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Closed System Cell Culture Protocol Using HYPERStack Vessels with Gas Permeable Material Technology

Large volume adherent cell culture is currently standardized on stacked plate cell growth products when microcarrier beads are not an optimal choice.   ...

Corning Life Science

&#x7334;&#x75C5;&#x6BD2; 40 &#xFF08;SV40&#xFF09; &#x4E3A;&#x771F;&#x6838; DNA &#x590D;&#x5236;&#xFF0C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5927; T &#x6297;&#x539F; &#xFF08;&#x6807;&#x7B7E;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5C06;&#x5C01;&#x9001;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6765;&#x590D;&#x5236;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x6A21;&#x578B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;SV40 &#x590D;&#x5236;&#x9700;&#x8981;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E0E;&#x4E3B;&#x673A;&#x5355;&#x94FE; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x590D;&#x5236;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;hRPA&#xFF09; &#x8FDB;&#x884C;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;HRPA32 &#x4E9A;&#x57FA; (RPA32C) &#x7684; C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x4FBF;&#x4E8E;&#x542F;&#x52A8;&#x590D;&#x5236;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#x4E0D;&#x77E5;&#x9053;&#x5B83;&#x662F;&#x5426;&#x4E0E;&#x6807;&#x8BB0;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x4EB2;&#x548C;&#x5C42;&#x6790;&#x548C;&#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x663E;&#x793A;&#x7269;&#x7406;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; hRPA32C &#x548C;&#x6807;&#x8BB0;&#x539F;&#x59CB; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x51B3;&#x5FC3;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x7136;&#x540E;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x88AB;&#x4E3A;&#x4E86;&#x626D;&#x8F6C;&#x9020;&#x6210;&#x5927;&#x5E45;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4EB2;&#x548C;&#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#xFF0C;&#x6536;&#x8D39;&#x3002;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x5F15;&#x5165;&#x5B8C;&#x597D; hRPA &#x53D7;&#x635F;&#x542F;&#x52A8;&#x590D;&#x5236;&#x548C; primosome &#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5177;&#x6709;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5927;&#x4F1A;&#x548C; SV40 replisome &#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;

HRPA32 C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;--&#x7334;&#x75C5;&#x6BD2; 40 replisome &#x4ECB;&#x5BFC;&#x5927;&#x4F1A;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;

Simian virus 40 (SV40) provides a model system for the study of eukaryotic DNA replication, in which the viral protein, large T antigen (Tag), marshals human proteins to replicate the viral minichromosome. SV40 replication requires interaction of Tag with the host single-stranded DNA-binding protein, replication protein A (hRPA). The C-terminal domain of the hRPA32 subunit (RPA32C) facilitates initiation of replication, but whether it interacts with Tag is not known. Affinity chromatography and NMR revealed physical interaction between hRPA32C and the Tag origin DNA-binding domain, and a structural model of the complex was determined. Point mutations were then designed to reverse charges in the binding sites, resulting in substantially reduced binding affinity. Corresponding mutations introduced into intact hRPA impaired initiation of replication and primosome activity, implying that this interaction has a critical role in assembly and progression of the SV40 replisome.

Insights into hRPA32 C-terminal domain--mediated assembly of the simian virus 40 replisome.

Le virus simien 40 (SV40) fournit un syst&egrave;me mod&egrave;le pour l&#39;&eacute;tude de la r&eacute;plication de l&#39;ADN eucaryote, dans lequel la prot&eacute;ine virale, l&#39;antig&egrave;ne T grand (Tag), marshale des prot&eacute;ines humaines pour r&eacute;pliquer le minichromosome viral. R&eacute;plication de SV40 requiert l&#39;intervention de balise avec la prot&eacute;ine de liaison &agrave; l&#39;ADN h&ocirc;te simple brin, prot&eacute;ine de r&eacute;plication un (hRPA). Le domaine C-terminal de la sous-unit&eacute; de hRPA32 (RPA32C) facilite l&#39;initiation de la r&eacute;plication, mais si elle interagit avec la balise n&#39;est pas connu. Chromatographie d&#39;affinit&eacute; et la RMN a r&eacute;v&eacute;l&eacute; une interaction physique entre hRPA32C et le domaine de liaison &agrave; l&#39;ADN d&#39;origine Tag, et un mod&egrave;le structural du complexe a &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;. Mutations ponctuelles ont &eacute;t&eacute; con&ccedil;ues puis d&#39;inverser les charges dans les sites de liaison, r&eacute;sultant en affinit&eacute; consid&eacute;rablement r&eacute;duit. Correspondantes mutations introduites dans hRPA intact avec facult&eacute;s affaiblies initiation de l&#39;activit&eacute; de r&eacute;plication et primosome, ce qui implique que cette interaction a un r&ocirc;le essentiel dans l&#39;Assembl&eacute;e et de la progression de la replisome de SV40.

Aper&ccedil;u le domaine C-terminal de hRPA32--m&eacute;di&eacute;e par l&#39;Assembl&eacute;e de le replisome le virus simien 40.

Einblicke in hRPA32 C-terminale Dom&#xE4;ne - vermittelte Montage des Simian Virus 40 replisome.

Simian virus 40 (SV40) fornisce un sistema modello per lo studio della replicazione del DNA negli eucarioti, in cui la proteina virale, antigene T grande (Tag), esegue il marshalling di proteine umane per replicare il minichromosome virale. La replica di SV40 richiede l&#39;interazione del Tag con l&#39;host single-stranded DNA-binding protein, replication protein A (hRPA). Il dominio C-terminale della subunit&agrave; hRPA32 (RPA32C) facilita l&#39;innesco di replica, ma non &egrave; noto se interagisce con etichetta. Cromatografia di affinit&agrave; e NMR ha rivelato interazione fisica tra hRPA32C e l&#39;etichetta origine DNA-binding domain, e un modello strutturale del complesso &egrave; stato determinato. Mutazioni puntiformi sono state progettate quindi per invertire le accuse in siti di legame, con conseguente affinit&agrave; di legame sostanzialmente ridotto. Corrispondente mutazioni introdotte hRPA intatto con problemi di iniziazione dell&#39;attivit&agrave; di replica e primosome, che implica che questa interazione ha un ruolo critico nell&#39;assembly e progressione di replisome il SV40.

Intuizioni nel dominio C-terminale di hRPA32 - mediata Assemblea del replisome virus simian 40.

