;&#x7D20;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x9175;&#x7D20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;YfcX&#x306F;yfcY&#x3001;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30C1;&#x30AA;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x304B;&#x3089;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x633F;&#x5165;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x7814;&#x7A76;&#x3084;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;fadB&#x5909;&#x7570;&#x682A;&#x306E;PHA&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;yfcX&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306B;YfcX&#x306E;&#x81EA;&#x7136;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

YfcX&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;FadB&#x682A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x304B;&#x3089;&#x4E2D;&#x9396;&#x9577;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#xFF08;3  - &#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30CE;&#x30A8;&#x30FC;&#x30C8;&#xFF09;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;

&#xC624;&#xD508; &#xD504;&#xB808;&#xC784; Yfcx&#xB97C; &#xC77D;&#xACE0; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xC2DD; &#xC911;&#xAC04; &#xCCB4;&#xC778; &#xAE38;&#xC774; polyhydroxyalkanoate (&#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; fadB &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xBC29;&#xC0B0;&#xC5D0;&#xC11C; PHA(MCL)) &#xD615;&#xC131; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD574;&#xC57C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5F4;&#xB824;&#xC788;&#xB294; &#xB3C5;&#xC11C; &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; beta-oxidation &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD070; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xACFC; YfcX, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; fadB &#xBCC0;&#xC885; &#xC0AC; yfcX &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xC911;&#xAC04; &#xCCB4;&#xC778; &#xAE38;&#xC774; synthase &#xD45C;&#xD604; &#xC218;&#xC815; &#xC9C0;&#xBC29;&#xC0B0;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xC131;&#xC7A5; &#xB420; &#xB54C; PHA (MCL) s&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. YfcX FadB(-) YfcX(-) PhaC(+) &#xD53C;&#xB85C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB454; &#xC2DD; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xBCF5;&#xC6D0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. YfcX &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C; hydratase &#xBC0F; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. YfcX &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; yfcY, thiolase &#xD65C;&#xB3D9; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD558;&#xB958;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58;. Insertional &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC640; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; yfcX &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; fadB &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC5D0; PHA &#xB2E8;&#xB7C9;&#xCCB4; &#xB2E8;&#xC704; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;. &#xB354; &#xC790;&#xC138;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xAC00; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; Yfcx&#xC758; &#xC790;&#xC5F0;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Yfcx&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; Escherichia&#xC758; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; fadB &#xBCC0;&#xC885;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xBC29;&#xC0B0; &#xC911;&#xAC04; &#xCCB4;&#xC778; &#xAE38;&#xC774; poly(3-hydroxyalkanoate) &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Expresi&#xF3;n de Escherichia coli marco de lectura abierta yfcX se muestra que se requiere para polihidroxialcanoato de cadena media de longitud (PHA (LCM)) formaci&#xF3;n de &#xE1;cidos grasos en un mutante de E. coli fadB. El marco de lectura abierta codifica una prote&#xED;na, YfcX, con una importante similitud con la subunidad grande de multifuncionales beta-oxidaci&#xF3;n enzimas. E. coli fadB cepas modificadas para contener una copia inactivada de yfcX y expresar una sintasa de cadena media de longitud son incapaces de formar PHA (LCM) s cuando se cultivan en presencia de &#xE1;cidos grasos. El pl&#xE1;smido basado en la expresi&#xF3;n de yfcX en la FadB (-) YfcX (-) Phac cepa (+) restaura la formaci&#xF3;n de pol&#xED;mero. YfcX se demuestra que es una enzima multifuncional que codifica m&#xED;nimamente hidratasa y actividades deshidrogenasa. El YfcX gen que codifica se encuentra aguas abajo de yfcY, un gen que codifica la actividad tiolasa. Los resultados de estudios de inactivaci&#xF3;n de inserci&#xF3;n y an&#xE1;lisis de la actividad enzim&#xE1;tica sugieren un papel de yfcX en la formaci&#xF3;n de PHA unidad de mon&#xF3;mero en cepas de E. coli recombinantes fadB mutantes. Se requieren estudios adicionales para determinar el papel natural de YfcX en el metabolismo de E. coli.

Permite YfcX de cadena media de longitud de poli (3-hidroxialcanoato) Formaci&#xF3;n de &#xE1;cidos grasos en Escherichia coli recombinantes Cepas FadB

