flow-cytometry-purification-of-mouse-meiotic-cells

Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells

The heterogeneous nature of cell types in the testis and the absence of meiotic cell culture models have been significant hurdles to the study of the ...

The Scripps Research Institute

Partially folded conformational ensembles of bovine pancreatic trypsin inhibitor (BPTI) are accessed by replacing Cys 5, 30, 51, and 55 by alpha-amino-n-butyric acid (Abu) while retaining the disulfide between Cys 14 and 38; the resultant variant is termed [14-38](Abu). Two new analogues with modifications in the beta-turn, P26D27[14-38](Abu) and N26G27K28[14-38](Abu), are compared to partially folded [14-38](Abu), as well as to [R](Abu), the unfolded protein with all six Cys residues replaced by Abu. Structural features of the new analogues of [14-38](Abu) have been determined by circular dichroism (CD), one-dimensional (1)H NMR, and 8-anilino-1-naphthalenesulfonic acid (ANS) fluorescence experiments. Both analogues are more disordered than the parent [14-38](Abu), but while P26D27[14-38](Abu) has a small population of native-like conformations observed by NMR, no ordered structure is detected for N26G27K28[14-38](Abu). Trypsin inhibition assays were carried out using a modified rat trypsin, C191A/C220A, that minimizes cleavage of unfolded peptides. Both [14-38](Abu) and P26D27[14-38](Abu) significantly inhibit modified trypsin. N26G27K28[14-38](Abu) has low but measurable inhibitor activity, while [R](Abu) has no activity even when in very high molar excess relative to trypsin. ANS fluorescence is enhanced by [14-38](Abu) and by both variants but not by [R](Abu). We conclude that partially folded ensembles of BPTI, even those with little or no CD- or NMR-detectable structure, contain minor populations of native-like conformations. Partially folded [14-38](Abu) and both variants, as well as [R](Abu), have enhanced negative ellipticity in CD spectra acquired in the presence of the osmolyte trimethylamine N-oxide (TMAO). TMAO-induced structure is formed cooperatively, as indicated by thermal unfolding curves. Inhibitor activity as a function of TMAO concentration implies that the osmolyte-induced structure is native-like for [14-38](Abu) and P26D27[14-38](Abu) and is probably native-like for N26G27K28[14-38](Abu). [R](Abu) also shows increased CD-detected structure in the presence of TMAO, but such structure is likely to be collapsed and non-native.

Native-like conformations are sampled by partially folded and disordered variants of bovine pancreatic trypsin inhibitor.

&#x725B;&#x80F0;&#x80F0;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242; (BPTI) &#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x6298;&#x53E0;&#x6784;&#x8C61;&#x6B4C;&#x821E;&#x56E2;&#x8BBF;&#x95EE;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x4FDD;&#x7559; Cys 14 &#x81F3; 38 &#xFF1B; &#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x7684; &alpha;-&#x6C28;&#x57FA;-n-&#x4E01;&#x9178; &#xFF08;&#x963F;&#x5E03;&#xFF09; &#x53D6;&#x4EE3; Cys 5&#x3001; 30&#x3001; 51&#x3001; 55&#x7531;&#x6B64;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x53D8;&#x91CF;&#x79F0;&#x4E3A; [14-38](Abu)&#x3002;&#x4E0E; &beta;-&#x8F6C;&#x578B;&#x4E2D;&#xFF0C;P26D27[14-38](Abu) &#x548C; N26G27K28[14-38](Abu)&#xFF0C;&#x4FEE;&#x6539;&#x4E24;&#x4E2A;&#x65B0;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x88AB;&#x6BD4;&#x4F5C;&#x90E8;&#x5206;&#x6298;&#x53E0; [14-38](Abu)&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5173;&#x4E8E; [R](Abu)&#xFF0C;&#x53D6;&#x800C;&#x4EE3;&#x4E4B;&#x7684;&#x662F;&#x963F;&#x5E03;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x516D;&#x4E2A; Cys &#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x672A;&#x6298;&#x53E0;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x65B0;&#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x7279;&#x5F81; [14-38](Abu) &#x5DF2;&#x7ECF;&#x7531;&#x5706;&#x4E8C;&#x8272; (CD) &#x4E00;&#x7EF4; (1) H &#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#xFF0C;&#x548C; 8-anilino-1-&#x8418;&#x9178; (ANS) &#x8367;&#x5149;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x90FD;&#x6BD4;&#x539F;&#x6765;&#x7684;&#x66F4;&#x52A0;&#x7D0A;&#x4E71; [14-38](Abu)&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E3A; N26G27K28[14-38](Abu) P26D27[14-38](Abu) &#x7684;&#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x50CF;&#x672C;&#x5730;&#x6784;&#x8C61;&#x4EBA;&#x53E3;&#x5F88;&#x5C11;&#xFF0C;&#x800C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x65E0;&#x5E8F;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x80F0;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528;&#x6539;&#x826F;&#x7684;&#x5927;&#x9F20;&#x80F0;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#xFF0C;C191A/C220A&#xFF0C;&#x6700;&#x5C0F;&#x5316;&#x7684;&#x5C55;&#x5F00;&#x591A;&#x80BD;&#x88C2;&#x89E3;&#x3002;[14-38](Abu) &#x548C; P26D27[14-38](Abu) &#x663E;&#x8457;&#x6291;&#x5236;&#x80F0;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6539;&#x6027;&#x3002;N26G27K28[14-38](Abu) &#x8F83;&#x4F4E;&#x4F46;&#x53EF;&#x8861;&#x91CF;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x800C; [R](Abu) &#x6709;&#x6CA1;&#x6709;&#x5373;&#x4F7F;&#x5728;&#x6781;&#x9AD8;&#x78E8;&#x7259;&#x8FC7;&#x5269;&#x4E0E;&#x80F0;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;ANS &#x8367;&#x5149;&#x7684;&#x589E;&#x5F3A; [14-38](Abu) &#x548C;&#x7531;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; [R](Abu)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x90E8;&#x5206;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x4FBF;&#x670D; BPTI&#xFF0C;&#x5373;&#x4FBF;&#x662F;&#x90A3;&#x4E9B;&#x5F88;&#x5C11;&#x6216;&#x6CA1;&#x6709; CD &#x6216;&#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x63A2;&#x6D4B;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x5305;&#x542B;&#x672C;&#x673A;&#x6837;&#x6784;&#x8C61;&#x5C0F;&#x79CD;&#x7FA4;&#x3002;&#x90E8;&#x5206;&#x6298;&#x53E0; [14-38](Abu) &#x53CA;&#x5176;&#x4E24;&#x4E2A;&#x53D8;&#x79CD;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; [R](Abu)&#xFF0C;&#x5177;&#x6709;&#x589E;&#x5F3A;&#x8D1F;&#x9762;&#x5728;&#x573A;&#x4E0B;&#x80FA; N-&#x6C27;&#x5316;&#x7269; (&#x80FA;) &#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684; CD &#x5149;&#x8C31;&#x4E2D;&#x7684;&#x692D;&#x5706;&#x3002;&#x80FA;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x88AB;&#x5F62;&#x6210;&#x5408;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x7531;&#x70ED;&#x5C55;&#x5F00;&#x66F2;&#x7EBF;&#x6240;&#x793A;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x80FA;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x6D3B;&#x6027;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x6E17;&#x900F;&#x5206;&#x5B50;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ED3;&#x6784;&#x662F;&#x50CF;&#x672C;&#x5730;&#x4E3A; [14-38](Abu) &#x548C; P26D27[14-38](Abu)&#xFF0C;&#x662F;&#x5F88;&#x53EF;&#x80FD;&#x50CF;&#x672C;&#x5730;&#x7684; N26G27K28[14-38](Abu)&#x3002;[R](&#x963F;&#x5E03;) &#x4E5F;&#x663E;&#x793A;&#x5B58;&#x5728;&#x80FA;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x5149;&#x76D8;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7ED3;&#x6784;&#x662F;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x88AB;&#x6298;&#x53E0;&#x548C;&#x975E;&#x6BCD;&#x8BED;&#x3002;

&#x50CF;&#x672C;&#x5730;&#x6784;&#x662F;&#x7531;&#x90E8;&#x5206;&#x6298;&#x53E0;&#x548C;&#x65E0;&#x5E8F;&#x53D8;&#x5F02;&#x725B;&#x80F0;&#x80F0;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x91C7;&#x6837;&#x3002;