&#x30B7;&#x30DF;&#x30A2;&#x30F3; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; 40 (SV40) &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E; minichromosome &#x3092;&#x8907;&#x88FD;&#x3059;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;&#x5927;&#x304D;&#x306A; T &#x6297;&#x539F; (&#x30BF;&#x30B0;) &#x3092;&#x30DE;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E3; &#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E; DNA &#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SV40 &#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8907;&#x88FD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (hRPA) &#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x4E00;&#x672C;&#x9396; DNA &#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x30BF;&#x30B0;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;HRPA32 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; (RPA32C) &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x30BF;&#x30B0;&#x3067;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x304C;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB; &#x30C6;&#x30A3;&#x30FC; &#x30FB; &#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3068; NMR hRPA32C &#x3068;&#x30BF;&#x30B0;&#x8D77;&#x6E90;&#x306E; DNA &#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x70B9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6E1B;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D50;&#x5408;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x6599;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x9006;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E; hRPA &#x306B;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3068; SV40 replisome &#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073; primosome &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x969C;&#x5BB3;&#x3002;

HRPA32 C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#xFF0D; &#x30B7;&#x30DF;&#x30A2;&#x30F3; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; 40 replisome &#x306E;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3002;

&#xC720;&#xC778;&#xC6D0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (SV40) 40 &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC740; T &#xB300;&#xD615; (&#xD0DC;&#xADF8;), &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; minichromosome &#xBCF5;&#xC81C; &#xC778;&#xAC04; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xB9C8;&#xC0EC;&#xB9C1;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC9C4; &#xD575; DNA &#xBCF5;&#xC81C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. SV40 &#xBCF5;&#xC81C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; DNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xBCF5;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (hRPA)&#xC640; &#xD0DC;&#xADF8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC774; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. HRPA32 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; (RPA32C)&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xAC1C;&#xC2DC;&#xB97C; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xD0DC;&#xADF8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xBD80;. &#xCE5C;&#xD654;&#xC131; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; &#xBC0F; NMR &#xACF5;&#xAC1C; Hrpa32c&#xC640; &#xD0DC;&#xADF8; &#xC6D0;&#xBCF8; DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAC04;&#xC758; &#xC2E4;&#xC81C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB2E4;&#xC74C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBE44;&#xC6A9;&#xC774; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xBC18;&#xC804; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD574;&#xB2F9; &#xBCC0;&#xC774; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; Hrpa&#xC5D0; &#xC7A5;&#xC560;&#xC778;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; &#xC870;&#xB9BD;&#xACFC; SV40 replisome&#xC758; &#xC9C4;&#xD589;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC554;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0;, &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; primosome &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xAC1C;&#xC2DC;.

HRPA32 C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;-&#xC720;&#xC778;&#xC6D0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; 40 replisome&#xC758; &#xC911;&#xC7AC; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;.

Simian virus 40 (SV40) proporciona un sistema modelo para el estudio de la replicaci&oacute;n del ADN eucariota, en el cual la prote&iacute;na viral, el ant&iacute;geno T grande (etiqueta), mariscales prote&iacute;nas humanas para replicar la minichromosome viral. Replicaci&oacute;n de SV40 requiere la interacci&oacute;n de la etiqueta con la prote&iacute;na de uni&oacute;n a ADN monocatenario anfitri&oacute;n, prote&iacute;na de replicaci&oacute;n una (hRPA). El dominio c-terminal de la subunidad hRPA32 (RPA32C) facilita la iniciaci&oacute;n de la replicaci&oacute;n, pero no se sabe si interact&uacute;a con etiqueta. Cromatograf&iacute;a de afinidad y RMN revelaron interacci&oacute;n f&iacute;sica entre hRPA32C y el dominio de uni&oacute;n al ADN de origen de etiqueta, y se determin&oacute; un modelo estructural del complejo. Posteriormente, se dise&ntilde;aron mutaciones puntuales para revertir cargos en los sitios de Uni&oacute;n, dando por resultado la afinidad sustancialmente reducido. Mutaciones correspondientes introducidas hRPA intacto deterioraron Inicio de la actividad de replicaci&oacute;n y primosome, lo que implica que esta interacci&oacute;n tiene un papel fundamental en la Asamblea y la progresi&oacute;n del replisoma SV40.

Informaci&oacute;n sobre el dominio c-terminal de hRPA32--Asamblea mediada del replisoma simian virus 40.

&#x6240;&#x6709;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x4FEE;&#x590D;&#x548C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x5904;&#x7406;&#x7684; DNA &#x590D;&#x5236;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x5355;&#x94FE; DNA &#xFF08;ssDNA&#xFF09; &#x7684;&#x53C2;&#x4E0E;-&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62; ssDNA nucleolytic &#x635F;&#x574F;&#xFF0C;&#x9632;&#x6B62;&#x53D1;&#x5939;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x5757; DNA &#x9000;&#x706B;&#x5904;&#x7406;&#x9014;&#x5F84;&#x6210;&#x529F;&#x5B8C;&#x6210;&#x4E4B;&#x524D;&#x3002;&#x8BB8;&#x591A; ssDNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6; DNA &#x52A0;&#x5DE5;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7269;&#x7406;&#x4E0A;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0A;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4EA4;&#x4E92;&#x662F;&#x601D;&#x8003;&#x6682;&#x65F6;&#x8BA2;&#x8D2D;&#x5E76;&#x6307;&#x5BFC; &#39;&#x8D38;&#x6613;&#x7684;&#x5730;&#x65B9;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x5DE1;&#x6E38; ssDNA&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A;&#x624B;-&#x5173;&#xFF0C;&#x968F;&#x7740;&#x52A0;&#x5DE5;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x8FDB;&#x884C;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x8FD9;&#x624B;&#x5173;&#x95ED;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x539F;&#x7406;&#x4ECD;&#x7136;&#x77E5;&#x4E4B;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x5B88;&#x6052;&#x771F;&#x6838; ssDNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5236;&#x86CB;&#x767D; A (RPA) &#x7684;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53EF;&#x80FD;&#x8D38;&#x6613;&#x4E0A; ssDNA &#x7684;&#x5730;&#x65B9;&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; RPA &#x548C;&#x8C03;&#x89E3;&#x6539;&#x53D8;&#x7684; RPA ssDNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x65B0;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x8FD9;&#x7BC7;&#x6587;&#x7AE0;&#x5BA1;&#x67E5;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; RPA&#x3001; &#x603B;&#x7ED3;&#x4E86;&#x8FD1;&#x5E74;&#x6765;&#x7814;&#x7A76;&#x7684; RPA DNA &#x590D;&#x5236;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6; DNA &#x5904;&#x7406;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x548C;&#x7231;&#x56FD;&#x519B;&#x5728;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x86CB;&#x767D;&#x624B;&#x8D77;&#x98DE;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E00;&#x822C;&#x6027;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;

&#x590D;&#x5236;&#x86CB;&#x767D; A (RPA) &#x529F;&#x80FD;&#x7684; DNA &#x52A0;&#x5DE5;&#x8DEF;&#x5F84;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

Processing of DNA in replication, repair and recombination pathways in cells of all organisms requires the participation of at least one major single-stranded DNA (ssDNA)-binding protein. This protein protects ssDNA from nucleolytic damage, prevents hairpin formation and blocks DNA reannealing until the processing pathway is successfully completed. Many ssDNA-binding proteins interact physically and functionally with a variety of other DNA processing proteins. These interactions are thought to temporally order and guide the parade of proteins that 'trade places' on the ssDNA, a model known as 'hand-off', as the processing pathway progresses. How this hand-off mechanism works remains poorly understood. Recent studies of the conserved eukaryotic ssDNA-binding protein replication protein A (RPA) suggest a novel mechanism by which proteins may trade places on ssDNA by binding to RPA and mediating conformation changes that alter the ssDNA-binding properties of RPA. This article reviews the structure and function of RPA, summarizes recent studies of RPA in DNA replication and other DNA processing pathways, and proposes a general model for the role of RPA in protein-mediated hand-off.

