nuclear-transport-assays-in-permeabilized-mouse-cortical-neurons

Nuclear Transport Assays in Permeabilized Mouse Cortical Neurons

Disruption of nucleocytoplasmic transport is increasingly implicated in the pathogenesis of neurodegenerative diseases. Moreover, there is a growing ...

Johns Hopkins School of Medicine

&#x73AF;&#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x53CA;&#x5176;&#x50AC;&#x5316;&#x4ECE;&#x82B1;&#x751F;&#x56DB;&#x70EF;&#x9178;&#x7684;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7D20;&#x548C;&#x70F7;&#x5F62;&#x6210;&#x72AF;&#x4E0B;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#x3002;&#x73AF;&#x6C27;&#x5408;&#x9176;-2 &#xFF08;COX-2&#xFF09;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x53D1;&#x578B;&#x73AF;&#x6C27;&#x5408;&#x9176;&#xFF0C;&#x662F;&#x5728;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D;&#x7684;&#x6D77;&#x9A6C;&#x3001; &#x5927;&#x8111;&#x76AE;&#x8D28;&#x3001; &#x674F;&#x4EC1;&#x6838;&#x3001; &#x4E0B;&#x4E18;&#x8111;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7D20;&#x5728;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x70ED;&#x611F;&#x5E94;&#x3001; &#x75DB;&#xFF0C;&#x53CA;&#x5B66;&#x4E60;&#x548C;&#x8BB0;&#x5FC6;&#xFF0C;&#x5F88;&#x591A;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x8303;&#x5F0F;&#x7684;&#x5174;&#x594B;&#x6BD2;&#x6027;&#x8111;&#x635F;&#x4F24;&#x5982;&#x63CF;&#x8FB9;&#x548C;&#x766B;&#x75EB;&#x7684;&#x589E;&#x9AD8;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x89E3;&#x51B3;&#x73AF;&#x6C27;&#x5408;&#x9176;-2 &#x548C;&#x5176;&#x8111;&#x5185;&#x7684;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7D20;&#x4EA7;&#x54C1;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x7684;&#x804C;&#x80FD;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x8BA2;&#x4E86;&#x73AF;&#x6C27;&#x5408;&#x9176;-2 &#x5728;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x5916;&#x6E90;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x73AF;&#x6C27;&#x5408;&#x9176;-2 &#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8868;&#x660E;&#x6240;&#x6709;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7D20;&#x548C;&#x8840;&#x6813;&#x7D20;&#xFF0C;&#x63D0;&#x5347;&#x7684;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x4E0E; PGE(2) &#x4E3B;&#x8981;&#x611F;&#x5E94;&#x8FC7;&#x5176;&#x4ED6;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7D20;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x8F83;&#x4E3A;&#x6E29;&#x548C;&#x7684;&#x5F52;&#x7EB3;&#xFF0C;PGI(2) &#x548C; PGF(2alpha),PGD(2)&#xFF0C;&#x548C; TxB(2) &#x7684;&#x5347;&#x5E45;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x5C0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x662F;&#x5426;&#x589E;&#x52A0;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x4EA7;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7D20;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x70ED;&#x611F;&#x5E94;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5185;&#x6BD2;&#x7D20;&#x7684;&#x56DE;&#x5E94;&#x3002;&#x73AF;&#x6C27;&#x5408;&#x9176;-2 &#x5728;&#x8111;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4E86;&#x5148;&#x524D;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x786E;&#x5B9A;&#x5728;&#x53D1;&#x70E7;&#x611F;&#x5E94;&#x65B9;&#x9762;&#x53D1;&#x6325;&#x7740;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x662F;&#x5426;&#x73AF;&#x6C27;&#x5408;&#x9176;-2 &#x5728;&#x4E0B;&#x4E18;&#x8111;&#x4E2D;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E5F;&#x4FC3;&#x6210;&#x4E86;&#x53D1;&#x70ED;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x73AF;&#x6C27;&#x5408;&#x9176;-2 &#x5728;&#x4E0B;&#x4E18;&#x8111;&#x524D;&#x90E8;&#xFF0C;&#x53D1;&#x70ED;&#x53CD;&#x5E94;&#x5927;&#x5927;&#x5F3A;&#x5316;&#x5728;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E0E;&#x975E;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x52A0;&#x901F;&#x51FA;&#x73B0;&#x53D1;&#x70E7;&#x7684; 1 LPS &#x7528;&#x836F;&#x540E; 2 &#x5C0F;&#x65F6; neuronally &#x6697;&#x793A;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x6D3E;&#x751F;&#x51FA;&#x73AF;&#x6C27;&#x5408;&#x9176;-2 &#x5728;&#x53D1;&#x70ED;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