&#x805A;&#x7F9F;&#x57FA;&#x4E01;&#x9178;&#x916F; &#xFF08;PHB&#xFF09; &#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x6D89;&#x53CA;&#x5230;&#x7684;&#x786B;&#x89E3;&#x9176;&#x3001; &#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x548C;&#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6210;&#x9176;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x7B80;&#x5316;&#x6B64;&#x9014;&#x5F84;&#x57FA;&#x4E8E;&#x690D;&#x7269;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x7531;&#x968F;&#x673A;&#x7ED3;&#x624E;&#x8981;&#x521B;&#x5EFA;&#x5E27;&#x4E2D;&#x786B;&#x89E3;&#x9176;&#x548C;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x77ED;&#x82AF;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668; DNA &#x5E8F;&#x5217;&#x751F;&#x6210;&#x786B;&#x89E3;&#x9176;&#x548C;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x878D;&#x5408;&#x7684;&#x5E93;&#x3002;PHB &#x5F62;&#x6210;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x7B5B;&#x9009;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x878D;&#x5408;&#x6784;&#x9020;&#x3002;&#x6B64;&#x5C4F;&#x5E55;&#x786E;&#x5B9A;&#x5728;&#x5176;&#x4E2D;&#x786B;&#x89E3;&#x9176;&#x548C;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x901A;&#x8FC7; 26-&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x7535;&#x7194;&#x751F;&#x4EA7;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x878D;&#x5408;&#xFF0C;&#x6307;&#x5B9A; phaA-&#x5065;&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x4E24;&#x4E2A; homotetrameric &#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x57FA;&#x56E0;&#x878D;&#x5408;&#x3002;PhaA &#x5065;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x548C;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E86;&#x9075;&#x5B88;&#x9884;&#x671F;&#x5927;&#x5C0F;&#x7684;&#x897F;&#x65B9;&#x86CB;&#x767D;&#x5370;&#x8FF9;&#x6280;&#x672F;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x5C55;&#x793A;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x662F;&#x4E09;&#x500D;&#x548C;&#x4E5D;&#x500D;&#x5C0F;&#x4E8E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x5355;&#x72EC;&#x8868;&#x793A;&#x786B;&#x89E3;&#x9176;&#x548C;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x9176;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x7C97;&#x63D0;&#x53D6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x786B;&#x89E3;&#x9176;&#x548C;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x5F53;&#x9762;&#x5411;&#x8D28;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0E;&#x8D28;&#x4F53;&#x9488;&#x5BF9;&#x70F7; (PHA) &#x5408;&#x9176; coexpressed&#xFF0C;&#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#xFF0C;&#x6536;&#x76CA;&#x7387;&#x5927;&#x7EA6;&#x4E00;&#x534A; PHB &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x542F;&#x7528; PHB &#x5F62;&#x6210;&#x5F62;&#x6210;&#x690D;&#x7269;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x7684;&#x786B;&#x89E3;&#x9176;&#x3001; &#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x53CA;&#x5408;&#x9176;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8868;&#x793A;&#x7B80;&#x5316;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; PHB &#x5728;&#x690D;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#x3002;

&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x786B;&#x89E3;&#x9176;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x878D;&#x5408;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x805A;&#x7F9F;&#x57FA;&#x4E01;&#x9178;&#x916F;&#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x4E2D;&#x3002;

The production of polyhydroxybutyrate (PHB) involves a multigene pathway consisting of thiolase, reductase and synthase genes. In order to simplify this pathway for plant-based expression, a library of thiolase and reductase gene fusions was generated by randomly ligating a short core linker DNA sequence to create in-frame fusions between the thiolase and reductase genes. The resulting fusion constructs were screened for PHB formation in Escherichia coli. This screen identified a polymer-producing candidate in which the thiolase and reductase genes were fused via a 26-amino-acid linker. This gene fusion, designated phaA-phaB, represents an active gene fusion of two homotetrameric enzymes. Expression of phaA-phaB in E. coli and Arabidopsis yielded a fusion protein observed to be the expected size by Western blotting techniques. The fusion protein exhibited thiolase and reductase enzyme activities in crude extracts of recombinant E. coli that were three-fold and nine-fold less than those of the individually expressed thiolase and reductase enzymes, respectively. When targeted to the plastid, and coexpressed with a plastid-targeted polyhydroxyalkanoate (PHA) synthase, the fusion protein enabled PHB formation in Arabidopsis, yielding roughly half the PHB formed in plants expressing individual thiolase, reductase and synthase enzymes. This work represents a first step towards simplifying the expression of the PHB biosynthetic pathway in plants.

A novel thiolase-reductase gene fusion promotes the production of polyhydroxybutyrate in Arabidopsis.

