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Identification of Protein Interacting Partners Using Tandem Affinity Purification

A critical and often limiting step in understanding the function of host and viral proteins is the identification of interacting cellular or viral protein ...

Imperial College London 

&#x5C0F;&#x53CD;&#x520D;&#x517D;&#x75AB;&#x75C5; des &#x5C0F;&#x5144;&#x5F1F;&#x4E4B;&#x53CB;&#x53CD;&#x520D;&#x52A8;&#x7269;&#x75C5;&#x6BD2; (PPRV) &#x5728;&#x5C0F;&#x53CD;&#x520D;&#x52A8;&#x7269;&#x7269;&#x79CD;&#xFF0C;&#x5927;&#x591A;&#x662F;&#x7EF5;&#x7F8A;&#x548C;&#x5C71;&#x7F8A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6025;&#x6027;&#x53D1;&#x70ED;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;PPRV &#x662F; Morbillivirus &#x5C5E;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x9EBB;&#x75B9;&#x3001; &#x725B;&#x761F; (&#x725B;&#x761F;)&#x3001; &#x72AC;&#x761F;&#x70ED;&#x3001; phocine &#x72AC;&#x761F;&#x70ED;&#x548C;&#x9CB8;&#x9C7C;&#x3001; &#x6D77;&#x8C5A;&#x548C;&#x6D77;&#x8C5A;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230; morbilliviruses &#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B; morbilliviruses &#x7684;&#x5168;&#x957F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5E8F;&#x5217;&#x662F;&#x53EF;&#x7528;&#x548C;&#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x6551;&#x63F4;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x9488;&#x5BF9;&#x9646;&#x751F;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86; PPRV &#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x3002;&#x672C;&#x6587;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x53D1;&#x5E03;&#x7684;&#x5168;&#x957F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E3A; PPRV&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x8981;&#x7B26;&#x5408;&#x516D;&#x89C4;&#x5219;&#x548C;&#x5F00;&#x653E;&#x9605;&#x8BFB;&#x6846;&#x67B6; &#xFF08;ORFs&#xFF09; &#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801;&#x7684; morbilliviruses &#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x516B;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x5728;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; (nt) &#x4E00;&#x7EA7;&#xFF0C;&#x5168;&#x957F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684; PPRV &#x662F;&#x6700;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684;&#x725B;&#x761F;&#xFF0C;&#x5176;&#x4ED6;&#x53CD;&#x520D;&#x52A8;&#x7269; morbillivirus&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E00;&#x7EA7;&#x4E94;&#x4E2A;&#x516D;&#x4E2A;&#x7ED3;&#x6784;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; V &#x86CB;&#x767D;&#x663E;&#x793A;&#x6D77;&#x8C5A; morbillivirus (DMV) &#x66F4;&#x76F8;&#x4F3C;&#x867D;&#x7136;&#x53EA;&#x86CB;&#x767D; C &#x548C; L &#x663E;&#x793A;&#x725B;&#x761F;&#x9AD8;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;

&#x5C0F;&#x53CD;&#x520D;&#x517D;&#x75AB;&#x75C5; des &#x5C0F;&#x5144;&#x5F1F;&#x4E4B;&#x53CB;&#x53CD;&#x520D;&#x52A8;&#x7269;&#x75C5;&#x6BD2;&#xFF0C;Morbillivirus &#x5C5E;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;

Peste des petits ruminants virus (PPRV) causes an acute febrile illness in small ruminant species, mostly sheep and goats. PPRV is a member of the Morbillivirus genus which includes measles, rinderpest (cattle plague), canine distemper, phocine distemper and the morbilliviruses found in whales, porpoises and dolphins. Full length genome sequences for these morbilliviruses are available and reverse genetic rescue systems have been developed for the viruses of terrestrial mammals, with the exception of PPRV. This paper presents the first published full length genome sequence for PPRV. The genome was found to be consistent with the rule-of-six and open reading frames (ORFs) were identified that encoded the eight proteins characteristic of morbilliviruses. At the nucleotide (nt) level, the full length genome of PPRV was most similar to that of rinderpest, the other ruminant morbillivirus. However, at the protein level five of the six structural proteins and the V protein showed a greater similarity to the dolphin morbillivirus (DMV) while only the C and L proteins showed a high relationship to rinderpest.

Full genome sequence of peste des petits ruminants virus, a member of the Morbillivirus genus.

Virus de la peste des petits ruminants (VPPR) provoque une maladie f&eacute;brile aigu&euml; chez les ch&egrave;vres, surtout des moutons et des petits ruminants. VPPR est membre du genre Morbillivirus qui comprend la rougeole, peste bovine (peste bovine), la maladie canine, phocine distemper et le morbillivirus trouv&eacute;s &agrave; baleines, marsouins et dauphins. S&eacute;quences de g&eacute;nome de pleine longueur pour ces morbillivirus sont disponibles et les syst&egrave;mes de sauvetage g&eacute;n&eacute;tique inverse ont &eacute;t&eacute; d&eacute;velopp&eacute;s pour les virus de mammif&egrave;res terrestres, &agrave; l&#39;exception de VPPR. Cet article pr&eacute;sente la premi&egrave;re s&eacute;quence du g&eacute;nome de publi&eacute;e pleine longueur pour VPPR. Le g&eacute;nome s&#39;est av&eacute;r&eacute; pour &ecirc;tre conforme aux r&egrave;gle-de-six et ouvert lecture cadres (ORF) ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s qui encod&eacute; les huit prot&eacute;ines caract&eacute;ristiques de morbillivirus. Niveau des nucl&eacute;otides (nt), le g&eacute;nome de pleine longueur du VPPR &eacute;tait plus semblable &agrave; celui de la peste bovine, les ruminants autres morbillivirus. Cependant, au niveau de la prot&eacute;ine cinq des six prot&eacute;ines structurales et la prot&eacute;ine V montrent une plus grande similarit&eacute; au morbillivirus Dauphin (DMV) tandis que seulement les prot&eacute;ines C et L a montr&eacute; une relation forte &agrave; la peste bovine.

S&eacute;quence du g&eacute;nome complet du virus de peste des petits ruminants, un membre du genre Morbillivirus.

Vollst&#xE4;ndiges Genomsequenz von Pest der kleinen Wiederk&#xE4;uer Virus, ein Mitglied der Gattung Morbillivirus.

Peste des petits ruminanti virus (PPRV) provoca una malattia febbrile acuta in caprini, soprattutto pecore e piccole specie ruminanti. PPRV &egrave; un membro del genere Morbillivirus che include morbillo, peste (peste bovina), cimurro, del cimurro e il morbilliviruses trovato in balene, focene e delfini. Sequenze di genoma lunghezza piena per questi morbilliviruses sono disponibili e sistemi di salvataggio genetica inversa sono stati sviluppati per il virus di mammiferi terrestri, ad eccezione di PPRV. Questo libro presenta la prima sequenza del genoma pubblicato lunghezza completa per PPRV. Il genoma &egrave; stato trovato per essere coerente con la regola-di-sei e open reading frame (ORF) sono stati identificati che codifica le otto proteine caratteristiche di morbilliviruses. A livello di nucleotidi (nt), il genoma di tutta la lunghezza del PPRV era pi&ugrave; simile a quello della peste bovina, l&#39;altri ruminanti morbillivirus. Tuttavia, a livello di proteina cinque delle sei proteine strutturali e la proteina V mostr&ograve; una maggiore somiglianza con il dolphin morbillivirus (DMV) mentre solo le proteine C e L ha dimostrato un alto rapporto di peste bovina.

Sequenza completa del genoma del virus di peste des petits ruminanti, un membro del genere Morbillivirus.

Peste des &#x30D7;&#x30C6;&#x30A3;&#x53CD;&#x82BB;&#x52D5;&#x7269;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (PPRV) &#x306F;&#x7F8A;&#x3068;&#x5C71;&#x7F8A;&#x3067;&#x306F;&#x5927;&#x62B5;&#x3001;&#x5C0F;&#x578B;&#x53CD;&#x82BB;&#x52D5;&#x7269;&#x7A2E;&#x3067;&#x6025;&#x6027;&#x71B1;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PPRV &#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30B8;&#x30E9;&#x3084;&#x30A4;&#x30EB;&#x30AB;&#x3001;&#x30A4;&#x30EB;&#x30AB;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x305F; morbilliviruses &#x30A2;&#x30B6;&#x30E9;&#x30B7; &#x30FB; &#x30B8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x3001;&#x72AC;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x725B;&#x75AB; &#xFF08;&#x725B;&#x30DA;&#x30B9;&#x30C8;&#xFF09; &#x9EBB;&#x75B9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30D1;&#x30E9;&#x30DF;&#x30AF;&#x30BD; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5C5E;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; morbilliviruses &#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x9577;&#x3055;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x914D;&#x5217;&#x304C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x9006;&#x907A;&#x4F1D;&#x30EC;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E5;&#x30FC; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E; PPRV &#x3092;&#x9664;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x9678;&#x68F2;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PPRV &#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x516C;&#x958B;&#x5B8C;&#x5168;&#x9577;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306F; 6 &#x306E;&#x898F;&#x5247;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;8 &#x3064;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; morbilliviruses &#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3; &#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0; (ORFs) &#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8AAD;&#x66F8;&#x3002;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; (nt) &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;PPRV &#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x9577;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x725B;&#x75AB;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x53CD;&#x82BB;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30DF;&#x30AF;&#x30BD; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;C &#x304A;&#x3088;&#x3073; L &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3060;&#x3051;&#x9AD8;&#x3044;&#x95A2;&#x4FC2;&#x725B;&#x75AB;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067; 5 &#x3064;&#x306E;&#x516D;&#x3064;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068; V &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x985E;&#x4F3C;&#x30A4;&#x30EB;&#x30AB; &#x30D1;&#x30E9;&#x30DF;&#x30AF;&#x30BD; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (DMV) &#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

Peste des &#x30D7;&#x30C6;&#x30A3;&#x53CD;&#x82BB;&#x52D5;&#x7269;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30E9;&#x30DF;&#x30AF;&#x30BD; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5C5E;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E;&#x5168;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3002;

Peste des petits ruminants &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (PPRV) &#xC791;&#xC740; &#xBC18;&#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC885;, &#xC8FC;&#xB85C; &#xC591;, &#xC5FC;&#xC18C;&#xC758; &#xAE09;&#xC131; &#xC5F4; &#xBCD1; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. PPRV &#xD64D; &#xC5ED;, rinderpest (&#xAC00;&#xCD95; &#xC804;&#xC5FC;&#xBCD1;), &#xAC1C; &#xB514; &#xC2A4;&#xD15C; &#xD37C;, phocine &#xB514; &#xC2A4;&#xD15C; &#xD37C;&#xC640; &#xACE0;&#xB798;, &#xB3CC;&#xACE0;&#xB798;, &#xB3CC;&#xACE0;&#xB798;&#xC5D0; morbilliviruses&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; Morbillivirus &#xC18D;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; morbilliviruses&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; PPRV &#xC81C;&#xC678;&#xD55C; &#xC9C0;&#xC0C1;&#xD30C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xBC29;&#xD5A5; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAD6C;&#xC870; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC885;&#xC774; PPRV&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xAC8C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC804;&#xC7A5; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC8C;&#xB188; 6 &#xADDC;&#xCE59;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xBC1C;&#xACAC; &#xBC0F; &#xC5F4;&#xB824;&#xC788;&#xB294; &#xB3C5;&#xC11C; &#xD504;&#xB808;&#xC784; (ORFs) &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB294; morbilliviruses&#xC758; 8 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C;. &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; (nt) &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; PPRV&#xC758; &#xC804;&#xC7A5; &#xAC8C;&#xB188; rinderpest, &#xB2E4;&#xB978; &#xBC18;&#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; morbillivirus&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC720;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; C&#xC640; L &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xB9CC; &#xBCF4;&#xC5EC; rinderpest&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; 5 6 &#xAD6C;&#xC870; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; V &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD070; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131; &#xB3CC;&#xD540; morbillivirus (DMV)&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;.