A dynamic model for replication protein A (RPA) function in DNA processing pathways.

Transformation de l&#39;ADN en r&eacute;plication, voies de r&eacute;paration et de recombinaison dans les cellules de tous les organismes n&eacute;cessite la participation au moins un majeur simple brin ADN (ADN simple brin)-binding protein. Cette prot&eacute;ine prot&egrave;ge ADNsb des dommages nucl&eacute;olytiques, emp&ecirc;che la formation de l&#39;&eacute;pingle &agrave; cheveux et blocs ADN reannealing jusqu&#39;&agrave; ce que la voie de la transformation est effectu&eacute;e avec succ&egrave;s. Nombreuses prot&eacute;ines liant l&#39;ADN simple brin interagissent physiquement et fonctionnellement avec une vari&eacute;t&eacute; d&#39;autres prot&eacute;ines de la transformation de l&#39;ADN. Ces interactions sont consid&eacute;r&eacute;es comme temporellement commander et guider le d&eacute;fil&eacute; des prot&eacute;ines qui &laquo; lieux de libre-&eacute;change &raquo; sur l&#39;ADN simple brin, un mod&egrave;le appel&eacute; &laquo; hand-off &raquo;, en cours de traitement en voie. Le fonctionnement de ce m&eacute;canisme de transfert reste mal comprise. Des &eacute;tudes r&eacute;centes de la prot&eacute;ine de r&eacute;plication conserv&eacute;e eucaryotes ssDNA-binding protein A (RPA) sugg&egrave;rent un nouveau m&eacute;canisme par lequel les prot&eacute;ines peuvent r&eacute;aliser d&#39;op&eacute;rations places sur l&#39;ADN simple brin en se liant &agrave; l&#39;APR et de m&eacute;diation des changements de conformation qui modifient les propri&eacute;t&eacute;s de liaison ADN simple brin de l&#39;arm&eacute;e patriotique rwandaise. Cet article examine la structure et le fonctionnement de l&#39;arm&eacute;e patriotique rwandaise, r&eacute;sume les &eacute;tudes r&eacute;centes de l&#39;arm&eacute;e patriotique rwandaise dans la r&eacute;plication de l&#39;ADN et autres voies de transformation de l&#39;ADN et propose un mod&egrave;le g&eacute;n&eacute;ral pour le r&ocirc;le de l&#39;arm&eacute;e patriotique rwandaise dans la prot&eacute;ine induite par la main-off.

Un mod&egrave;le dynamique pour la prot&eacute;ine de r&eacute;plication fonction A (APR) dans les voies de transformation de l&#39;ADN.

Verarbeitung von DNA Replikation, Reparatur und Rekombination Bahnen in Zellen aller Organismen erfordert die Beteiligung mindestens einen gro&szlig;en einzelstr&auml;ngige DNA (SsDNA)-verbindliches Protein. Dieses Protein SsDNA vor Nucleolytic Besch&auml;digungen sch&uuml;tzt, verhindert Haarnadel Bildung und Bl&ouml;cke DNA reannealing, bis die Verarbeitung-Pathway erfolgreich abgeschlossen ist. Viele SsDNA-bindene Proteine interagieren physisch und funktionell mit einer Vielzahl von anderen DNA-Verarbeitung-Proteinen. Diese Interaktionen werden gedacht, um zeitlich bestellen und die Parade der Proteine, die &#39;Orte handeln&#39; zu f&uuml;hren, auf die SsDNA, ein Modell, bekannt als &quot;Hand-off&quot;, wie die Verarbeitung Weg weiterkommt. Wie funktioniert dieser Mechanismus &Uuml;bergabe bleibt weitgehend unverstanden. J&uuml;ngste Studien des Proteins Replikation konservierten eukaryotischen SsDNA-verbindliches Protein A (RPA) schlagen vor, einen neuen Mechanismus, mit dem Proteine Orte auf SsDNA handeln k&ouml;nnen durch Bindung an RPA und Vermittlung Konformation &Auml;nderungen, die die SsDNA-Bindungseigenschaften des RPA &auml;ndern. In diesem Artikel &Uuml;berblick &uuml;ber die Struktur und Funktion der RPA und fasst aktuelle Studien der RPA DNA-Replikation und anderen DNA-Verarbeitung-Wege schl&auml;gt ein allgemeines Modell f&uuml;r die Rolle des RPA in Protein-vermittelte Hand-off.

Ein dynamisches Modell f&uuml;r Replikation Protein A (RPA) Funktion in DNA Verarbeitung Wege.

Elaborazione del DNA in replicazione, riparazione e ricombinazione percorsi nelle cellule di tutti gli organismi richiede la partecipazione di almeno un importante single-stranded DNA (ssDNA)-binding protein. Questa proteina protegge ssDNA dai danni nucleolytic, impedisce la formazione di tornanti e blocchi del DNA reannealing fino a quando &egrave; completato con successo il percorso di elaborazione. Molti ssDNA-binding proteins interagire fisicamente e funzionalmente con una variet&agrave; di altre proteine elaborazione del DNA. Queste interazioni sono pensate temporaneamente ordinare e guida la sfilata delle proteine che &#39;commercio posti&#39; su ssDNA, un modello noto come &#39;hand-off&#39;, con il progredire del percorso di elaborazione. Come funziona questo meccanismo hand-off rimane scarsamente comprensibile. Recenti studi della proteina replica conservata negli eucarioti ssDNA-binding protein A (RPA) suggeriscono un romanzo meccanismo mediante il quale le proteine possono commerciare posti su ssDNA associando a RPA e cambiamenti di conformazione che alterano le propriet&agrave; di ssDNA binding di RPA di mediazione. Questo articolo cliente la struttura e la funzione della RPA, riassume i recenti studi di RPA nella replicazione del DNA e altri percorsi di elaborazione del DNA e propone un modello generale per il ruolo di RPA nella proteina-mediata hand-off.

Un modello dinamico per replication protein funzione A (RPA) in percorsi di elaborazione del DNA.

&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 1 &#x3064;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x4E00;&#x672C;&#x9396; DNA &#xFF08;ssDNA&#xFF09; &#x306E;&#x53C2;&#x52A0;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x4FEE;&#x7406;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x518D;&#x7D50;&#x5408;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; DNA &#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x51E6;&#x7406;&#x3001;-&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F; ssDNA &#x4FEE;&#x98FE;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x30C0;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x304B;&#x3089;&#x5B88;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x51E6;&#x7406;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x5B8C;&#x4E86;&#x3059;&#x308B;&#x307E;&#x3067;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF; DNA reannealing &#x3092;&#x9632;&#x304E;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306E; ssDNA &#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x4ED6;&#x306E; DNA &#x51E6;&#x7406;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F; ssDNA&#x3001;&#39; &#x624B;-off&#39;&#x3001;&#x51E6;&#x7406;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;&#x9032;&#x3080;&#x306B;&#x3064;&#x308C;&#x3066;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306B;&#x6CE8;&#x6587;&#x3057;&#x3001;&#39;&#x5834;&#x6240; &#39;&#x3092;&#x8CBF;&#x6613;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x5C0E;&#x304F;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30CF;&#x30F3;&#x30C9;&#x30AA;&#x30D5;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x3057;&#x304F;&#x307F;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269; ssDNA &#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x88FD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; A (RPA) RPA &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x3001;RPA &#x306E; ssDNA &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C; ssDNA &#x4E0A;&#x5834;&#x6240;&#x3092;&#x53D6;&#x5F15;&#x304C;&#x65B0;&#x898F;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8CC7;&#x6599;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E; RPA &#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x3001;RPA DNA &#x8907;&#x88FD;&#x3068;&#x4ED6; DNA &#x51E6;&#x7406;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3001;RPA &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30CF;&#x30F3;&#x30C9;&#x30AA;&#x30D5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8907;&#x88FD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; A (RPA) &#x95A2;&#x6570; DNA &#x51E6;&#x7406;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3002;