Partiellement repli&eacute;es ensembles conformationnelles d&#39;inhibiteur de trypsine pancr&eacute;atique bovine (TPBE) sont accessibles en rempla&ccedil;ant Cys 5, 30, 51 et 55 de l&#39;acide alpha-amino-n-butyrique (Abu) tout en conservant le disulfure entre Cys 14 et 38 ; la variante qui en r&eacute;sulte est appel&eacute;e [14-38](Abu). Deux nouveaux analogues avec des modifications &agrave; la b&ecirc;ta-tour, P26D27[14-38](Abu) et N26G27K28[14-38](Abu), sont compar&eacute;s aux partiellement repli&eacute;e [14-38](Abu), aussi bien quant &agrave; [R](Abu), la prot&eacute;ine d&eacute;pli&eacute;e avec tous les six r&eacute;sidus Cys remplac&eacute; par Ahmed. Caract&eacute;ristiques structurelles des nouveaux analogues de [14-38](Abu) ont &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;es par dichro&iuml;sme circulaire (CD), RMN unidimensionnelle du (1), et les exp&eacute;riences de fluorescence de l&#39;acide 8-anilino-1-sulfonique (SNA). Les deux analogues sont plus d&eacute;sordonn&eacute;s que le parent [14-38](Abu), mais P26D27[14-38](Abu) a une petite population de type natif conformations observ&eacute;es par RMN, aucune structure ordonn&eacute;e n&#39;est d&eacute;tect&eacute; pour N26G27K28[14-38](Abu). Tests d&#39;inhibition de la trypsine ont &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;es &agrave; l&#39;aide d&#39;une trypsine rat modifi&eacute;, C191A/C220A, ce qui minimise le clivage des peptides non pli&eacute;s. [14-38](Abu) et P26D27[14-38](Abu) inhibent significativement modifi&eacute;e par la trypsine. N26G27K28[14-38](Abu) a bas mais l&#39;activit&eacute; inhibitrice mesurables, alors que [R](Abu) n&#39;exerce aucune activit&eacute; m&ecirc;me en exc&egrave;s molaire tr&egrave;s &eacute;lev&eacute; par rapport &agrave; la trypsine. Fluorescence et est renforc&eacute;e par [14-38](Abu) et par les deux variantes, mais pas par [R](Abu). Nous concluons que partiellement repli&eacute;es ensembles de TPBE, m&ecirc;me ceux qui ont peu ou pas de structure CD - ou NMR d&eacute;tectables, contiennent des populations mineures des conformations de type natif. Partiellement repli&eacute;e [14-38](Abu) et les deux variantes, comme [R](Abu), ont am&eacute;lior&eacute; l&#39;ellipticit&eacute; n&eacute;gative dans les spectres de DC acquis en pr&eacute;sence de l&#39;osmolyte trim&eacute;thylamine N-oxyde (TMAO). Structure induite par TMAO est form&eacute; en collaboration, telle qu&#39;indiqu&eacute;e par les courbes de d&eacute;pliement thermiques. L&#39;activit&eacute; inhibitrice en fonction de la concentration de TMAO implique que la structure induite par osmolyte est natif pour [14-38](Abu) et P26D27[14-38](Abu) et est probablement originaire-like pour N26G27K28[14-38](Abu). [R](Abu) montre &eacute;galement une augmentation structure CD-d&eacute;tect&eacute; en pr&eacute;sence de TMAO, mais cette structure est susceptible d&#39;&ecirc;tre r&eacute;duit et les non-autochtones.

Conformations de natif sont &eacute;chantillonn&eacute;es par variantes partiellement repli&eacute;es et d&eacute;sordonn&eacute;es de l&#39;inhibiteur de trypsine pancr&eacute;atique bovine.

Nativ-&#xE4;hnliche Konformationen werden durch teilweise gefalteten und gest&#xF6;rten Varianten von Rinder-Trypsin-Inhibitor abgetastet.

Parzialmente ripiegati Ensemble conformazionale dell&#39;inibitore della tripsina pancreatica bovina (BPTI) sono accessibili mediante sostituzione Cys 5, 30, 51 e 55 di acido alfa-ammino-n-butirrico (Abu) pur mantenendo il disolfuro tra Cys 14 e 38; la variante risulta &egrave; definita [14-38](Abu). Due nuovi analoghi con modifiche in beta-turn, P26D27[14-38](Abu) e N26G27K28[14-38](Abu), sono rispetto al parzialmente piegata [14-38](Abu), come pure per quanto riguarda [R](Abu), la proteina spiegata con tutti i residui di Cys sei sostituito da Abu. Caratteristiche strutturali dei nuova analoghi del [14-38](Abu) sono stati determinati da Dicroismo circolare (CD), unidimensionale (1) H NMR, ed esperimenti di fluorescenza acido 8-anilino-1-naftalensolfonico (ANS). Entrambi analoghi sono pi&ugrave; disordinati rispetto il padre [14-38](Abu), ma mentre P26D27[14-38](Abu) ha una piccola popolazione di conformazioni native-come osservato da NMR, nessuna struttura ordinata viene rilevata per N26G27K28[14-38](Abu). Saggi di inibizione della tripsina sono state effettuate utilizzando una tripsina modificata ratto, C191A/C220A, che riduce al minimo la scissione dei peptidi dispiegate. [14-38](Abu) e P26D27[14-38](Abu) che inibiscono significativamente modificata tripsina. N26G27K28[14-38](Abu) ha basse ma attivit&agrave; di inibitore misurabile, mentre [R](Abu) non ha alcuna attivit&agrave; anche in eccesso molare molto alta rispetto alla tripsina. Fluorescenza ANS &egrave; rafforzata da [14-38](Abu) e da entrambe le varianti, ma non da [R](Abu). Concludiamo che parzialmente ripiegati Ensemble di BPTI, anche quelli con poca o nessuna struttura CD o NMR-rilevabile, contengono popolazioni minori di conformazioni native-like. Parzialmente piegata [14-38](Abu) ed entrambe le varianti, cos&igrave; come [R](Abu), hanno rafforzato la ellitticit&agrave; negativo negli spettri CD acquistato in presenza l&#39;osmolita trimetilammina N-ossido (TMAO). Struttura TMAO-indotta &egrave; formata in modo cooperativo, come indicato dalle curve termiche dispiegarsi. Attivit&agrave; di inibitore in funzione della concentrazione TMAO implica che la struttura osmolita-indotta &egrave; nativo-come per [14-38](Abu) e P26D27[14-38](Abu) ed &egrave; probabilmente nativo-come per N26G27K28[14-38](Abu). [R](Abu) mostra anche maggiore struttura CD-rilevato in presenza di TMAO, ma tale struttura &egrave; probabile essere compresso e non-nativi.

Conformazioni native-come vengono campionati da varianti parzialmente ripiegati e disordinate dell&#39;inibitore della tripsina pancreatica bovina.