&#xC804;&#xCCB4; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; peste des petits ruminants &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;, Morbillivirus &#xC18D;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Peste des petits rumiantes virus (PPRV) provoca una enfermedad febril aguda en cabras, sobre todo ovejas y peque&ntilde;as especies rumiantes. PPRV es un miembro del g&eacute;nero Morbillivirus que incluye sarampi&oacute;n, peste bovina (plaga de ganados), moquillo canino, moquillo phocine y el morbilliviruses encuentra en ballenas, delfines y marsopas. Las secuencias del genoma completo de longitud para estos morbilliviruses est&aacute;n disponibles y se han desarrollado sistemas de rescate gen&eacute;tica inversa para los virus de mam&iacute;feros terrestres, con la excepci&oacute;n de PPRV. Este documento presenta la primera secuencia de genoma de longitud completo publicado por PPRV. El genoma fue encontrado para ser consistentes con la regla de seis y abierto leyendo Marcos (ORFs) identificaron codificado las ocho prote&iacute;nas caracter&iacute;sticas de morbilliviruses. En el plano de nucle&oacute;tidos (nt), el genoma completo de la longitud de PPRV fue m&aacute;s similar a la de la peste bovina, los otros rumiantes morbillivirus. Sin embargo, en el nivel de prote&iacute;na cinco de las seis prote&iacute;nas estructurales y la prote&iacute;na V demostr&oacute; una mayor similitud con el delf&iacute;n morbillivirus (DMV) mientras que s&oacute;lo las prote&iacute;nas C y L demostraron una alta relaci&oacute;n con la peste bovina.

Secuencia del genoma completo del virus de la peste des petits rumiantes, un miembro del g&eacute;nero Morbillivirus.

&#x5C0F;&#x53CD;&#x520D;&#x517D;&#x75AB;&#x75C5;---&#x53CD;&#x520D;&#x52A8;&#x7269;&#x75C5;&#x6BD2; (PPRV) (&#x5BB6;&#x5EAD; Paramyxoviridae&#xFF0C;&#x5C5E; Morbillivirus) &#x5BFC;&#x81F4;&#x6025;&#x6027;&#x53D1;&#x70ED;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x5728;&#x7EF5;&#x7F8A;&#x548C;&#x5C71;&#x7F8A;&#x9020;&#x6210;&#x91CD;&#x5927;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x7387;&#x548C;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x5728;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7267;&#x7FA4;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x7C98;&#x6DB2;&#x5177;&#x6709;&#x8D1F;&#x9762;&#x610F;&#x4E49;&#x3001; &#x975E;&#x5206;&#x6BB5; RNA &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x548C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x5BC4;&#x4E3B;&#x8303;&#x56F4;&#x53CA;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x6709;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7814;&#x7A76;&#x5229;&#x7528;&#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6280;&#x672F;&#x8FD8;&#x4F7F;&#x75AB;&#x82D7;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x5E94;&#x91C7;&#x53D6;&#x66F4;&#x7406;&#x6027;&#x7684;&#x6001;&#x5EA6;&#x3002;&#x5728;&#x8FDB;&#x884C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684; PPRV &#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x9020; PPRV minigenome &#x548C;&#x7814;&#x7A76;&#x53CA;&#x5176;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x81F3;&#x4E8E;&#x5176;&#x4ED6; morbilliviruses minigenome &#x6551;&#x63F4;&#x7684;&#x6700;&#x4F4E;&#x8981;&#x6C42;&#x8BC1;&#x660E;&#x662F;&#x987A;&#x5F0F;&#x7684;&#x5143;&#x7D20;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; (GP) &#x548C; antigenome (AGP) &#x521B;&#x529E;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E09;&#x4E2A;&#x53CD;&#x5F0F;&#x4F5C;&#x7528;&#x5E2E;&#x52A9;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; N (&#x6838;&#x8863;&#x58F3;)&#x3001; P (&#x78F7;) &#x548C; L (&#x5927;&#x805A;&#x5408;&#x9176;)&#x3002;&#x540C;&#x6E90; PPRV helper &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x88AB;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5176;&#x5916;&#x6E90;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x4ECE;&#x5BC6;&#x5207;&#x76F8;&#x5173;&#x725B;&#x761F;&#x75C5;&#x6BD2; &#xFF08;&#x53CD;&#x5E94;&#x5806;&#x538B;&#x529B;&#x5BB9;&#x5668;&#xFF09; &#x548C;&#x5916;&#x6E90; minigenome &#x6551;&#x63F4;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6548;&#x7387;&#x8F83;&#x4F4E;&#x7684;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x3002;&#x7531;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x4E24;&#x4E2A; GP/AGP &#x5D4C;&#x5408; minigenomes &#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x5728;&#x5021;&#x5BFC;&#x8005;&#x4E0E;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x9176;/&#x590D;&#x5236;&#x9176;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;PPRV minigenome &#x8FD8;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x4E0D;&#x5E94;&#x4E25;&#x683C;&#x9075;&#x5B88;&quot;&#x516D;&#x89C4;&#x5219;&quot;&#x4F53;&#x5916;&#x3002;

&#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x5C0F;&#x53CD;&#x520D;&#x517D;&#x75AB;&#x75C5;---&#x53CD;&#x520D;&#x52A8;&#x7269;&#x75C5;&#x6BD2; (PPRV)&#xFF1A; &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x60C5;&#x51B5;&#x3002;

Peste-des-petits-ruminants virus (PPRV) (family Paramyxoviridae, genus Morbillivirus) causes an acute febrile illness in sheep and goats resulting in significant morbidity and mortality in infected herds. The paramyxoviruses all have negative sense, non-segmented RNA genomes and their host range and pathogenic determinants have been extensively studied using reverse genetics. This technology also enables a more rational approach to be taken with respect to vaccine design. In order to initiate this type of work for PPRV we constructed a PPRV minigenome and studied its expression in transfected cells. As for other morbilliviruses, the minimum requirements for minigenome rescue were shown to be the cis-acting elements of the genome (GP) and antigenome (AGP) promoters as well as the three trans-acting helper proteins N (nucleocapsid), P (phosphoprotein) and L (large polymerase). Homologous PPRV helper proteins were compared to their heterologous analogues from the closely related rinderpest virus (RPV) and heterologous minigenome rescue was found to be a much less efficient process. By engineering two GP/AGP chimeric minigenomes we also identified differences between the two viruses in the specific interactions between the promoters and the transcriptase/replicase complexes. The PPRV minigenome was also shown not to strictly comply with the "rule of six"in vitro.

Reverse genetics for peste-des-petits-ruminants virus (PPRV): promoter and protein specificities.

Virus de la peste-des-petits-ruminants (VPPR) (famille des Paramyxoviridae, genre Morbillivirus) provoque une maladie f&eacute;brile aigu&euml; chez les ovins et les caprins, entra&icirc;nant une morbidit&eacute; et de mortalit&eacute; dans les troupeaux infect&eacute;s. Les paramyxovirus tous ont le sens n&eacute;gatif, non segment&eacute; des g&eacute;nomes de RNA et leur gamme d&#39;h&ocirc;tes et pathog&egrave;nes d&eacute;terminants ont &eacute;t&eacute; intensivement &eacute;tudi&eacute;s &agrave; l&#39;aide de la g&eacute;n&eacute;tique inverse. Cette technologie permet &eacute;galement une approche plus rationnelle &agrave; prendre en ce qui concerne la conception de vaccins. Afin de lancer ce type de travail pour VPPR, nous avons construit un minigenome VPPR et &eacute;tudi&eacute; son expression dans les cellules transfect&eacute;es. En ce qui concerne les autres morbillivirus, les exigences minimales pour le sauvetage de minigenome se sont av&eacute;r&eacute;s &ecirc;tre les intramol&eacute;culaires &eacute;l&eacute;ments du g&eacute;nome (GP) et antigenome (AGP) promoteurs ainsi que les trois prot&eacute;ines de trans action d&#39;assistance N (nucl&eacute;ocapside), P (phosphoprot&eacute;ine) et L (grand polym&eacute;rase). Des prot&eacute;ines d&#39;assistance VPPR homologues ont &eacute;t&eacute; compar&eacute;s &agrave; leurs analogues h&eacute;t&eacute;rologues du virus de la peste bovine apparent&eacute;e (RPV) et sauvetage h&eacute;t&eacute;rologue minigenome s&#39;est av&eacute;r&eacute; un processus beaucoup moins efficace. Par deux minigenomes chim&eacute;riques de GP/AGP d&#39;ing&eacute;nierie, nous avons &eacute;galement identifi&eacute; des diff&eacute;rences entre les deux virus dans les interactions sp&eacute;cifiques entre les promoteurs et les complexes de la transcriptase inverse/r&eacute;plicase. Le minigenome VPPR a aussi montr&eacute; ne pas &agrave; &ecirc;tre conforme &agrave; la &laquo; r&egrave;gle de six &raquo; in vitro.

Inverser la g&eacute;n&eacute;tique pour le virus de la peste-des-petits-ruminants (VPPR): sp&eacute;cificit&eacute;s de promoteur et de prot&eacute;ines.

Pest--Petits-Wiederk&auml;uer-Virus (PPRV) (Familie Virus, Gattung Morbillivirus) verursacht eine akute fieberhafte Erkrankung bei Schafen und Ziegen, was zu erheblicher Morbidit&auml;t und Mortalit&auml;t bei infizierten Herden. Die Paramyxoviren alle haben negativen Sinne, nicht-segmentierten RNA-Genome und ihre Host-Bereich und pathogene Faktoren wurden ausgiebig untersucht mit Reverser. Diese Technologie erm&ouml;glicht auch einen rationaleren Ansatz in Bezug auf Impfstoff Gestaltung getroffen werden. Um diese Art von Arbeit f&uuml;r PPRV zu initiieren wir konstruiert ein PPRV Minigenome und studierte seinen Ausdruck in transfected Zellen. Wie bei anderen Morbilliviruses wurden die Mindestanforderungen f&uuml;r Minigenome Rettung gezeigt die Cis wirkende Elemente des Genoms (GP) und antigenome (AGP)-Projekttr&auml;ger sowie die drei Trans wirkende Helfer Proteine N (Nucleocapsid), P (Phosphoprotein) und L (gro&szlig;e Polymerase). Homologe PPRV Helfer Proteine wurden im Vergleich zu ihrer heterologe Analoga von der eng verwandten Rinderpest-Virus (RPV) und heterologe Minigenome Rettung erwies sich als deutlich weniger effizient erweisen. Durch zwei GP/AGP Chim&auml;rer Minigenomes Technik identifiziert wir auch Unterschiede zwischen den zwei Viren in die spezifischen Wechselwirkungen zwischen dem Projekttr&auml;ger und der Transkriptase/Replicase-komplexe. Die PPRV Minigenome wurde auch nicht auf der &quot;sechs&quot;-Regel strikt einzuhalten in Vitro gezeigt.

Reverse Genetik f&uuml;r Pest--Petits-Wiederk&auml;uer-Virus (PPRV): Projekttr&auml;ger und Protein Besonderheiten.