DNA&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xCC98;&#xB9AC;, &#xC218;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xACBD;&#xB85C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD558;&#xB098; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; DNA (ssDNA)&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC;&#xAC00; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;. &#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; ssDNA nucleolytic &#xC190;&#xC0C1; &#xC73C;&#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xBCF4;&#xD638;, &#xBA38;&#xB9AC; &#xD540; &#xD615;&#xC131;&#xACFC; &#xBE14;&#xB85D; DNA reannealing &#xCC98;&#xB9AC; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC644;&#xB8CC; &#xB420; &#xB54C;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9CE;&#xC740; ssDNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E4;&#xB978; DNA &#xCC98;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC721;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; ssDNA &#39; &#xC190;-off, &#xCC98;&#xB9AC; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC9C4;&#xD589; &#xB418;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC8FC;&#xBB38; &#xD558; &#xACE0; &#39;&#xBB34;&#xC5ED; &#xC7A5;&#xC18C;&#39; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD37C;&#xB808;&#xC774;&#xB4DC; &#xAC00;&#xC774;&#xB4DC; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD578;&#xB4DC; &#xC624;&#xD504; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC774; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC774;&#xD574; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC9C4; &#xD575; ssDNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; A (RPA)&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; RPA&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; RPA ssDNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xB294; &#xB098; &#xB780; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558; &#xC5EC; Ssdna&#xC5D0; &#xC7A5;&#xC18C;&#xB97C; &#xBB34;&#xC5ED; &#xC218; &#xC18C;&#xC124; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC81C;&#xC548;. &#xC774; &#xBB38;&#xC11C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; RPA&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xAC80;&#xD1A0; &#xD558; &#xACE0; DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC640; &#xB2E4;&#xB978; DNA &#xCC98;&#xB9AC; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; RPA&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC694;&#xC57D; RPA &#xC5ED;&#xD560; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC911;&#xC7AC; &#xD578;&#xB4DC;-&#xC624;&#xD504;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC77C;&#xBC18; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBCF5;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; DNA &#xCC98;&#xB9AC; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; A (RPA) &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3D9;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378;.

Tratamiento de ADN en la replicaci&oacute;n, reparaci&oacute;n y recombinaci&oacute;n de v&iacute;as en las c&eacute;lulas de todos los organismos requiere la participaci&oacute;n de al menos un importante monocatenario ADN (ssDNA)-binding protein. Esta prote&iacute;na protege ssDNA da&ntilde;en nucleolytic, previene la formaci&oacute;n de la horquilla y bloques reannealing de ADN hasta que finalice con &eacute;xito el camino de la transformaci&oacute;n. Muchas prote&iacute;nas ssDNA interact&uacute;an f&iacute;sicamente y funcionalmente con una variedad de otras prote&iacute;nas de procesamiento del ADN. Estas interacciones son probablemente temporal ordenar y dirigir el desfile de prote&iacute;nas que el &#39;comercio lugares&#39; en el ssDNA, un modelo conocido como &#39;hand-off&#39;, conforme avanza la v&iacute;a de procesamiento. &iquest;C&oacute;mo funciona este mecanismo entregue sigue siendo mal entendida. Estudios recientes de la prote&iacute;na de replicaci&oacute;n conservado eucariotas ssDNA prote&iacute;na A (RPA) sugieren un nuevo mecanismo por el cual prote&iacute;nas pueden comercio lugares ssDNA por atar a RPA y mediar cambios de conformaci&oacute;n que alteran las propiedades de enlace de ssDNA de RPA. Este art&iacute;culo repasa la estructura y funci&oacute;n de RPA, resume los estudios recientes de RPA en la replicaci&oacute;n del ADN y otras v&iacute;as de procesamiento del ADN y propone un modelo general para el papel de RPA en mediada por prote&iacute;nas hand-off.

Un modelo din&aacute;mico para la prote&iacute;na de replicaci&oacute;n funci&oacute;n A (RPA) en v&iacute;as de transformaci&oacute;n de ADN.

DNA &#x635F;&#x4F24;&#x540E;&#x590D;&#x5236;&#xFF0C;&#x6545; S &#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x68C0;&#x67E5;&#x70B9;&#x3002;ATR (&#x5171;&#x6D4E;&#x5931;&#x8C03;&#x6BDB;&#x7EC6;&#x8840;&#x7BA1;&#x6269;&#x5F20;&#x75C7;&#x7A81;&#x53D8;&#x548C; Rad3-&#x6709;&#x5173;&#x7684;) &#x5177;&#x4F53;&#x53C2;&#x4E0E;&#x590D;&#x5236;&#x5B50;&#x53D1;&#x8D77;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x65F6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4EE3;&#x7406;&#x6863;&#x590D;&#x5236;&#x53C9;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x5C1A;&#x672A;&#x5F97;&#x5230;&#x5145;&#x5206;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6CE8;&#x610F;&#x5230; RPA2 &#x78F7;&#x9178;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x5728; ATR &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x5F53;&#x590D;&#x5236;&#x53C9;&#x800C;&#x6401;&#x7F6E;&#x3002;ATR &#x4F9D;&#x8D56;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9; RPA2 &#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4; DNA &#x5408;&#x6210;&#x4E0E;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF;&#x8F90;&#x5C04;&#x6CBB;&#x7597;&#x540E;&#x4E0B;&#x8C03;&#x4E2D;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x867D;&#x7136; ATR &#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x53D7;&#x5230;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;21 &#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x548C;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 33&#xFF0C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6B8B;&#x7559;&#x51E0;&#x4E2A;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E2D;&#x7684; RPA2&#xFF0C;&#x6C28;&#x57FA;&#x7EC8;&#x70B9;&#x7AD9;&#x662F;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x3001; ATR &#x4ECB;&#x5BFC;&#x6291;&#x5236; DNA &#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x8981;&#x6C42;&#x3002;RPA2 &#x542B;&#x78F7;&#x4EFF;&#x751F;&#x7A81;&#x53D8; ATR &#x4F9D;&#x8D56;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5730;&#x76D8;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x6709;&#x80FD;&#x529B;&#x53D7;&#x635F;&#x800C;&#x5173;&#x8054;&#x590D;&#x5236;&#x4E2D;&#x5FC3;&#xFF0C;&#x76F4;&#x63A5;&#x6307;&#x793A;&#x7684; ATR &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; RPA2 &#x5F71;&#x54CD; RPA &#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x9488;&#x5BF9;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684; DNA &#x635F;&#x4F24;&#xFF0C;ATR &#x8FC5;&#x901F; phosphorylates RPA2&#xFF0C;&#x6270;&#x4E71;&#x4E86;&#x5176;&#x4E0E; S &#x671F;&#x590D;&#x5236;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x6291;&#x5236; DNA &#x590D;&#x5236;&#x3002;