La production d&#x26;#39;un polyhydroxybutyrate (PHB) comporte une voie multig&#xE9;nique constitu&#xE9; des g&#xE8;nes thiolase, la r&#xE9;ductase et synthase. Afin de simplifier cette voie pour l&#x26;#39;expression &#xE0; base de plantes, une biblioth&#xE8;que de thiolase et des fusions de g&#xE8;nes r&#xE9;ductase a &#xE9;t&#xE9; g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;e par hasard la ligature d&#x26;#39;une s&#xE9;quence de base &#xE0; court lieur d&#x26;#39;ADN pour cr&#xE9;er dans leur cadre, des fusions entre la thiolase et les g&#xE8;nes de r&#xE9;ductase. Les constructions de fusion r&#xE9;sultant ont &#xE9;t&#xE9; test&#xE9;s pour la formation de PHB dans Escherichia coli. Cet &#xE9;cran identifi&#xE9; un candidat polym&#xE8;re produisant dans lequel la thiolase et les g&#xE8;nes r&#xE9;ductase ont &#xE9;t&#xE9; fusionn&#xE9;es via un lieur 26-amino-acide. Ce g&#xE8;ne de fusion, d&#xE9;sign&#xE9; phaa-PHAB, repr&#xE9;sente un g&#xE8;ne de fusion active des deux enzymes homot&#xE9;tram&#xE9;rique. Expression de phaa-PHAB chez E. coli et d&#x26;#39;Arabidopsis a abouti &#xE0; une prot&#xE9;ine de fusion observ&#xE9; que la taille attendue par Western techniques de transfert. La prot&#xE9;ine de fusion pr&#xE9;sent&#xE9; les activit&#xE9;s enzymatiques et thiolase r&#xE9;ductase dans des extraits bruts de E. coli recombinant qui &#xE9;taient trois fois et neuf fois moins que ceux de la thiolase individuellement exprim&#xE9;es et les enzymes r&#xE9;ductase, respectivement. Lorsqu&#x26;#39;elles sont cibl&#xE9;es pour le plaste, et co-exprim&#xE9; avec un polyhydroxyalcanoate plaste cibl&#xE9;e (PHA) synthase, la prot&#xE9;ine de fusion a permis la formation de PHB chez Arabidopsis, ce qui donne &#xE0; peu pr&#xE8;s la moiti&#xE9; de la PHB form&#xE9; dans les plantes exprimant des enzymes individuels thiolase, r&#xE9;ductase et synthase. Ce travail repr&#xE9;sente une premi&#xE8;re &#xE9;tape vers la simplification de l&#x26;#39;expression de la voie de biosynth&#xE8;se de PHB dans les plantes.

Un nouveau g&#xE8;ne de fusion thiolase-r&#xE9;ductase favorise la production de polyhydroxybutyrate chez Arabidopsis

Die Produktion von Polyhydroxybutyrate (PHB) beinhaltet eine multigene Weg, bestehend aus Thiolase, Reduktase und Synthase Gene. Um diese Option f&uuml;r pflanzliche Ausdruck zu vereinfachen, wurde eine Bibliothek mit Thiolase und Reduktase-gen Fusionen durch Verbindung zuf&auml;llig eine kurze Kern Linker-DNA-Sequenz in Frame Fusionen zwischen den Thiolase und Reduktase-gen zu erstellen generiert. Die resultierende Verschmelzung Konstrukte wurden zum PHB-Formation in Escherichia coli &uuml;berpr&uuml;ft. Dieser Bildschirm identifiziert ein Polymer-produzierenden Kandidat, in denen die Gene Thiolase und Reduktase &uuml;ber einen 26-Aminos&auml;ure-Linker verschmolzen wurden. Diese gen-Fusion, benannten PhaA-PhaB, stellt eine aktive gen-Fusion von zwei Homotetrameric Enzyme. Ausdruck eines PhaA-PhaB in E. Coli und Arabidopsis hat ein Fusionsprotein beobachtet, um die erwartete Gr&ouml;&szlig;e werden von westlichen befleckenden Techniken ergeben. Das Schmelzverfahren Protein ausgestellt Thiolase und Reduktase Enzym-Aktivit&auml;ten in grobe Extrakte von rekombinanter E. Coli, die um das Dreifache und Neunfache kleiner als die der individuell exprimierten Thiolase und Reduktase Enzyme, bzw. waren. Wenn an die Plastiden gezielt und coexpressed mit einem Plastid ausgerichtete Polyhydroxyalkanoat (PHA)-Synthase, gr&uuml;ndete die Fusion Protein aktiviert PHB Bildung in Arabidopsis, woraus sich etwa die H&auml;lfte das PHB Pflanzen einzelne Thiolase, Reduktase und Synthase Enzyme zum Ausdruck zu bringen. Diese Arbeit stellt einen ersten Schritt zur Vereinfachung des Ausdrucks des PHB biosynthetischen Biosyntheseweges in Pflanzen.

Eine neuartige Thiolase-Reduktase-gen-Fusion f&ouml;rdert die Produktion von Polyhydroxybutters&auml;ure in Arabidopsis.

La produzione di poliidrossibutirrato (PHB) prevede un percorso multigene costituito da geni tiolasi, reduttasi e sintasi. Per semplificare questo percorso per espressione vegetale, una libreria di tiolasi e reduttasi fusioni del gene &egrave; stata generata da legare in modo casuale una sequenza di DNA breve nucleo del linker per creare nel telaio fusioni tra i geni tiolasi e reduttasi. Il risultante fusione costrutti sono stati proiettati per la formazione di PHB in Escherichia coli. Questo schermo identificato un candidato di produzione di polimero in cui i geni tiolasi e reduttasi sono state fuse tramite un linker 26-amminoacido. Questa fusione genica, designata phaA-phaB, rappresenta una fusione del gene attivo di due enzimi homotetrameric. Espressione di phaA-phaB in Arabidopsis ed e. coli ha reso una proteina di fusione osservata per essere la dimensione prevista da tecniche macchiantesi occidentali. La proteina di fusione esposto tiolasi reduttasi enzima in attivit&agrave; e greggi estratti di e. coli ricombinante che erano triplice e nine-fold inferiori a quelli di tiolasi individualmente espressa ed enzimi reduttasi, rispettivamente. Quando mirata del plastid e coespressi con una sintasi plastidio mirati polyhydroxyalkanoate (PHA), la formazione di PHB fusione proteina attivata in Arabidopsis, producendo circa la met&agrave; il PHB forma piante esprimendo singoli enzimi tiolasi, reduttasi e sintasi. Questo lavoro rappresenta un primo passo per semplificare l&#39;espressione del percorso biosintetico PHB in piante.

