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Selective Labelling of Cell-surface Proteins using CyDye DIGE Fluor Minimal Dyes

Surface  proteins are central to the cell's ability to react to its environment and to interact with neighboring cells. They are known to be inducers of ...

GE Healthcare Bio-Sciences AB

E6AP &#x6700;&#x521D;&#x88AB;&#x8BA4;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E73;&#x5934;&#x72B6;&#x7624;&#x75C5;&#x6BD2; (HPV) E6 &#x4ECB;&#x5BFC; p53 &#x964D;&#x89E3;&#x7684;&#x6CDB;&#x7D20;&#x86CB;&#x767D;&#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x548C;&#x5DF2;&#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x4F5C;&#x4E3A; E3 &#x6CDB;&#x7D20;&#x86CB;&#x767D;&#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x4E2D;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5176;&#x4ED6;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x8D28;&#x6CDB;&#x3002;&#x8981;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5B9A;&#x4E49;&#x5728;&#x5206;&#x5B50;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684; E6AP &#x51FD;&#x6570;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E00;&#x79CD;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6838;&#x9176;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5931;&#x6D3B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x56FE;&#x4E66;&#x9986;&#x7684;&#x9524;&#x5934;&#x6838;&#x9176;&#xFF0C;&#x968F;&#x673A;&#x7684;&#x81C2;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x5C4F;&#x5E55;&#x6CBF; E6AP &#x6574;&#x4E2A;&#x8C08;&#x8BDD;&#x5185;&#x5BB9;&#x4E3A;&#x6838;&#x9176;&#x591A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x6D3B;&#x8DC3;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x7ED3;&#x624E;&#x951A;&#x5B9A; PCR &#x505A;&#x4E86;&#x8C03;&#x6574;&#xFF0C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x88C2;&#x89E3;&#x4EA7;&#x54C1;&#x548C;&#x6838;&#x9176;&#x5230;&#x6240;&#x9009;&#x7AD9;&#x70B9;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;E6AP &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x4E2D;&#x7684;&#x7AEF;&#x7C92;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x51CF;&#x5C11;&#x627E;&#x6765;&#x52A0;&#x5F3A;&#x5BF9;&#x4E1D;&#x88C2;&#x9709;&#x7D20; C &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x5BAB;&#x9888;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x51CB;&#x4EA1;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;E6AP &#x5177;&#x6709;&#x6F5C;&#x529B;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5176;&#x5236;&#x6B62;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x836F;&#x7269;&#x6CBB;&#x7597;&#x4EBA;&#x4E73;&#x5934;&#x7624;&#x75C5;&#x6BD2;&#x9633;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;

E6AP &#x57FA;&#x56E0;&#x6291;&#x5236;&#x548C;&#x8868;&#x5F81;&#x4E0E;&#x4F53;&#x5916;&#x9009;&#x5B9A;&#x9524;&#x5934;&#x6838;&#x9176;&#x3002;

E6AP was originally identified as the ubiquitin-protein ligase involved in human papillomavirus (HPV) E6-mediated p53 degradation and has since been shown to act as an E3 ubiquitin-protein ligase in the ubiquitination of several other protein substrates. To further define E6AP function at the molecular and cellular levels, a ribozyme-based gene inactivation approach was adopted. A library of hammerhead ribozymes, with randomized arm sequences, was used to screen active molecules along the entire E6AP transcript for ribozyme-cleavable sites. Ligation-anchored PCR was adapted to detect cleavage products, and ribozymes designed to the selected sites were characterized both in vitro and in vivo. Ribozyme-mediated reduction in E6AP expression was found to enhance the apoptotic response of HeLa cells to mitomycin C-induced DNA damage. These findings suggest that E6AP has potential as a drug target, as its suppression can potentiate apoptosis in HPV-positive cells treated with a cytotoxic drug.

E6AP gene suppression and characterization with in vitro selected hammerhead ribozymes.

E6ap a &#xE9;t&#xE9; initialement identifi&#xE9; comme &#xE9;tant le ubiquitine ligase-prot&#xE9;ine impliqu&#xE9;e dans le virus du papillome humain (VPH) la d&#xE9;gradation de p53 m&#xE9;di&#xE9;e par E6-et a depuis &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; &#xE0; agir comme un E3 ubiquitine ligase de prot&#xE9;ine dans l&#x26;#39;ubiquitination de plusieurs autres substrats prot&#xE9;iques. Afin de mieux d&#xE9;finir la fonction E6ap aux niveaux mol&#xE9;culaire et cellulaire, une approche bas&#xE9;e sur ribozyme g&#xE8;ne inactivation a &#xE9;t&#xE9; adopt&#xE9;e. Une biblioth&#xE8;que de marteau ribozymes, avec des s&#xE9;quences de bras randomis&#xE9;s, a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pour cribler des mol&#xE9;cules actives le long de la transcription E6ap entier pour ribozyme-clivables sites. La ligature-PCR ancr&#xE9;e a &#xE9;t&#xE9; adapt&#xE9; pour d&#xE9;tecter les produits de clivage, et ribozymes con&#xE7;us pour les sites s&#xE9;lectionn&#xE9;s ont &#xE9;t&#xE9; caract&#xE9;ris&#xE9;s &#xE0; la fois in vitro et in vivo. Ribozyme &#xE0; m&#xE9;diation r&#xE9;duction de l&#x26;#39;expression E6ap &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9;e pour am&#xE9;liorer la r&#xE9;ponse apoptotique des cellules HeLa aux dommages mitomycine C ADN induite. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que E6ap dispose d&#x26;#39;un potentiel en tant que cible de m&#xE9;dicament, comme sa suppression peut potentialiser l&#x26;#39;apoptose dans les HPV-positives les cellules trait&#xE9;es avec un m&#xE9;dicament cytotoxique.

R&#xE9;pression g&#xE9;nique E6ap et caract&#xE9;risation in vitro avec s&#xE9;lection Hammerhead ribozymes

E6AP Gensuppression und Charakterisierung mit in vitro selektierten Hammerhead-Ribozyme.

E6AP originalmente &egrave; stato identificato come l&#39;ubiquitina-proteina ligasi coinvolta nel papillomavirus umano (HPV) degradazione p53 E6-mediata ed allora &egrave; stato dimostrato di agire come una ligasi di ubiquitin-proteina E3 in ubiquitination di parecchi altri substrati della proteina. Per definire ulteriormente la funzione di E6AP a livello molecolare e cellulare, &egrave; stato adottato un approccio di inattivazione del gene ribozima-based. Una libreria di hammerhead ribozimi, con sequenze di braccio randomizzato, &egrave; stata utilizzata per lo screening di molecole attive lungo l&#39;intera trascrizione E6AP per siti ribozima-fessurabili. Legatura-ancorata PCR &egrave; stata adattata per rilevare i prodotti di clivaggio e ribozimi progettati per i siti selezionati sono stati caratterizzati sia in vitro che in vivo. Ribozima-mediata riduzione nell&#39;espressione di E6AP &egrave; stato trovato per aumentare la risposta apoptotic delle cellule HeLa di mitomicina C-induced DNA damage. Questi risultati suggeriscono che E6AP ha un potenziale come un obiettivo di droga, come sua soppressione pu&ograve; potenziare il apoptosis in cellule HPV-positivi trattati con un farmaco citotossico.

Soppressione genica E6AP e caratterizzazione con in vitro selezionati hammerhead ribozimi.