RPA2 &#x662F; ATR&#xFF0C;&#x89C4;&#x7BA1; S &#x9636;&#x6BB5;&#x68C0;&#x67E5;&#x70B9;&#x4E0B;&#x6E38;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

Upon DNA damage, replication is inhibited by the S-phase checkpoint. ATR (ataxia telangiectasia mutated- and Rad3-related) is specifically involved in the inhibition of replicon initiation when cells are treated with DNA damage-inducing agents that stall replication forks, but the mechanism by which it acts to prevent replication is not yet fully understood. We observed that RPA2 is phosphorylated on chromatin in an ATR-dependent manner when replication forks are stalled. Mutation of the ATR-dependent phosphorylation sites in RPA2 leads to a defect in the down-regulation of DNA synthesis following treatment with UV radiation, although ATR activation is not affected. Threonine 21 and serine 33, two residues among several phosphorylation sites in the amino terminus of RPA2, are specifically required for the UV-induced, ATR-mediated inhibition of DNA replication. RPA2 mutant alleles containing phospho-mimetic mutations at ATR-dependent phosphorylation sites have an impaired ability to associate with replication centers, indicating that ATR phosphorylation of RPA2 directly affects the replication function of RPA. Our studies suggest that in response to UV-induced DNA damage, ATR rapidly phosphorylates RPA2, disrupting its association with replication centers in the S-phase and contributing to the inhibition of DNA replication.

RPA2 is a direct downstream target for ATR to regulate the S-phase checkpoint.

Sur les l&eacute;sions de l&#39;ADN, la r&eacute;plication est inhib&eacute;e par le point de contr&ocirc;le de phase S. ATR (ataxie t&eacute;langiectasie mut&eacute; et Rad3-li&eacute;s) est sp&eacute;cifiquement impliqu&eacute; dans l&#39;inhibition de l&#39;initiation du r&eacute;plicon lorsque les cellules sont trait&eacute;es avec l&#39;ADN des dommages inducteurs enzymatiques qui d&eacute;crochage des fourches de r&eacute;plication, mais le m&eacute;canisme par lequel il agit pour emp&ecirc;cher la r&eacute;plication n&#39;est pas encore enti&egrave;rement &eacute;lucid&eacute;. Nous avons observ&eacute; que RPA2 est phosphoryl&eacute;e sur la chromatine de fa&ccedil;on d&eacute;pendante RTA lorsque les fourches de r&eacute;plication sont au point mort. Mutation des sites de phosphorylation ATR-d&eacute;pendante dans RPA2 conduit &agrave; un d&eacute;faut dans la r&eacute;gulation de la synth&egrave;se de l&#39;ADN apr&egrave;s un traitement par rayonnement UV, bien que l&#39;activation de la RTA n&#39;est pas affect&eacute;e. Thr&eacute;onine 21 et s&eacute;rine 33, deux r&eacute;sidus parmi plusieurs sites de phosphorylation dans l&#39;extr&eacute;mit&eacute; amin&eacute;e de RPA2, sont sp&eacute;cifiquement requis pour l&#39;inhibition par les rayons UV, ATR-mediated de r&eacute;plication de l&#39;ADN. RPA2 all&egrave;les mutants contenant phospho-mim&eacute;tiques mutations aux sites de phosphorylation d&eacute;pendante ATR ont une capacit&eacute; affaiblie &agrave; associer avec des centres de la r&eacute;plication, ce qui indique que la phosphorylation de RTA de RPA2 directement affecte la fonction de r&eacute;plication de l&#39;arm&eacute;e patriotique rwandaise. Nos &eacute;tudes sugg&egrave;rent que, en r&eacute;ponse aux dommages &agrave; l&#39;ADN par les rayons UV, ATR a rapidement phosphoryle RPA2, perturbant son association avec les centres de r&eacute;plication dans la phase S et qui contribuent &agrave; l&#39;inhibition de la r&eacute;plication de l&#39;ADN.

RPA2 est une cible directe en aval pour ATR r&eacute;gler le point de contr&ocirc;le de phase S.

Auf DNA-Sch&auml;digung wird die Replikation von der S-Phase-Checkpoint gehemmt. ATR (Ataxie Teleangiektasien mutiert und Rad3-gebundene) speziell beteiligt ist die Hemmung der Replikon Einleitung, wenn Zellen mit DNA-Schaden-induzierende Agenzien behandelt werden, die Replikation Gabeln zu blockieren, aber der Mechanismus, durch den es fungiert, um zu verhindern, dass die Replikation, nicht noch v&ouml;llig verstanden. Wir beobachteten, dass RPA2 auf Chromatin in ATR-abh&auml;ngigen Weise phosphoryliert ist, wenn die Replikation Gabeln ins Stocken geraten sind. Mutation der ATR-abh&auml;ngige Phosphorylierung Standorte in RPA2 f&uuml;hrt auf einen Fehler in die Herunterregulation der DNA-Synthese, die nach Behandlung mit UV-Bestrahlung, obwohl ATR-Aktivierung nicht beeintr&auml;chtigt wird. 21 Threonin und Serin 33, zwei R&uuml;ckst&auml;nde zwischen mehreren Phosphorylierung-Standorten in das amino-Terminus des RPA2, sind speziell f&uuml;r die UV-induzierte, ATR-vermittelte Hemmung der DNA-Replikation erforderlich. RPA2 mutierten Allele mit Phospho-mimetische Mutationen an ATR-abh&auml;ngige Phosphorylierung Standorten eine beeintr&auml;chtigte F&auml;higkeit, Replikation Zentren zugeordnet haben, betrifft, der angibt, dass ATR-Phosphorylierung von RPA2 direkt die Replikationsfunktion des RPA. Unsere Studien belegen, dass die Reaktion auf UV-induzierten DNA-Sch&auml;den, ATR rasch RPA2, st&ouml;ren seine Verkn&uuml;pfung mit der Replikation-Zentren in der S-Phase und die Hemmung der DNA-Replikation zur phosphorylates.

RPA2 ist eine direkte nachgeschaltete Ziel f&uuml;r ATR, den S-Phase-Pr&uuml;fpunkt zu regulieren.