&#x73AF;&#x6C27;&#x5408;&#x9176;-2 &#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x8868;&#x8FBE;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684; PGE2 &#x548C;&#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x53D1;&#x70ED;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

Cyclooxygenases catalyze the first committed step in the formation of prostaglandins and thromboxanes from arachidonic acid. Cyclooxygenase-2 (COX-2), the inducible isoform of cyclooxygenase, is expressed in brain selectively in neurons of hippocampus, cerebral cortex, amygdala, and hypothalamus. Prostaglandins function in many processes in the CNS, including fever induction, nociception, and learning and memory, and are upregulated in paradigms of excitotoxic brain injury such as stroke and epilepsy. To address the varied functions of COX-2 and its prostaglandin products in brain, we have developed a transgenic mouse model in which COX-2 is selectively overexpressed in neurons of the CNS. COX-2 transgenic mice demonstrate elevated levels of all prostaglandins and thromboxane, albeit with a predominant induction of PGE(2) over other prostaglandins, followed by more modest inductions of PGI(2), and relatively smaller increases in PGF(2alpha),PGD(2), and TxB(2). We also examined whether increased neuronal production of prostaglandins would affect fever induction in response to the bacterial endotoxin lipopolysaccharide. COX-2 induction in brain endothelium has been previously determined to play an important role in fever induction, and we tested whether neuronal expression of COX-2 in hypothalamus also contributed to the febrile response. We found that in mice expressing transgenic COX-2 in anterior hypothalamus, the febrile response was significantly potentiated in transgenic as compared to non-transgenic mice, with an accelerated onset of fever by 1 2 hours after LPS administration, suggesting a role for neuronally derived COX-2 in the fever response.

Neuronal overexpression of COX-2 results in dominant production of PGE2 and altered fever response.