E6AP&#x306F;&#x3001;&#x3082;&#x3068;&#x3082;&#x3068;&#x30D2;&#x30C8;&#x30D1;&#x30D4;&#x30ED;&#x30FC;&#x30DE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;HPV&#xFF09;E6&#x5A92;&#x4ECB;p53&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x4EE5;&#x6765;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x306E;E3&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;E6AP&#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x304C;&#x63A1;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7121;&#x4F5C;&#x70BA;&#x30A2;&#x30FC;&#x30E0;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30CF;&#x30F3;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D8;&#x30C3;&#x30C9;&#x578B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x3001;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x5207;&#x65AD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;E6AP&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B2;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;PCR&#x306F;&#x3001;&#x958B;&#x88C2;&#x751F;&#x6210;&#x7269;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x9069;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002; E6AP&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x5A92;&#x4ECB;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;C&#x8A98;&#x767A;DNA&#x640D;&#x50B7;&#x3078;&#x306E;HeLa&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x304C;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;&#x85AC;&#x5264;&#x3067;&#x51E6;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x305F;HPV&#x967D;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;E6AP&#x306F;&#x3001;&#x85AC;&#x7269;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

in vitro&#x3067;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30CF;&#x30F3;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D8;&#x30C3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30DC;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x6301;&#x3064;E6AP&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x3068;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

E6AP &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB9AC;&#xAC00; &#xC778;&#xAC04; &#xC720; &#xB450; &#xC885; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (HPV) E6 &#xC911;&#xC7AC; p53 &#xC800;&#xD558;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC6D0;&#xB798;&#xB294; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xD6C4; &#xB2E4;&#xB978; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; ubiquitination&#xC5D0;&#xC11C; E3 &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB9AC;&#xAC00;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC790; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; E6AP &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xCD94;&#xAC00;&#xB85C; &#xC815;&#xC758; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; ribozyme &#xAE30;&#xBC18; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC811;&#xADFC; &#xCC44;&#xD0DD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBB34;&#xC791;&#xC704; &#xD314; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC640; &#xADC0;&#xC0C1;&#xC5B4; ribozymes &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; ribozyme cleavable &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xCCB4; E6AP &#xB300; &#xBCF8; &#xB530;&#xB77C; &#xD65C;&#xC131; &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xD654;&#xBA74;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xACB0; &#xCC30; &#xACE0;&#xC815; PCR &#xC801;&#xC751; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC81C;&#xD488;&#xC744; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; ribozymes &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB85C; &#xC124;&#xACC4; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4;. E6AP &#xC2DD; &#xAC10;&#xC18C; Ribozyme &#xC911;&#xC7AC; &#xBBF8;&#xD1A0;&#xB9C8;&#xC774;&#xC2E0; C&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xC5D0; HeLa &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; apoptotic &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC5B5;&#xC81C; cytotoxic &#xC57D;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD558;&#xB294; HPV &#xC591;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; apoptosis &#xC57D;&#xD6A8; &#xC218; E6AP &#xB9C8;&#xC57D; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC774; &#xC81C;&#xC548;.

E6AP &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC0F; &#xCCB4; &#xC678;&#xB85C; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xADC0;&#xC0C1;&#xC5B4; ribozymes&#xB97C; &#xC120;&#xD0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

E6AP fue originalmente identificado como la ligasa de ubiquitina-prote&#xED;na que participa en el virus del papiloma humano (VPH) E6-mediada por la degradaci&#xF3;n de p53 y desde entonces se ha demostrado que act&#xFA;a como una E3 ubiquitina-prote&#xED;na ligasa en la ubiquitinaci&#xF3;n de varios sustratos proteicos otros. Para definir mejor la funci&#xF3;n E6AP en los niveles molecular y celular, un enfoque basado en gen ribozima inactivaci&#xF3;n fue adoptado. Una biblioteca de martillo ribozimas, con secuencias de brazo aleatorios, fue utilizado para cribar mol&#xE9;culas activas a lo largo de la transcripci&#xF3;n E6AP entero para ribozima-escindibles sitios. Ligaci&#xF3;n-anclado PCR se adaptado para detectar productos de escisi&#xF3;n, y ribozimas dise&#xF1;ados para los sitios seleccionados se caracterizaron tanto in vitro como in vivo. Ribozima mediada por la reducci&#xF3;n en la expresi&#xF3;n E6AP se encontr&#xF3; para aumentar la respuesta apopt&#xF3;tica de las c&#xE9;lulas HeLa a da&#xF1;os mitomicina C ADN inducido. Estos hallazgos sugieren que E6AP tiene potencial como diana terap&#xE9;utica, ya que su supresi&#xF3;n puede potenciar la apoptosis en las c&#xE9;lulas positivas para el VPH-tratados con una droga citot&#xF3;xica.

Supresi&#xF3;n E6AP Gene y Caracterizaci&#xF3;n in vitro con martillo seleccionados ribozimas

&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7528;&#x4E8E;&#x6807;&#x8BC6;&#x663E;&#x793A;&#x66F4;&#x6539;&#x7684;&#x7EA7;&#x522B;&#x4E0E;&#x5019;&#x9009;&#x836F;&#x7269;&#x6CBB;&#x7597;&#x540E;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x809D;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x4ECE;&#x5019;&#x9009;&#x836F;&#x7269;&#x6CBB;&#x7597;&#x6216;&#x672A;&#x7ECF;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x809D;&#x810F;&#x7684;&#x6837;&#x54C1;&#x51C6;&#x5907;&#x3001; &#x91CF;&#x5316;&#x3001; &#x6807;&#x8BB0;&#x4E0E;&#x5E1D; Fluors CyDye&#xFF0C;&#x5E76;&#x53D7;&#x5230;&#x7535;&#x6CF3;&#x3002;&#x626B;&#x63CF;&#x548C;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x51DD;&#x80F6;&#x4ECE;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7B49;&#x7535;&#x805A;&#x7126;&#x95F4;&#x9694; 6.2-7.5 7-11 3-10&#xFF09; &#x4E4B;&#x540E;, &#x81EA;&#x52A8;&#x70B9;&#x7684;&#x5904;&#x7406;&#x4E0A;&#x4E00;&#x5927;&#x6279;&#x5305;&#x62EC;&#x90A3;&#x4E9B;&#x6709;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x5206;&#x522B;&#x8D85;&#x8FC7; 20%&#x7684;&#x5904;&#x7406;&#x548C;&#x672A;&#x7ECF;&#x5904;&#x7406;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x51DD;&#x80F6;&#x70B9;&#x6267;&#x884C;&#x3002;&#x968F;&#x540E;&#xFF0C;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x5230;&#x4F7F;&#x7528; (a) &#x57FA;&#x8D28;&#x8F85;&#x52A9;&#x6FC0;&#x5149;&#x89E3;&#x5438;&#x7535;&#x79BB;/&#x98DE;&#x884C;&#x65F6;&#x95F4;&#x8D28;&#x8C31;&#x80BD;&#x8D28;&#x91CF;&#x6307;&#x7EB9;&#x56FE;&#x8C31;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528;&#x5316;&#x5B66;&#x8F85;&#x52A9;&#x7684;&#x788E;&#x7247;&#x548C; (c) &#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x4E32;&#x8054;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5; (b) post-source &#x8870;&#x53D8;&#x7684;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x4E09;&#x6B65;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#x5DF2;&#x89E3;&#x51B3; 121 &#x5DEE;&#x5F02;&#x8C03;&#x8282;&#x86CB;&#x767D;&#x540E;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E0E;&#x5019;&#x9009;&#x836F;&#x7269;&#x6CBB;&#x7597;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x6765;&#x786E;&#x5B9A;&#x8FD9;&#x4E9B; 110&#x3002;&#x6B64;&#x7C7B;&#x6570;&#x636E;&#x53EF;&#x80FD;&#x8BA9;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x6BD2;&#x6027;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6CBB;&#x7597;&#x540E;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x80FD;&#x591F;&#x6539;&#x8FDB;&#x5206;&#x5B50;&#x6D1E;&#x6089;&#x3002;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x53EF;&#x7528;&#x4F5C;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x6216;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x3002;

&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x5438;&#x6536;&#x3001; &#x5206;&#x5E03;&#x3001; &#x4EE3;&#x8C22;&#x3001; &#x6392;&#x6CC4;&#x548C;&#x6BD2;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

A proteomics approach was used to identify liver proteins that displayed altered levels in mice following treatment with a candidate drug. Samples from livers of mice treated with candidate drug or untreated were prepared, quantified, labeled with CyDye DIGE Fluors, and subjected to two-dimensional electrophoresis. Following scanning and imaging of gels from three different isoelectric focusing intervals (3-10, 7-11, 6.2-7.5), automated spot handling was performed on a large number of gel spots including those found to differ more than 20% between the treated and untreated condition. Subsequently, differentially regulated proteins were subjected to a three-step approach of mass spectrometry using (a) matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry peptide mass fingerprinting, (b) post-source decay utilizing chemically assisted fragmentation, and (c) liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Using this approach we have so far resolved 121 differentially regulated proteins following treatment of mice with the candidate drug and identified 110 of these using mass spectrometry. Such data can potentially give improved molecular insight into the metabolism of drugs as well as the proteins involved in potential toxicity following the treatment. The differentially regulated proteins could be used as targets for metabolic studies or as markers for toxicity.

A proteomics approach to the study of absorption, distribution, metabolism, excretion, and toxicity.