Al danno al DNA, replica &egrave; inibita dal checkpoint di fase S. ATR (atassia teleangectasia mutato e Rad3-correlati) specificamente &egrave; coinvolto nell&#39;inibizione della iniziazione replicone quando le cellule sono trattate con agenti che inducono danni del DNA che stallo forcelle replica, ma il meccanismo con cui agisce per impedire la replica ancora completamente non &egrave; capito. Abbiamo osservato che RPA2 &egrave; fosforilata sulla cromatina in maniera ATR-dipendente quando forcelle replica sono in fase di stallo. Mutazione dei luoghi di fosforilazione ATR-dipendente RPA2 conduce ad un difetto nella down-regolazione della sintesi del DNA, dopo il trattamento con radiazioni UV, sebbene attivazione ATR non &egrave; interessato. 21 Treonina e serina 33, due residui tra diversi siti di fosforilazione nel terminus amminico di RPA2, sono specificamente richiesti per l&#39;UV-indotta, ATR-mediata inibizione della replicazione del DNA. RPA2 alleli mutanti contenenti fosfo-mimetiche mutazioni in siti di fosforilazione ATR-dipendenti hanno un&#39;alterata capacit&agrave; di associare con i centri di replica, che indica che la fosforilazione di ATR di RPA2 direttamente interessa la funzione di replica della RPA. I nostri studi suggeriscono che in risposta a danni del DNA indotta da UV, ATR tirosine rapidamente RPA2, interrompendo la sua associazione con i centri di replica nella S-fase e contribuire alla inibizione della replicazione del DNA.

RPA2 &egrave; un obiettivo diretto a valle per ATR di regolamentare il checkpoint di fase S.

DNA &#x640D;&#x50B7;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; S &#x76F8;&#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB;&#x8907;&#x88FD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AF;&#x505C;&#x6B62; DNA &#x640D;&#x50B7;&#x8A98;&#x5C0E;&#x5264;&#x3068;&#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x304D; ATR &#xFF08;&#x904B;&#x52D5;&#x5931;&#x8ABF;&#x6BDB;&#x7D30;&#x8840;&#x7BA1;&#x62E1;&#x5F35;&#x75C7;&#x5909;&#x7570;&#x30FB; Rad3 &#x95A2;&#x9023;&#xFF09; &#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B3;&#x30F3;&#x767A;&#x751F;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x884C;&#x52D5;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x8907;&#x88FD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AF;&#x505C;&#x6B62;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306B; RPA2&#x3001;ATR &#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;ATR &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570; RPA2 &#x306E; ATR &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E; DNA &#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x7D2B;&#x5916;&#x7DDA;&#x653E;&#x5C04;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6CBB;&#x7642;&#x3092;&#x6B21;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x306B; &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;21 &#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x3068;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3; 33&#x3001;RPA2 &#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x672B;&#x7AEF;&#x3067;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x9593;&#x3067; 2 &#x3064;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA; UV &#x8A98;&#x8D77;&#x3001;ATR &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6291;&#x5236; DNA &#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7279;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RPA2 &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D5;&#x30A9;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A9; &#x30DF;&#x30E1;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E; ATR &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306E;&#x969C;&#x5BB3;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5; RPA2 ATR &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3059; RPA &#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x7D2B;&#x5916;&#x7DDA;&#x306B;&#x3088;&#x308B; DNA &#x640D;&#x50B7;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;ATR &#x304C;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC; S &#x671F;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3068; DNA &#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066; RPA2 &#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

RPA2 S &#x76F8;&#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B; ATR &#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xC2DC; &#xBCF5;&#xC81C; S &#xC0C1; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xB294; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD3EC;&#xD06C;, &#xC2A4; &#xD1A8;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD558;&#xBA74; ATR (&#xC6B4;&#xB3D9; &#xC2E4; &#xC870; &#xC99D; telangiectasia &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC0F; Rad3 &#xAD00;&#xB828;) replicon &#xAC1C;&#xC2DC;&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xC5D0; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;&#xB294; &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xC544;&#xC9C1; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC774;&#xD574; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB54C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD3EC;&#xD06C; &#xC9C0;&#xC5F0; chromatin ATR &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0; RPA2 phosphorylated &#xAD00;&#xCC30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. RPA2 ATR &#xC885;&#xC18D; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC704;&#xCE58;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; ATR &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; DNA &#xD569;&#xC131; &#xC790;&#xC678;&#xC120; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB2E4;&#xC74C;&#xC758; &#xC544;&#xB798; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; &#xACB0;&#xD568;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; 21 &#xACE0; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 33, RPA2&#xC758; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC911; &#xB450; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC740; DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; UV &#xC720;&#xB3C4;, ATR &#xC911;&#xC7AC; &#xC800;&#xD574;&#xC5D0;. RPA2 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB300;&#xB9BD; &#xC778; &#xBAA8;&#xBC29; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; ATR &#xC885;&#xC18D; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC13C;&#xD130;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0;&#xD560; &#xC7A5;&#xC560;&#xC778; &#xB2A5;&#xB825;&#xC774;, rpa2&#xC758; ATR &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xADF8;&#xB97C; &#xC9C1;&#xC811; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; RPA&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC790;&#xC678;&#xC120;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;, ATR &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; phosphorylates RPA2, S &#xC0C1; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC13C;&#xD130;&#xC640;&#xC758; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; DNA &#xBCF5;&#xC81C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RPA2 S &#xC0C1; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; ATR&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xB300;&#xC0C1; &#xC774;&#xB2E4;.

Al da&ntilde;o de la DNA, replicaci&oacute;n es inhibida por el puesto de control de fase S. ATR (ataxia telangiectasia mutado y Rad3-relacionados) espec&iacute;ficamente est&aacute; implicada en la inhibici&oacute;n de la iniciaci&oacute;n del replic&oacute;n cuando las c&eacute;lulas se tratan con agentes inductores de da&ntilde;o de ADN que las horquillas de replicaci&oacute;n se atasque, pero el mecanismo por el cual act&uacute;a para evitar la replicaci&oacute;n no se entiende todav&iacute;a completamente. Observamos que RPA2 es fosforilado en la cromatina de una forma dependiente de ATR cuando las horquillas de replicaci&oacute;n est&aacute;n bloqueadas. Mutaci&oacute;n de los sitios de fosforilaci&oacute;n de ATR-dependiente de RPA2 conduce a un defecto en la abajo-regulaci&oacute;n de la s&iacute;ntesis de ADN, despu&eacute;s del tratamiento con radiaci&oacute;n ultravioleta, aunque activaci&oacute;n ATR no se ve afectada. 21 De treonina y serina 33, dos residuos entre varios sitios de fosforilaci&oacute;n en el amino terminal del RPA2, son especialmente necesarios para la inhibici&oacute;n inducida por UV, ATR-mediada de la replicaci&oacute;n del ADN. RPA2 alelos mutantes que contiene mutaciones phospho-mim&eacute;ticas en sitios de fosforilaci&oacute;n de ATR-dependiente tienen una capacidad deteriorada para asociar con centros de replicaci&oacute;n, lo que indica que la fosforilaci&oacute;n ATR de RPA2 directamente afecta la funci&oacute;n de replicaci&oacute;n de RPA. Nuestros estudios indican que en respuesta al da&ntilde;o del ADN UV-inducida, ATR fosforila r&aacute;pidamente RPA2, interrumpir su asociaci&oacute;n con centros de replicaci&oacute;n en la fase S y contribuir a la inhibici&oacute;n de la replicaci&oacute;n del ADN.

RPA2 es una Diana para ATR regular el punto de control de fase S directa.