&#x725B;&#x81B5;&#x81D3;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D2;&#x30D3;&#x30BF;&#x30FC; (BPTI) &#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DB;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30A2;&#x30F3;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB; Cys 14 &#x3068; 38 &#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089; (&#x30A2;&#x30D6;) &#x306B;&#x3088;&#x308B; &alpha;-&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;-n-&#x916A;&#x9178; Cys 5&#x3001;30&#x3001;51&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; 55 &#x3092;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x547C;&#x3073;&#x307E;&#x3059; [14-38](Abu)&#x3002;2 &#x3064;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x985E;&#x7E01;&#x4F53;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3067;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; &#x30BF;&#x30FC;&#x30F3; P26D27[14-38](Abu) &#x3068; N26G27K28[14-38](Abu)&#x3001;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306B;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307E;&#x308C;&#x3066; [14-38](Abu)&#x3001;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066; [R](Abu)&#x3001;&#x30A2;&#x30D6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x516D;&#x3064; Cys &#x6B8B;&#x57FA;&#x3068;&#x80DE;&#x3002;&#x65B0;&#x898F;&#x985E;&#x7E01;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4; [14-38](Abu) &#x306E;&#x5186;&#x4E8C;&#x8272;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x308B; (CD)&#x3001;&#x4E00;&#x6B21;&#x5143; (1) H NMR&#x3001;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;8-&#x30A2;&#x30CB;&#x30EA;&#x30CE;-1-&#x30CA;&#x30D5;&#x30BF;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EB;&#x30DB;&#x30F3;&#x9178; (ANS) &#x86CD;&#x5149;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x89AA;&#x3088;&#x308A;&#x4E0D;&#x8ABF;&#x3067;&#x3059; [14-38](Abu)&#x3001;P26D27[14-38](Abu) NMR &#x3067;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5C0F;&#x96C6;&#x56E3;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x9806;&#x5E8F;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x69CB;&#x9020; N26G27K28[14-38](Abu) &#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x691C;&#x51FA;&#x306A;&#x3057;&#x3002;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x963B;&#x5BB3;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5909;&#x66F4;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; &#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; C191A/C220A&#x3001;&#x7E70;&#x308A;&#x5E83;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x958B;&#x88C2;&#x3092;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306B;&#x6291;&#x3048;&#x308B;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9; [14-38](Abu) &#x3068;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B; P26D27[14-38](Abu)&#x3002;N26G27K28[14-38](Abu) &#x306F;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x304C;&#x3001;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4F4E;&#x4E2D; [R](Abu) &#x306F;&#x6D3B;&#x6027;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x306E;&#x81FC;&#x6B6F;&#x904E;&#x5270;&#x3068;&#x304D;&#x3067;&#x3055;&#x3048;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;ANS &#x86CD;&#x5149;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066; [14-38](Abu) &#x3068;&#x306F;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x304C;&#x306A;&#x3044; [R](Abu)&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x6298;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB; BPTI &#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x3066;&#x3082;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x3001;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F;&#x5168;&#x304F;&#x306E; CD &#x307E;&#x305F;&#x306F; NMR &#x691C;&#x51FA;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30CA;&#x30FC;&#x306A;&#x500B;&#x4F53;&#x7FA4;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307E;&#x308C;&#x305F; [14-38](Abu) &#x3068;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x4E9C;&#x7A2E;&#x3068;&#x540C;&#x69D8; [R](Abu)&#x3001;&#x8CA0;&#x306E;&#x6955;&#x5186; osmolyte &#x30C8;&#x30EA;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3; n-&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C9; (TMAO) &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x53D6;&#x5F97;&#x3057;&#x305F; CD &#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3067;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5354;&#x8ABF;&#x7684;, &#x71B1;&#x5909;&#x6027;&#x66F2;&#x7DDA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B; TMAO &#x8A98;&#x8D77;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; TMAO &#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;osmolyte &#x8A98;&#x8D77;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x305F;&#x3081; [14-38](Abu) &#x3068; P26D27[14-38](Abu) &#x3068;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; - N26G27K28[14-38](Abu) &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;[R](&#x30A2;&#x30D6;) &#x307E;&#x305F; TMAO &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E; CD &#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x975E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x4E71;&#x308C;&#x305F;&#x725B;&#x81B5;&#x81D3;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D2;&#x30D3;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC18C; &#xCDCC; &#xC7A5; trypsin &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; (BPTI)&#xC758; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC811;&#xD78C;&#xB41C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC559;&#xC0C1;&#xBE14; Cys 14, 38; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xC54C;&#xD30C;-&#xC544;&#xBBF8;&#xB178;-n-butyric &#xC0B0; (&#xC544;)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Cys 5, 30, 51, 55&#xB97C; &#xB300;&#xCCB4; &#xD558; &#xC5EC; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xBCC0;&#xD615; &#xB418; &#xB098; [14-38](Abu). &#xC218;&#xC815; &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xCC28;&#xB840;, P26D27[14-38](Abu) &#xBC0F; N26G27K28[14-38](Abu), &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; analogues &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC811;&#xD600;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; [14-38](Abu)&#xB3C4;&#xB85C; [R](Abu), &#xC544; &#xBD80;&#xB85C; &#xB300;&#xCCB4; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; 6 &#xAC1C;&#xC758; Cys &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;. &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; analogues&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5; [14-38](Abu) &#xC6D0;&#xD615; &#xC591;&#xC0C9;&#xC131; (CD) 1 &#xCC28;&#xC6D0; (1) H NMR &#xD558; &#xC5EC; &#xACB0;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; 8-anilino-1-naphthalenesulfonic &#xC0B0; (ANS) &#xD615;&#xAD11; &#xC2E4;&#xD5D8;. &#xB450; analogues&#xB294; &#xBD80;&#xBAA8; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xBB34;&#xC9C8;&#xC11C; [14-38](Abu), n26g27k28[14-38](abu)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC815;&#xB82C; &#xB41C; &#xAD6C;&#xC870;&#xAC00; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB41C; p26d27[14-38](abu)&#xB294; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xAC19;&#xC740; conformations NMR&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC778;&#xAD6C;. Trypsin &#xC800;&#xD574; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xC950; &#xD2B8;&#xB9BD; &#xC2E0;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD654; &#xD558;&#xB294; C191A/C220A. [14-38](Abu)&#xC640; p26d27[14-38](abu)&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xB41C; &#xD2B8;&#xB9BD; &#xC2E0; &#xC5B5;&#xC81C;. N26g27k28[14-38](abu)&#xB294; &#xB0AE;&#xC740; &#xCE21;&#xC815; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBC18;&#xC751; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBC18;&#xBA74; [r](abu)&#xB3C4; trypsin&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB192;&#xC740; &#xC5B4; &#xAE08; &#xB2C8; &#xCD08;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. ANS &#xD615;&#xAD11;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC15;&#xD654; [14-38](Abu) &#xACE0; &#xB450; &#xBCC0;&#xC885;&#xC774; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC758;&#xD574; [R](Abu). &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2EC;&#xC9C0;&#xC5B4; &#xADF8; &#xAC70;&#xC758; &#xB610;&#xB294; &#xC804;&#xD600; &#xAC10;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; CD &#xB610;&#xB294; NMR &#xAD6C;&#xC870; BPTI&#xC758; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC811;&#xD78C;&#xB41C; &#xC559;&#xC0C1;&#xBE14; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xAC19;&#xC740; conformations&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC778;&#xAD6C; &#xD3EC;&#xD568; &#xACB0;&#xB860;. &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC811;&#xD600; [14-38](Abu) &#xACE0; &#xB450; &#xBCC0;&#xC885;&#xC73C;&#xB85C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; [R](Abu), CD &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; osmolyte trimethylamine N &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C; (TMAO)&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC778;&#xC218;&#xC5D0; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; ellipticity&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4;. TMAO &#xC720;&#xB3C4; &#xAD6C;&#xC870; &#xD611;&#xB825; &#xC5F4; &#xD3BC;&#xCCD0;&#xC9C4; &#xACE1;&#xC120;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xD615;&#xC2DD;&#xC774;. TMAO &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xD568;&#xC218;&#xB85C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; osmolyte&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xAC19;&#xC740; &#xC758;&#xBBF8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; [14-38](Abu) &#xBC0F; P26D27[14-38](Abu) &#xC774;&#xBA70; &#xC544;&#xB9C8; &#xBCF8;&#xD1A0;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; n26g27k28[14-38](abu)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;. [R](&#xC544; &#xBD80;) &#xB610;&#xD55C; TMAO, &#xC874;&#xC7AC; &#xC99D;&#xAC00; CD &#xBC1C;&#xACAC; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xBD95;&#xAD34; &#xB420; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xBC0F; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC774; &#xC544;&#xB2CC;.