Une approche prot&#xE9;omique a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pour identifier les prot&#xE9;ines du foie qui s&#x26;#39;affichent niveaux alt&#xE9;r&#xE9;s chez la souris apr&#xE8;s un traitement avec un m&#xE9;dicament candidat. Les &#xE9;chantillons provenant de foies de souris trait&#xE9;es avec le m&#xE9;dicament candidat ou non trait&#xE9;e ont &#xE9;t&#xE9; pr&#xE9;par&#xE9;s, quantifi&#xE9;s, &#xE9;tiquet&#xE9;s avec Fluors DIGE CyDye, et soumis &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;lectrophor&#xE8;se bidimensionnelle. Apr&#xE8;s balayage et l&#x26;#39;imagerie des gels de trois diff&#xE9;rents intervalles de focalisation iso&#xE9;lectrique (3-10, 7-11, 6.2 &#xE0; 7.5), la manutention automatis&#xE9;e place a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;alis&#xE9;e sur un grand nombre de taches de gel y compris ceux trouv&#xE9;s &#xE0; diff&#xE9;rer de plus de 20% entre le trait&#xE9; et l&#x26;#39;&#xE9;tat non trait&#xE9;. Par la suite, les prot&#xE9;ines diff&#xE9;rentiellement r&#xE9;gul&#xE9;s ont &#xE9;t&#xE9; soumis &#xE0; une approche en trois &#xE9;tapes de la spectrom&#xE9;trie de masse &#xE0; l&#x26;#39;aide (a) laser assist&#xE9;e par matrice de d&#xE9;sorption / ionisation de temps de vol spectrom&#xE9;trie de masse empreinte de masse peptidique, (b) l&#x26;#39;apr&#xE8;s-source de d&#xE9;sint&#xE9;gration en utilisant la fragmentation chimiquement assist&#xE9;e, et (c) la spectrom&#xE9;trie de masse liquide chromatographie en tandem. En utilisant cette approche, nous avons jusqu&#x26;#39;&#xE0; pr&#xE9;sent r&#xE9;solu 121 prot&#xE9;ines diff&#xE9;rentiellement r&#xE9;gul&#xE9;s apr&#xE8;s le traitement de souris avec le candidat-m&#xE9;dicament et identifi&#xE9; 110 de ces spectrom&#xE9;trie de masse &#xE0; l&#x26;#39;aide. Ces donn&#xE9;es peuvent potentiellement donner une meilleure compr&#xE9;hension mol&#xE9;culaire dans le m&#xE9;tabolisme des m&#xE9;dicaments ainsi que les prot&#xE9;ines impliqu&#xE9;es dans la toxicit&#xE9; potentielle apr&#xE8;s le traitement. Les prot&#xE9;ines diff&#xE9;rentiellement r&#xE9;gul&#xE9;s pourraient &#xEA;tre utilis&#xE9;s comme cibles pour des &#xE9;tudes m&#xE9;taboliques ou en tant que marqueurs de toxicit&#xE9;.

A approche prot&#xE9;omique pour l&#x26;#39;&#xE9;tude de l&#x26;#39;absorption, distribution, m&#xE9;tabolisme, excr&#xE9;tion et toxicit&#xE9;

Einen Proteomics-Ansatz zum Studium der Resorption, Verteilung, Stoffwechsel, Ausscheidung und Toxizit&#xE4;t.

Un approccio di proteomica &egrave; stato utilizzato per identificare le proteine epatiche che visualizzato livelli alterati nei topi dopo il trattamento con un farmaco candidato. Campioni provenienti da fegati di topi trattati con il farmaco candidato o non trattata sono stati preparati, quantificati, etichettata con CyDye DIGE Fluors e sottoposti a elettroforesi bidimensionale. A seguito di analisi e di imaging di gel da tre intervalli messa a fuoco isoelettrici differenti (3-10, 7-11, 6,2-7,5), gestione automatizzata spot &egrave; stata eseguita su un gran numero di macchie di gel compresi quelli trovati a differire pi&ugrave; del 20% tra la condizione trattata e non trattata. Successivamente, le proteine differenzialmente regolamentate sono stati sottoposti ad un approccio in tre fasi di spettrometria di massa utilizzando (a) matrix-assisted laser desorbimento/ionizzazione spettrometria di massa a tempo di volo del peptide mass fingerprinting, decadimento (b) post-source che utilizzano frammentazione chimicamente assistita e (c) liquida cromatografia-massa spettrometria. Utilizzando questo approccio abbiamo finora abbiamo risolto 121 differenzialmente regolato le proteine dopo il trattamento di topi con il farmaco candidato e identificato 110 di questi mediante spettrometria di massa. Tali dati possono potenzialmente dare una migliore visione molecolare nel metabolismo dei farmaci, come pure le proteine coinvolte nella potenziale tossicit&agrave; dopo il trattamento. Le proteine differenzialmente regolamentate potrebbero essere utilizzate come bersagli per Studi metabolici o come marcatori per la tossicit&agrave;.

Un approccio di proteomica per lo studio dell&#39;assorbimento, distribuzione, metabolismo, escrezione e tossicit&agrave;.

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x5019;&#x88DC;&#x85AC;&#x5264;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6CBB;&#x7642;&#x5F8C;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x809D;&#x81D3;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x5019;&#x88DC;&#x85AC;&#x5264;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6CBB;&#x7642;&#x3067;&#x51E6;&#x7F6E;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x809D;&#x81D3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;&#x3001;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3057;&#x3001;CyDye DIGE&#x306E;&#x30D5;&#x30EB;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x6A19;&#x8B58;&#x3057;&#x3001;&#x4E8C;&#x6B21;&#x5143;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306B;&#x4F9B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7B49;&#x96FB;&#x70B9;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x9593;&#x9694;&#x304B;&#x3089;&#x30B2;&#x30EB;&#x306E;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x3068;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;3-10&#x3001;7-11&#x3001;6.2&#x304B;&#x3089;7.5&#xFF09;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x81EA;&#x52D5;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x51E6;&#x7406;&#x306F;&#x3001;&#x51E6;&#x7406;&#x306E;&#x9593;&#x306B;20&#xFF05;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30B2;&#x30EB;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x591A;&#x6570;&#x3067;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x672A;&#x51E6;&#x7406;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;&#x5DEE;&#x52D5;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;b&#xFF09;&#x306F;&#x30DD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x5206;&#x89E3;&#x3001;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x652F;&#x63F4;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#xFF08;&#xFF09;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x652F;&#x63F4;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x8131;&#x96E2;/&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5316;&#x98DB;&#x884C;&#x6642;&#x9593;&#x578B;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30DE;&#x30B9;&#xB7;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30AC;&#x30FC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x306E;3&#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#xFF08;c&#xFF09;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x3068;&#x3053;&#x308D;&#x3001;&#x5019;&#x88DC;&#x85AC;&#x5264;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x5F8C;&#x306B;121&#x5DEE;&#x52D5;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306E;110&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306B;&#x85AC;&#x7269;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x6CBB;&#x7642;&#x5F8C;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x6BD2;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306B;&#x6539;&#x5584;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5DEE;&#x52D5;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x5438;&#x53CE;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3001;&#x5206;&#x5E03;&#x3001;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3001;&#x6392;&#x6CC4;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6BD2;&#x6027;&#x3078;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;

Proteomics &#xC811;&#xADFC; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xACBD;&#xB41C; &#xC218;&#xC900; &#xD45C;&#xC2DC; &#xAC04; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC815;&#xB7C9;, CyDye DIGE Fluors &#xB808;&#xC774;&#xBE14; &#xBC0F; 2 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95;&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC885; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB610;&#xB294; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC950;&#xC758; &#xAC04;&#xC740;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0D8;&#xD50C; &#xC900;&#xBE44; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC80;&#xC0C9; &#xD558; &#xACE0; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB2E4;&#xB978; isoelectric &#xCD08;&#xC810; &#xAC04;&#xACA9; (3-10, 7-11, 6.2-7.5)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC824;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;, &#xB2E4;&#xC74C; &#xC790;&#xB3D9;&#xD654; &#xB41C; &#xBCC4;&#xC0C9; &#xCC98;&#xB9AC; &#xC824; &#xBC18;&#xC810; &#xCE58;&#xB8CC; &#xBC0F; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC870;&#xAC74; &#xC0AC;&#xC774; 20% &#xC774;&#xC0C1; &#xB2E4;&#xB97C; &#xBCFC; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB4F1;&#xC758; &#xB2E4; &#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xD589; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xADF8; &#xD6C4;, &#xCC28;&#xB3D9; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (a) &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xC870; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD0C8; &#xCC29;/&#xC774;&#xC628;&#xD654; &#xBE44;&#xD589; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xC9C0;&#xBB38;, &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xBCF4;&#xC870; &#xC870;&#xAC01;&#xD654; &#xBC0F; (c) &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; &#xD0E0;&#xB364; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; (b) post-source &#xBD80;&#xD328;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; 3 &#xB2E8;&#xACC4; &#xC811;&#xADFC;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF5;&#xC885; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; 121 &#xCC28;&#xB3D9; &#xD574;&#xACB0; &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC74C; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xC57D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC950;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; 110 &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xADDC;&#xC81C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC57D;&#xBB3C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xB3C5;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB300;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xBD84;&#xC790; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC904; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCC28;&#xB3D9; &#xADDC;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xB610;&#xB294; &#xB3C5;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD45C;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD761;&#xC218;, &#xBD84;&#xD3EC;, &#xB300;&#xC0AC;, &#xBC30;&#xC124;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB3C5;&#xC131;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; proteomics &#xC811;&#xADFC;.