&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#x5728;&#x7334;&#x75C5;&#x6BD2; 40 &#xFF08;SV40&#xFF09; &#x590D;&#x5236;&#x524D;&#x590D;&#x6742;&#xFF0C;SV40 T &#x6297;&#x539F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x8FC7;&#x7A0B; &#xFF08;&#x6807;&#x8BB0;&#xFF09; &#x89E3;&#x65CB;&#x9176;&#x79EF;&#x6781;&#x52A0;&#x8F7D;&#x590D;&#x5236;&#x86CB;&#x767D; A (RPA) &#x65B0;&#x5174;&#x7684;&#x5355;&#x94FE; DNA &#xFF08;ssDNA&#xFF09; &#x4E0A;&#x3002;&#x8FD9;&#x672C;&#x5C0F;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x52A0;&#x8F7D;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E0E;&#x7231;&#x56FD;&#x519B;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B; ssDNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x57DF; (RPA70AB) &#x9700;&#x8981;&#x7269;&#x7406;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x6807;&#x8BB0;&#x8D77;&#x6E90; &#xFF08;OBD&#xFF09;&#x3002;&#x5F02;&#x6838;&#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x5316;&#x5B66;&#x4F4D;&#x79FB;&#x6620;&#x5C04;&#x663E;&#x793A;&#x6807;&#x8BB0; OBD &#x4ECE; ssDNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E0A;&#x7684; RPA70AB &#x548C; RPA70AB&#x3001; &#x6807;&#x8BB0;-OBD &#x548C; 8 &#x6838;&#x82F7;&#x9178; ssDNA &#x5F62;&#x6210;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x4E09;&#x5143;&#x590D;&#x6570;&#x3002;&#x5B8C;&#x597D;&#x7684; RPA &#x548C;&#x6807;&#x8BB0;&#x8FD8;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7A33;&#x5B9A;&#x4E0B; 8 mer&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#x6807;&#x8BB0;&#x52A0;&#x5165;&#x4ECE;&#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x5F53;&#x7231;&#x56FD;&#x519B;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x8F83;&#x957F;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x6697;&#x793A;&#x7231;&#x56FD;&#x519B;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7EAA;&#x7ED3;&#x6784;&#x53D8;&#x6784;&#x53D8;&#x5316;&#x5B8C;&#x6210;&#x52A0;&#x8F7D;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x673A;&#x68B0;&#x6A21;&#x578B;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684;&#x4E09;&#x5143;&#x60C5;&#x7ED3;&#x5728;&#x76F4;&#x63A5;&#x5230; RPA &#x52A0;&#x8F7D;&#x5BF9;&#x65B0;&#x5174; ssDNA &#x60C5;&#x4FA3;&#x6765;&#x6E90; DNA &#x5C55;&#x5F00;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x3002;

RPA &#x52A0;&#x8F7D;&#x5BF9; DNA &#x6D3B;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x524D;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

We report that during activation of the simian virus 40 (SV40) pre-replication complex, SV40 T antigen (Tag) helicase actively loads replication protein A (RPA) on emerging single-stranded DNA (ssDNA). This novel loading process requires physical interaction of Tag origin DNA-binding domain (OBD) with the RPA high-affinity ssDNA-binding domains (RPA70AB). Heteronuclear NMR chemical shift mapping revealed that Tag-OBD binds to RPA70AB at a site distal from the ssDNA-binding sites and that RPA70AB, Tag-OBD, and an 8-nucleotide ssDNA form a stable ternary complex. Intact RPA and Tag also interact stably in the presence of an 8-mer, but Tag dissociates from the complex when RPA binds to longer oligonucleotides. Together, our results imply that an allosteric change in RPA quaternary structure completes the loading reaction. A mechanistic model is proposed in which the ternary complex is a key intermediate that directly couples origin DNA unwinding to RPA loading on emerging ssDNA.

Structural mechanism of RPA loading on DNA during activation of a simple pre-replication complex.

Les auteurs rapportent que lors de l&#39;activation de la virus simien 40 (SV40) pr&eacute;-r&eacute;plication complexe, T de SV40 antig&egrave;ne h&eacute;licase (Tag) charge activement prot&eacute;ine de r&eacute;plication A (EPR) sur l&#39;ADN monocat&eacute;naire &eacute;mergent (ssDNA). Ce roman, processus de chargement n&eacute;cessite une interaction physique du domaine de liaison &agrave; l&#39;ADN origine Tag (OBD) avec le domaine de ssDNA liaison de haute affinit&eacute; de l&#39;arm&eacute;e patriotique rwandaise (RPA70AB). Cartographie des d&eacute;placements chimiques RMN h&eacute;t&eacute;ronucl&eacute;aire a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que Tag-OBD lie &agrave; RPA70AB sur un site distal de l&#39;ADN simple brin-accepteurs et que RPA70AB, Tag-OBD et un ADN simple brin 8-nucl&eacute;otides forment un complexe ternaire stable. Intact l&#39;arm&eacute;e patriotique rwandaise et Tag interagissent &eacute;galement stable en pr&eacute;sence d&#39;un 8-mer, mais Tag se dissocie du complexe lorsque l&#39;arm&eacute;e patriotique rwandaise se lie &agrave; des oligonucl&eacute;otides plus longtemps. Ensemble, nos r&eacute;sultats laissent entendre qu&#39;un changement allost&eacute;rique en structure quaternaire de l&#39;arm&eacute;e patriotique rwandaise compl&egrave;te la r&eacute;action de chargement. Un mod&egrave;le m&eacute;caniste est propos&eacute; dans lequel le complexe ternaire est un interm&eacute;diaire cl&eacute; qui allie directement le d&eacute;roulement d&#39;ADN origine au chargement de l&#39;arm&eacute;e patriotique rwandaise sur ADNsb &eacute;mergent.

M&eacute;canisme structurel de chargement de l&#39;arm&eacute;e patriotique rwandaise sur l&#39;ADN lors de l&#39;activation d&#39;un simple complexe pr&eacute;-r&eacute;plication.

Wir berichten, dass w&auml;hrend der Aktivierung des simian Virus 40 (SV40) vor komplexen, SV40 T Antigens (Tag)-Helikase aktiv Replikation Protein A (RPA) auf aufstrebenden einzelstr&auml;ngige DNA (SsDNA) l&auml;dt. Dieser Roman Ladevorgang erfordert k&ouml;rperliche Interaktion Tag Herkunft DNA-bindenden Dom&auml;ne (OBD) mit den RPA hoher Affinit&auml;t SsDNA-Bindung Domains (RPA70AB). Heteronukleare NMR chemische Verschiebung Zuordnung ergab, dass die Tag-OBD RPA70AB an einem Standort distale von SsDNA-Bindungsstellen bindet und RPA70AB, Tag-OBD und ein 8-Nukleotid-SsDNA einen stabilen tern&auml;ren Komplex bilden. Intakte RPA und Tag auch interagieren stabil in Anwesenheit eines 8-Mer, sondern Tag distanziert sich von der Anlage beim RPA l&auml;nger Oligonukleotide gebunden wird. Zusammen bedeuten unsere Ergebnisse, dass eine allosterische Ver&auml;nderung RPA quart&auml;re Struktur laden Reaktion abgeschlossen ist. Eine mechanistische Modell wird vorgeschlagen, in dem der tern&auml;re Komplex ein Schl&uuml;ssel Mittelstufe ist, die direkt RPA belasteten auf aufstrebenden SsDNA Paare Herkunft DNA entladen.