Cyclooxyg&#xE9;nases catalyser la premi&#xE8;re &#xE9;tape engag&#xE9;e dans la formation de prostaglandines et des thromboxanes de l&#x26;#39;acide arachidonique. La cyclo-oxyg&#xE9;nase 2 (COX-2), l&#x26;#39;isoforme inductible de la cyclo-oxyg&#xE9;nase, est exprim&#xE9;e dans le cerveau de mani&#xE8;re s&#xE9;lective dans les neurones de l&#x26;#39;hippocampe, le cortex c&#xE9;r&#xE9;bral, l&#x26;#39;amygdale et l&#x26;#39;hypothalamus. Les prostaglandines fonctionner dans de nombreux processus dans le SNC, y compris induction de la fi&#xE8;vre, la nociception, et de l&#x26;#39;apprentissage et la m&#xE9;moire, et sont r&#xE9;gul&#xE9;s &#xE0; la hausse dans les paradigmes de la l&#xE9;sion c&#xE9;r&#xE9;brale excitotoxique tels que accidents vasculaires c&#xE9;r&#xE9;braux et l&#x26;#39;&#xE9;pilepsie. Pour r&#xE9;pondre aux diverses fonctions de la COX-2 et ses produits de prostaglandine dans le cerveau, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; un mod&#xE8;le de souris transg&#xE9;nique dans lequel la COX-2 est s&#xE9;lectivement surexprim&#xE9; dans les neurones du syst&#xE8;me nerveux central. De la COX-2 souris transg&#xE9;niques montrent des niveaux &#xE9;lev&#xE9;s de toutes les prostaglandines et thromboxane, mais avec une induction pr&#xE9;dominante de PGE (2) sur d&#x26;#39;autres prostaglandines, suivie par des inductions plus modestes de PGI (2), et des augmentations relativement petites dans PGF (2alpha), le DPI (2), et TxB (2). Nous avons &#xE9;galement examin&#xE9; si l&#x26;#39;augmentation de production neuronale de prostaglandines affecterait induction de la fi&#xE8;vre en r&#xE9;ponse &#xE0; la lipopolysaccharide endotoxine bact&#xE9;rienne. COX-2 par induction dans l&#x26;#39;endoth&#xE9;lium du cerveau a &#xE9;t&#xE9; pr&#xE9;alablement d&#xE9;termin&#xE9;e &#xE0; jouer un r&#xF4;le important dans l&#x26;#39;induction de la fi&#xE8;vre, et nous avons test&#xE9; si l&#x26;#39;expression neuronale de la COX-2 dans l&#x26;#39;hypothalamus a &#xE9;galement contribu&#xE9; &#xE0; la r&#xE9;ponse f&#xE9;brile. Nous avons constat&#xE9; que chez la souris transg&#xE9;nique exprimant la COX-2 dans l&#x26;#39;hypothalamus ant&#xE9;rieur, la r&#xE9;ponse f&#xE9;brile a &#xE9;t&#xE9; significativement potentialis&#xE9;e dans transg&#xE9;nique par rapport &#xE0; des souris non transg&#xE9;niques, avec un d&#xE9;but de fi&#xE8;vre acc&#xE9;l&#xE9;r&#xE9;e par 1 2 heures apr&#xE8;s l&#x26;#39;administration de LPS, sugg&#xE9;rant un r&#xF4;le pour origine neuronale COX-2 dans la r&#xE9;ponse de la fi&#xE8;vre.

La surexpression neuronale de la COX-2 R&#xE9;sultats dans la production dominante de PGE2 et de r&#xE9;ponse Fever Altered

Neuronale &#xDC;berexpression von COX-2 f&#xFC;hrt zu dominant Produktion von PGE2 und ver&#xE4;nderte Fieber Antwort.

Cicloossigenasi catalizzano il primo passaggio impegnato nella formazione di prostaglandine e trombossani dall&#39;acido arachidonico. Cyclooxygenase-2 (COX-2), l&#39;isoforma inducibile della cicloossigenasi, &egrave; espresso nel cervello selettivamente nei neuroni dell&#39;ippocampo, la corteccia cerebrale, amigdala e ipotalamo. Prostaglandine funzionano in molti processi nel sistema nervoso centrale, tra cui l&#39;induzione di febbre, nocicezione e apprendimento e memoria e sono sovraregolati nei paradigmi di excitotoxic lesioni cerebrali come ictus ed epilessia. Per affrontare le funzioni varie di COX-2 e i suoi prodotti di Prostaglandina nel cervello, abbiamo sviluppato un modello di topo transgenico in cui COX-2 &egrave; overexpressed selettivamente nei neuroni del sistema nervoso centrale. COX-2 topi transgenici dimostrano livelli elevati di tutte le prostaglandine e trombossano, seppure con una predominante induzione di PGE(2) sopra altre prostaglandine, seguita da induzioni pi&ugrave; modesti di PGI(2) e relativamente pi&ugrave; piccoli aumenti in PGF(2alpha),PGD(2) e TxB(2). Abbiamo anche esaminato se aumentata produzione neuronale di prostaglandine interesserebbe induzione di febbre in risposta al lipopolisaccaride di endotossine batteriche. COX-2 induzione nell&#39;endotelio cerebrale &egrave; stata determinata in precedenza a giocare un ruolo importante nell&#39;induzione di febbre, e abbiamo testato se neuronale espressione di COX-2 nell&#39;ipotalamo ha contribuito anche alla risposta febbrile. Abbiamo scoperto che nei topi in che transgenici che esprimono COX-2 nell&#39;ipotalamo anteriore, la risposta febbrile &egrave; stato notevolmente potenziato transgenici rispetto ai topi non transgenici, con un&#39;accelerata insorgenza di febbre da 1 2 ore dopo la somministrazione di LPS, suggerendo un ruolo per neuronally derivate COX-2 nella risposta febbre.