Un enfoque prote&#xF3;mica se utiliza para identificar las prote&#xED;nas hep&#xE1;ticas que muestran niveles alterados en ratones despu&#xE9;s del tratamiento con un f&#xE1;rmaco candidato. Las muestras de los h&#xED;gados de los ratones tratados con el f&#xE1;rmaco candidato o no tratada se prepararon, cuantificado, marcado con CyDye Fluors DIGE, y se someti&#xF3; a electroforesis en dos dimensiones. Despu&#xE9;s de exploraci&#xF3;n y las im&#xE1;genes de geles a partir de tres diferentes intervalos de isoelectroenfoque (3-10, 7-11, 6.2 a 7.5), el manejo automatizado lugar se realiz&#xF3; en un gran n&#xFA;mero de manchas de gel incluyendo aquellos encontr&#xF3; que difieren en m&#xE1;s del 20% entre el grupo tratado y la condici&#xF3;n no tratada. Posteriormente, las prote&#xED;nas reguladas diferencialmente fueron sometidos a un enfoque de tres pasos de la espectrometr&#xED;a de masas utilizando (a) l&#xE1;ser asistida por matriz de desorci&#xF3;n / ionizaci&#xF3;n tiempo de vuelo espectrometr&#xED;a de masas p&#xE9;ptido masiva de huellas dactilares, (b) despu&#xE9;s de la fuente de la caries utilizando la fragmentaci&#xF3;n qu&#xED;micamente asistida, y (c) cromatograf&#xED;a l&#xED;quida-espectrometr&#xED;a de masas en t&#xE1;ndem. Utilizando este enfoque hasta ahora hemos resuelto 121 prote&#xED;nas diferencialmente reguladas despu&#xE9;s del tratamiento de ratones con el f&#xE1;rmaco candidato y se identificaron 110 de estos espectrometr&#xED;a de masas utilizando. Estos datos pueden potencialmente dar una idea molecular mejora en el metabolismo de los f&#xE1;rmacos as&#xED; como las prote&#xED;nas implicadas en la toxicidad potencial despu&#xE9;s del tratamiento. Las prote&#xED;nas diferencialmente regulados podr&#xED;an ser utilizados como dianas para estudios metab&#xF3;licos o como marcadores para la toxicidad.

A Prote&#xF3;mica Aproximaci&#xF3;n al estudio de la absorci&#xF3;n, distribuci&#xF3;n, metabolismo, excreci&#xF3;n y toxicidad

&#x4E8C;&#x7EF4; (2D) &#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3;&#x662F;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x540C;&#x65F6;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7814;&#x7A76;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x5927;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E95;&#x8BB0;&#x5F55;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x548C;&#x5B9A;&#x91CF;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x73B0;&#x6709;&#x6807;&#x8BB0;&#x8BD5;&#x5242;&#x3001; &#x6709;&#x9650;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x5DEE;&#x5F02;&#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3; (2D &#x5E1D;) &#x901A;&#x8FC7;&#x6DFB;&#x52A0;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x7CBE;&#x786E;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7EF4;&#x5EA6;&#x751F;&#x6210;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x3002;2D &#x5E1D;&#x4F7F;&#x591A;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x63D0;&#x53D6;&#x76F8;&#x540C;&#x7684; 2D &#x51DD;&#x80F6;&#x4E0A;&#x5206;&#x79BB;&#x3002;&#x8FD9;&#x7531;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F7F;&#x7528;&#x5149;&#x8C31;&#x53EF;&#x89E3;&#x6790;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x63D0;&#x53D6;&#x5927;&#x5C0F;&#x7684;&#x6807;&#x7B7E;&#x548C;&#x7535;&#x8377;&#x5339;&#x914D;&#x8367;&#x5149;&#x67D3;&#x6599;&#x79F0;&#x4E3A; CyDye &#x5E1D; fluors&#x3002;2D &#x5E1D;&#x6D89;&#x53CA;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x53C2;&#x8003;&#x6837;&#x672C;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A;&#x5185;&#x90E8;&#x6807;&#x51C6;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x5728;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x751F;&#x7269;&#x6837;&#x672C;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x76F8;&#x7B49;&#x3002;&#x5728;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x4E30;&#x5EA6;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5728;&#x51DD;&#x80F6;&#x4E0A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x70B9;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5230;&#x5176;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x51DD;&#x80F6;&#x4E0A;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x6807;&#x51C6;&#x4E2D;&#x7684;&#x76F8;&#x5E94;&#x4F4D;&#x7F6E; &#xFF08;&#x5373;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6BD4;&#x7387;) &#x662F;&#x8861;&#x91CF;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B;&#x751F;&#x7269;&#x6837;&#x54C1;&#x624B;&#x6BB5;&#x5305;&#x62EC;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x51DD;&#x80F6;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x6807;&#x51C6;&#x3002;Ettan &#x5E1D;&#x662F;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x4F18;&#x5316;&#xFF0C;&#x5145;&#x5206;&#x53D7;&#x76CA;&#x4E8E; 2D &#x5E1D;&#x6240;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x4F18;&#x52BF;&#x3002;

&#x5E1D;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5F00;&#x53D1;&#xFF1A; 2D &#x8367;&#x5149;&#x5DEE;&#x5F02;&#x51DD;&#x80F6;&#x5206;&#x6790;&#x6280;&#x672F;&#x3002;

Two-dimensional (2D) gel electrophoresis is a powerful technique enabling simultaneous visualization of relatively large portions of the proteome. However, the well documented issues of variation and lack of sensitivity and quantitative capabilities of existing labeling reagents, has limited the use of this technique as a quantitative tool. Two-dimensional difference gel electrophoresis (2D DIGE) builds on this technique by adding a highly accurate quantitative dimension. 2D DIGE enables multiple protein extracts to be separated on the same 2D gel. This is made possible by labeling of each extract using spectrally resolvable, size and charge-matched fluorescent dyes known as CyDye DIGE fluors. 2D DIGE involves use of a reference sample, known as an internal standard, which comprises equal amounts of all biological samples in the experiment. Including the internal standard on each gel in the experiment with the individual biological samples means that the abundance of each protein spot on a gel can be measured relative (i.e. as a ratio) to its corresponding spot in the internal standard present on the same gel. Ettan DIGE is the system of technologies that has been optimized to fully benefit from the advantages provided by 2D DIGE.

The development of the DIGE system: 2D fluorescence difference gel analysis technology.

L&#x26;#39;&#xE9;lectrophor&#xE8;se bidimensionnelle sur gel (2D) est une technique puissante permettant la visualisation simultan&#xE9;e de portions relativement grandes du prot&#xE9;ome. Toutefois, les questions bien document&#xE9;es de la variation et le manque de sensibilit&#xE9; et les capacit&#xE9;s quantitatives de r&#xE9;actifs de marquage existants, a limit&#xE9; l&#x26;#39;utilisation de cette technique comme un outil quantitatif. L&#x26;#39;&#xE9;lectrophor&#xE8;se bidimensionnelle sur gel de diff&#xE9;rence (2D DIGE) s&#x26;#39;appuie sur cette technique en y ajoutant une dimension hautement quantitative pr&#xE9;cise. 2D DIGE permet extraits prot&#xE9;iques multiples d&#x26;#39;&#xEA;tre s&#xE9;par&#xE9;s sur le m&#xEA;me gel 2D. Ceci est rendu possible par l&#x26;#39;&#xE9;tiquetage de chaque extrait &#xE0; l&#x26;#39;aide spectralement r&#xE9;solu, la taille et de charge correspondent &#xE0; des colorants fluorescents connus sous le nom fluors DIGE CyDye. 2D DIGE implique l&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;un &#xE9;chantillon de r&#xE9;f&#xE9;rence, connu sous le nom d&#x26;#39;un &#xE9;talon interne, qui comprend des quantit&#xE9;s &#xE9;gales de tous les &#xE9;chantillons biologiques dans l&#x26;#39;exp&#xE9;rience. Y compris l&#x26;#39;&#xE9;talon interne sur chaque gel dans l&#x26;#39;exp&#xE9;rience avec des &#xE9;chantillons individuels biologiques signifie que l&#x26;#39;abondance de chaque spot de prot&#xE9;ines sur un gel peut &#xEA;tre mesur&#xE9;e par rapport (c.-&#xE0;-comme un rapport) &#xE0; son endroit correspondant dans le pr&#xE9;sent de l&#x26;#39;&#xE9;talon interne sur le m&#xEA;me gel. Ettan DIGE est le syst&#xE8;me de technologies qui a &#xE9;t&#xE9; optimis&#xE9;e pour tirer pleinement parti des avantages offerts par DIGE 2D.