&#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C;-&#xCC98;&#xB7FC; conformations &#xC18C; &#xCDCC; &#xC7A5; trypsin &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC811;&#xD78C; &#xBC0F; &#xBB34;&#xC9C8;&#xC11C; &#xBCC0;&#xD615;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0D8;&#xD50C;&#xB9C1; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Conjuntos parcialmente plegadas conformacionales del inhibidor de tripsina pancre&aacute;tico bovino (TRASYLOL) son accesibles mediante la sustituci&oacute;n de Cys 5, 30, 51 y 55 por &aacute;cido alfa-amino-n-but&iacute;rico (Abu) conservando el disulfuro entre Cys 14 y 38; la variante resultante se denomina [14-38](Abu). Dos nuevos an&aacute;logos con modificaciones en la beta-vuelta, P26D27[14-38](Abu) y N26G27K28[14-38](Abu), se comparan a parcialmente doblado [14-38](Abu), as&iacute; como a [R](Abu), la prote&iacute;na desplegada con todos los residuos Cys seis sustituido por Abu. Caracter&iacute;sticas estructurales de los nuevos an&aacute;logos de [14-38](Abu) han sido determinados por dicro&iacute;smo circular (CD), unidimensional (1) H NMR, y experimentos de fluorescencia 8-anilino-1-naphthalenesulfonic &aacute;cido (ANS). Ambos an&aacute;logos son m&aacute;s desordenados que el padre [14-38](Abu), pero mientras que P26D27[14-38](Abu) tiene una poblaci&oacute;n peque&ntilde;a de conformaciones nativo observado por RMN, no se detecta ninguna estructura ordenada para N26G27K28[14-38](Abu). Ensayos de inhibici&oacute;n de tripsina se llevaron a cabo utilizando un tripsina rata modificada, C191A/C220A, que reduce al m&iacute;nimo escote de p&eacute;ptidos desplegados. Tanto [14-38](Abu) y P26D27[14-38](Abu) inhibir significativamente modificada de la tripsina. N26G27K28[14-38](Abu) tiene baja actividad del inhibidor medibles, mientras que [R](Abu) tiene ninguna actividad aunque est&eacute; en exceso molar muy alta en comparaci&oacute;n con tripsina. Es acompa&ntilde;ada de fluorescencia de la ANS [14-38](Abu) y por ambas variantes, pero no por [R](Abu). Concluimos que conjuntos parcialmente plegadas de TRASYLOL, incluso aquellos con poca o ninguna estructura CD o NMR-detectables, contienen poblaciones menores de conformaciones nativo. Parcialmente doblado [14-38](Abu) y ambas variantes, as&iacute; como [R](Abu), han mejorado la elipticidad negativa en espectros de CD adquirido en presencia de la osmolyte trimetilamina n-&oacute;xido (TMAO). OTMA-inducida de la estructura est&aacute; formada cooperativamente, como indicado por curvas despliegue termales. Actividad del inhibidor en funci&oacute;n de la concentraci&oacute;n de OTMA implica que la estructura osmolyte-inducida es nativo para [14-38](Abu) y P26D27[14-38](Abu) y es probablemente nativo como para N26G27K28[14-38](Abu). [R](Abu) tambi&eacute;n muestra mayor estructura CD detectados en presencia de OTMA, pero dicha estructura es probable que se colaps&oacute; y no nativos.

Conformaciones de nativo son muestreadas por variantes parcialmente plegadas y desordenadas del inhibidor de tripsina pancre&aacute;tico bovino.

Crystal structures, at 1.7 A resolution, were solved for complexes between each of two chemically synthesized partially folded analogues of bovine pancreatic trypsin inhibitor (BPTI) with the proteolytically inactive rat trypsin mutant S195A. The BPTI analogue termed [14-38](Abu) retains only the disulfide bond between Cys14 and Cys38, while Cys5, Cys30, Cys51, and Cys55 are replaced by isosteric alpha-amino-n-butyric acid residues. The analogue K26P,A27D[14-38](Abu) contains two further replacements, by statistically favored residues, in the type I beta-turn that has been suggested to be a main site for initiation of BPTI folding. As a control, the structure of the complex between S195A trypsin and wild-type BPTI was also solved. Despite significant differences in the degree of structure detected among these three BPTIs in solution by several biophysical techniques, their tertiary folds once bound to S195A trypsin in a crystalline lattice are essentially superimposable.

Partially folded bovine pancreatic trypsin inhibitor analogues attain fully native structures when co-crystallized with S195A rat trypsin.

Las estructuras cristalinas, en 1.7 una resoluci&oacute;n, se resolvieron por complejos entre cada uno de los dos an&aacute;logos parcialmente plegados qu&iacute;micamente sintetizados de inhibidor de tripsina pancre&aacute;tico bovino (TRASYLOL) con el mutante de tripsina de rata proteolytically inactivo S195A. El an&aacute;logo de TRASYLOL denominado [14-38](Abu) conserva s&oacute;lo el enlace disulfuro entre Cys14 y Cys38, Cys5, Cys30, Cys51, y Cys55 se sustituyen por isosteric residuos de &aacute;cido alfa-amino-n-but&iacute;rico. El an&aacute;logo K26P,A27D[14-38](Abu) contiene dos otros reemplazos, por residuos estad&iacute;sticamente favorecidos, en el tipo vuelta beta que se ha sugerido que un sitio principal de iniciaci&oacute;n de TRASYLOL plegable. Como control, tambi&eacute;n se resolvi&oacute; la estructura del complejo entre S195A tripsina y salvaje-tipo TRASYLOL. A pesar de diferencias significativas en el grado de estructura detectada entre estos tres BPTIs en soluci&oacute;n por varias t&eacute;cnicas biof&iacute;sicas, sus pliegues terciarios una vez obligados a S195A tripsina en un enrejado cristalino son esencialmente superponibles.

An&aacute;logos de inhibidor de tripsina pancre&aacute;tico bovino parcialmente plegadas alcanzan totalmente nativo estructuras cuando co-crystallized con tripsina de rata S195A.

&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x5728; 1.7 A &#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#xFF0C;&#x89E3;&#x51B3;&#x4E86;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x725B;&#x80F0;&#x80F0;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242; (BPTI) &#x4E0E; proteolytically &#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x5927;&#x9F20;&#x80F0;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; S195A &#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5316;&#x5B66;&#x5408;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x6298;&#x53E0;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x914D;&#x5408;&#x3002;&#x88AB;&#x79F0;&#x4E3A; BPTI &#x6A21;&#x62DF; [14-38](Abu) &#x4FDD;&#x7559;&#x53EA; Cys14 &#x548C; Cys38&#xFF0C;Cys5&#x3001; Cys30&#x3001; Cys51&#x3001; &#x540C;&#x65F6;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#xFF0C;Cys55 &#x53D6;&#x800C;&#x4EE3;&#x4E4B;&#x7684;&#x5438;&#x9644;&#x4E01;&#x9178; &alpha;-&#x6C28;&#x57FA;-n-&#x7CFB;&#x5217;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x3002;K26P,A27D[14-38](Abu) &#x6A21;&#x62DF;&#x7531;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x9752;&#x7750;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x7F51;&#x7AD9;&#xFF0C;BPTI &#x6298;&#x53E0;&#x5C55;&#x5F00;&#x7684;&#x7C7B;&#x578B;&#x6211; beta &#x8F6C;&#x4E2D;&#x5305;&#x542B;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x66FF;&#x6362;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x63A7;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x89E3;&#x51B3;&#x4E86; S195A &#x80F0;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x548C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; BPTI &#x4E4B;&#x95F4;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x7531;&#x51E0;&#x4E2A;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x6280;&#x672F;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A; BPTIs &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x91CD;&#x5927;&#x5DEE;&#x5F02;&#xFF0C;&#x57FA;&#x672C;&#x4E0A;&#x662F; superimposable &#x4E00;&#x6B21;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; S195A &#x80F0;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x7ED3;&#x6676;&#x6676;&#x683C;&#x5176;&#x4E13;&#x4E0A;&#x8936;&#x76B1;&#x3002;

&#x90E8;&#x5206;&#x6298;&#x53E0;&#x725B;&#x80F0;&#x80F0;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x5145;&#x5206;&#x5B9E;&#x73B0;&#x672C;&#x673A;&#x7ED3;&#x6784;&#x65F6; co-crystallized &#x4E0E; S195A &#x5927;&#x9F20;&#x80F0;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x3002;

Structures cristallines, &agrave; 1,7 r&eacute;solution, ont &eacute;t&eacute; r&eacute;solus pour complexes entre chacune des deux analogues partiellement pli&eacute;s par synth&egrave;se chimique d&#39;inhibiteur de trypsine pancr&eacute;atique bovine (BPTI) avec le mutant de la trypsine de clivage prot&eacute;olytique inactif rat S195A. L&#39;analogue de TPBE appel&eacute; [14-38](Abu) conserve uniquement la liaison disulfure entre Cys14 et Cys38, tandis que Cys5, Cys30, Cys51, et Cys55 sont remplac&eacute;s par les r&eacute;sidus d&#39;acide alpha-amino-n-butyrique isost&egrave;res. L&#39;analogue K26P,A27D[14-38](Abu) contient deux autre remplacement, par des r&eacute;sidus statistiquement favoris&eacute;s, dans le type j&#39;ai beta-tour qui a &eacute;t&eacute; sugg&eacute;r&eacute; d&#39;&ecirc;tre un site principal pour l&#39;initiation du BPTI pliage. Comme un contr&ocirc;le, la structure du complexe entre S195A la trypsine et sauvage BPTI a &eacute;galement r&eacute;solue. Malgr&eacute; les diff&eacute;rences significatives dans le degr&eacute; de structure d&eacute;tect&eacute;e parmi ces trois BPTIs en solution par plusieurs techniques biophysiques, leurs plis tertiaires une fois li&eacute;s &agrave; S195A la trypsine dans un r&eacute;seau cristallin sont essentiellement superposables.