Struktureller Mechanismus der RPA laden auf DNA w&auml;hrend der Aktivierung eines einfachen vor komplexen.

Segnaliamo che durante l&#39;attivazione del simian virus 40 (SV40) pre-replication complesso, SV40 T antigene elicasi (Tag) carichi attivamente replication protein A (RPA) sul DNA single-stranded emergente (ssDNA). Questo processo di caricamento di romanzo richiede interazione fisica del dominio DNA-binding di Tag origine (OBD) con i domini di ssDNA-legame ad alta affinit&agrave; RPA (RPA70AB). Mappatura spostamento chimico eteronucleari NMR ha rivelato che Tag-OBD si lega al RPA70AB presso un sito distale dai siti di legame ssDNA e che RPA70AB, Tag-OBD e un 8-nucleotide ssDNA formano un complesso ternario stabile. Intatto RPA e Tag anche interagire stabilmente in presenza di un 8-mer, ma Tag si dissocia dal complesso quando RPA si lega a oligonucleotides lunghi. Insieme, i nostri risultati implicano che un cambiamento allosterico in struttura quaternaria RPA viene completata la reazione di caricamento. Un modello meccanicistico &egrave; proposto in cui il complesso ternario &egrave; un&#39;intermedia chiave che direttamente le coppie origine svolgimento del DNA a carico RPA su ssDNA emergente.

Meccanismo strutturale di caricamento RPA sul DNA durante l&#39;attivazione di un complesso di pre-replication semplice.

&#x30B7;&#x30DF;&#x30A2;&#x30F3; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; 40 (SV40) &#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x524D;&#x8907;&#x96D1;&#x3001;SV40 T &#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x8CE6;&#x6D3B; (&#x30BF;&#x30B0;) &#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC;&#x304C;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x8907;&#x88FD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; A (RPA) &#x65B0;&#x8208;&#x306E;&#x4E00;&#x672C;&#x9396; DNA &#xFF08;ssDNA&#xFF09; &#x4E0A;&#x3067;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3053;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x30BF;&#x30B0;&#x306E;&#x5143;&#x306E; DNA &#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (OBD) &#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; RPA &#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027; ssDNA &#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (RPA70AB) &#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;25Pxn-1 &#x7570;&#x6838; NMR &#x5316;&#x5B66;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30B0; OBD &#x304C; ssDNA &#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x304B;&#x3089;&#x9060;&#x4F4D;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067; RPA70AB &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3068; RPA70AB&#x3001;&#x30BF;&#x30B0; OBD &#x304A;&#x3088;&#x3073; 8 &#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; ssDNA &#x5B89;&#x5B9A;&#x4E09;&#x5143;&#x932F;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x306E; RPA &#x3068;&#x30BF;&#x30B0;&#x3082;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306A; 8 mer &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;RPA &#x306B;&#x9577;&#x3044;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x30BF;&#x30B0; &#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x5207;&#x308A;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F; RPA &#x306E;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7D00;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x304C;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x5B8C;&#x4E86;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E09;&#x5143;&#x932F;&#x4F53;&#x306F;&#x76F4;&#x63A5;&#x7531;&#x6765; DNA &#x5DFB;&#x304D;&#x623B;&#x3057;&#x65B0;&#x8208; ssDNA &#x306E; RPA &#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306F;&#x4E2D;&#x9593;&#x306E;&#x30AD;&#x30FC; (&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;) &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.

RPA &#x8377;&#x91CD;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x524D;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x9593;&#x306B; DNA &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC911; &#xC6D0;&#xC758; &#xC720;&#xC778;&#xC6D0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; 40 (SV40) pre-replication &#xBCF5;&#xC7A1; SV40 T &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; (&#xD0DC;&#xADF8;) helicase &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB85C;&#xB4DC; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; A (RPA) &#xC2E0;&#xD765; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; DNA (ssDNA)&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC18C;&#xC124; &#xB85C;&#xB4DC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; RPA &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; ssDNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (RPA70AB)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD0DC;&#xADF8; &#xC6D0;&#xBCF8; DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (OBD)&#xB97C; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Heteronuclear NMR &#xD654;&#xD559; &#xBCC0;&#xD654; &#xB9E4;&#xD551; &#xD0DC;&#xADF8; OBD ssDNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; RPA70AB &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC6D0;&#xC2EC;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; RPA70AB, &#xD0DC;&#xADF8; OBD &#xBC0F; 8-&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; ssDNA &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC0BC;&#xD56D; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; RPA &#xBC0F; &#xD0DC;&#xADF8; &#xB610;&#xD55C; &#xC791;&#xC6A9; &#xC548;&#xC815;&#xC801; 8 &#xBA54; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD0DC;&#xADF8; RPA &#xAE34; oligonucleotides&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xB54C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC5D0;&#xC11C; dissociates. &#xD568;&#xAED8;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; RPA &#xC81C; &#xC0AC;&#xAE30; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; allosteric &#xBCC0;&#xD654; &#xB85C;&#xB4DC; &#xBC18;&#xC751; &#xC644;&#xB8CC; &#xC758;&#xBBF8;. &#xAE30;&#xACC4; &#xBAA8;&#xB378; 3 &#xC9C4; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC9C1;&#xC811; &#xC2E0;&#xD765; ssDNA RPA &#xB85C;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC6D0;&#xBCF8; DNA &#xD574;&#xC81C; &#xCEE4;&#xD50C; &#xD0A4; &#xC911;&#xAC04;&#xC740; &#xC81C;&#xC548; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; pre-replication &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; DNA&#xC5D0; RPA &#xB85C;&#xB4DC;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;.

Se reporta que durante la activaci&oacute;n del virus simio 40 (SV40) pre-replication complejo, SV40 T ant&iacute;geno (Tag) helicase activamente carga prote&iacute;na de replicaci&oacute;n A (RPA) en emergente los ADN monocatenario (ssDNA). Esta novela en el proceso de carga requiere interacci&oacute;n f&iacute;sica del dominio de uni&oacute;n al ADN de origen etiqueta (DAB) con los dominios de ssDNA-Uni&oacute;n de alta afinidad RPA (RPA70AB). Asignaci&oacute;n de cambio qu&iacute;mica heteronuclear RMN revel&oacute; que etiqueta-OBD se une a RPA70AB en un sitio distal de los sitios de uni&oacute;n de ssDNA y que RPA70AB, Tag-DAB y un 8-nucle&oacute;tido ssDNA forman un complejo ternario estable. Intacto RPA y etiqueta tambi&eacute;n interactuan estable en presencia de un 8-mer y etiqueta se disocia del complejo cuando el RPA se une a oligonucle&oacute;tidos m&aacute;s. Juntos, nuestros resultados implican que un cambio alost&eacute;rico en estructura cuaternaria RPA completa la reacci&oacute;n de la carga. Se propone un modelo mecanicista en la que el complejo ternario es una clave intermedia que directamente parejas desenrollar de ADN de origen a la carga del EPR en ssDNA emergente.

Vitaly Klimovich

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Corning Life Science

Closed System Cell Culture Protocol Using HYPERStack Vessels with Gas Permeable Material Technology

Vitaly Klimovich

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