Le d&#xE9;veloppement du syst&#xE8;me DIGE: 2D Diff&#xE9;rence analyse par fluorescence Gel Technology

Die Entwicklung des DIGE System: 2D-Fluoreszenz Unterschied Gel-Analyse-Technologie.

Elettroforesi su gel bidimensionali (2D) &egrave; una tecnica potente che consente la visualizzazione simultanea di relativamente grandi porzioni del proteoma. Tuttavia, il ben documentato problemi di variazione e mancanza di sensibilit&agrave; e capacit&agrave; quantitativa dell&#39;esistente etichettatura reagenti, ha limitato l&#39;uso di questa tecnica come uno strumento quantitativo. Elettroforesi del gel di differenza bidimensionale (2D DIGE) si basa su questa tecnica con l&#39;aggiunta di una dimensione quantitativa altamente accurata. DIGE 2D consente molteplici estratti di proteine separate sullo stesso gel 2D. Questo &egrave; reso possibile dall&#39;etichettatura di ciascun estratto utilizzando spettralmente risolvibile, dimensioni e carica-matched fluorescente tinture conosciuto come fluors CyDye DIGE. DIGE 2D implica l&#39;uso di un campione di riferimento, noto come standard interno, che comprende gli importi uguali di tutti i campioni biologici nell&#39;esperimento. Compreso lo standard interno su ogni gel nell&#39;esperimento con i mezzi di singoli campioni biologici che l&#39;abbondanza di ogni spot della proteina su un gel pu&ograve; essere misurato relativo (cio&egrave; come un rapporto) al suo posto corrispondente nello standard interni presenti sullo stesso gel. Ettan DIGE &egrave; il sistema di tecnologie che &egrave; stato ottimizzato per beneficiare pienamente dei vantaggi forniti da 2D DIGE.

Lo sviluppo del sistema DIGE: tecnologia di analisi di fluorescenza 2D differenza gel.

2&#x6B21;&#x5143;&#xFF08;2D&#xFF09;&#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x90E8;&#x5206;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x624B;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5909;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x6A19;&#x8B58;&#x8A66;&#x85AC;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x3068;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x80FD;&#x529B;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x3092;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x6587;&#x66F8;&#x5316;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3001;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x304C;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x4E8C;&#x6B21;&#x5143;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306F;&#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#xFF08;2D DIGE&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x306A;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x6B21;&#x5143;&#x3092;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 2D DIGE&#x3068;&#x540C;&#x3058;2D&#x30B2;&#x30EB;&#x4E0A;&#x3067;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3001;CyDye DIGE&#x306E;&#x30D5;&#x30EB;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x96FB;&#x8377;&#x3092;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x8272;&#x7D20;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x3092;&#x6A19;&#x8B58;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 2D DIGE&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;&#x7B49;&#x91CF;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x5185;&#x90E8;&#x6A19;&#x6E96;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B9;&#xB7;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x4F34;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x8A66;&#x6599;&#x3092;&#x5B9F;&#x9A13;&#x4E2D;&#x306E;&#x5404;&#x30B2;&#x30EB;&#x306B;&#x5185;&#x90E8;&#x6A19;&#x6E96;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x30B2;&#x30EB;&#x4E0A;&#x306E;&#x5404;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x3055;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x30B2;&#x30EB;&#x4E0A;&#x3067;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x6A19;&#x6E96;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x6240;&#x306B;&#xFF08;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;&#x6BD4;&#x7387;&#x306A;&#x3069;&#xFF09;&#x304C;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306B;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Ettan DIGE&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;2D DIGE&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5229;&#x70B9;&#x306E;&#x6069;&#x6075;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

DIGE&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#xFF1A;2&#x6B21;&#x5143;&#x86CD;&#x5149;&#x30C7;&#x30A3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B2;&#x30EB;&#x89E3;&#x6790;&#x6280;&#x8853;

2 &#xCC28;&#xC6D0; (2D) &#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC634;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;&#xC801; &#xB9CE;&#xC740; &#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xAE30;&#xC220; &#xC774;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC798; &#xBB38;&#xC11C;&#xD654; &#xB418;&#xC5B4; &#xBCC0;&#xD615; &#xBB38;&#xC81C; &#xBC0F; &#xAC10;&#xB3C4;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xACFC; &#xAE30;&#xC874; &#xC591;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC81C;&#xD55C; &#xC2DC; &#xC57D;, &#xB77C;&#xBCA8; &#xC591;&#xC801; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; &#xC11C;&#xC774; &#xAE30;&#xC220; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC870;&#xD68C; &#xC218; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; 2 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95; (2D DIGE) &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC591;&#xC801; &#xCC28;&#xC6D0; &#xCD94;&#xAC00; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC5D0; &#xAD6C;&#xCD95;. 2D DIGE &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC744; &#xAC19;&#xC740; 2D &#xC824;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xAC01; &#xCD94;&#xCD9C; spectrally &#xD655;&#xC778;&#xD560; &#xC218;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD06C;&#xAE30;&#xC758; &#xB77C;&#xBCA8; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xCDA9;&#xC804; &#xD615;&#xAD11; &#xC5FC;&#xB8CC; CyDye DIGE fluors&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;. 2D DIGE &#xD3EC;&#xD568; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC0D8;&#xD50C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC758; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xAE08;&#xC561;&#xC744; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB0B4;&#xBD80; &#xD45C;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xCC38;&#xC870; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC774; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC01; &#xC824;&#xC5D0; &#xB0B4;&#xBD80; &#xD45C;&#xC900; &#xC824;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC790;&#xB9AC; &#xAC01;&#xC758; &#xD48D;&#xC694;&#xB85C; &#xC6C0; &#xAC19;&#xC740; &#xC824;&#xC5D0; &#xB0B4;&#xBD80; &#xD45C;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD574;&#xB2F9; &#xC790;&#xB9AC;&#xC5D0; (&#xC989;, &#xBE44;&#xC728;)&#xB85C; &#xCE21;&#xC815; &#xB41C; &#xC0C1;&#xB300;&#xB97C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC0D8;&#xD50C; &#xC758;&#xBBF8;&#xC640; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ettan DIGE 2D DIGE&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xC7A5;&#xC810;&#xC744; &#xB204;&#xB9B4; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xAE30;&#xC220; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

DIGE &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAC1C;&#xBC1C;: 2D &#xD615;&#xAD11; &#xCC28;&#xC774; &#xC824; &#xBD84;&#xC11D; &#xAE30;&#xC220;.

Dos dimensiones (2D) electroforesis en gel es una t&#xE9;cnica de gran alcance que permite la visualizaci&#xF3;n simult&#xE1;nea de porciones relativamente grandes del proteoma. Sin embargo, los problemas bien documentados de la variaci&#xF3;n y la falta de sensibilidad y las capacidades cuantitativas de reactivos de etiquetado existentes, ha limitado el uso de esta t&#xE9;cnica como una herramienta cuantitativa. Electroforesis bidimensional en gel de diferencia (DIGE 2D) se basa en esta t&#xE9;cnica mediante la adici&#xF3;n de una dimensi&#xF3;n cuantitativa de alta precisi&#xF3;n. 2D DIGE permite extractos m&#xFA;ltiples prote&#xED;nas que se separaron en gel de la misma 2D. Esto se hace posible por el etiquetado de cada extracto utilizando espectralmente resoluble, tama&#xF1;o y carga emparejados tintes fluorescentes conocidos como compuestos fluorescentes CyDye DIGE. 2D DIGE implica el uso de una muestra de referencia, conocido como un patr&#xF3;n interno, que comprende cantidades iguales de todas las muestras biol&#xF3;gicas en el experimento. Incluyendo el patr&#xF3;n interno en cada gel en el experimento con las muestras biol&#xF3;gicas individuales significa que la abundancia de cada mancha prote&#xED;na en un gel puede medirse relativa (es decir, como una proporci&#xF3;n) a su lugar correspondiente en el presente patr&#xF3;n interno en el mismo gel. Ettan DIGE es el sistema de tecnolog&#xED;as que ha sido optimizado para aprovechar al m&#xE1;ximo las ventajas que ofrece DIGE 2D.