Virus della peste-des petits-ruminanti (PPRV) (Famiglia Paramyxoviridae, Genere Morbillivirus) provoca una malattia febbrile acuta in pecore e capre con conseguente significativa morbidit&agrave; e mortalit&agrave; negli allevamenti infetti. Gli aviari tutti hanno senso negativo, non segmentato genomi di RNA e loro gamma di host e patogeni determinanti sono state ampiamente studiate utilizzando genetica inversa. Questa tecnologia permette anche un approccio pi&ugrave; razionale da adottare rispetto alla progettazione di vaccini. Al fine di avviare questo tipo di lavoro per PPRV abbiamo costruito un minigenome PPRV e studiato la sua espressione nelle celle transfected. Per quanto riguarda altri morbilliviruses, i requisiti minimi per il soccorso di minigenome hanno dimostrati di essere i cis-acting elementi del genoma (GP) e antigenome promotori (AGP), come pure le tre proteine trans-recitazione helper N (nucleocapside), P (fosfoproteina) e L (grande polimerasi). Proteine omologhe di helper PPRV erano rispetto ai loro analoghi eterologa del virus della peste bovina strettamente correlati (RPV) e salvataggio minigenome eterologa &egrave; stato trovato per essere un processo molto meno efficiente. Di ingegneria due GP/AGP chimerico minigenomes abbiamo individuato anche le differenze tra i due virus nelle interazioni specifiche tra i promotori e i complessi trascrittasi/replicasi. Il minigenome PPRV &egrave; stato anche dimostrato di non rispettare rigorosamente la &quot;regola dei sei&quot; in vitro.

Invertire la genetica per il virus della peste-des petits-ruminanti (PPRV): specificit&agrave; promotore e proteine.

Peste des &#x30D7;&#x30C6;&#x30A3;&#x53CD;&#x82BB;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (PPRV) (&#x5BB6;&#x65CF;&#x91CD;&#x5408;&#x3001;&#x5C5E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30DF;&#x30AF;&#x30BD; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;) &#x6025;&#x6027;&#x71B1;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x7F8A;&#x3084;&#x30E4;&#x30AE;&#x306E;&#x91CD;&#x5927;&#x306A;&#x5408;&#x4F75;&#x75C7;&#x3084;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x7FA4;&#x308C;&#x306E;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x3067;&#x7D50;&#x679C;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30DF;&#x30AF;&#x30BD;&#x8CA0;&#x306E;&#x610F;&#x5473;&#x3001;RNA &#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x975E;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x57DF;&#x3068;&#x9006;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306F;&#x5E83;&#x304F;&#x7814;&#x7A76;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x5408;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E; PPRV &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B; PPRV minigenome &#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x3001;transfected &#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x52C9;&#x5F37;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4ED6;&#x306E; morbilliviruses &#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F; minigenome &#x6551;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x5C0F;&#x8981;&#x4EF6; cis &#x6F14;&#x6280;&#x306E;&#x8981;&#x7D20;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; (GP) &#x3068; antigenome (AGP) &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066; 3 &#x3064;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; N (&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;) P (&#x30EA;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;) &#x3068; L (&#x5927;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;) &#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;PPRV &#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;&#x7570;&#x7A2E;&#x69CB;&#x9020;&#x985E;&#x4F3C;&#x4F53;&#x306B;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x725B;&#x75AB;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (RPV) &#x304B;&#x3089;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x7570;&#x7A2E; minigenome &#x6551;&#x52A9;&#x306F;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;2 &#x3064;&#x306E; GP/AGP &#x30AD;&#x30E1;&#x30E9; minigenomes &#x30A8;&#x30F3;&#x30B8;&#x30CB;&#x30A2; &#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3082; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x9006;&#x8EE2;&#x5199;&#x9175;&#x7D20;/&#x8907;&#x88FD;&#x9175;&#x7D20;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x9593;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;PPRV minigenome &#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x53B3;&#x5BC6;&#x306B;&#x516D;&#x3064;&#x306E;&#x300C;&#x30EB;&#x30FC;&#x30EB;&#x300D;&#x3092;&#x9075;&#x5B88;&#x3059;&#x308B; in vitro &#x3067;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x9006;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66; peste des &#x30D7;&#x30C6;&#x30A3;&#x53CD;&#x82BB;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (PPRV): &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3002;

Peste des petits ruminants &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (PPRV) (&#xAC00;&#xC871; Paramyxoviridae, &#xC18D; Morbillivirus) &#xC591; &#xBC0F; &#xC5FC;&#xC18C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBCD1; &#xC801; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC640; &#xC0AC;&#xB9DD;&#xB960;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xBB34;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; &#xAE09;&#xC131; &#xC5F4; &#xBCD1; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; paramyxoviruses&#xC5D0;&#xB294; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC758;&#xBBF8;, RNA &#xC720;&#xC804;&#xC790;-&#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC94;&#xC704;&#xC640; &#xC5ED; &#xC720;&#xC804;&#xD559;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778;&#xC744; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xACF5;&#xBD80; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xBC31;&#xC2E0; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xC8FC;&#xC758;&#xAC00; &#xB354; &#xD569;&#xB9AC;&#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC; &#xAC00;&#xB2A5;. &#xC774; &#xC720;&#xD615;&#xC758; PPRV&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC; PPRV minigenome &#xACE0; transfected &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xADF8; &#xD45C;&#xD604; &#xACF5;&#xBD80;. &#xB2E4;&#xB978; morbilliviruses&#xC5D0; &#xAD00;&#xD574;&#xC11C;&#xB294; minigenome &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xC18C; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC740; cis &#xC5F0;&#xAE30;&#xC758; &#xC694;&#xC18C; &#xAC8C;&#xB188; (GP)&#xC640; antigenome (AGP) &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; &#xC5F0;&#xAE30; &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; N (nucleocapsid), P (phosphoprotein)&#xC640; L (&#xD070; &#xD6A8;&#xC18C;) &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB3D9;&#xC885; PPRV &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; analogues &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; rinderpest &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (RPV)&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xAD50; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xBD84;&#xB9AC; minigenome &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xB450; GP/AGP chimeric minigenomes &#xC5D4;&#xC9C0;&#xB2C8;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xBC0F; transcriptase/replicase &#xB2E8;&#xC9C0; &#xC0AC;&#xC774; &#xD2B9;&#xC815; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB450; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xCC28;&#xC774; &#xC2DD;&#xBCC4;. PPRV minigenome&#xB294; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00;&#xC5D0; &#xD558;&#xC9C0; &#xC5C4;&#xACA9;&#xD788; 6&#xC758; &quot;&#xADDC;&#xCE59;&quot;&#xC744; &#xC900;&#xC218; &#xD558;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9AC;&#xBC84;&#xC2A4; peste des petits ruminants &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (PPRV)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xD559;: &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;.

Virus de la peste de los peque&ntilde;os rumiantes (PPRV) (familia Paramyxoviridae, g&eacute;nero Morbillivirus) causa una enfermedad febril aguda en ovinos y caprinos que resulta importante morbilidad y mortalidad en reba&ntilde;os infectados. Los paramyxoviruses todos tienen sentido negativo, no segmentado de genomas de RNA y su rango de hospederos y determinantes pat&oacute;genos se han estudiado ampliamente utilizando gen&eacute;tica reversa. Esta tecnolog&iacute;a tambi&eacute;n permite un enfoque m&aacute;s racional para tomarse con respecto al dise&ntilde;o de la vacuna. Para iniciar este tipo de trabajo para PPRV hemos construido un minigenome PPRV y estudi&oacute; su expresi&oacute;n en las c&eacute;lulas transfected. En cuanto a otros morbilliviruses, los requisitos m&iacute;nimos para el rescate de minigenome fueron demostrados para ser los cis acci&oacute;n elementos del genoma (GP) y promotores de antigenome (AGP) as&iacute; como las tres prote&iacute;nas trans-actuantes ayudante N (nucleoc&aacute;pside), P (fosfoprote&iacute;na) y L (grande polimerasa). Prote&iacute;nas hom&oacute;logas de ayudante PPRV se compararon con sus an&aacute;logos heter&oacute;logos del virus de la peste bovina estrechamente relacionados (RPV) y rescate heter&oacute;logo minigenome result&oacute; para ser un proceso mucho menos eficiente. Por ingenier&iacute;a dos GP/AGP quim&eacute;ricos minigenomes tambi&eacute;n se identificaron diferencias entre los dos virus en las interacciones espec&iacute;ficas entre los promotores y los complejos de transcriptasa/replicase. El minigenome PPRV tambi&eacute;n mostr&oacute; no cumplen estrictamente con la &quot;regla de los seis&quot; in vitro.

Revertir la gen&eacute;tica de los virus de la peste de los peque&ntilde;os rumiantes (PPRV): especificidades promotor y prote&iacute;na.

&#x4E2D;&#x590D;&#x5236;&#x7684; RNA &#x7ED3;&#x6784;&#x5143;&#x7D20;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x673A;&#x5236;&#x548C; Caliciviridae &#x7FFB;&#x8BD1;&#x4ECD;&#x7136;&#x77E5;&#x4E4B;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x7B97;&#x6CD5;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x9884;&#x6D4B;&#x8BFA;&#x6C83;&#x514B;&#x3001; Sapovirus&#x3001; Vesivirus &#x548C; Lagovirus &#x5C5E;&#x5185;&#x7684;&#x4E8C;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x663E;&#x793A;&#x6DF1;&#x523B;&#x5236;&#x6B62;&#x540C;&#x4E49;&#x7F51;&#x7AD9;&#x53D8;&#x5F02;&#x6027; (&#x8BAE;&#x5E2D;) &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#xFF09; 5&#39; &#x672B;&#x7AEF;&#x548C; sub-genomic (sg) &#x8C08;&#x8BDD;&#x8BB0;&#x5F55;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408;&#x6765;&#x81EA;&#x5E95;&#x5C42;&#x7684; RNA &#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x8FDB;&#x5316;&#x7EA6;&#x675F;&#x7684;&#x5F00;&#x59CB;&#x3002;&#x65B0;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684;&#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x626B;&#x63CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#x9884;&#x6D4B; RNA &#x6298;&#x53E0;&#x7CBE;&#x786E;&#x5230;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x8BAE;&#x5E2D;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; 3&#39; &#x7AEF;&#x7684;&#x6620;&#x5C04;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x533A;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x51E0;&#x4E2A;&#x8FDB;&#x5316;&#x4FDD;&#x6301;&#x7684; RNA &#x4E8C;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x53EF;&#x53D8;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x548C;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x676F;&#x6240;&#x90FD;&#x8F7D; 3&#39; &#x7EC8;&#x7AEF;&#x53D1;&#x5939;&#x548C;&#x5E72;&#x5FAA;&#x73AF; anti-genomic &#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x603B;&#x662F;&#x516D;&#x57FA;&#x5730;&#x4E0A;&#x6E38;&#x7684; sg &#x8A8A;&#x672C;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x503C;&#x5047;&#x5B9A;&#x4E3A; sg &#x5BA3;&#x4F20;&#x5458;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;5&#39; &#x7AEF;&#x5E72;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4E2D;&#x65AD;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8BFA;&#x6C83;&#x514B; &#xFF08;&#x8F6C;&#x5411;&#x8282;&#x7528;&#xFF09; &#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x4EA7;&#x751F;&#x51CF;&#x5C11;&#x7EA6; 15-&#x5230; 20 &#x500D;&#x7684;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E2D;&#x65AD;&#x7684; sg &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A;&#x548C; 3&#39; &#x7AEF;&#x7684; RNA &#x7ED3;&#x6784;&#x5B8C;&#x5168;&#x6467;&#x6BC1;&#x4E86;&#x590D;&#x5236;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x6062;&#x590D;&#x4FEE;&#x590D;&#x7A81;&#x53D8; sg &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A;&#x7684;&#x611F;&#x67D3;&#x529B;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E3A; RNA &#x4E8C;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x8BE5;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x4E3A;&#x4ECA;&#x540E;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x8F6C;&#x5411;&#x8282;&#x7528;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x676F;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5168;&#x9762;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x8D44;&#x6E90;&#x3002;