Neuronale iperespressione di COX-2 risultati nella produzione dominante di PGE2 e febbre alterata risposta.

&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30E9;&#x30AD;&#x30C9;&#x30F3;&#x9178;&#x304B;&#x3089;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;&#x3068;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B5;&#x30F3;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B3;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;-2&#xFF08;COX-2&#xFF09;&#x3001;&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x6D77;&#x99AC;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x5927;&#x8133;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3001;&#x6241;&#x6843;&#x4F53;&#x3001;&#x8996;&#x5E8A;&#x4E0B;&#x90E8;&#x3067;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x8133;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;&#x306F;&#x71B1;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3001;&#x75DB;&#x899A;&#x3001;&#x5B66;&#x7FD2;&#x3084;&#x8A18;&#x61B6;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x3001;&#x8133;&#x5352;&#x4E2D;&#x3001;&#x3066;&#x3093;&#x304B;&#x3093;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x8208;&#x596E;&#x6BD2;&#x6027;&#x8133;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0;&#x3067;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8133;&#x5185;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;COX-2&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;&#x306E;&#x88FD;&#x54C1;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;COX-2&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; COX-2&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;PGI&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x63A7;&#x3048;&#x3081;&#x306A;&#x5E30;&#x7D0D;&#x6CD5;&#xFF08;2&#xFF09;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x4ED6;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;PGE&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x8A98;&#x5C0E;&#xFF08;2&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;PGF&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x4E0A;&#x6607;&#xFF08;2alpha&#xFF09;&#x3068;&#x306F;&#x3044;&#x3048;&#x3001;PGD&#x3092;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;&#x3068;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B5;&#x30F3;&#x306E;&#x4E0A;&#x6607;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#xFF08;2&#xFF09;&#x3001;TXB&#xFF08;2&#xFF09;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x304C;&#x7D30;&#x83CC;&#x5185;&#x6BD2;&#x7D20;&#x30EA;&#x30DD;&#x591A;&#x7CD6;&#x306B;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3057;&#x3066;&#x767A;&#x71B1;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8133;&#x306E;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;COX-2&#x8A98;&#x5C0E;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x71B1;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x8996;&#x5E8A;&#x4E0B;&#x90E8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;COX-2&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x8868;&#x73FE;&#x3082;&#x767A;&#x71B1;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3057;&#x305F;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;neuronally&#x6D3E;&#x751F;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x975E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x8996;&#x5E8A;&#x4E0B;&#x90E8;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x306F;&#x3001;COX-2&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x71B1;&#x53CD;&#x5FDC;&#x304C;&#x6709;&#x610F;&#x306B;LPS&#x6295;&#x4E0E;&#x5F8C;1&#x6642;&#x9593;&#x3067;&#x767A;&#x71B1;&#x306E;&#x52A0;&#x901F;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x5897;&#x5F37;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x767A;&#x71B1;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;COX-2&#x3002;

PGE2&#x306E;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x751F;&#x7523;&#x3068;&#x6539;&#x5909;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x767A;&#x71B1;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;COX-2&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;