Analogues d&#39;inhibiteurs de la trypsine pancr&eacute;atique bovine partiellement pli&eacute; atteignent enti&egrave;rement natif structures quand co-crystallized avec de la trypsine du rat S195A.

Kristallstrukturen, bei 1,7 A Aufl&ouml;sung, wurden f&uuml;r komplexe zwischen jedem der zwei chemisch synthetisierte teilweise gefalteten Analoga bovine pancreatic Trypsin Inhibitor (BPTI) mit der Mutant Trypsin spaltet inaktive Ratte S195A gel&ouml;st. BPTI analogen genannt [14-38](Abu) beh&auml;lt nur die Disulfidbindung zwischen Cys14 und Cys38, Cys5, Cys30, Cys51, und Cys55 Fassung Isosteric Alpha-amino-n-Butters&auml;ure saure R&uuml;ckst&auml;nde. Die analogen K26P,A27D[14-38](Abu) enth&auml;lt zwei weitere Ersetzungen, statistisch bevorzugten R&uuml;ckst&auml;nde in den Typ, den ich, den Beta-Zuges, der behauptet wird, eine Haupt-Website f&uuml;r Einleitung BPTI faltbar sein. Als Steuerelement wurde auch die Struktur des Komplexes zwischen S195A Trypsin und Wildtyp BPTI gel&ouml;st. Trotz signifikante Unterschiede im Grad der Struktur, die bei diesen drei BPTIs in L&ouml;sung durch verschiedene biophysikalische Techniken festgestellt sind ihre terti&auml;ren Falten, die einmal an S195A Trypsin in ein Kristallgitter gebunden im wesentlichen superimposable.

Teilweise gefalteten bovine pancreatic Trypsin Inhibitor Analoga erreichen voll Native Strukturen bei co-crystallized mit S195A Ratte Trypsin.

Strutture cristalline, a 1,7 risoluzione, sono stati risolti per complessi tra ciascuno dei due analoghi chimicamente sintetizzati parzialmente ripiegati dell&#39;inibitore della tripsina pancreatica bovina (BPTI) con il mutante di tripsina proteoliticamente inattivo ratto S195A. L&#39;analogo BPTI definito [14-38](Abu) conserva solo il legame disolfuro tra Cys14 e Cys38, mentre Cys5, Cys30, Cys51, e Cys55 vengono sostituiti da residui di acido alfa-ammino-n-butirrico isosteric. L&#39;analogo K26P,A27D[14-38](Abu) contiene due ulteriori sostituzioni, da residui statisticamente favoriti, nel tipo beta-turn che &egrave; stato suggerito per essere un sito principale per l&#39;avvio di BPTI pieghevole. Come un controllo, la struttura del complesso tra S195A tripsina e selvaggio-tipo BPTI inoltre &egrave; stato risolto. Nonostante le significative differenze nel grado di struttura rilevata tra questi tre BPTIs nella soluzione di diverse tecniche biofisiche, loro pieghe terziari una volta associati a S195A tripsina in un reticolo cristallino sono sostanzialmente sovrapponibili.

Analoghi inibitore della tripsina pancreatica bovina parzialmente ripiegato raggiungono completamente nativo strutture quando co-crystallized con tripsina ratto S195A.

1.7 &Aring; &#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3067;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x5404; 2 &#x3064;&#x725B;&#x81B5;&#x81D3;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D2;&#x30D3;&#x30BF;&#x30FC; (BPTI) &#x751F;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; &#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; S195A &#x3068;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x6298;&#x308C;&#x305F;&#x985E;&#x7E01;&#x4F53;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B; BPTI &#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0; [14-38](Abu) &#x306F;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408; Cys14 &#x3068; Cys38&#x3001;Cys5&#x3001;Cys30&#x3001;Cys51 &#x4E2D;&#x3001;&#x9593;&#x306E;&#x307F;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x3001;Cys55 &#x7B49;&#x91CF; &alpha;-&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;-n-&#x916A;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0; K26P,A27D[14-38](Abu) I &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; &#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; BPTI &#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x578B;&#x3067;&#x3001;&#x7D71;&#x8A08;&#x7684;&#x306B;&#x652F;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3067; 2 &#x3064;&#x306E;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x7F6E;&#x63DB;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x9593; S195A &#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; BRTI &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 3 &#x3064;&#x306E; BPTIs &#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5E74;&#x4F1A;&#x624B;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306B;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;S195A &#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x683C;&#x5B50;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F8C;&#x306E;&#x7B2C;&#x4E09;&#x7D00;&#x3072;&#x3060;&#x306F;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x638C;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x6298;&#x308C;&#x305F;&#x30A6;&#x30B7;&#x81B5;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x985E;&#x7E01;&#x4F53;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x304D;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; S195A &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; &#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x3002;

1.7 A &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xAD6C;&#xC870; &#xC0AC;&#xC774; &#xC18C; &#xCDCC; &#xC7A5; trypsin &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; (BPTI) S195A proteolytically &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xC950; trypsin &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC640; &#xD654;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xC131; &#xB41C; &#xB450; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC811;&#xD78C;&#xB41C; analogues&#xC758; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD574;&#xACB0; &#xD588;&#xB2E4;. BPTI &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; &#xB418; &#xB098; [14-38](Abu) Cys14 Cys38, Cys5, Cys30, Cys51, &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC0AC;&#xC774; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xACB0;&#xD569;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; Cys55 isosteric &#xC54C;&#xD30C;-&#xC544;&#xBBF8;&#xB178;-n-butyric acid &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB300;&#xCCB4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; K26P,A27D[14-38](Abu) &#xC720;&#xD615; &#xB098; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD134; BPTI &#xC811;&#xC774;&#xC2DD;&#xC758; &#xAC1C;&#xC2DC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB85C; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0; &#xD1B5;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC120;&#xD638; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xB300;&#xCCB4; &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xB85C; S195A trypsin &#xC0AC;&#xC774; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; BPTI &#xBCF5;&#xD569; &#xAD6C;&#xC870; &#xB610;&#xD55C; &#xD574;&#xACB0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; BPTIs &#xC911;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xAE30;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC9C0; &#xAD6C;&#xC870; &#xC815;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xCC28;&#xC774;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; 3 &#xCC28; &#xC8FC;&#xB984; &#xD55C;&#xBC88; &#xACB0;&#xC815; &#xACA9;&#xC790;&#xC5D0; S195A trypsin&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; superimposable &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC811;&#xD78C;&#xB41C; &#xC18C; &#xCDCC; &#xC7A5; trypsin &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; analogues &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2EC;&#xC131; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAD6C;&#xC870; &#xB54C; S195A &#xC950; trypsin&#xC73C;&#xB85C; co-crystallized.

En todo el genoma-an&#xE1;lisis han sugerido miles de puntos calientes de recombinaci&#xF3;n mei&#xF3;tica entre los genomas de mam&#xED;feros. Sin embargo, los puntos calientes muy pocos se han analizado directamente en una escala sub-kb de cruce (CO) la actividad. Uso de cepas recombinantes puras como una biblioteca de CO, aqu&#xED; se presenta la identificaci&#xF3;n y caracterizaci&#xF3;n detallada de los siete nuevos puntos calientes en mei&#xF3;ticas cromosoma 19 del rat&#xF3;n, m&#xE1;s del doble el n&#xFA;mero de plazas disponibles en la actualidad rat&#xF3;n calientes. Aunque una caracter&#xED;stica compartida es la estrecha 1.5 a 2.5-kb de ancho de estos sitios recombinogenic, estos an&#xE1;lisis revelaron que los puntos calientes tienen atributos diferentes secuencias sim&#xE9;tricas y asim&#xE9;tricas y los perfiles de CO. Curiosamente, las mol&#xE9;culas de CO con tramos discontinuos de conversi&#xF3;n son com&#xFA;nmente observados, lo que contrasta con los encontrados en humanos. Adem&#xE1;s, a diferencia de humanos los puntos calientes, los presentes en el rat&#xF3;n no necesariamente tienen una distribuci&#xF3;n de CO casi normal, pero las zonas portuarias de CO dentro de los n&#xFA;cleos recombinogenic repulsi&#xF3;n. Proponemos un modelo donde el paisaje local de la cromatina dirige estas zonas de repulsi&#xF3;n.