Una fusione del gene romanzo tiolasi-reduttasi promuove la produzione di poliidrossibutirrato in Arabidopsis.

&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30D6;&#x30C1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#xFF08;PHB&#xFF09;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30AA;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x30EC;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304B;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x591A;&#x91CD;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x690D;&#x7269;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x7C21;&#x7D20;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30C1;&#x30AA;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EC;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x878D;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306B;&#x30C1;&#x30AA;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EC;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x878D;&#x5408;&#x7269;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x77ED;&#x3044;&#x30B3;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;DNA&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x9023;&#x7D50;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x878D;&#x5408;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x3092;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;PHB&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30AA;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EC;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;26&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x878D;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x7523;&#x751F;&#x5019;&#x88DC;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; phaA-phaB&#x6307;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x878D;&#x5408;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;homotetrameric&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x878D;&#x5408;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;phaA-phaB&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x6280;&#x8853;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E88;&#x60F3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30AA;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x500B;&#x5225;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x30C1;&#x30AA;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EC;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;3&#x500D;&#x3001;9&#x500D;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x7C97;&#x62BD;&#x51FA;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306E;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C1;&#x30C9;&#x6A19;&#x7684;&#x30DD;&#x30EA;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30CE;&#x30A8;&#x30FC;&#x30C8;&#xFF08;PHA&#xFF09;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30C1;&#x30AA;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x30EC;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x690D;&#x7269;&#x306B;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D04;&#x534A;&#x5206;&#x306E;PHB&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;PHB&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x3067;&#x306E;PHB&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x7C21;&#x7D20;&#x5316;&#x3078;&#x306E;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B69;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x65B0;&#x898F;&#x30C1;&#x30AA;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;-&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x200B;&#x200B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x878D;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30D6;&#x30C1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;

Polyhydroxybutyrate (PHB) &#xC0DD;&#xC0B0; thiolase reductase&#xC640; synthase &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB85C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9C4; multigene &#xD1B5;&#xB85C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC2DD;&#xBB3C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC758; &#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;&#xC774; &#xD1B5;&#xB85C; &#xB2E8;&#xC21C;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; thiolase &#xBC0F; reductase &#xC720;&#xC804;&#xC790; fusions &#xB3C4;&#xC11C;&#xAD00; &#xC784;&#xC758;&#xB85C; thiolase&#xC640; reductase &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0AC;&#xC774; &#xD504;&#xB808;&#xC784; fusions &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xC9E7;&#xC740; &#xCF54;&#xC5B4; &#xB9C1;&#xCEE4; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; ligating&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xD4E8;&#xC804; &#xAD6C;&#xBB38; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; PHB &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C1;&#xC601; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD654;&#xBA74; thiolase&#xC640; reductase &#xC720;&#xC804;&#xC790; 26 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC0B0; &#xB9C1;&#xCEE4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC735;&#xD569; &#xB41C; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD6C4;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. PhaA-phaB, &#xC9C0;&#xC815; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC735;&#xD569;&#xC744;&#xC774; &#xB450; homotetrameric &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC735;&#xD569;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xBC0F; Arabidopsis phaA-Phab&#xC758; &#xC2DD; &#xBD80; &#xB7FD; &#xAE30;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC608;&#xC0C1; &#xB41C; &#xD06C;&#xAE30;&#xB85C; &#xAD00;&#xCC30; &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; &#xB098;&#xC654;&#xACE0;. &#xD4E8;&#xC804; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC804;&#xC2DC; &#xD588;&#xB358; &#xBC30; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xAC1C;&#xBCC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; thiolase reductase &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; nine-fold &#xBCF4;&#xB2E4; &#xAC01;&#xAC01; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xC6D0;&#xC720; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; thiolase reductase &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;. &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; plastid plastid &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; polyhydroxyalkanoate (PHA) synthase&#xC640; coexpressed &#xB54C; &#xC808;&#xBC18; PHB &#xC800;&#xC870;&#xD55C; Arabidopsis&#xC758; &#xD4E8;&#xC804; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; PHB &#xD615;&#xC131; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xAC1C;&#xBCC4; thiolase, reductase synthase &#xD6A8;&#xC18C; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xD615;&#xC131;. &#xC774; &#xC791;&#xD488; &#xC2DD;&#xBB3C; PHB &#xC0DD; &#xD569;&#xC131; &#xACBD;&#xB85C;&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xB2E8;&#xC21C;&#xD654; &#xD5A5;&#xD55C; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC18C;&#xC124; thiolase reductase &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC735;&#xD569; Arabidopsis&#xC758; polyhydroxybutyrate&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La producci&#xF3;n de polihidroxibutirato (PHB) consiste en una v&#xED;a que consiste en m&#xFA;ltiples genes de los genes tiolasa, reductasa y sintasa. Con el fin de simplificar esta v&#xED;a para la expresi&#xF3;n a base de plantas, una biblioteca de tiolasa y fusiones de genes reductasa fue generado por azar ligando un enlazador corto n&#xFA;cleo secuencia de ADN para crear en cuadro fusiones entre el tiolasa y los genes reductasa. Los constructos de fusi&#xF3;n resultantes se seleccionaron para la formaci&#xF3;n de PHB en Escherichia coli. Esta pantalla identificado un candidato pol&#xED;mero que produce en el cual se fusion&#xF3; la tiolasa y los genes reductasa a trav&#xE9;s de un enlazador 26-amino-&#xE1;cido. Esta fusi&#xF3;n de genes, designado phaa-Phab, representa una fusi&#xF3;n de genes activos de las dos enzimas homotetrameric. Expresi&#xF3;n de phaa-Phab en E. coli y Arabidopsis produjo una prote&#xED;na de fusi&#xF3;n observado que el tama&#xF1;o esperado por Western Blot t&#xE9;cnicas. La prote&#xED;na de fusi&#xF3;n exhiben actividades enzim&#xE1;ticas tiolasa y reductasa en extractos crudos de E. coli recombinante que eran tres veces y nueve veces-menos que los de la tiolasa individualmente expresadas y enzimas reductasa, respectivamente. Cuando se dirige a la plastidio, y coexpressed con un polihidroxialcanoato plastidio orientada (PHA) sintasa, la prote&#xED;na de fusi&#xF3;n permiti&#xF3; la formaci&#xF3;n de PHB en Arabidopsis, produciendo aproximadamente la mitad del PHB formado en plantas que expresan enzimas individuales tiolasa, reductasa y sintasa. Este trabajo representa un primer paso hacia la simplificaci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n de la ruta biosint&#xE9;tica de PHB en las plantas.