Cyclooxygenases &#xCD5C;&#xC120;&#xC744; &#xB2E4;&#xD558;&#xACE0; &#xCCAB;&#xAC78;&#xC74C; &#xC544;&#xB77C;&#xD0A4; &#xB3C8; &#xC0B0;&#xC5D0;&#xC11C; prostaglandins&#xACFC; thromboxanes&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xCD09;&#xB9E4;. Cyclooxygenase 2 (c o X-2)&#xC758; cyclooxygenase &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; isoform &#xB1CC; &#xD574; &#xB9C8;&#xC640; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;, &#xD3B8;&#xB3C4;, &#xC2DC;&#xC0C1; &#xD558; &#xBD80;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Prostaglandins &#xBC1C;&#xC5F4; &#xC720;&#xB3C4;, nociception, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD559;&#xC2B5; &#xBC0F; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; CNS&#xC5D0; &#xB9CE;&#xC740; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9; &#xB418;&#xBA70; excitotoxic &#xB1CC;&#xC878;&#xC911;, &#xAC04; &#xC9C8; &#xB4F1; &#xB1CC; &#xC190;&#xC0C1;&#xC758; &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784;&#xC5D0; upregulated. C o X-2&#xC640; &#xB450;&#xB1CC;&#xC5D0; &#xC2A4;&#xD0C0; &#xAE00;&#xB780; &#xB518; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; c o X-2&#xB294; CNS&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; overexpressed &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCF55;&#xC2A4;-2 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC950; PGI(2), PGF(2alpha),PGD(2), &#xBC0F; Txb(2)&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;&#xC801; &#xC791;&#xC740; &#xC99D;&#xAC00;&#xC758; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xACB8;&#xC190; inductions &#xC774;&#xC5B4;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; prostaglandins &#xD1B5;&#xD574; PGE(2)&#xC758; &#xC8FC;&#xB41C; &#xC720;&#xB3C4;, &#xD568;&#xAED8; &#xC774;&#xAE30;&#xB294; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; prostaglandins&#xACFC; thromboxane, &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; prostaglandins&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC1C;&#xC5F4; &#xC720;&#xB3C4; &#xC138;&#xADE0; &#xC120;&#xCC98;&#xB9AC; lipopolysaccharide&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC904; &#xC9C0; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB1CC; endothelium&#xC5D0;&#xC11C; c o X-2 &#xC720;&#xB3C4; &#xBC1C;&#xC5F4; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD655;&#xC778; &#xB41C; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC2DC;&#xC0C1; &#xD558; &#xBD80;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; c o X-2&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DD; &#xB610;&#xD55C; &#xC5F4; &#xBCD1; &#xB300;&#xC751;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC55E;&#xCABD;&#xC5D0; &#xC2DC;&#xC0C1; &#xD558; &#xBD80;, &#xC5F4; &#xBCD1; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; c o X-2&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C;&#xC5D0; potentiated&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5F4; 1&#xC758; &#xAC00;&#xC18D; &#xBC1C;&#xBCD1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xBE44; &#xC950;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; LPS &#xAD00;&#xB9AC; &#xD6C4; 2 &#xC2DC;&#xAC04; neuronally&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; c o X-2 &#xBC1C;&#xC5F4; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC;.

C o X-2&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; overexpression pge2&#xACFC; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xC5F4;&#xC774; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ciclooxigenasas catalizan el primer paso comprometido en la formaci&#xF3;n de prostaglandinas y tromboxanos a partir del &#xE1;cido araquid&#xF3;nico. La ciclooxigenasa-2 (COX-2), la isoforma inducible de la ciclooxigenasa, se expresa en el cerebro de manera selectiva en las neuronas del hipocampo, corteza cerebral, la am&#xED;gdala y el hipot&#xE1;lamo. Las prostaglandinas funcionan en muchos procesos en el sistema nervioso central, incluida la inducci&#xF3;n de la fiebre, la nocicepci&#xF3;n y el aprendizaje y la memoria, y se regul&#xF3; en los paradigmas de la lesi&#xF3;n cerebral por excitotoxicidad, tales como accidente cerebrovascular y la epilepsia. Para hacer frente a las diversas funciones de la COX-2 y sus productos de prostaglandinas en el cerebro, hemos desarrollado un modelo de rat&#xF3;n transg&#xE9;nico en el que la COX-2 se sobreexpresa de forma selectiva en las neuronas del sistema nervioso central. COX-2 ratones transg&#xE9;nicos muestran niveles elevados de todas las prostaglandinas y tromboxanos, aunque con una inducci&#xF3;n predominante de la PGE (2) sobre otras prostaglandinas, seguido por las inducciones m&#xE1;s modestos de la IGP (2), y los aumentos relativamente peque&#xF1;os de PGF (2 alfa), el DGP (2), y TxB (2). Tambi&#xE9;n examin&#xF3; si aumento de la producci&#xF3;n de prostaglandinas neuronal afectar&#xED;a inducci&#xF3;n de la fiebre en respuesta a la endotoxina bacteriana lipopolisac&#xE1;rido. La inducci&#xF3;n de COX-2 en el endotelio cerebral ha sido previamente decidido a desempe&#xF1;ar un papel importante en la inducci&#xF3;n de la fiebre, y hemos probado si la expresi&#xF3;n neuronal de la COX-2 en el hipot&#xE1;lamo tambi&#xE9;n contribuy&#xF3; a la respuesta febril. Se encontr&#xF3; que en ratones que expresan la COX-2 transg&#xE9;nico en el hipot&#xE1;lamo anterior, la respuesta febril se potenci&#xF3; significativamente en plantas transg&#xE9;nicas en comparaci&#xF3;n con ratones no transg&#xE9;nicos, con un inicio acelerado de la fiebre en 1 2 horas despu&#xE9;s de la administraci&#xF3;n de LPS, lo que sugiere un papel para neuronalmente deriva COX-2 en la respuesta fiebre.