Anatom&#xED;a de los puntos calientes de recombinaci&#xF3;n del rat&#xF3;n

Genome-wide analyses have suggested thousands of meiotic recombination hot spots across mammalian genomes. However, very few hot spots have been directly analyzed at a sub-kb scale for crossover (CO) activity. Using recombinant inbred strains as a CO library, here we report the identification and detailed characterization of seven new meiotic hot spots on mouse chromosome 19, more than doubling the number of currently available mouse hot spots. Although a shared feature is the narrow 1.5-2.5-kb width of these recombinogenic sites, these analyses revealed that hot spots have diverse sequence attributes and distinct symmetric and asymmetric CO profiles. Interestingly, CO molecules with discontinuous conversion tracts are commonly observed, contrasting with those found in human. Furthermore, unlike human hot spots, those present in the mouse do not necessarily have a quasi-normal CO distribution but harbor CO repulsion zones within recombinogenic cores. We propose a model where local chromatin landscape directs these repulsion zones.

Anatomy of mouse recombination hot spots.

&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5206;&#x6790;&#x8DE8;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x6210;&#x5343;&#x4E0A;&#x4E07;&#x7684;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x91CD;&#x7EC4;&#x70ED;&#x70B9;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5F88;&#x5C11;&#x6709;&#x70ED;&#x70B9;&#x8FC7;&#x76F4;&#x63A5;&#x5256;&#x6790;&#x5728; sub kb &#x89C4;&#x6A21;&#x4E3A;&#x4EA4;&#x53C9; (CO) &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x516C;&#x53F8;&#x5E93;&#x4F7F;&#x7528;&#x91CD;&#x7EC4;&#x8FD1;&#x4EA4;&#x7684;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x53CA;&#x4E03;&#x4E2A;&#x65B0;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x70ED;&#x70B9;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x9F20;&#x6807;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; 19&#xFF0C;&#x5F53;&#x524D;&#x53EF;&#x7528;&#x9F20;&#x6807;&#x70ED;&#x70B9;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x589E;&#x52A0;&#x4E00;&#x500D;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5171;&#x4EAB;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x8FD9;&#x4E9B; recombinogenic &#x7F51;&#x7AD9;&#x7684; 1.5-2.5-kb &#x5BBD;&#x5EA6;&#x7A84;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x70ED;&#x70B9;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x5E8F;&#x5217;&#x5C5E;&#x6027;&#x548C;&#x4E0D;&#x540C;&#x5BF9;&#x79F0;&#x548C;&#x975E;&#x5BF9;&#x79F0; CO &#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x8FD8;&#x6307;&#x51FA;&#x4E0E;&#x975E;&#x8FDE;&#x7EED;&#x8F6C;&#x6362;&#x5927;&#x7247; CO &#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x6BD4;&#x4E0E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x88AB;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x70ED;&#x70B9;&#x5730;&#x533A;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x662F;&#x90A3;&#x4E9B;&#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x9F20;&#x6807;&#x4E0D;&#x4E00;&#x5B9A;&#x534A;&#x7684;&#x516C;&#x53F8;&#x5206;&#x5E03;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6E2F;&#x53E3;&#x516C;&#x53F8;&#x65A5;&#x529B;&#x533A; recombinogenic &#x82AF;&#x5185;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x51E1;&#x672C;&#x5730;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x666F;&#x89C2;&#x6307;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65A5;&#x529B;&#x533A;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

&#x9F20;&#x6807;&#x91CD;&#x7EC4;&#x70ED;&#x70B9;&#x7684;&#x89E3;&#x5256;&#x3002;

L&#x26;#39;&#xE9;chelle du g&#xE9;nome analyses ont sugg&#xE9;r&#xE9; des milliers de points chauds de recombinaison m&#xE9;iotique &#xE0; travers g&#xE9;nomes de mammif&#xE8;res. Cependant, tr&#xE8;s peu de points chauds ont &#xE9;t&#xE9; analys&#xE9;s directement &#xE0; une &#xE9;chelle sous-ko pour crossover (CO) d&#x26;#39;activit&#xE9;. Utilisation de souches recombinantes consanguines comme une biblioth&#xE8;que de CO, ici nous rapportons l&#x26;#39;identification et la caract&#xE9;risation d&#xE9;taill&#xE9;e de sept nouveaux points chauds m&#xE9;iotiques sur 19 chromosomes de la souris, a plus que doubl&#xE9; le nombre de places de souris actuellement disponibles chaudes. M&#xEA;me si une caract&#xE9;ristique commune est l&#x26;#39;&#xE9;troite 1.5 &#xE0; 2.5 kb largeur de ces sites recombinog&#xE9;niques, ces analyses ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que les points chauds ont des attributs divers et s&#xE9;quences sym&#xE9;triques distinctes et les profils de CO asym&#xE9;triques. Il est int&#xE9;ressant, avec de vastes mol&#xE9;cules de CO conversion discontinus sont couramment observ&#xE9;es, contrastant avec celles trouv&#xE9;es chez l&#x26;#39;homme. En outre, contrairement &#xE0; l&#x26;#39;homme les points chauds, ceux qui sont pr&#xE9;sents chez la souris n&#x26;#39;ont pas n&#xE9;cessairement une distribution de CO quasi-normale, mais les zones portuaires de CO dans les carottes de r&#xE9;pulsion recombinog&#xE9;niques. Nous proposons un mod&#xE8;le o&#xF9; le paysage chromatine locale dirige ces zones de r&#xE9;pulsion.

Anatomie des taches de recombinaison de souris Hot

Genomweiter Analysen haben Tausende von Hotspots meiotischen Rekombination &uuml;ber S&auml;ugetier-Genome vorgeschlagen. Allerdings wurden nur sehr wenige Hotspots direkt in einem Sub-kb-Ma&szlig;stab f&uuml;r die Frequenzweiche (CO) Aktivit&auml;t analysiert. Rekombinante Inzucht St&auml;mme als eine CO-Bibliothek verwenden, Berichten hier wir die Identifizierung und detaillierte Charakterisierung von sieben neuen meiotischen Hotspots auf Maus-Chromosom 19, mehr als verdoppelt die Anzahl der derzeit verf&uuml;gbaren Maus Hot Spots. Zwar eine gemeinsame Funktion der schmalen 1.5-2.5-kb-Breite dieser Recombinogenic-Sites, ergab diese Analysen, dass Hot-Spots diverse Sequenz Attribute und verschiedene symmetrische und asymmetrische CO-Profile haben. Interessanterweise sind CO-Molek&uuml;le mit diskontinuierlichen Konvertierung Abhandlungen allgemein beobachtet, im Gegensatz zu denen in Menschen. Au&szlig;erdem im Gegensatz zu menschlichen Hot-Spots, die Anwesenden in der Maus m&uuml;ssen nicht unbedingt eine Kriegsparteien CO-Verteilung aber Hafen CO Absto&szlig;ung Zonen innerhalb Recombinogenic Kerne. Wir schlagen ein Modell, wo lokale Chromatin Landschaft diese Absto&szlig;ung-Zonen leitet.

Anatomie der Maus Rekombination Hot Spots.

Analisi genome-wide hanno suggerito migliaia di ricombinazione meiotic hot spot attraverso genomi dei mammiferi. Tuttavia, molto pochi punti caldi sono stati analizzati direttamente a scala sub-kb per attivit&agrave; di crossover (CO). Utilizzando ceppi inbred ricombinante come libreria CO, riportiamo l&#39;identificazione e la caratterizzazione dettagliata di sette nuovi meiotic hot spot sul cromosoma mouse 19, pi&ugrave; che raddoppiando il numero dei punti caldi del mouse attualmente disponibili. Anche se una caratteristica condivisa &egrave; la stretta larghezza di 1,5-2,5-kb di questi siti recombinogenic, queste analisi hanno rivelato che hot spot hanno attributi sequenza diversi e distinti profili di CO simmetrici e asimmetrici. &Egrave; interessante notare che, molecole di CO con tratti discontinui conversione sono comunemente osservati, in contrasto con quelle che si trovano nell&#39;uomo. Inoltre, a differenza di umana hot spot, quelli presenti nel topo non hanno necessariamente una distribuzione CO quasi-normal ma CO zone repulsione all&#39;interno di nuclei recombinogenic del porto. Vi proponiamo un modello dove il panorama locale della cromatina dirige queste zone di repulsione.