El desarrollo del sistema DIGE: Diferencia de fluorescencia 2D Gel Tecnolog&#xED;a An&#xE1;lisis

&#x6BD4;&#x8F83;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8FC5;&#x901F;&#x88AB;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x8BB8;&#x591A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7F3A;&#x9677;&#x662F;&#x5728;&#x67D0;&#x4E9B;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#x80BF;&#x7624;&#x5B66;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x79D1;&#x5B66;&#x3001; &#x7EC4;&#x7EC7;&#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x793A;&#x4F8B;&#x662F;&#x6709;&#x9650;&#x3002;&#x6FC0;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x5207;&#x5272; &#xFF08;LMD&#xFF09; &#x901A;&#x5E38;&#x7528;&#x4E8E;&#x83B7;&#x53D6;&#x6B64;&#x7C7B;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x6837;&#x54C1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x7ED3;&#x5408; LMD &#x654F;&#x611F;&#x5DEF;&#x57FA;&#x65E0;&#x529F;&#x9971;&#x548C;&#x67D3;&#x6599;&#x6807;&#x7B7E;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6837;&#x54C1;&#x548C; 2 D &#x5E1D;&#x6765;&#x8BC6;&#x522B;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x643A;&#x5E26;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x524D;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0; &#xFF08;Tg&#xFF09; &#x5927;&#x9F20;&#x7684;&#x5B64;&#x7ACB; CA1 &#x9525;&#x4F53;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5C42;&#x4E2D;&#x3002;&#x9971;&#x548C;&#x67D3;&#x6599;&#x6807;&#x7B7E;&#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x662F;&#x6781;&#x5176;&#x654F;&#x611F;&#x4E0E;&#x6B63;&#x5728;&#x4ECE; 5 &#x676F;&#x603B;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x8D85;&#x8FC7; 100 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x88AB;&#x5927;&#x5927;&#x6539;&#x53D8;&#x5728; p &lt; 0.0005 &#x5C31;&#x5F88;&#x5BB9;&#x6613;&#x4EA7;&#x751F;&#x8D85;&#x8FC7; 5,000 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x666F;&#x70B9;&#x5730;&#x56FE;&#x3002;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x90FD;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8FDE;&#x8D2F;&#x53D8;&#x5316;&#x4E0E;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5F88;&#x96BE;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E0A;&#x5305;&#x542B;&#x5C11;&#x4E8E; 500 &#x676F;&#x603B;&#x86CB;&#x767D;&#x51DD;&#x80F6;&#x7684; PMF &#x548C;&#x8FDB;&#x884C;&#x8D28;&#x8C31; TOF &#x5927;&#x5927;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x9971;&#x548C;&#x67D3;&#x6599;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#x6837;&#x54C1;&#x6807;&#x7B7E;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x9700;&#x8981;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x654F;&#x611F;&#x7684; MS &#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F7F;&#x7528;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982; LMD &#x5927;&#x5927;&#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

&#x6BD4;&#x8F83;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x4F7F;&#x7528;&#x9971;&#x548C;&#x67D3;&#x6599;&#x6807;&#x7B7E;&#x4E0E;&#x6FC0;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x5207;&#x5272;&#x6280;&#x672F;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x6837;&#x672C;&#x3002;

Comparative proteomic methods are rapidly being applied to many different biological systems including complex tissues. One pitfall of these methods is that in some cases, such as oncology and neuroscience, tissue complexity requires isolation of specific cell types and sample is limited. Laser microdissection (LMD) is commonly used for obtaining such samples for proteomic studies. We have combined LMD with sensitive thiol-reactive saturation dye labelling of protein samples and 2-D DIGE to identify protein changes in a test system, the isolated CA1 pyramidal neurone layer of a transgenic (Tg) rat carrying a human amyloid precursor protein transgene. Saturation dye labelling proved to be extremely sensitive with a spot map of over 5,000 proteins being readily produced from 5 mug total protein, with over 100 proteins being significantly altered at p < 0.0005. Of the proteins identified, all showed coherent changes associated with transgene expression. It was, however, difficult to identify significantly different proteins using PMF and MALDI-TOF on gels containing less than 500 mug total protein. The use of saturation dye labelling of limiting samples will therefore require the use of highly sensitive MS techniques to identify the significantly altered proteins isolated using methods such as LMD.

Comparative proteomic analysis using samples obtained with laser microdissection and saturation dye labelling.

Comparatives des m&#xE9;thodes prot&#xE9;omiques sont rapidement appliqu&#xE9;e &#xE0; de nombreux syst&#xE8;mes biologiques diff&#xE9;rents, y compris les tissus complexes. Un &#xE9;cueil de ces m&#xE9;thodes est que dans certains cas, tels que l&#x26;#39;oncologie et des neurosciences, de la complexit&#xE9; du tissu exige l&#x26;#39;isolement de types cellulaires sp&#xE9;cifiques et de l&#x26;#39;&#xE9;chantillon est limit&#xE9;. Microdissection laser (LMD) est couramment utilis&#xE9; pour obtenir des &#xE9;chantillons pour les &#xE9;tudes prot&#xE9;omiques telles. Nous avons combin&#xE9; avec LMD sensible thiol r&#xE9;active &#xE9;tiquetage colorant de saturation des &#xE9;chantillons de prot&#xE9;ines et 2-D pour identifier les modifications DIGE prot&#xE9;ines dans un syst&#xE8;me de test, la couche CA1 isol&#xE9; neurone pyramidale d&#x26;#39;un transg&#xE9;nique (Tg) de rat portant un transg&#xE8;ne amylo&#xEF;de humaine pr&#xE9;curseur de la prot&#xE9;ine. Saturation colorant &#xE9;tiquetage s&#x26;#39;est av&#xE9;r&#xE9;e extr&#xEA;mement sensible avec une carte des spots de plus de 5.000 prot&#xE9;ines &#xEA;tre facilement produites &#xE0; partir de 5 prot&#xE9;ines totales tasse, avec plus de 100 prot&#xE9;ines &#xE9;tant sensiblement modifi&#xE9; &#xE0; la p &#x26;lt;0,0005. Parmi les prot&#xE9;ines identifi&#xE9;es, ont tous montr&#xE9; des changements coh&#xE9;rents li&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;expression du transg&#xE8;ne. Il &#xE9;tait cependant difficile d&#x26;#39;identifier des prot&#xE9;ines tr&#xE8;s diff&#xE9;rentes en utilisant PMF et MALDI-TOF sur des gels contenant moins de 500 prot&#xE9;ines tasse totale. L&#x26;#39;utilisation de l&#x26;#39;&#xE9;tiquetage des &#xE9;chantillons de teinture de saturation limitant, il faudra donc l&#x26;#39;utilisation de techniques de SM tr&#xE8;s sensibles pour identifier les prot&#xE9;ines isol&#xE9;es sensiblement modifi&#xE9; en utilisant des m&#xE9;thodes telles que le LMD.

Analyse comparative prot&#xE9;omique utilisant &#xE9;chantillons obtenus avec microdissection laser et l&#x26;#39;&#xE9;tiquetage des teintures Saturation

Vergleichende Proteomic-Methoden sind schnell auf viele verschiedene biologische Systeme, einschlie&szlig;lich komplexer Gewebe angewendet. Ein Nachteil dieser Methoden ist, dass in einigen F&auml;llen, wie Onkologie und Neurologie, Gewebe Komplexit&auml;t Isolierung von bestimmten Zelltypen erfordert und Probe begrenzt ist. Laser Microdissection (LMD) wird h&auml;ufig verwendet, f&uuml;r den Erhalt solcher Beispiele f&uuml;r Proteomic-Studien. Wir haben LMD kombiniert, mit sensiblen Thiol-reaktives S&auml;ttigung Farbstoff Kennzeichnung Proteinproben und 2-D-DIGE Protein &Auml;nderungen in einem Testsystem, die isoliert CA1 pyramidale Neurone Schicht einer transgenen (Tg)-Ratte, die Durchf&uuml;hrung einer menschlichen Amyloid Precursor Protein Transgene zu identifizieren. S&auml;ttigung Farbstoff Kennzeichnung erwies sich extrem empfindlich mit einer vor Ort Karte von mehr als 5.000 Proteine produziert wird leicht von 5 Becher Gesamtprotein, mit mehr als 100 Proteinen bei p &lt; 0.0005 wesentlich ge&auml;ndert wird. Der Proteine identifiziert zeigten alle zusammenh&auml;ngende &Auml;nderungen zugeordnet Transgenexpression. Es war jedoch schwer auszumachen deutlich unterschiedliche Proteine mit PMF und MALDI-TOF auf Gele, die weniger als 500 Becher-Gesamt-Protein enth&auml;lt. Die Verwendung von S&auml;ttigung Farbstoff Kennzeichnung einer Begrenzung der Proben erfordert daher die Verwendung von hochsensiblen MS-Verfahren zum Identifizieren von erheblich ver&auml;nderten Proteine isoliert mit Methoden wie LMD.