&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x7684; RNA &#x4E8C;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#x5143;&#x7D20;&#x4E4B;&#x95F4;&#x4E0D;&#x540C;&#x5C5E;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x548C;&#x52A8;&#x7269;&#x676F;&#x3002;

The mechanism and role of RNA structure elements in the replication and translation of Caliciviridae remains poorly understood. Several algorithmically independent methods were used to predict secondary structures within the Norovirus, Sapovirus, Vesivirus and Lagovirus genera. All showed profound suppression of synonymous site variability (SSSV) at genomic 5' ends and the start of the sub-genomic (sg) transcript, consistent with evolutionary constraints from underlying RNA structure. A newly developed thermodynamic scanning method predicted RNA folding mapping precisely to regions of SSSV and at the genomic 3' end. These regions contained several evolutionarily conserved RNA secondary structures, of variable size and positions. However, all caliciviruses contained 3' terminal hairpins, and stem-loops in the anti-genomic strand invariably six bases upstream of the sg transcript, indicating putative roles as sg promoters. Using the murine norovirus (MNV) reverse-genetics system, disruption of 5' end stem-loops produced approximately 15- to 20-fold infectivity reductions, while disruption of the RNA structure in the sg promoter region and at the 3' end entirely destroyed replication ability. Restoration of infectivity by repair mutations in the sg promoter region confirmed a functional role for the RNA secondary structure, not the sequence. This study provides comprehensive bioinformatic resources for future functional studies of MNV and other caliciviruses.

Bioinformatic and functional analysis of RNA secondary structure elements among different genera of human and animal caliciviruses.

Le m&#xE9;canisme et le r&#xF4;le des &#xE9;l&#xE9;ments de structure d&#x26;#39;ARN dans la r&#xE9;plication et la traduction des Caliciviridae reste mal comprise. Plusieurs m&#xE9;thodes algorithmiquement ind&#xE9;pendants ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour pr&#xE9;dire les structures secondaires dans les genres Norovirus, Sapovirus, Vesivirus et Lagovirus. Tous ont pr&#xE9;sent&#xE9; une suppression profonde de la variabilit&#xE9; site synonyme (SSSV) &#xE0; g&#xE9;nomiques extr&#xE9;mit&#xE9;s 5 &#x26;#39;et le d&#xE9;but de la sous-g&#xE9;nomique (sg) la transcription, compatible avec les contraintes &#xE9;volutives &#xE0; partir d&#x26;#39;ARN structure sous-jacente. Une m&#xE9;thode thermodynamique nouvellement d&#xE9;velopp&#xE9; balayage pr&#xE9;dit ARN cartographie pliage pr&#xE9;cis&#xE9;ment pour les r&#xE9;gions du SSSV et en 3 g&#xE9;nomique &#xBB;fin. Ces r&#xE9;gions &#xE9;volutivement conserv&#xE9;es contenait plusieurs structures secondaires d&#x26;#39;ARN, de taille variable et des positions. Cependant, tous les calicivirus contenue 3 &#x26;#39;&#xE9;pingles &#xE0; cheveux terminaux, et les souches des boucles dans le brin anti-g&#xE9;nomique invariablement six bases en amont de la transcription sg, indiquant les r&#xF4;les putatifs en tant que promoteurs sg. Utilisation de la norovirus murin (MNV) syst&#xE8;me de g&#xE9;n&#xE9;tique inverse, la perturbation de l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; 5 &#x26;#39;tige-boucles produit environ 15 - &#xE0; la r&#xE9;duction d&#x26;#39;infectivit&#xE9; de 20 fois, tandis que la perturbation de la structure de l&#x26;#39;ARN dans la r&#xE9;gion promotrice sg et &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; 3&#x26;#39; enti&#xE8;rement d&#xE9;truite la capacit&#xE9; de r&#xE9;plication. Restauration de l&#x26;#39;infectiosit&#xE9; par des mutations de r&#xE9;paration dans la r&#xE9;gion promotrice sg a confirm&#xE9; un r&#xF4;le fonctionnel pour la structure secondaire d&#x26;#39;ARN, et non pas la s&#xE9;quence. Cette &#xE9;tude fournit une gamme compl&#xE8;te de ressources bioinformatiques pour de futures &#xE9;tudes fonctionnelles de calicivirus MNV et d&#x26;#39;autres.

Analyse bioinformatique et fonctionnelle des &#xE9;l&#xE9;ments de structure secondaire d&#x26;#39;ARN Parmi Diff&#xE9;rents genres de calicivirus humains et les animaux

Der Mechanismus und die Rolle der RNA-Struktur-Elemente bei der Replikation und &Uuml;bersetzung der Caliciviridae bleibt weitgehend unverstanden. Mehrere algorithmisch unabh&auml;ngige Methoden wurden verwendet, um sekund&auml;re Strukturen innerhalb der Norovirus, Sapovirus, Vesivirus und Lagovirus Gattungen vorherzusagen. Alle zeigten tiefgreifende Unterdr&uuml;ckung Synonym Website Variabilit&auml;t (SSSV) bei genomischen 5&#39; endet und Beginn der sub-genomic (sg) Abschrift mit evolution&auml;ren Einschr&auml;nkungen von zugrunde liegenden RNA-Struktur. Eine neuentwickelte thermodynamische Scanmethode vorhergesagt RNA Faltreifen Zuordnung genau auf Regionen des SSSV und an die genomische 3&#39;-enden. Diese Regionen enthalten mehrere evolution&auml;r konservierte RNA Sekund&auml;rstrukturen, variabler Gr&ouml;&szlig;e und Positionen. Allerdings enthalten alle Caliciviruses 3&#39; terminal Haarnadeln und Vorbau-Loops in der anti-genomic Strang immer sechs Basen stromaufw&auml;rts der sg Abschrift angibt, vermeintliche Rollen als sg Promotoren. Mit dem murinen Norovirus (MNV)-umgekehrt-Genetik-System produziert Unterbrechung der 5&#39; Vorbau-End&ouml;sen ca. 15 - bis 20 - 8-fach Infektiosit&auml;t K&uuml;rzungen, w&auml;hrend Unterbrechungen in der sg-Promotor-Region und am 3&#39;-Ende der RNA-Struktur Replikation F&auml;higkeit v&ouml;llig zerst&ouml;rt. Restaurierung der Infektiosit&auml;t Reparatur Mutationen in der sg-Promotor-Region best&auml;tigt eine funktionale Rolle f&uuml;r die RNA-Sekund&auml;rstruktur, nicht die Reihenfolge. Diese Studie enth&auml;lt umfassende Bioinformatic Ressourcen f&uuml;r zuk&uuml;nftige Funktionsstudien MNV und andere Caliciviruses.

Bioinformatic und funktionelle Analyse der RNA Sekund&auml;rstruktur Elemente in verschiedenen Gattungen von Mensch und Tier Caliciviruses.

Il meccanismo e il ruolo degli elementi di struttura di RNA nella replicazione e traduzione di Caliciviridae rimane scarsamente comprensibile. Diversi metodi algoritmicamente indipendenti sono stati utilizzati per predire le strutture secondarie all&#39;interno dei generi Norovirus, Sapovirus, Vesivirus e Lagovirus. Tutti hanno mostrato profonda soppressione della variabilit&agrave; sito sinonimo (SSSV) all&#39;estremit&agrave; genomic 5&#39; e l&#39;inizio della trascrizione sub-genomic (sg), coerenza con i vincoli evolutivi dalla sottostante struttura di RNA. Un metodo di scansione termodinamico appena sviluppato predetto RNA pieghevole mappatura precisamente alle regioni di SSSV e alla fine genomic 3&#39;. Queste regioni contenevano diversi evolutionarily conserved RNA strutture secondarie, di dimensione variabile e posizioni. Tuttavia, tutti i calicivirus conteneva 3&#39; terminale forcine e stem-loop in anti-genomic strand invariabilmente sei basi a monte della trascrizione sg, indicando ruoli putativi come promotori di sg. Utilizzando il sistema di retro-genetica murino norovirus (MNV), interruzione di 5&#39; fine stem-loop prodotto riduzioni di infettivit&agrave; di circa 15 - a 20 volte, mentre perturbazione della struttura RNA nella regione del promotore di sg e all&#39;estremit&agrave; 3&#39; interamente distrutto la possibilit&agrave; di replica. Restauro di infettivit&agrave; di riparazione mutazioni nella regione del promotore sg ha confermato un ruolo funzionale per la struttura secondaria del RNA, non la sequenza. Questo studio fornisce risorse bioinformatiche completa per futuri studi funzionali di MNV e altri calicivirus.

Bioinformatica ed analisi funzionale degli elementi di struttura secondaria di RNA tra diversi generi di calicivirus umani e animali.

Caliciviridae&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x3068;&#x7FFB;&#x8A33;RNA&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3068;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x307E;&#x307E;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3001;&#x30B5;&#x30DD;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3001;Vesivirus&#x3068;Lagovirus&#x5C5E;&#x5185;&#x306E;&#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306F;&#x540C;&#x7FA9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;5 &#x26;#39;&#x672B;&#x7AEF;&#x5909;&#x52D5;&#xFF08;SSSV&#xFF09;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;RNA&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x304B;&#x3089;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x5236;&#x7D04;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#xFF08;SG&#xFF09;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x306E;&#x6DF1;&#x9060;&#x306A;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x71B1;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x306A;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304C;SSSV&#x306E;&#x3001;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;3 &#x26;#39;&#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;RNA&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;&#x3001;&#x5909;&#x6570;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3068;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x7684;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;RNA&#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x3001;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;sg&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x5E38;&#x306B;6&#x5869;&#x57FA;&#x4E0A;&#x6D41;&#x306B;sg&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x6297;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x9396;&#x306B;3 &#x26;#39;&#x672B;&#x7AEF;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; - &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;MNV&#xFF09;&#x9006;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;5&#x306E;&#x7834;&#x58CA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; &#x26;#39;&#x672B;&#x7AEF;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306F;&#x7D04;15&#x3092;&#x751F;&#x6210; -  20&#x500D;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x529B;&#x306E;&#x524A;&#x6E1B;&#x306B;&#x3001;SG&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;RNA&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x7834;&#x58CA;&#x3068;3&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x26;#39;&#x672B;&#x7AEF;&#x304C;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x7834;&#x58CA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8907;&#x88FD;&#x80FD;&#x529B;&#x3002; sg&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306F;&#x3001;RNA&#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;MNV&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4ECA;&#x5F8C;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;&#x3068;&#x52D5;&#x7269;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5C5E;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x3001;RNA&#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;