Anatomia dei punti caldi della ricombinazione di mouse.

&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x306A;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306E;&#x30DB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x6570;&#x5343;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5C11;&#x6570;&#x306E;&#x30DB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC;&#xFF08;CO&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30AD;&#x30ED;&#x30D0;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x5206;&#x6790;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; CO&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x8FD1;&#x4EA4;&#x7CFB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x5165;&#x624B;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30DB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x6570;&#x3092;&#x500D;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;19&#x756A;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x4E0A;&#x306E;7&#x3064;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x30DB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5171;&#x6709;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x72ED;&#x3044;1.5&#x304B;&#x3089;2.5-kb&#x306E;&#x5E45;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x30DB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x5C5E;&#x6027;&#x3068;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5BFE;&#x79F0;&#x3068;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x306E;CO&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x4E0D;&#x9023;&#x200B;&#x200B;&#x7D9A;&#x5909;&#x63DB;&#x7BA1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;CO&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x3001;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x30DB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x5FC5;&#x305A;&#x3057;&#x3082;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30B3;&#x30A2;&#x5185;&#x306E;&#x6E96;&#x6B63;&#x5E38;CO&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x304C;&#x6E2F;&#x306E;CO&#x53CD;&#x767A;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5730;&#x5143;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x98A8;&#x666F;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x53CD;&#x767A;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x6307;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30DB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x89E3;&#x5256;&#x5B66;

&#xAC8C;&#xB188; &#xB113;&#xC740; &#xBD84;&#xC11D; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; meiotic &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD56B;&#xC2A4;&#xD31F; &#xC218;&#xCC9C;&#xC744; &#xAC74;&#xC758; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xAC70;&#xC758; &#xD56B;&#xC2A4;&#xD31F; &#xC9C1;&#xC811; &#xBD84;&#xC11D; &#xB41C; &#xD06C;&#xB85C;&#xC2A4; &#xC624;&#xBC84; (CO) &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD558;&#xC704; kb &#xADDC;&#xBAA8;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C;&#xB41C; &#xC885;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; CO &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xB85C;, &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; 7 &#xAC1C;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; meiotic &#xD56B; &#xC2A4;&#xD3EC;&#xD2B8;&#xC758; &#xC0C1;&#xC138;&#xD55C; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; 19 &#xC77C; &#xC774;&#xC0C1; &#xD604;&#xC7AC; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD56B;&#xC2A4;&#xD31F; &#xC218;&#xB97C; &#xB450; &#xBC30;&#xB85C;. &#xACF5;&#xC720; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC740; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; recombinogenic &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC881;&#xC740; 1.5 2.5 kb &#xD3ED; &#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC628;&#xCC9C; &#xAD00;&#xAD11; &#xBA85;&#xC18C;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xD2B9;&#xC131; &#xBC0F; &#xACE0;&#xC720; &#xB300;&#xCE6D; &#xBC0F; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xACF5;&#xB3D9; &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xBD88;&#xC5F0;&#xC18D; &#xBCC0;&#xD658; &#xCC45;&#xC790;&#xC640; CO &#xBD84;&#xC790;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xCC30;, &#xADF8; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC;&#xACFC; &#xB300;&#xC870;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC628;&#xCC9C; &#xBA85;&#xC18C;&#xC640;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xADF8; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBC18;&#xB4DC;&#xC2DC; quasi-normal &#xACF5;&#xB3D9; &#xBD84;&#xBC30;&#xB97C; &#xD544;&#xC694;&#xB294; &#xC5C6;&#xC9C0;&#xB9CC; recombinogenic &#xCF54;&#xC5B4; &#xB0B4; CO &#xBC18;&#xBC1C; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xD56D;&#xAD6C;. &#xC5B4;&#xB514; &#xC9C0;&#xC5ED; chromatin &#xD48D;&#xACBD; &#xC9C0;&#xD718; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC18;&#xBC1C; &#xC601;&#xC5ED; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD56B;&#xC2A4;&#xD31F; &#xD574;&#xBD80;&#xD559;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x5728;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#xFF0C;&#x7236;&#x4EB2;&#x548C;&#x6BCD;&#x4EB2;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x91CD;&#x7EC4;&#x547D;&#x540D;&#x70ED;&#x70B9;&#x5177;&#x4F53;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x5730;&#x70B9;&#x3002;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x672A;&#x77E5;&#x4EC0;&#x4E48;&#x5448;&#x73B0; 2%&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5BBD;&#x5BB9;&#x5230;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x91CD;&#x7EC4;&#x901A;&#x8FC7;&#x5141;&#x8BB8; Spo11 &#x6838;&#x9178;&#x5185;&#x5207;&#x9176;&#x542F;&#x52A8;&#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2;&#x3002;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8868;&#x660E;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x8F85;&#x52A9;&#x529F;&#x80FD;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5B9A;&#x4E49;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x548C;&#x7B2C;&#x56DB;&#x4E2A;&#x9F20;&#x6807;&#x91CD;&#x7EC4;&#x70ED;&#x70B9;&#x7531;&#x51C0;&#x5316;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x9AD8;&#x6D53;&#x7F29;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x6570;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F1A;&#x53D1;&#x73B0;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x5360;&#x7528;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x8FDB;&#x5C55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x662F;&#x5927;&#x81F4;&#x4FDD;&#x6301;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x70ED;&#x70B9;&#x7684;&#x6838;&#x5FC3;&#x90E8;&#x5206;&#x6709;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x5F00;&#x653E;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5185;&#x6838;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7CBE;&#x786E;&#x5173;&#x8054;&#x4EA4;&#x53C9;&#x533A; recombinogenic &#x57DF;&#x4E2D;&#x3002;&#x96C6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x5165;&#x4F4F;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x5BF9;&#x76F4;&#x63A5;&#xFF0C;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x5982;&#x4F55;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x8FDB;&#x884C;&#x5904;&#x7406;&#x3002;

&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x5165;&#x4F4F;&#x666F;&#x89C2;&#x548C;&#x9F20;&#x6807;&#x91CD;&#x7EC4;&#x70ED;&#x70B9;&#x52A8;&#x6001;&#x3002;

During meiosis, paternal and maternal homologous chromosomes recombine at specific recombination sites named hotspots. What renders 2% of the mammalian genomes permissive to meiotic recombination by allowing Spo11 endonuclease to initiate double-strand breaks is largely unknown. Work in yeast has shown that chromatin accessibility seems to be important for this activity. Here, we define nucleosome profiles and dynamics at four mouse recombination hotspots by purifying highly enriched fractions of meiotic cells. We found that nucleosome occupancy is generally stable during meiosis progression. Interestingly, the cores of recombination hotspots have largely open chromatin structure, and the localization of the few nucleosomes present in these cores correlates precisely with the crossover-free zones in recombinogenic domains. Collectively, these high-resolution studies suggest that nucleosome occupancy seems to direct, at least in part, how meiotic recombination events are processed.

Nucleosome occupancy landscape and dynamics at mouse recombination hotspots.

Durante la meiosis, paterno y materno se recombinan los cromosomas hom&#xF3;logos en los sitios espec&#xED;ficos de recombinaci&#xF3;n denominado puntos de acceso. Lo que hace el 2% de los genomas de mam&#xED;feros permisivas a la recombinaci&#xF3;n mei&#xF3;tica, permitiendo Spo11 endonucleasa para iniciar doble filamento se rompe es en gran parte desconocido. Trabajo en la levadura ha demostrado que la accesibilidad de la cromatina parece ser importante para esta actividad. En este sentido, definir los perfiles de nucleosomas y la din&#xE1;mica de cuatro puntos de recombinaci&#xF3;n del rat&#xF3;n mediante la purificaci&#xF3;n de las fracciones altamente enriquecido de c&#xE9;lulas mei&#xF3;ticas. Se encontr&#xF3; que la ocupaci&#xF3;n nucleosoma es generalmente estable durante la progresi&#xF3;n de la meiosis. Curiosamente, los n&#xFA;cleos de los puntos calientes de recombinaci&#xF3;n tienen estructura de la cromatina muy abierto, y la localizaci&#xF3;n de los nucleosomas pocos presentes en estos n&#xFA;cleos se relaciona precisamente con las zonas francas de cruce-en los dominios recombinogenic. En conjunto, estos estudios de alta resoluci&#xF3;n sugieren que la ocupaci&#xF3;n nucleosoma parece dirigir, al menos en parte, como los eventos de recombinaci&#xF3;n mei&#xF3;tica se procesan.