Vergleichende Proteomic-Analyse mit Proben mit Laser Microdissection und S&auml;ttigung Farbstoff Kennzeichnung.

Metodi comparativi proteomic vengono applicate rapidamente a molti diversi sistemi biologici, compresi i tessuti complessi. Uno insidia di questi metodi &egrave; che in alcuni casi, come oncologia e neuroscienze, tessuto complessit&agrave; richiede isolamento di tipi cellulari specifici e campione &egrave; limitata. Microdissezione laser (LMD) &egrave; comunemente utilizzato per ottenere tali campioni per studi di proteomica. Abbiamo unito la LMD con saturazione tiolo-reattiva sensibile colorante etichettatura dei campioni della proteina e DIGE 2-D per identificare le modifiche della proteina in un sistema di test, il livello di neurone piramidale isolato CA1 di un ratto (Tg) transgenico che trasportano un transgene proteina precursore dell&#39;amiloide umana. Saturazione colorante etichettatura ha dimostrato di essere estremamente sensibile con spot in una mappa di oltre 5.000 proteine prontamente prodotte dalla proteina totale 5 tazza, con oltre 100 proteine essendo alterato significativamente a p &lt; 0.0005. Delle proteine identificate, tutte hanno mostrato coerente cambiamenti associati con espressione del transgene. Era, tuttavia, difficile identificare significativamente differenti proteine usando PMF e MALDI-TOF su gel contenenti meno di 500 proteine totali mug. L&#39;uso di saturazione colorante etichettatura di limitare campioni richieder&agrave; pertanto l&#39;uso di tecniche MS altamente sensibile per identificare le proteine significativamente alterate isolate utilizzando metodi quali LMD.

Analisi proteomic comparativa utilizzando campioni ottenuti con laser microdissection e saturazione colorante etichettatura.

&#x6BD4;&#x8F03;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x843D;&#x3068;&#x3057;&#x7A74;&#x4E00;&#x3064;&#x306F;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x5B66;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x79D1;&#x5B66;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x304C;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#xFF08;LMD&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x8A66;&#x6599;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#xB7;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#xFF08;Tg&#xFF09;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5358;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;CA1&#x9310;&#x4F53;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x5C64;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3068;2-D DIGE&#x306E;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x98FD;&#x548C;&#x8272;&#x7D20;&#x6A19;&#x8B58;&#x3067;LMD&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x98FD;&#x548C;&#x8272;&#x7D20;&#x6A19;&#x8B58;&#x306F;&#x3001;100&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;P &#x26;lt;0.0005&#x3067;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3001;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;5&#x30DE;&#x30B0;&#x7DCF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;5,000&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x305F;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;500&#x672A;&#x6E80;&#x306E;&#x30DE;&#x30B0;&#x306E;&#x7DCF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30B2;&#x30EB;&#x3067;PMF&#x3068;MALDI-TOF&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5236;&#x9650;&#x8A66;&#x200B;&#x200B;&#x6599;&#x306E;&#x98FD;&#x548C;&#x8272;&#x7D20;&#x6A19;&#x8B58;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;LMD&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x5358;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5927;&#x5E45;&#x5909;&#x66F4;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;MS&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x98FD;&#x548C;&#x8272;&#x7D20;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x8A66;&#x200B;&#x200B;&#x6599;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x6BD4;&#x8F03;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x89E3;&#x6790;

&#xBE44;&#xAD50; proteomic &#xBC29;&#xBC95; &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC870;&#xC9C1; &#xB4F1; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB418;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xBB38;&#xC81C;&#xB294; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xC885;&#xC591;&#xD559;, &#xC2E0;&#xACBD; &#xACFC;&#xD559; &#xB4F1; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD2B9;&#xC815; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC; &#xD544;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC740; &#xC81C;&#xD55C;. &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xAE30;&#xC815; (LMD) proteomic &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC744; &#xC5BB;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. LMD &#xACB0;&#xD569; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; thiol &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xCC44;&#xB3C4; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xB97C; &#xB77C;&#xBCA8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0D8;&#xD50C; &#xBC0F; 2 &#xCC28;&#xC6D0; DIGE &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC804;&#xC870; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; transgene &#xC6B4;&#xBC18; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; (Tg) &#xC950;&#xC758; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB41C; CA1 &#xD53C;&#xB77C;&#xBBF8;&#xB4DC; &#xB274;&#xB7F0; &#xACC4;&#xCE35; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB294;. &#xCC44;&#xB3C4; &#xC5FC;&#xB8CC; &#xB77C;&#xBCA8; 5000 &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC27D;&#xAC8C; 100 &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; p &lt; 0.0005&#xC5D0;&#xC11C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB418; &#xACE0;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; 5 &#xC5BC;&#xAD74; &#xCD1D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB418; &#xACE0;&#xC758; &#xD604;&#xC7A5; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xD568;&#xAED8; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC785;&#xC99D;. &#xD655;&#xC778; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; transgene &#xC2DD;&#xACFC; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xC77C;&#xAD00; &#xB41C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740;,, 500 &#xBBF8;&#xB9CC; &#xBA38;&#xADF8;&#xC794; &#xCD1D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC824;&#xC5D0; PMF&#xACFC; MALDI TOF&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30;&#xAC00; &#xC5B4;&#xB835;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xCC44;&#xB3C4; &#xC5FC;&#xB8CC; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558;&#xB294; &#xB77C;&#xBCA8;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9; LMD &#xAC19;&#xC740; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC808;&#xC5F0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; MS &#xAE30;&#xC220;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC774; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xC778; &#xBC0F; &#xCC44;&#xB3C4; &#xC5FC;&#xB8CC; &#xB77C;&#xBCA8; &#xC5BB;&#xC740; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBE44;&#xAD50; proteomic &#xBD84;&#xC11D;.

Comparados los m&#xE9;todos de prote&#xF3;mica est&#xE1;n siendo r&#xE1;pidamente aplicado a diferentes sistemas biol&#xF3;gicos complejos, incluidos los tejidos. Una trampa de estos m&#xE9;todos es que en algunos casos, como la oncolog&#xED;a y la neurolog&#xED;a, la complejidad del tejido requiere el aislamiento de determinados tipos de c&#xE9;lulas y de la muestra es limitado. Microdisecci&#xF3;n l&#xE1;ser (LMD) se utiliza com&#xFA;nmente para la obtenci&#xF3;n de estas muestras para los estudios prote&#xF3;micos. Hemos combinado con LMD sensible al tiol reactivo marcado con tinte de saturaci&#xF3;n de muestras de prote&#xED;nas y 2-D DIGE para identificar los cambios de prote&#xED;nas en un sistema de prueba, la capa CA1 aislado neurona piramidal de un transg&#xE9;nico (Tg) de rata que lleva un precursor de amiloide humana transg&#xE9;n prote&#xED;na. La saturaci&#xF3;n de colorante etiquetado demostrado ser extremadamente sensible, con un mapa de puntos de m&#xE1;s de 5.000 prote&#xED;nas que se producen f&#xE1;cilmente a partir del 5 de prote&#xED;nas totales taza, con m&#xE1;s de 100 prote&#xED;nas que se modifican significativamente a p &#x26;lt;0,0005. De las prote&#xED;nas identificadas, todos mostraron cambios coherentes asociados con la expresi&#xF3;n del transg&#xE9;n. Fue, sin embargo, dif&#xED;cil de identificar las prote&#xED;nas significativamente diferentes utilizando PMF y MALDI-TOF de geles que contienen menos de 500 prote&#xED;nas taza total. El uso de etiquetado colorante saturaci&#xF3;n de las muestras que limitan por tanto, requieren el uso de t&#xE9;cnicas de MS de alta sensibilidad para identificar las prote&#xED;nas alteradas significativamente aislados utilizando m&#xE9;todos tales como la LMD.