&#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xBC0F; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; RNA &#xAD6C;&#xC870; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xBC0F; Caliciviridae&#xC758; &#xBC88;&#xC5ED; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC774;&#xD574; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xB178;&#xB85C;&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;, Sapovirus, Vesivirus &#xBC0F; Lagovirus &#xC7A5;&#xAD70; &#xB0B4; 2 &#xCC28; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC608;&#xCE21; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xAC8C;&#xB188; 5&#39; &#xB05D;&#xACFC; sub-genomic (sg) &#xC0AC;&#xBCF8;, &#xAE30;&#xBCF8; RNA &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C4;&#xD654; &#xC81C;&#xC57D;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58;&#xC758; &#xC2DC;&#xC791;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC758;&#xC5B4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBCC0;&#xD654; (SSSV)&#xC758; &#xC2EC;&#xC624;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC0C8;&#xB85C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xB41C; &#xB41C; &#xC5F4;&#xC5ED;&#xD559;&#xC801; &#xAC80;&#xC0C9; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; RNA&#xB97C; &#xAC8C;&#xB188; 3&#39; &#xB05D;&#xC5D0; SSSV&#xC758; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xB9E4;&#xD551; &#xC811;&#xB294; &#xC608;&#xCE21; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC9C4;&#xD654; &#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; RNA &#xC774;&#xCC28; &#xAD6C;&#xC870;, &#xAC00;&#xBCC0; &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; &#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xBAA8;&#xB4E0; caliciviruses 3&#39; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xD5E4;&#xC5B4;&#xD540;, &#xBC0F; anti-genomic &#xAC00;&#xB2E5; &#xBCC0;&#xD568;&#xC5C6;&#xC774; 6 &#xAE30;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB958; sg &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC11C; &#xC0C1; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; sg &#xB300; &#xBCF8;&#xC758; &#xC904;&#xAE30; &#xB8E8;&#xD504;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C;. 5&#39; &#xB05D; &#xC904;&#xAE30;-&#xB8E8;&#xD504;&#xC758; &#xC911;&#xB2E8; sg &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC9C0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xACE0; 3&#39; &#xB05D;&#xC5D0; RNA &#xAD6C;&#xC870; &#xC911;&#xB2E8; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xD30C;&#xAD34; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC57D; 15-&#xC744; 20 &#xBC30; infectivity &#xAC10;&#xCD95;&#xC744; &#xC0DD;&#xC0B0; murine &#xB178;&#xB85C;&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (MNV) &#xB9AC;&#xBC84;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xD559; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. Sg &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC9C0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC218;&#xB9AC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; infectivity &#xBCF5;&#xC6D0; RNA &#xC774;&#xCC28; &#xAD6C;&#xC870; &#xD558;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; MNV &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; caliciviruses&#xC758; &#xD5A5;&#xD6C4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; bioinformatic &#xB9AC;&#xC18C;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Bioinformatic&#xC640; RNA &#xC774;&#xCC28; &#xAD6C;&#xC870; &#xC694;&#xC18C; &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xB3D9;&#xBB3C; caliciviruses&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC7A5;&#xAD70; &#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;.

El mecanismo y el papel de los elementos de la estructura del ARN en la replicaci&#xF3;n y la traducci&#xF3;n de Caliciviridae sigue siendo poco conocida. Varios m&#xE9;todos de algoritmos independientes fueron utilizados para predecir estructuras secundarias dentro de los g&#xE9;neros Norovirus, Sapovirus, Vesivirus y Lagovirus. Todos mostraron una supresi&#xF3;n profunda de la variabilidad sin&#xF3;nimo sitio (SSSV) en gen&#xF3;mica extremos 5 &#x26;#39;y el inicio de la sub-gen&#xF3;mico (SG) la transcripci&#xF3;n, de conformidad con las limitaciones de la evoluci&#xF3;n subyacente de la estructura del ARN. Un m&#xE9;todo termodin&#xE1;mico de exploraci&#xF3;n desarrollado recientemente predijo mapeo ARN plegable precisamente a las regiones de SSSV y en la gen&#xF3;mica extremo 3 &#x26;#39;. Estas regiones conten&#xED;a varias estructuras de ARN evolutivamente conservados de secundaria, de tama&#xF1;o variable y posiciones. Sin embargo, todos los calicivirus conten&#xED;a 3 &#x26;#39;horquillas terminales, y los lazos madre-en la cadena de lucha contra la gen&#xF3;mica invariablemente seis bases antes de la transcripci&#xF3;n sg, lo que indica las funciones como promotores putativos sg. Usando el norovirus murino (MNV) inversa gen&#xE9;tica sistema, la perturbaci&#xF3;n de extremo 5 &#x26;#39;tallo de bucles produjo aproximadamente 15 - a la reducci&#xF3;n de la infectividad 20-pliegue, mientras que la interrupci&#xF3;n de la estructura del ARN en la regi&#xF3;n promotora SG y en el extremo 3&#x26;#39; completamente destruido capacidad de replicaci&#xF3;n. Restauraci&#xF3;n de la infectividad por mutaciones de reparaci&#xF3;n en la regi&#xF3;n promotora SG confirm&#xF3; un papel funcional para la estructura secundaria del ARN no, la secuencia. Este estudio proporciona amplios recursos bioinform&#xE1;ticas para futuros estudios funcionales de calicivirus MNV y de otra &#xED;ndole.

El an&#xE1;lisis bioinform&#xE1;tico y funcional de los elementos de estructura secundaria de ARN Entre los distintos g&#xE9;neros de Calicivirus Humanos y Animales

Peste-des-Petits Wiederk&auml;uer Virus (PPRV) f&uuml;hrt zu akuten fieberhaften Erkrankung Federwild und sowohl kleine Wiederk&auml;uer, mit zugeordneten Sterblichkeitsrate von 50-80 %. PPRV ist ein Mitglied der Gattung Morbillivirus innerhalb der Familie der Paramyxoviridae und obwohl es viele Sequenzen in voller L&auml;nge Genom f&uuml;r Mitglieder dieser Familie gibt, deren Verf&uuml;gbarkeit f&uuml;r PPRV insbesondere ist beschr&auml;nkt. Wir haben ermittelt, die in voller L&auml;nge-Sequenzen, zwei virulenten St&auml;mme der PPRV, der C&ocirc;te d &#39; Ivoire 1989 (CI/89) und Nigeria 1976 (Ng76/1) St&auml;mme darstellt. Wir pr&auml;sentieren eine Angleichung der Projekttr&auml;ger Regionen dieser Viren mit anderen verf&uuml;gbaren PPRV Projekttr&auml;ger Sequenzen und Dom&auml;nen in PPRV Proteinen vermutet, dass kritische Paramyxoviridae Projekttr&auml;ger D&auml;mpfung identifiziert haben. Wir haben auch die Proteine dieser Viren analysiert, vergleicht sie mit anderen verf&uuml;gbaren PPRV-Proteinsequenzen und Motive, die zuvor als notwendig f&uuml;r die Funktion anderer Proteine Paramyxoviridae anerkannt wurden identifiziert.

Vollst&auml;ndige Genomsequenzen zwei virulenten St&auml;mme von Peste-des-Petits Wiederk&auml;uer-Virus, der C&ocirc;te d &#39; Ivoire 1989 und Nigeria 1976 St&auml;mme.

&#x53CD;&#x520D;&#x53CD;&#x520D;&#x52A8;&#x7269;&#x75C5;&#x6BD2; (PPRV) &#x5BFC;&#x81F4;&#x517B;&#x6B96;&#x548C;&#x91CE;&#x751F;&#x5C0F;&#x53CD;&#x520D;&#x52A8;&#x7269;&#x76F8;&#x5173;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x7684; 50-80%&#x7684;&#x6025;&#x6027;&#x53D1;&#x70ED;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;PPRV &#x662F; Morbillivirus &#x5C5E;&#x526F;&#x7C98;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5BB6;&#x65CF;&#x4E2D;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x6709;&#x8BB8;&#x591A;&#x7684;&#x5168;&#x957F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5E8F;&#x5217;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x5176;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x7684; PPRV &#x662F;&#x6709;&#x9650;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x4EE3;&#x8868;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6BD2;&#x682A;&#x7684; PPRV&#xFF0C;&#x79D1;&#x7279;&#x8FEA;&#x74E6; 1989&#x5E74; (CI/89&#xFF09; &#x548C;&#x5C3C;&#x65E5;&#x5229;&#x4E9A; &#xFF08;Ng76/1&#xFF09; 1976&#x5E74;&#x83CC;&#x682A;&#x7684;&#x5168;&#x957F;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x5BF9;&#x9F50;&#x65B9;&#x5F0F;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x53EF;&#x7528;&#x7684; PPRV &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x57DF;&#x4E2D; PPRV &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x636E;&#x8BF4;&#x8FD9;&#x662F;&#x526F;&#x7C98;&#x75C5;&#x6BD2;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x8870;&#x51CF;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x53EF;&#x7528;&#x7684; PPRV &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5E8F;&#x5217;&#x8FDB;&#x884C;&#x6BD4;&#x8F83;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4EE5;&#x524D;&#x516C;&#x8BA4;&#x7684;&#x88AB;&#x5176;&#x4ED6;&#x526F;&#x7C98;&#x75C5;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x56FE;&#x6848;&#x3002;

&#x4E24;&#x4E2A;&#x6BD2;&#x682A;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;-&#x53CD;&#x520D;&#x53CD;&#x520D;&#x52A8;&#x7269;&#x3001; &#x79D1;&#x7279;&#x8FEA;&#x74E6; 1989&#x5E74;&#x548C;&#x5C3C;&#x65E5;&#x5229;&#x4E9A; 1976&#x5E74;&#x682A;&#x7684;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;

Peste-des-petits ruminants virus (PPRV) causes acute febrile illness in both farmed and wild small ruminants, with associated mortality rates of 50-80%. PPRV is a member of the Morbillivirus genus within the Paramyxovirus family and although there are many full length genome sequences available for members of this family, their availability for PPRV in particular is limited. We have determined the full length sequences representing two virulent strains of PPRV, the CÃ´te d'Ivoire 1989 (CI/89) and Nigeria 1976 (Ng76/1) strains. We present an alignment of the promoter regions of these viruses with other available PPRV promoter sequences and have identified domains in PPRV proteins believed to be critical for paramyxovirus promoter attenuation. We have also analysed the proteins of these viruses, comparing them to other available PPRV protein sequences and identified motifs that were previously recognised as being required for the function of other paramyxovirus proteins.

Full genome sequences of two virulent strains of peste-des-petits ruminants virus, the CÃ´te d'Ivoire 1989 and Nigeria 1976 strains.

Virus de la peste-des-petits ruminants (VPPR) provoque une maladie f&eacute;brile aigu&euml; chez les petits ruminants d&#39;&eacute;levage et sauvages, avec des taux de mortalit&eacute; de 50 &agrave; 80 %. VPPR est membre du genre Morbillivirus au sein de la famille des Paramyxovirus, et bien qu&#39;il existe de nombreuses s&eacute;quences de g&eacute;nome de pleine longueur disponible pour les membres de cette famille, leur disponibilit&eacute; pour VPPR, en particulier, est limit&eacute;e. Nous avons d&eacute;termin&eacute; les s&eacute;quences de pleine longueur repr&eacute;sentant deux souches virulentes de VPPR, la C&ocirc;te d&#39;Ivoire 1989 (CI/89) et les souches Nig&eacute;ria 1976 (Ng76/1). Nous pr&eacute;senter un alignement des r&eacute;gions promoteur de ces virus avec d&#39;autres s&eacute;quences de promoteur VPPR disponibles et ont identifi&eacute; des domaines de prot&eacute;ines VPPR consid&eacute;r&eacute;s comme essentiel pour l&#39;att&eacute;nuation du promoteur paramyxovirus. Nous avons &eacute;galement analys&eacute; les prot&eacute;ines de ces virus, en les comparant aux autres s&eacute;quences de prot&eacute;ines VPPR disponibles et identifi&eacute; les motifs qui ont &eacute;t&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment reconnus comme &eacute;tant n&eacute;cessaire pour la fonction d&#39;autres prot&eacute;ines de paramyxovirus.

S&eacute;quences de g&eacute;nome complet de deux souches virulentes du virus de la peste-des-petits ruminants, la C&ocirc;te d&#39;Ivoire 1989 et souches Nig&eacute;ria 1976.