La sobreexpresi&#xF3;n neuronal de la COX-2 Resultados de producci&#xF3;n dominante de la PGE2 y la respuesta de la fiebre alterada

Peripheral nerve regeneration following injury occurs spontaneously, but many of the processes require metabolic energy. The mechanism of energy supply to axons has not previously been determined. In the central nervous system, monocarboxylate transporter 1 (MCT1), expressed in oligodendroglia, is critical for supplying lactate or other energy metabolites to axons. In the current study, MCT1 is shown to localize within the peripheral nervous system to perineurial cells, dorsal root ganglion neurons, and Schwann cells by MCT1 immunofluorescence in wild-type mice and tdTomato fluorescence in MCT1 BAC reporter mice. To investigate whether MCT1 is necessary for peripheral nerve regeneration, sciatic nerves of MCT1 heterozygous null mice are crushed and peripheral nerve regeneration was quantified electrophysiologically and anatomically. Compound muscle action potential (CMAP) recovery is delayed from a median of 21 days in wild-type mice to greater than 38 days in MCT1 heterozygote null mice. In fact, half of the MCT1 heterozygote null mice have no recovery of CMAP at 42 days, while all of the wild-type mice recovered. In addition, muscle fibers remain 40% more atrophic and neuromuscular junctions 40% more denervated at 42 days post-crush in the MCT1 heterozygote null mice than wild-type mice. The delay in nerve regeneration is not only in motor axons, as the number of regenerated axons in the sural sensory nerve of MCT1 heterozygote null mice at 4 weeks and tibial mixed sensory and motor nerve at 3 weeks is also significantly reduced compared to wild-type mice. This delay in regeneration may be partly due to failed Schwann cell function, as there is reduced early phagocytosis of myelin debris and remyelination of axon segments. These data for the first time demonstrate that MCT1 is critical for regeneration of both sensory and motor axons in mice following sciatic nerve crush.

Deficiency in monocarboxylate transporter 1 (MCT1) in mice delays regeneration of peripheral nerves following sciatic nerve crush.

Tau is the major constituent of neurofibrillary tangles in Alzheimer's disease (AD), but the mechanism underlying tau-associated neural damage remains unclear. Here, we show that tau can directly interact with nucleoporins of the nuclear pore complex (NPC) and affect their structural and functional integrity. Pathological tau impairs nuclear import and export in tau-overexpressing transgenic mice and in human AD brain tissue. Furthermore, the nucleoporin Nup98 accumulates in the cell bodies of some tangle-bearing neurons and can facilitate tau aggregation in vitro. These data support the hypothesis that tau can directly interact with NPC components, leading to their mislocalization and consequent disruption of NPC function. This raises the possibility that NPC dysfunction contributes to tau-induced neurotoxicity in AD and tauopathies.

Svetlana Vidensky

Department of Neurology

Johns Hopkins School of Medicine

Nuclear Transport Assays in Permeabilized Mouse Cortical Neurons