Una novela Tiolasa-reductasa de fusi&#xF3;n de genes favorece la producci&#xF3;n de polihidroxibutirato en Arabidopsis

&#x5BF9;&#x836F;&#x7269;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x836F;&#x6548;&#x53CD;&#x5E94;&#x901A;&#x5E38;&#x7528;&#x4E8E;&#x786E;&#x8BA4;&#x836F;&#x7269;&#x5BF9;&#x76EE;&#x6807;&#x751F;&#x7269;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x4ECE;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x5230;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x5316;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;&#x6700;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x91C7;&#x7528;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x68C0;&#x6D4B; &#xFF08;&#x81F3;&#x5C11;&#xFF09; &#x548C;&#x5728;&#x67D0;&#x4E9B;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5B9A;&#x91CF;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x9891;&#x7387;&#x8C03;&#x5236;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x4ECE; BioScale &#x79F0;&#x58F0;&#x5FAE;&#x578B;&#x78C1;&#x6027;&#x7C92;&#x5B50; &#xFF08;&#x4F69;&#xFF09; &#x68C0;&#x6D4B;&#xFF0C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x9014;&#x5F84;&#x6807;&#x5FD7;&#x88AB;&#x9009;&#x5B9A;&#x7684;&#x836F;&#x6548;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x4E0E; AlphaScreen &#x6216;&#x674E;&#x80BA;&#x5FC3;&#x75C5;&#x897F;&#x90E8;&#x6C61;&#x70B9;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x91C7;&#x7528;&#x4E86;&#x751F;&#x7269;&#x6807;&#x5FD7;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x548C;&#x808C;&#x9187;&#x78F7;&#x8102; 3-&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x836F;&#x6548;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x6E05;&#x695A;&#x663E;&#x793A; BioScale &#x6280;&#x672F;&#x662F;&#x6D4B;&#x91CF;&#x91CD;&#x7EC4;&#x6807;&#x51C6;&#x6216;&#x4ECE;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x57F9;&#x517B;&#x548C;&#x9F20;&#x6807;&#x5F02;&#x79CD;&#x79FB;&#x690D;&#x80BF;&#x7624;&#x88C2;&#x89E3;&#x6B65;&#x4E4B;&#x9065;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x7A33;&#x5065;&#x548C;&#x5FEB;&#x901F;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684; BioScale &#x5E73;&#x53F0;&#x7684;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x674E;&#x80BA;&#x5FC3;&#x75C5;&#x5370;&#x8FF9;&#x548C; AlphaScreen &#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;ViBE &#x751F;&#x7269;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x6D88;&#x9664;&#x4E86;&#x52B3;&#x52A8;&#x5BC6;&#x96C6;&#x578B;&#x7684;&#x5370;&#x8FF9;&#x5206;&#x6790;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x548C;&#x6CA1;&#x6709;&#x5149;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x5E72;&#x6270;&#x7269;&#x8D28;&#x6765;&#x81EA;&#x5F02;&#x79CD;&#x79FB;&#x690D;&#x80BF;&#x7624;&#x4E00;&#x822C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x4E0E; AlphaScreen &#x88C2;&#x89E3;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x58F0;&#x78C1;&#x5FAE;&#x7C92;&#x4E0A; ViBE &#x25C6; &#x4E24;&#x79CD;&#x836F;&#x6548;&#x5B66;&#x751F;&#x7269;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Pharmacodynamic responses to drug treatment are often used to confirm drug-on-target biological responses. Methods ranging from mass spectrometry to immunohistochemistry exist for such analyses. By far, the most extensively used methodologies employ antigen-specific antibodies for detection (at a minimum) and, in some cases, target quantitation as well. Using a novel frequency-modulating technology from BioScale called acoustic micro magnetic particle (AMMP) detection, two pathway biomarkers were chosen for pharmacodynamic analysis and compared with either AlphaScreen or LI-COR Western blot assays. For these studies, pharmacodynamic biomarkers for both proteasome and phosphoinositol 3-kinase inhibition were used. Our results show clearly that the BioScale technology is a robust and rapid method for measuring recombinant standards or endogenously derived proteins from both tissue culture and mouse xenograft tumor lysates. Moreover, the sensitivity obtained with the BioScale platform compares favorably with LI-COR Western blot and AlphaScreen technologies. Furthermore, the use of the ViBE Bioanalyzer eliminates the labor-intensive effort of Western blot analysis and is devoid of the optical and other endogenous interfering substances derived from lysates of xenograft tumors typically observed with AlphaScreen.