Virus della peste-des-piccoli ruminanti (PPRV) provoca una malattia febbrile acuta in allevamento e selvatici piccoli ruminanti, con tassi di mortalit&agrave; associata del 50-80%. PPRV &egrave; un membro del genere all&#39;interno della famiglia dei Paramyxovirus Morbillivirus e anche se ci sono molte sequenze di genoma di lunghezza completa disponibile per i membri di questa famiglia, in particolare la disponibilit&agrave; a PPRV &egrave; limitata. Abbiamo determinato le sequenze di lunghezza che rappresenta due ceppi virulenti di PPRV, la Costa d&#39;Avorio 1989 (CI/89) e ceppi di Nigeria 1976 (Ng76/1). Noi presenti un allineamento delle regioni promotore di questi virus con altre sequenze del promotore PPRV disponibili e hanno identificato domini in proteine PPRV credute di essere critico per attenuazione promotore paramixovirus. Abbiamo anche analizzato le proteine di questi virus, li confronto a altre sequenze di proteine PPRV disponibili e identificati motivi che in precedenza erano state riconosciute come essendo necessaria per la funzione di altre proteine paramixovirus.

Sequenze di genoma completo di due ceppi virulenti del virus della peste-des-piccoli ruminanti, la Costa d&#39;Avorio 1989 e Nigeria 1976 ceppi.

Peste des &#x30D7;&#x30C6;&#x30A3;&#x53CD;&#x82BB;&#x52D5;&#x7269;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (PPRV) &#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x306E; 50 &#x301C; 80 &#xFF05; &#x306E;&#x990A;&#x6B96;&#x3068;&#x91CE;&#x751F;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x53CD;&#x82BB;&#x3067;&#x6025;&#x6027;&#x71B1;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PPRV &#x30D1;&#x30E9;&#x30DF;&#x30AF;&#x30BD; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5C5E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30DF;&#x30AF;&#x30BD; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x5185;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x9577;&#x3055;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5229;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x53EF;&#x7528;&#x6027; PPRV &#x306E;&#x7279;&#x306B;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2 &#x5F37;&#x6BD2;&#x682A; PPRV&#x3001;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C8;&#x30B8;&#x30DC;&#x30EF;&#x30FC;&#x30EB; 1989&#x5E74; (CI/89&#xFF09; &#x3068;&#x30CA;&#x30A4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30EA;&#x30A2; 1976 (Ng76/1&#xFF09; &#x7CFB;&#x7D71;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x9577;&#x3055;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4FC3;&#x9032;&#x8005;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x7DDA;&#x5F62;&#x4ED6;&#x53EF;&#x80FD; PPRV &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#x30D1;&#x30E9;&#x30DF;&#x30AF;&#x30BD; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x6E1B;&#x8870;&#x3092;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3053;&#x3068;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066; PPRV &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A; PPRV &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x4ED6;&#x30D1;&#x30E9;&#x30DF;&#x30AF;&#x30BD; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

Peste des &#x30D7;&#x30C6;&#x30A3;&#x53CD;&#x82BB;&#x52D5;&#x7269;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3001;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C8;&#x30B8;&#x30DC;&#x30EF;&#x30FC;&#x30EB; 1989&#x5E74;&#x3068;&#x30CA;&#x30A4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30EA;&#x30A2; 1976&#x5E74;&#x83CC;&#x682A;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x5168;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3002;

Peste des petits ruminants &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (PPRV) 50-80%&#xC758; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB41C; &#xC0AC;&#xB9DD;&#xB960;&#xACFC; &#xB18D;&#xC7A5; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC57C;&#xC0DD; &#xC791;&#xC740; ruminants &#xAE09;&#xC131; &#xC5F4; &#xBCD1; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. PPRV &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC778; &#xAC00;&#xC871; &#xB0B4; Morbillivirus &#xC18D;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC774; &#xACE0; &#xB9CE;&#xC740; &#xC804;&#xC7A5; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xAC00;&#xC774; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; PPRV&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131;&#xC744; &#xD2B9;&#xD788; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB450; &#xC545;&#xC131; &#xBCC0;&#xC885; PPRV, &#xCF54;&#xD2B8;&#xB514;&#xBD80;&#xC544;&#xB974;&#xC758; 1989&#xC758; (CI/89)&#xACFC; &#xB098;&#xC774;&#xC9C0;&#xB9AC;&#xC544; 1976 (Ng76/1) &#xAE34;&#xC7A5;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; PPRV &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC640; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC9C0;&#xAD6C;&#xC758; &#xB9DE;&#xCDA4;&#xC744; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC778; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xAC10;&#xC1E0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; PPRV &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; PPRV &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBE44;&#xAD50; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xC815; &#xB41C; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC;.

&#xC804;&#xCCB4; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; peste des petits ruminants &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;, &#xCF54;&#xD2B8;&#xB514;&#xBD80;&#xC544;&#xB974;&#xC758; 1989 &#xB098;&#xC774;&#xC9C0;&#xB9AC;&#xC544; 1976 &#xAE34;&#xC7A5;&#xC758; &#xB450; &#xC545;&#xC131; &#xBCC0;&#xC885;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Virus de la peste-des-peque&ntilde;os rumiantes (PPRV) causa enfermedad febril aguda en tanto silvestres como cultivados peque&ntilde;os rumiantes, con tasas de mortalidad asociada de 50-80%. PPRV es un miembro del g&eacute;nero Morbillivirus dentro de la familia de los paramixovirus, y aunque hay muchas secuencias de genoma completo longitud disponible para los miembros de esta familia, su disponibilidad para PPRV en particular es limitada. Hemos determinado las secuencias completas que representan dos cepas virulentas de PPRV, Costa de Marfil 1989 (CI/89) y cepas de 1976 (Ng76/1) de Nigeria. Presentamos una alineaci&oacute;n de las regiones promotoras de estos virus con otras secuencias de promotor PPRV disponibles y han identificado los dominios en prote&iacute;nas PPRV cre&iacute;das que es fundamental para la atenuaci&oacute;n del promotor de paramixovirus. Tambi&eacute;n hemos analizado las prote&iacute;nas de estos virus, compar&aacute;ndolas con otras secuencias de prote&iacute;nas PPRV disponibles e identificado motivos fueron reconocidas como siendo necesaria para la funci&oacute;n de otras prote&iacute;nas de paramixovirus.

Secuencias del genoma completo de dos cepas virulentas del virus de la peste-des-peque&ntilde;os rumiantes, C&ocirc;te d &#39; Ivoire 1989 y cepas de Nigeria 1976.

&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x6B63;&#x94FE; RNA &#x75C5;&#x6BD2;&#x3001; &#x732B;&#x676F;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2; (&#x71C3;&#x6599;&#x7535;&#x6C60;&#x6C7D;&#x8F66;&#xFF09; &#x590D;&#x5236;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x819C;&#x548C;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x65E0;&#x6570;&#x819C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6C34;&#x75B1;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0A;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x590D;&#x5236;&#x601D;&#x60F3;&#x53D1;&#x751F;&#x91CD;&#x6392;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7684;&#x71C3;&#x6599;&#x7535;&#x6C60;&#x6C7D;&#x8F66;&#x975E;&#x7ED3;&#x6784;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5373; p32&#x3001; p39 &#x548C; p30&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x8DE8;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5F97;&#x4EE5;&#x9488;&#x5BF9;&#x589E;&#x5F3A;&#x578B;&#x84DD;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x4E3A;&#x819C;&#x5206;&#x6570;&#x5728;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x4E3E;&#x6B62;&#x5982;&#x540C;&#x79EF;&#x5206;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x8868;&#x660E;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7ECF;&#x4E0E;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; &#xFF08;ER&#xFF09; &#x6807;&#x8BB0;&#x3002;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E0E;&#x542B; KDEL ER &#x4FDD;&#x7559;&#x6BCD;&#x9898;&#x7684;&#x8FA3;&#x6839;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;&#x86CB;&#x767D;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x83CC;&#x71C3;&#x6599;&#x7535;&#x6C60;&#x6C7D;&#x8F66; p39 &#x6216; p30 &#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7535;&#x955C;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x6BDB;&#x5F62;&#x6001;&#x5B66;&#x53D8;&#x5316;&#x5230; ER&#x3002;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x6A21;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x5BF9;&#x90A3;&#x4E9B;&#x7531; p30&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728;&#x81EA;&#x7136;&#x611F;&#x67D3; Crandel Rees &#x732B;&#x80BE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x71C3;&#x6599;&#x7535;&#x6C60;&#x6C7D;&#x8F66;&#x7684; p32&#x3001; p39 &#x548C; p30 &#x86CB;&#x767D;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x5230;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4; ER &#x819C;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x4EE3;&#x7684;&#x71C3;&#x6599;&#x7535;&#x6C60;&#x6C7D;&#x8F66;&#x590D;&#x5236;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x548C;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EE3;&#x8868;&#x5728;&#x71C3;&#x6599;&#x7535;&#x6C60;&#x6C7D;&#x8F66;&#x611F;&#x67D3;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x56CA;&#x6CE1;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x6765;&#x6E90;&#x3002;

&#x732B;&#x676F;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2; p32&#x3001; p39 &#x548C; p30 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x542F;&#x52A8;&#x590D;&#x5236;&#x590D;&#x6742;&#x5730;&#x5C42;&#x3002;

In common with other positive-strand RNA viruses, replication of feline calicivirus (FCV) results in rearrangement of intracellular membranes and production of numerous membrane-bound vesicular structures on which viral genome replication is thought to occur. In this study, bioinformatics approaches have identified three of the FCV non-structural proteins, namely p32, p39 and p30, as potential transmembrane proteins. These proteins were able to target enhanced cyan fluorescent protein to membrane fractions where they behaved as integral membrane proteins. Immunofluorescence microscopy of these proteins expressed in cells showed co-localization with endoplasmic reticulum (ER) markers. Further electron microscopy analysis of cells co-expressing FCV p39 or p30 with a horseradish peroxidase protein containing the KDEL ER retention motif demonstrated gross morphological changes to the ER. Similar reorganization patterns, especially for those produced by p30, were observed in naturally infected Crandel-Rees feline kidney cells. Together, the data demonstrate that the p32, p39 and p30 proteins of FCV locate to the ER and lead to reorganization of ER membranes. This suggests that they may play a role in the generation of FCV replication complexes and that the endoplasmic reticulum may represent the potential source of the membrane vesicles induced during FCV infection.

Feline calicivirus p32, p39 and p30 proteins localize to the endoplasmic reticulum to initiate replication complex formation.