An&#xE1;lisis comparativo de Prote&#xF3;mica utilizando muestras obtenidas con la microdisecci&#xF3;n l&#xE1;ser Dye y el etiquetado de saturaci&#xF3;n

&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x5316;&#x5B66;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7269;&#x7406;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7528;&#x4E8E;&#x968F;&#x540E;&#x5411;&#x5176;&#x5206;&#x79BB;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5;&#x540E;&#x5927;&#x591A;&#x88AB;&#x5E94;&#x7528;&#x7269;&#x7406;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x662F;&#x4EFB;&#x4E00;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7684;&#x8C31;&#x559C;&#x6B22;&#x5149;&#x5438;&#x6536;&#x67D0;&#x4E9B;&#x6CE2;&#x957F;&#x6216;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x80BD;&#x53CA;&#x8D28;&#x8C31;&#x788E;&#x7247;&#x3002;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x7535;&#x6CF3;&#x548C;&#x8058;&#x7528;&#x4E0E;&#x6709;&#x673A;&#x67D3;&#x6599;&#x3001; &#x91D1;&#x5C5E;&#x87AF;&#x5408;&#x7269;&#x3001; &#x8367;&#x5149;&#x67D3;&#x6599;&#x3001; &#x7EDC;&#x5408;&#x94F6;&#x3001; &#x67D3;&#x8272;&#x6216;&#x8367;&#x5149;&#x4E0E; pre-labeling &#x540E;&#x4F7F;&#x7528;&#x5316;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5728;&#x67D0;&#x4E9B;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x4ECD;&#x7136;&#x4F7F;&#x7528;&#x653E;&#x5C04;&#x81EA;&#x663E;&#x5F71;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6280;&#x672F;&#x90FD;&#x662F;&#x5F88;&#x5927;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#xFF0C;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x5176;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x5DEE;&#x522B;&#x5F88;&#x5927;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x68C0;&#x8BA8;&#x5C06;&#x63CF;&#x8FF0;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x7535;&#x6CF3;&#x51DD;&#x80F6;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

In proteomics research chemical as well as physical methods are used to detect proteins subsequently to their separation. Physical methods are mostly applied after chromatography. They are either based on spectroscopy like light absorption at certain wavelengths or mass determination of peptides and their fragments with mass spectrometry. Chemical methods are used after two-dimensional electrophoresis and employ staining with organic dyes, metal chelates, fluorescent dyes, complexing with silver, or pre-labeling with fluorophores. In some cases autoradiography is still used. Since all of these techniques are very different in terms of sensitivity, their usefulness for quantitative determinations varies significantly. This review will describe the various protein detection methods applied to electrophoresis gels.

Protein detection methods in proteomics research.

Dans la recherche en prot&#xE9;omique chimique ainsi que des m&#xE9;thodes physiques sont utilis&#xE9;s pour d&#xE9;tecter des prot&#xE9;ines par la suite &#xE0; leur s&#xE9;paration. Les m&#xE9;thodes physiques sont la plupart du temps appliqu&#xE9;e apr&#xE8;s chromatographie. Ils sont soit bas&#xE9;s sur la spectroscopie d&#x26;#39;absorption de lumi&#xE8;re, comme &#xE0; certaines longueurs d&#x26;#39;onde ou de la d&#xE9;termination de masse de peptides et de leurs fragments par spectrom&#xE9;trie de masse. Les m&#xE9;thodes chimiques sont utilis&#xE9;s apr&#xE8;s l&#x26;#39;&#xE9;lectrophor&#xE8;se bidimensionnelle et emploient coloration avec des colorants organiques, des ch&#xE9;lates m&#xE9;talliques, des colorants fluorescents, complexation avec de l&#x26;#39;argent, ou de pr&#xE9;-&#xE9;tiquetage avec des fluorophores. Dans certains cas, autoradiographie est encore utilis&#xE9;. Depuis toutes ces techniques sont tr&#xE8;s diff&#xE9;rentes en termes de sensibilit&#xE9;, de leur utilit&#xE9; pour les d&#xE9;terminations quantitatives varie consid&#xE9;rablement. Cet examen sera de d&#xE9;crire les diff&#xE9;rentes m&#xE9;thodes de d&#xE9;tection de prot&#xE9;ines appliqu&#xE9;es &#xE0; des gels d&#x26;#39;&#xE9;lectrophor&#xE8;se.

M&#xE9;thodes de d&#xE9;tection des prot&#xE9;ines dans la recherche en prot&#xE9;omique

Proteomics-Forschung werden chemische als auch physikalische Methoden verwendet, um anschlie&szlig;end zu ihrer Trennung Proteine zu erkennen. Physikalische Methoden werden meist nach Chromatographie angewendet. Sie sind entweder basierend auf Spektroskopie wie Lichtabsorption bei bestimmten Wellenl&auml;ngen der Peptide und ihre Fragmente mit Massenspektrometrie oder Masse. Chemische Methoden wird nach zweidimensionale Elektrophorese und beflecken mit organischen Farbstoffen, Metall Chelate, fluoreszierende Farbstoffe Komplexbildner mit Silber oder pre-labeling mit Fluorophore besch&auml;ftigen. In einigen F&auml;llen wird noch Autoradiografie verwendet. Da alle diese Techniken sehr unterschiedlich in Bezug auf die Empfindlichkeit sind, unterschiedlich ihre N&uuml;tzlichkeit f&uuml;r quantitative Bestimmungen. Diesen Bericht werden die verschiedenen Protein-Nachweismethoden auf Elektrophorese Gele angewendet beschreiben.

Protein-Nachweismethoden in der Proteomics-Forschung.

Nella ricerca proteomica metodi chimici nonch&eacute; fisici sono utilizzati per rilevare le proteine successivamente alla loro separazione. Metodi fisici sono per lo pi&ugrave; applicati dopo cromatografia. Sono entrambi basata sulla spettroscopia come assorbimento della luce a determinate lunghezze d&#39;onda o la determinazione della massa dei peptidi e loro frammenti con spettrometria di massa. Metodi chimici vengono utilizzati dopo l&#39;elettroforesi bidimensionale e impiegano la colorazione con coloranti organici, metalli chelati, tinture fluorescenti, complessanti con argento o pre-labeling con fluorofori. In alcuni casi &egrave; ancora utilizzato autoradiografia. Poich&eacute; tutte queste tecniche sono molto differenti in termini di sensibilit&agrave;, la loro utilit&agrave; per le determinazioni quantitative varia in modo significativo. Questa revisione verr&agrave; descritti i vari metodi di rilevazione della proteina applicati al gel di elettroforesi.

Metodi di rilevazione della proteina nella ricerca proteomica.

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&#xB2E8;&#xBC31;&#xCCB4;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC80;&#xCD9C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

En la investigaci&#xF3;n prote&#xF3;mica qu&#xED;mica, as&#xED; como los m&#xE9;todos f&#xED;sicos se utilizan para detectar prote&#xED;nas posteriormente a su separaci&#xF3;n. Los m&#xE9;todos f&#xED;sicos son en su mayor&#xED;a aplicado despu&#xE9;s de la cromatograf&#xED;a. Ellos est&#xE1;n basados &#x200B;&#x200B;en la espectroscopia de absorci&#xF3;n de luz, como en ciertas longitudes de onda o la determinaci&#xF3;n de masas de los p&#xE9;ptidos y sus fragmentos con espectrometr&#xED;a de masas. Los m&#xE9;todos qu&#xED;micos se utilizan despu&#xE9;s de electroforesis en dos dimensiones y emplear la tinci&#xF3;n con colorantes org&#xE1;nicos, quelatos met&#xE1;licos, colorantes fluorescentes, complejos con plata, o pre-etiquetado con fluor&#xF3;foros. En algunos casos autorradiograf&#xED;a todav&#xED;a se utiliza. Puesto que todas estas t&#xE9;cnicas son muy diferentes en t&#xE9;rminos de sensibilidad, su utilidad para las determinaciones cuantitativas var&#xED;a significativamente. En esta revisi&#xF3;n se describen los m&#xE9;todos de detecci&#xF3;n de prote&#xED;nas diferentes se aplican a los geles de electroforesis.

Rita Marouga

Research and Development

GE Healthcare Bio-Sciences AB

Selective Labelling of Cell-surface Proteins using CyDye DIGE Fluor Minimal Dyes