Analysis of two pharmacodynamic biomarkers using acoustic micro magnetic particles on the ViBE bioanalyzer.

R&#xE9;ponses pharmacodynamiques &#xE0; un traitement m&#xE9;dicamenteux sont souvent utilis&#xE9;s pour confirmer la drogue sur les cibles des r&#xE9;actions biologiques. M&#xE9;thodes allant de spectrom&#xE9;trie de masse pour l&#x26;#39;immunohistochimie existent pour de telles analyses. De loin, les m&#xE9;thodes les plus largement utilis&#xE9;es emploient antig&#xE8;ne-anticorps sp&#xE9;cifiques pour la d&#xE9;tection (au minimum) et, dans certains cas, la quantification cible. Utilisation d&#x26;#39;un roman de la fr&#xE9;quence de modulation de la technologie de micro-acoustique BioScale appel&#xE9; particule magn&#xE9;tique (PMMA) de d&#xE9;tection, deux biomarqueurs de la voie ont &#xE9;t&#xE9; choisis pour l&#x26;#39;analyse pharmacodynamique et par rapport aux deux AlphaScreen ou LI-COR tests Western blot. Pour ces &#xE9;tudes, les biomarqueurs pharmacodynamiques &#xE0; la fois pour le prot&#xE9;asome et phospho-3-kinase inhibition ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s. Nos r&#xE9;sultats montrent clairement que la technologie BioScale est une m&#xE9;thode robuste et rapide pour mesurer les normes recombinantes ou des prot&#xE9;ines d&#xE9;riv&#xE9;es de fa&#xE7;on endog&#xE8;ne par culture de tissus &#xE0; la fois et les lysats de x&#xE9;nogreffes de tumeurs de souris. En outre, la sensibilit&#xE9; obtenue avec la plate-forme BioScale se compare favorablement avec LI-COR Western blot et technologies AlphaScreen. En outre, l&#x26;#39;utilisation du Bioanalyzer ViBE &#xE9;limine l&#x26;#39;effort de main-d&#x26;#39;&#x153;uvre de l&#x26;#39;analyse Western blot et est d&#xE9;pourvue des optiques et d&#x26;#39;autres substances endog&#xE8;nes interf&#xE9;rentes d&#xE9;riv&#xE9;es &#xE0; partir de lysats de tumeurs de x&#xE9;nogreffe g&#xE9;n&#xE9;ralement observ&#xE9;s avec AlphaScreen.

L&#x26;#39;analyse des biomarqueurs pharmacodynamiques Deux micro-acoustique utilisant des particules magn&#xE9;tiques sur le Bioanalyzer ViBE

Pharmakodynamische Antworten auf medikament&ouml;se Behandlung werden h&auml;ufig, Droge-zielgerechte biologische Reaktionen zu best&auml;tigen. Es gibt Methoden, die von Massenspektrometrie bis hin zu Immunohistochemistry, f&uuml;r solche Analysen. Bei weitem die ausf&uuml;hrlichsten verwendeten Methoden besch&auml;ftigen Antigen-spezifische Antik&ouml;rper f&uuml;r die Erkennung (mindestens) und in einigen F&auml;llen, sowie Ziel-Quantisierung. Mit einer neuartige Frequenz-Modulation-Technologie von BioScale akustischen Mikro magnetische Partikel (AMMP) Erkennung aufgerufen, zwei-Weg-Biomarker wurden pharmakodynamische Analyse ausgew&auml;hlt und verglichen mit entweder AlphaScreen oder LI-COR Western Blot Assays. F&uuml;r diese Studien wurden pharmakodynamische Biomarker f&uuml;r Proteasom und Phosphoinositol 3-Kinase Hemmung verwendet. Unsere Ergebnisse zeigen deutlich, dass die BioScale-Technologie eine robuste und schnelle Methode zur Messung der rekombinanten Normen oder endogen abgeleiteten Proteine aus Gewebekultur und Maus Xenograft-Tumor Lysates ist. Die Empfindlichkeit, die mit der BioScale-Plattform vorne zudem mit LI-COR Western Blot und AlphaScreen Technologien. Dar&uuml;ber hinaus die Verwendung von der ViBE Bioanalyzer eliminiert die arbeitsintensive Anstrengung der Western-Blot-Analyse und ist frei von der optischen und andere endogenen St&ouml;rsubstanzen abgeleitet Lysates Xenograft-Tumoren in der Regel mit AlphaScreen beobachtet.