En commun avec d&#x26;#39;autres virus &#xE0; ARN brin positif, la r&#xE9;plication des calicivirus f&#xE9;lin (FCV) entra&#xEE;ne un r&#xE9;arrangement des membranes intracellulaires et la production de nombreux li&#xE9;s &#xE0; la membrane des structures v&#xE9;siculaires sur lequel la r&#xE9;plication du g&#xE9;nome viral est pens&#xE9; &#xE0; se produire. Dans cette &#xE9;tude, les approches bio-informatiques ont identifi&#xE9; trois des FCV prot&#xE9;ines non structurelles, &#xE0; savoir p32, p39 et p30, sous forme de prot&#xE9;ines transmembranaires potentiels. Ces prot&#xE9;ines ont &#xE9;t&#xE9; en mesure de cibler prot&#xE9;ine fluorescente cyan am&#xE9;lior&#xE9;e aux fractions membranaires o&#xF9; ils se comportaient comme des prot&#xE9;ines membranaires int&#xE9;grales. La microscopie en immunofluorescence de ces prot&#xE9;ines exprim&#xE9;es dans les cellules a montr&#xE9; la co-localisation avec r&#xE9;ticulum endoplasmique (RE) des marqueurs. En outre analyse par microscopie &#xE9;lectronique de cellules co-exprimant FCV p39 ou p30 avec une prot&#xE9;ine peroxydase de raifort contenant le motif de r&#xE9;tention KDEL ER d&#xE9;montr&#xE9; bruts des changements morphologiques &#xE0; l&#x26;#39;urgence. Sch&#xE9;mas de r&#xE9;organisation similaires, en particulier pour celles produites par p30, ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;s dans les cellules infect&#xE9;es naturellement Rees Crandel les reins f&#xE9;lins. Ensemble, les donn&#xE9;es d&#xE9;montrent que les prot&#xE9;ines p32, p39 et p30 de FCV localiser &#xE0; l&#x26;#39;urgence et conduire &#xE0; la r&#xE9;organisation des membranes ER. Ceci sugg&#xE8;re qu&#x26;#39;ils peuvent jouer un r&#xF4;le dans la g&#xE9;n&#xE9;ration des complexes de r&#xE9;plication FCV et que le r&#xE9;ticulum endoplasmique peut repr&#xE9;senter une source potentielle de la membrane des v&#xE9;sicules induites lors de l&#x26;#39;infection FCV.

Feline Calicivirus P32, P39 et P30 prot&#xE9;ines Localiser vers le r&#xE9;ticulum endoplasmique pour initier la formation complexe de r&#xE9;plication

Replikation von feline Calicivirus (FCV) f&uuml;hrt gemeinsam mit anderen positiven-Strang-RNA-Viren Neuordnung des intrazellul&auml;ren Membranen und Produktion von zahlreichen membrangebundener vesikul&auml;re Strukturen auf die virale Genom Replikation gedacht ist, auftreten. In dieser Studie identifizierten drei der FCV nicht-Strukturproteine, n&auml;mlich p32, p39 und p30, Bioinformatik-Ans&auml;tze als potenzielle Transmembranproteine. Diese Proteine konnten verbesserte Cyan fluoreszierenden Proteins zu Membrane Br&uuml;che als Ziel wo sie als integrale Membranproteine Verhalten. Immunofluoreszenz-Mikroskopie dieser Proteine in Zellen ausgedr&uuml;ckt zeigten Doppelhybridisierung mit Endoplasmatisches Reticulum (ER) Marker. Weitere Elektronenmikroskopie-Analyse der Zellen co-expressing FCV p39 oder p30 mit einem Meerrettich Peroxydase Protein, enth&auml;lt das KDEL ER Aufbewahrung Motiv zeigte grobe morphologische Ver&auml;nderungen, die ER. &Auml;hnliche Reorganisation Muster, wurden vor allem f&uuml;r diejenigen von p30, produziert bei nat&uuml;rlich infizierten Crandel-Rees Katzenartige Nierenzellen beobachtet. Zusammen, zeigen die Daten, dass die p32, p39 und p30 Proteine des FCV, die ER suchen und zu Neuorganisation von ER-Membranen f&uuml;hren. Dies l&auml;sst vermuten, dass sie eine Rolle in der Generation der FCV Replikation komplexe spielen k&ouml;nnen und dem Endoplasmatischen Retikulum die potenziellen die Membrane Vesicles induzierte w&auml;hrend FCV Infektion darstellen kann.

Feline Calicivirus p32, p39 und p30 Proteine zu lokalisieren, Endoplasmatisches Reticulum, Replikation Komplexbildung zu initiieren.

In comune con altri virus a RNA positivo-strand, replica di calicivirus felino (FCV) risultati nel riarrangiamento di membrane intracellulari e la produzione di numerose strutture vescicolari membrana-limiti su cui genoma virale replica &egrave; pensata per accadere. In questo studio, gli approcci bioinformatica hanno identificato tre delle proteine non strutturali FCV, vale a dire p32, p39 e p30, come potenziali proteine transmembrana. Queste proteine erano in grado di avanzata proteina fluorescente ciano a frazioni di membrana di destinazione dove si comportavano come proteine integrali di membrana. Microscopia di immunofluorescenza di queste proteine espresse nelle cellule ha mostrato la collocazione con reticolo endoplasmatico marcatori (ER). Un&#39;ulteriore analisi di microscopia elettronica delle cellule co-expressing FCV p39 o p30 con una proteina di perossidasi di rafano contenente il motivo di ritenzione KDEL ER dimostrato cambiamenti morfologici lordi al pronto soccorso. Modelli di riorganizzazione simili, specialmente per quelle prodotte da p30, sono stati osservati in cellule di rene felino Crandel-Rees naturalmente infette. Insieme, i dati dimostrano che le proteine p32, p39 e p30 di FCV individuare al pronto soccorso e portano alla riorganizzazione delle membrane ER. Questo suggerisce che essi possono svolgere un ruolo nella generazione di complessi replica FCV e che il reticolo endoplasmatico pu&ograve; rappresentare la fonte potenziale delle vescicole di membrana indotta durante l&#39;infezione FCV.

Calicivirus felino p32, p39 e p30 proteine localizzare il reticolo endoplasmatico di avviare la formazione dei complessi replica.

&#x4ED6;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x9396;RNA&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3001;&#x30CD;&#x30B3;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#xFF08;FCV&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x819C;&#x306E;&#x8EE2;&#x4F4D;&#x3068;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x819C;&#x7D50;&#x5408;&#x5C0F;&#x80DE;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x5171;&#x901A;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;FCV&#x306E;&#x975E;&#x69CB;&#x9020;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;3&#x3064;&#x3001;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;P32&#x3001;P39&#x3068;P30&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x5728;&#x6027;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x819C;&#x753B;&#x200B;&#x200B;&#x5206;&#x306B;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30A2;&#x30F3;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#xFF08;ER&#xFF09;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;KDEL ER&#x4FDD;&#x6301;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x897F;&#x6D0B;&#x30EF;&#x30B5;&#x30D3;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;FCV P39&#x307E;&#x305F;&#x306F;P30&#x306E;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;ER&#x306B;&#x7DCF;&#x5F62;&#x614B;&#x5B66;&#x7684;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7279;&#x306B;P30&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x7136;&#x611F;&#x67D3;Crandel-Rees&#x306E;&#x30CD;&#x30B3;&#x306E;&#x814E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;FCV&#x306E;P32&#x3001;P39&#x304A;&#x3088;&#x3073;P30&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;ER&#x306B;&#x691C;&#x7D22;&#x3057;&#x3001;ER&#x819C;&#x306E;&#x518D;&#x7DE8;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;FCV&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x306B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3068;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;FCV&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x6642;&#x306B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x819C;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30CD;&#x30B3;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;P32&#x3001;P39&#x3068;P30&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x88FD;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;

&#xB2E4;&#xB978; &#xC591;&#xC131; &#xAC00;&#xB2E5; RNA &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC640; &#xACE0;&#xC591;&#xC774; calicivirus (FCV)&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB9C9;&#xACFC;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xB9C9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xC7AC;&#xBC30;&#xCE58; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC815;&#xBCF4;&#xD559; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138; &#xC989; p32, p39 &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; p30, FCV &#xBE44; &#xAD6C;&#xC870; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC774; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xD589;&#xB3D9; &#xB9C9; &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC2DC;&#xC548;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC140; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; (ER) &#xB9C8;&#xCEE4; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xACFC; co-localization&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4;. &#xC140; FCV p39 &#xB610;&#xB294; p30 KDEL &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xBCF4;&#xC874; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC591; &#xACE0;&#xCD94;&#xB0C9;&#xC774; &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; co-expressing&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xC2EC;&#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBCC0;&#xD654;. &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xAC1C;&#xD3B8; &#xD328;&#xD134;, p30&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD2B9;&#xD788; &#xC790;&#xC5F0;&#xC2A4;&#xB7FD; &#xAC8C; &#xAC10;&#xC5FC;&#xB41C; Crandel &#xB9AC;&#xC2A4; &#xACE0;&#xC591;&#xC774; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8;, &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC124;&#xBA85; FCV&#xC758; p32, p39 &#xBC0F; p30 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xCC3E;&#xC544;&#xC640; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xB9C9;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xAC1C;&#xD3B8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; FCV &#xBCF5;&#xC81C; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; &#xB9C9; &#xC18C;&#xD3EC; FCV &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC; &#xC720;&#xB3C4;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC18C;&#xC2A4;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0BC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;.

&#xACE0;&#xC591;&#xC774; calicivirus p32, p39 &#xBC0F; p30 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC744; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

En com&#xFA;n con otras de cadena positiva virus de ARN, la replicaci&#xF3;n de calicivirus felino (FCV) resulta en reordenaci&#xF3;n de las membranas intracelulares y la producci&#xF3;n de numerosos unidas a la membrana estructuras vesiculares en la que se cree la replicaci&#xF3;n del genoma viral que se produzca. En este estudio, los enfoques de la bioinform&#xE1;tica han identificado tres de los FCV prote&#xED;nas no estructurales, es decir, p32, p39 y p30, como las prote&#xED;nas transmembrana potenciales. Estas prote&#xED;nas fueron capaces de dirigir mayor prote&#xED;na fluorescente cian a fracciones de membrana donde se comportaron como prote&#xED;nas integrales de membrana. La inmunofluorescencia de estas prote&#xED;nas que se expresan en las c&#xE9;lulas mostraron co-localizaci&#xF3;n con ret&#xED;culo endoplasm&#xE1;tico (ER) marcadores. Un an&#xE1;lisis m&#xE1;s detallado de microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de las c&#xE9;lulas de co-expresi&#xF3;n de p30 FCV P39 o con una prote&#xED;na peroxidasa de r&#xE1;bano picante contiene el motivo de retenci&#xF3;n de ER KDEL demostrado grandes cambios morfol&#xF3;gicos en la sala de emergencias. Patrones similares de reorganizaci&#xF3;n, especialmente de los producidos por p30, se observ&#xF3; en los infectados de forma natural Crandel Rees c&#xE9;lulas de ri&#xF1;&#xF3;n de felinos. En conjunto, los datos demuestran que las prote&#xED;nas p32, p39 y p30 de FCV localizar a la sala de emergencia y llevar a la reorganizaci&#xF3;n de las membranas del RE. Esto sugiere que pueden jugar un papel en la generaci&#xF3;n de los complejos de replicaci&#xF3;n de FCV y que el ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico puede representar la fuente potencial de la membrana ves&#xED;culas inducida durante la infecci&#xF3;n por FCV.