Paisaje de ocupaci&#xF3;n nucleosoma y din&#xE1;mica en los hotspots de recombinaci&#xF3;n del rat&#xF3;n

Au cours de la m&#xE9;iose, paternelle et maternelle homologue recombinent chromosomes sur les sites de recombinaison sp&#xE9;cifique nomm&#xE9;e hotspots. Ce qui rend 2% des g&#xE9;nomes de mammif&#xE8;res permissives &#xE0; la recombinaison m&#xE9;iotique en permettant Spo11 endonucl&#xE9;ase de lancer des cassures double brin est largement inconnue. Travail dans la levure a montr&#xE9; que l&#x26;#39;accessibilit&#xE9; chromatine semble &#xEA;tre important pour cette activit&#xE9;. Ici, nous d&#xE9;finissons les profils des nucl&#xE9;osomes et de la dynamique &#xE0; quatre points chauds de recombinaison de la souris en purifiant fractions hautement enrichies de cellules m&#xE9;iotiques. Nous avons trouv&#xE9; que l&#x26;#39;occupation nucl&#xE9;osome est g&#xE9;n&#xE9;ralement stable pendant la progression de la m&#xE9;iose. Fait int&#xE9;ressant, les noyaux de points chauds de recombinaison ont largement ouvert structure de la chromatine, et la localisation des nucl&#xE9;osomes peu pr&#xE9;sents dans ces noyaux est corr&#xE9;l&#xE9;e pr&#xE9;cis&#xE9;ment avec les zones de croisement-libres dans les domaines recombinog&#xE9;niques. Collectivement, ces &#xE9;tudes &#xE0; haute r&#xE9;solution indiquent que l&#x26;#39;occupation nucl&#xE9;osome semble diriger, au moins en partie, comment les &#xE9;v&#xE9;nements de recombinaison m&#xE9;iotique sont trait&#xE9;es.

Paysage d&#x26;#39;occupation des nucl&#xE9;osomes et dynamique au points chauds de recombinaison de souris

W&auml;hrend der Meiose rekombinieren v&auml;terliche und m&uuml;tterliche homologe Chromosomen an bestimmten Rekombination Standorten namens Hotspots. Es ist weitgehend unbekannt, was 2 % der S&auml;ugetier-Genome zu meiotischen Rekombination permissive macht dadurch, dass Spo11 Endonuklease, Doppel-Strang Pausen zu initiieren. Arbeit in der Hefe ergab, dass Chromatin Barrierefreiheit scheint wichtig f&uuml;r diese T&auml;tigkeit zu sein. Hier definieren wir Nukleosom-Profile und Dynamik an vier Maus Rekombination Hotspots durch Filtrieren hochangereichertes Br&uuml;che meiotischen Zellen. Wir fanden, dass Nukleosom Belegung w&auml;hrend der Meiose Fortschreiten insgesamt stabil ist. Interessant ist, die Kerne der Rekombination Hotspots haben weitgehend offen Chromatin-Struktur, und die Sprachunterst&uuml;tzung f&uuml;r das Paar in dieser Kerne vorhanden Nucleosomes korreliert genau mit den Crossover-freie Zonen in Recombinogenic Dom&auml;nen. Zusammenfassend deutet diese hochaufl&ouml;senden Untersuchungen Nukleosom Belegung direkt, zumindest teilweise, wie meiotischen Rekombination scheint die Ereignisse verarbeitet werden.

Nukleosom Belegung Landschaft und Dynamik an Maus Rekombination Hotspots.

Durante la meiosi, paterna e materne cromosomi omologhi ricombinano in siti di ricombinazione specifico denominati hotspot. Ci&ograve; che rende il 2% del genoma dei mammiferi permissiva per ricombinazione meiotic consentendo Spo11 endonucleasi di avviare double-strand break &egrave; in gran parte sconosciuto. Lavoro in lievito ha dimostrato che l&#39;accessibilit&agrave; della cromatina sembra essere importante per questa attivit&agrave;. Qui, noi definire profili nucleosome e dinamica presso gli hotspot di ricombinazione del mouse quattro purificando altamente arricchito le frazioni di meiotic delle cellule. Abbiamo trovato che occupazione nucleosoma &egrave; generalmente stabile durante la progressione di meiosi. &Egrave; interessante notare che, i nuclei di hotspot ricombinazione hanno struttura della cromatina in gran parte aperto, e la localizzazione dei nucleosomes pochi presenti in questi nuclei correla esattamente con il crossover-free zone in domini recombinogenic. Collettivamente, questi studi ad alta risoluzione suggeriscono che occupazione nucleosome sembra diretto, almeno in parte, ricombinazione meiotic come gli eventi vengono elaborati.

Nucleosome occupazione paesaggio e dinamica presso gli hotspot di ricombinazione del mouse.

&#x30DB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x540D;&#x524D;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7236;&#x65B9;&#x3068;&#x6BCD;&#x65B9;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x518D;&#x7D50;&#x5408;&#x3002;&#x4F55;SPO11&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3001;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306B;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x306A;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;2&#xFF05;&#x3092;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x3067;&#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x601D;&#x308F;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9AD8;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x753B;&#x5206;&#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x3066;4&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30DB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3068;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5360;&#x6709;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x4E2D;&#x306B;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30DB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5185;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC;&#xB7;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x4E8B;&#x8C61;&#x304C;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x51E6;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5360;&#x6709;&#x7387;&#x304C;&#x6307;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30DB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x5360;&#x6709;&#x306E;&#x98A8;&#x666F;&#x3068;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;

Meiosis, &#xB3D9;&#xC548; &#xC544;&#xBC84;&#xC9C0;&#xC640; &#xC5B4;&#xBA38;&#xB2C8; &#xB3D9;&#xC885; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xD56B;&#xC2A4;&#xD31F; &#xB77C;&#xB294; &#xD2B9;&#xC815; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC7AC;&#xACB0;&#xD569;. &#xBB34;&#xC5C7; &#xB80C;&#xB354;&#xB9C1; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; 2%&#xB97C; Spo11 endonuclease &#xB354;&#xBE14;-&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB79C;&#xB4DC; &#xB098;&#xB204;&#xAE30;&#xB97C; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558; &#xC5EC; meiotic &#xC7AC;&#xACB0;&#xD569;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC740; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;. &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0; &#xC791;&#xD488; chromatin &#xC811;&#xADFC;&#xC131;&#xC774;&#xC774; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83; &#xAC19;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; nucleosome &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xC815;&#xC758; &#xBC0F; &#xC5ED;&#xD559;&#xC744; &#xC815;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD56B;&#xC2A4;&#xD31F;&#xC5D0; &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xB18D;&#xCD95; meiotic &#xC140;&#xC758; &#xBD84;&#xC218;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; nucleosome &#xC778; meiosis &#xC9C4;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC548;&#xC815; &#xB418;&#xC5B4; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD56B;&#xC2A4;&#xD31F; &#xCF54;&#xC5B4; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC624;&#xD508; chromatin &#xAD6C;&#xC870;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCF54;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; nucleosomes&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xAD00;&#xB828; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; recombinogenic &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD06C;&#xB85C;&#xC2A4; &#xC624;&#xBC84; &#xBB34;&#xB8CC; &#xC601;&#xC5ED;. &#xC0E8; &#xB2E4;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC5F0;&#xAD6C; nucleosome &#xC778; &#xAC19;&#xB2E4;&#xB294; &#xC9C1;&#xC811;, &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; meiotic &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xAC00; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB418;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Nucleosome &#xC778; &#xD48D;&#xACBD;&#xACFC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD56B;&#xC2A4;&#xD31F;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD559;.

Irina V. Getun

Genome Plasticity Laboratory,
Department of Cancer Biology,
Genome Plasticity Laboratory, Department of Cancer Biology

The Scripps Research Institute

Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells

Irina V. Getun

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Genome Plasticity Laboratory,Department of Cancer Biology,Genome Plasticity Laboratory, Department of Cancer Biology

The Scripps Research Institute

Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells

Genome Plasticity Laboratory,
Department of Cancer Biology,
Genome Plasticity Laboratory, Department of Cancer Biology