Analyse von zwei pharmakodynamische Biomarkern mit akustische magnetische Mikropartikeln auf dem ViBE Bioanalyzer.

Farmacodinamiche risposte al trattamento farmacologico sono spesso utilizzate per confermare le risposte biologiche droga sul bersaglio. Esistono metodi che vanno dalla spettrometria di massa di immunohistochemistry per tale analisi. Di gran lunga, le metodologie pi&ugrave; estesamente usate impiegano anticorpi antigene-specifiche per il rilevamento (al minimo) e, in alcuni casi, nonch&eacute; la quantificazione di destinazione. Utilizzando una tecnologia di modulazione di frequenza romanzo da BioScale chiamato rilevamento acustico micro particelle magnetiche (AMMP), due pathway biomarcatori furono scelti per l&#39;analisi farmacodinamiche e confrontati con AlphaScreen o LI-COR Western blot dosaggi. Per questi studi farmacodinamici biomarcatori per l&#39;inibizione della chinasi 3 sia del proteasoma e phosphoinositol sono stati utilizzati. I nostri risultati mostrano chiaramente che la tecnologia BioScale &egrave; un metodo affidabile e rapido per la misurazione standard ricombinante o proteine endogena derivate dalla coltura del tessuto e il mouse xenoinnesto lisati tumorali. Inoltre, la sensibilit&agrave; ottenuta con la piattaforma BioScale confronta favorevolmente con tecnologie AlphaScreen e LI-COR Western blot. Inoltre, l&#39;uso del Bioanalyzer ViBE elimina lo sforzo di analisi Western blot intensive ed &egrave; privo di ottica e altre sostanze interferenti endogeni derivato da lisati di tumori xenoinnesto tipicamente osservati con AlphaScreen.

Analisi di due biomarcatori farmacodinamici utilizzando acustici micro particelle magnetiche su bioanalyzer ViBE.

&#x85AC;&#x7269;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x85AC;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x85AC;&#x7269;&#x30AA;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x304B;&#x3089;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#x306B;&#x81F3;&#x308B;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x3067;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3082;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x691C;&#x51FA;&#x7528;&#x6297;&#x4F53;&#xFF08;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#xFF09;&#x3068;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; BioScale&#x304B;&#x3089;&#x65B0;&#x898F;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x5909;&#x8ABF;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;2&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x85AC;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9078;&#x3070;&#x308C;&#x3001;AlphaScreen&#x307E;&#x305F;&#x306F;LI-COR&#x30A6;&#x30A7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x97F3;&#x97FF;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x78C1;&#x6027;&#x7C92;&#x5B50;&#xFF08;AMMP&#xFF09;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;3  - &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x85AC;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;BioScale&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x7D44;&#x7E54;&#x57F9;&#x990A;&#x3068;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7570;&#x7A2E;&#x79FB;&#x690D;&#x816B;&#x760D;&#x6EB6;&#x89E3;&#x7269;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304B;&#x3089;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x6A19;&#x6E96;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5805;&#x7262;&#x304B;&#x3064;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x306F;&#x3063;&#x304D;&#x308A;&#x3068;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;BioScale&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x611F;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;LI-COR&#x3001;&#x30A6;&#x30A7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;AlphaScreen&#x30C6;&#x30AF;&#x30CE;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x3068;&#x597D;&#x610F;&#x7684;&#x306B;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30D6;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A2;&#x30CA;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B6;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A8;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x52B4;&#x50CD;&#x96C6;&#x7D04;&#x7684;&#x306A;&#x52AA;&#x529B;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3057;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;AlphaScreen&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7570;&#x7A2E;&#x79FB;&#x690D;&#x7247;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x6EB6;&#x89E3;&#x7269;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x59A8;&#x5BB3;&#x7269;&#x8CEA;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

ViBE&#x30D7;&#x30ED;&#x30C0;&#x30AF;&#x30C8;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A2;&#x30CA;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B6;&#x306E;&#x97F3;&#x97FF;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x78C1;&#x6027;&#x7C92;&#x5B50;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x4E8C;&#x85AC;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;

&#xC57D;&#xBB3C; &#xCE58;&#xB8CC; pharmacodynamic &#xC751;&#xB2F5; &#xB9C8;&#xC57D;&#xC5D0; &#xB300;&#xC0C1; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC751;&#xB2F5; &#xD655;&#xC778; &#xC790;&#xC8FC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xC220;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAE30;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xAC19;&#xC740; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC874;&#xC7AC;. &#xAC00;&#xC7A5; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860; (&#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;) &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC77C;&#xBD80;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0;, &#xB300;&#xC0C1; &#xC815;&#xB7C9; &#xBFD0;&#xB9CC;. &#xC74C;&#xD5A5; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xC790;&#xC131; &#xC785;&#xC790; (AMMP) &#xD0D0;&#xC9C0; &#xB77C;&#xB294; &#xAE30;&#xC220; Bioscale&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xBCC0;&#xC870; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC0DD;&#xCCB4; pharmacodynamic &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4; AlphaScreen &#xB610;&#xB294; &#xB9AC; &#xCF54;&#xB974; &#xC11C;&#xC591; &#xC624; &#xC810; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; pharmacodynamic biomarkers &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xBC0F; phosphoinositol 3-kinase &#xC800;&#xD574;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; BioScale &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD45C;&#xC900; &#xB610;&#xB294; &#xC870;&#xC9C1; &#xBB38;&#xD654; &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB1CC;&#xC885;&#xC591; &#xC885;&#xC591; lysates&#xC5D0;&#xC11C; endogenously &#xD30C;&#xC0DD;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xACE0; &#xBE60;&#xB978; &#xBC29;&#xBC95;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, BioScale &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5BB;&#xC740; &#xAC10;&#xB3C4; &#xB9AC; &#xCF54;&#xB974; &#xC11C;&#xC591; &#xC624; &#xC810; &#xBC0F; AlphaScreen &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xD638;&#xC758;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBE44;&#xAD50; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xBC14;&#xC774;&#xBE0C; Bioanalyzer&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC11C;&#xCABD; &#xC624; &#xC810; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xB178;&#xB3D9; &#xC9D1;&#xC57D;&#xC801;&#xC778; &#xB178;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558; &#xACE0; &#xAD11;&#xD559; &#xBC0F; &#xAE30;&#xD0C0; &#xC0DD; &#xAC04;&#xC12D; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xC5C6;&#xB294; &#xB1CC;&#xC885;&#xC591; &#xC885;&#xC591; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; Alphascreen&#xC640; &#xAD00;&#xCC30;&#xC758; lysates&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBC14;&#xC774;&#xBE0C; bioanalyzer&#xC5D0; &#xC5B4;&#xCFE0;&#xC2A4;&#xD2F1; &#xBBF8;&#xC138; &#xC790;&#xC11D; &#xC785;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB450; pharmacodynamic biomarkers&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;.

Respuestas farmacodin&#xE1;micas para el tratamiento de drogas se utilizan a menudo para confirmar la droga en el blanco las respuestas biol&#xF3;gicas. M&#xE9;todos que van desde la espectrometr&#xED;a de masas para inmunohistoqu&#xED;mica existen para este tipo de an&#xE1;lisis. Por el momento, las metodolog&#xED;as m&#xE1;s ampliamente utilizados emplean ant&#xED;genos espec&#xED;ficos de anticuerpos para la detecci&#xF3;n (como m&#xED;nimo) y, en algunos casos, la cuantificaci&#xF3;n de destino tambi&#xE9;n. Usando una nueva tecnolog&#xED;a de modulaci&#xF3;n de frecuencia a partir BioScale llamada ac&#xFA;stica micro part&#xED;culas magn&#xE9;ticas (Como parte del proyecto) la detecci&#xF3;n de dos biomarcadores de la v&#xED;a fueron escogidos para el an&#xE1;lisis de farmacodin&#xE1;mica y la comparaci&#xF3;n con cualquiera de AlphaScreen o LI-COR ensayos de Western blot. Para estos estudios, los biomarcadores farmacodin&#xE1;micos, tanto para proteasoma y fosfoinositol 3-quinasa inhibici&#xF3;n se utilizaron. Nuestros resultados muestran claramente que la tecnolog&#xED;a BioScale es un m&#xE9;todo fiable y r&#xE1;pida para medir los est&#xE1;ndares recombinantes o end&#xF3;genamente prote&#xED;nas derivadas de cultivo de tejidos tanto y lisados &#x200B;&#x200B;de rat&#xF3;n xenoinjertos tumorales. Adem&#xE1;s, la sensibilidad obtenida con la plataforma BioScale se compara favorablemente con LI-COR Western blot y tecnolog&#xED;as AlphaScreen. Adem&#xE1;s, el uso de la Bioanalyzer ViBE elimina el esfuerzo de trabajo intensivo de Western blot y est&#xE1; desprovisto de las &#xF3;pticas y otras sustancias end&#xF3;genas interferentes derivados a partir de lisados &#x200B;&#x200B;de xenoinjertos de tumores t&#xED;picamente observados con AlphaScreen.

Lara Madison

Biomarker Division

BioScale, Inc.

Developing Custom Chinese Hamster Ovary-host Cell Protein Assays using Acoustic Membrane Microparticle Technology