Calicivirus felino P32, P39 y P30 Localizar prote&#xED;nas en el ret&#xED;culo endoplasm&#xE1;tico para iniciar la formaci&#xF3;n del complejo de replicaci&#xF3;n

&#x4E3B;&#x673A;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E0E; RNA &#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x6B63;&#x94FE; RNA &#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7ED3;&#x6784;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x751F;&#x547D;&#x5468;&#x671F;&#x4E2D;&#x626E;&#x6F14;&#x5404;&#x79CD;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E86;&#x89E3;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#x672C;&#x8BFA;&#x5982;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x7684;&#x529F;&#x80FD; RNA &#x5143;&#x4EF6;&#x5DF2;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x9650;&#x4E8E;&#x4F53;&#x5916;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x7528;&#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x6765;&#x6807;&#x8BC6;&#x8FDB;&#x5316;&#x4FDD;&#x6301; RNA &#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x8BFA;&#x5982;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x73B0;&#x5728;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x627F;&#x8BFA;&#x51FA;&#x5E2D; 3&#39; &#x4E0B;&#x80A2;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8BFA;&#x6C83;&#x514B; &#xFF08;&#x8F6C;&#x5411;&#x8282;&#x7528;) &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; RNA &#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x66F4;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x751F;&#x5316;&#x6570;&#x636E;&#x6307;&#x793A;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x5E72;&#x5FAA;&#x73AF;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4E24;&#x4E2A;&#x672A;&#x7ECF;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x548C;&#x53EF;&#x53D8;&#x957F;&#x5EA6;&#x4E4B;&#x95F4;&#x8F6C;&#x5411;&#x8282;&#x7528;&#x5355;&#x7EDE; polypyrimidine &#x9053; [p(Y)] &#x682A;&#x5185;&#x7684;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x5E72;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x4EBA;&#x4EEC;&#x719F;&#x77E5;&#x7684;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5627;&#x5576;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x5BA2;&#x8FD0;&#x5927;&#x697C;&#x548C; PCBP &#x7ED1;&#x5B9A;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E92;&#x52A8;&#x4E0E;&#x6B64;&#x53D8;&#x91CF;&#x5E8F;&#x5217; 3&#39; &#x975E;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x7F3A;&#x4E4F; p(Y) &#x547C;&#x5438;&#x9053;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4E00;&#x4E9B;&#x53EF;&#x884C;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x548C;&#x5728;&#x9F20;&#x6807;&#x611F;&#x67D3;&#x540E;&#xFF0C;&#x8BC1;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0D;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x8F6C;&#x5411;&#x8282;&#x7528;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x7ADE;&#x4E89;&#x5206;&#x6790;&#x6307;&#x51FA;&#x635F;&#x5931;&#x7684; p(Y) &#x9053;&#x5173;&#x8054;&#x4E0E;&#x6210;&#x672C;&#x5065;&#x8EAB;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;p (Y)-&#x5220;&#x9664;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x8868;&#x660E;&#x51CF;&#x5C11;&#x6BD2;&#x529B;&#x5728; STAT1(-/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x7A81;&#x51FA;&#x7684; RNA &#x4F5C;&#x7528;&#x7ED3;&#x6784;&#x8BFA;&#x6C83;&#x514B;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x4EAE;&#x70B9;&#x5982;&#x4F55;&#xFF0C;&#x559C;&#x6B22;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x6B63;&#x94FE; RNA &#x75C5;&#x6BD2;&#xFF0C;&#x672C;&#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x8BFA;&#x5982;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; RNA &#x7ED3;&#x6784;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x548C;&#x6BD2;&#x529B;&#x3002;

RNA &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x7ED3;&#x6784;&#x51FA;&#x5E2D;&#x8BFA;&#x6C83;&#x514B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; 3&#39; &#x4E0B;&#x80A2;&#xFF1A; &#x53D8;&#x91CF; polypyrimidine &#x9053;&#x4E2D;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6BD2;&#x529B;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Interactions of host cell factors with RNA sequences and structures in the genomes of positive-strand RNA viruses play various roles in the life cycles of these viruses. Our understanding of the functional RNA elements present in norovirus genomes to date has been limited largely to in vitro analysis. However, we recently used reverse genetics to identify evolutionarily conserved RNA structures and sequences required for norovirus replication. We have now undertaken a more detailed analysis of RNA structures present at the 3' extremity of the murine norovirus (MNV) genome. Biochemical data indicate the presence of three stable stem-loops, including two in the untranslated region, and a single-stranded polypyrimidine tract [p(Y)] of variable length between MNV isolates, within the terminal stem-loop structure. The well-characterized host cell pyrimidine binding proteins PTB and PCBP bound the 3'-untranslated region via an interaction with this variable sequence. Viruses lacking the p(Y) tract were viable both in cell culture and upon mouse infection, demonstrating that this interaction was not essential for virus replication. However, competition analysis with wild-type MNV in cell culture indicated that the loss of the p(Y) tract was associated with a fitness cost. Furthermore, a p(Y)-deleted mutant showed a reduction in virulence in the STAT1(-/-) mouse model, highlighting the role of RNA structures in norovirus pathogenesis. This work highlights how, like with other positive-strand RNA viruses, RNA structures present at the termini of the norovirus genome play important roles in virus replication and virulence.

Functional analysis of RNA structures present at the 3' extremity of the murine norovirus genome: the variable polypyrimidine tract plays a role in viral virulence.

Interactions des facteurs cellulaires de l&#x26;#39;h&#xF4;te avec des s&#xE9;quences d&#x26;#39;ARN et des structures dans les g&#xE9;nomes de virus &#xE0; ARN brin positif jouent divers r&#xF4;les dans les cycles de vie de ces virus. Notre compr&#xE9;hension des &#xE9;l&#xE9;ments d&#x26;#39;ARN fonctionnels pr&#xE9;sents dans les g&#xE9;nomes de norovirus &#xE0; ce jour a surtout &#xE9;t&#xE9; limit&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;analyse in vitro. Toutefois, nous avons r&#xE9;cemment utilis&#xE9; la g&#xE9;n&#xE9;tique inverse afin d&#x26;#39;identifier l&#x26;#39;&#xE9;volution, conserv&#xE9;es structures d&#x26;#39;ARN et les s&#xE9;quences n&#xE9;cessaires &#xE0; la r&#xE9;plication des norovirus. Nous avons maintenant entrepris une analyse plus d&#xE9;taill&#xE9;e des structures d&#x26;#39;ARN pr&#xE9;sents &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; 3 &#x26;#39;de l&#x26;#39;norovirus (MNV) du g&#xE9;nome murin. Des donn&#xE9;es biochimiques indiquent la pr&#xE9;sence de trois souches stables des boucles, dont deux dans la r&#xE9;gion non traduite, et un tube &#xE0; simple brin polypyrimidine [p (Y)] de longueur variable entre les isolats MNV, dans le terminal de structure tige-boucle. Le bien caract&#xE9;ris&#xE9; h&#xF4;te cellulaire pyrimidine liaison prot&#xE9;ines TBP et PCBP li&#xE9; au r&#xE9;gion 3 &#x26;#39;non traduite par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire d&#x26;#39;une interaction avec cette s&#xE9;quence variable. Les virus qui n&#x26;#39;ont pas la p (Y) des voies &#xE9;taient viables &#xE0; la fois en culture cellulaire et sur l&#x26;#39;infection de la souris, ce qui d&#xE9;montre que cette interaction n&#x26;#39;&#xE9;tait pas essentielle pour la r&#xE9;plication du virus. Cependant, l&#x26;#39;analyse de la concurrence avec le type sauvage MNV en culture cellulaire a indiqu&#xE9; que la perte de la p (Y) des voies a &#xE9;t&#xE9; associ&#xE9;e &#xE0; un co&#xFB;t de remise en forme. En outre, ap (Y)-supprim&#xE9; mutant a montr&#xE9; une r&#xE9;duction de la virulence dans la STAT1 (- / -) mod&#xE8;le de souris, en soulignant le r&#xF4;le des structures d&#x26;#39;ARN dans la pathogen&#xE8;se de norovirus. Ce travail met en &#xE9;vidence la mani&#xE8;re dont, comme avec d&#x26;#39;autres positifs des virus &#xE0; ARN, les structures d&#x26;#39;ARN pr&#xE9;sents &#xE0; des extr&#xE9;mit&#xE9;s du g&#xE9;nome norovirus jouent un r&#xF4;le important dans la r&#xE9;plication du virus et la virulence.

Analyse fonctionnelle des structures d&#x26;#39;ARN pr&#xE9;sentes au Extr&#xE9;mit&#xE9; 3 &#x26;#39;du g&#xE9;nome murin norovirus: la parcelle polypyrimidine variable joue un r&#xF4;le dans la virulence du virus

Wechselwirkungen von Host-Zell-Faktoren mit RNA-Sequenzen und Strukturen in den Genomen von positiv-Strang-RNA-Viren spielen verschiedene Rollen in die Lebenszyklen dieser Viren. Unser Verst&auml;ndnis der RNA Funktionselemente in Norovirus Genomen bis jetzt vorhanden war weitgehend auf in-vitro-Analyse beschr&auml;nkt. Jedoch verwendeten wir zuletzt Reverser evolution&auml;r konservierte RNA-Strukturen und f&uuml;r Norovirus-Replikation ben&ouml;tigt-Sequenzen zu identifizieren. Wir haben jetzt eine genauere Analyse der RNA-Strukturen vorhanden am 3&#39; Ende des Genoms murinen Norovirus (MNV) durchgef&uuml;hrt. Biochemische Daten zeigen das Vorhandensein von drei stabile Vorbau-Schleifen, darunter zwei in der un&uuml;bersetzte Region, und eine einzelstr&auml;ngige Polypyrimidine Trakt [p(Y)] mit variabler L&auml;nge zwischen MNV isoliert, innerhalb der terminal Haarnadelstruktur. Die gut charakterisierten Host Zelle Pyrimidin bindende Proteine PTB und PCBP gebunden nicht 3&#39;-&uuml;bersetzte Region &uuml;ber eine Interaktion mit dieser Variable Sequenz. Viren fehlt den p(Y)-Trakt waren lebensf&auml;hig, sowohl in der Zellkultur als auch auf Maus-Infektion, die belegen, da&szlig; diese Interaktion nicht notwendig f&uuml;r die Replikation des Virus war. Wettbewerbsanalyse mit Wildtyp MNV in Zellkultur angegeben jedoch, dass der Verlust des p(Y) Trakt mit einem Fitness Kosten verbunden war. Dar&uuml;ber hinaus ein p (Y)-gel&ouml;schte Mutant zeigte einer Verringerung Virulenz im Mausmodell STAT1(-/-), Hervorhebung der Rolle der RNA-Strukturen in Norovirus Pathogenese. Diese Arbeit, die H&ouml;hepunkte wie, mit anderen positiven-Strang-RNA-Viren, RNA-Strukturen an den Termini des Genoms Norovirus spielen wichtige Rollen in Virus, Replikation und Virulenz.

Funktionale Analyse der RNA-Strukturen vorhanden am 3&#39; Ende des Genoms murinen Norovirus: der Variable Polypyrimidine-Darm-Trakt spielt eine Rolle bei viralen Virulenz.

Interazioni dell&#39;host cell fattori con sequenze di RNA e strutture nei genomi dei virus a RNA positivo-strand giocano vari ruoli nei cicli di vita di questi virus. La nostra comprensione degli elementi funzionali RNA presenti nei genomi norovirus a data &egrave; stata limitata in gran parte all&#39;analisi in vitro. Tuttavia, abbiamo recentemente utilizzato genetica inversa per identificare evolutionarily conserved RNA strutture e sequenze necessarie per la replica di norovirus. Ora abbiamo intrapreso un&#39;analisi pi&ugrave; dettagliata delle strutture RNA presente all&#39;estremit&agrave; 3&#39; del genoma murino norovirus (MNV). Dati biochimici indicano la presenza di tre stabile stem-loop, incluse due nella regione non tradotta, e un tratto di single-stranded polypyrimidine [p (y)] di lunghezza variabile tra MNV isolati, all&#39;interno della struttura del gambo-ciclo terminale. L&#39;ospite ben caratterizzati cella pirimidina proteine leganti PTB e PCBP associato il 3&#39;-untranslated regione attraverso un&#39;interazione con questa sequenza variabile. Virus manca il tratto p (y) sono stati vitali nella coltura delle cellule e all&#39;infezione del mouse, dimostrando che questa interazione non era essenziale per la replicazione del virus. Tuttavia, analisi concorrenza con selvaggio-tipo MNV in coltura cellulare indicano che la perdita del tratto p (y) &egrave; stata associata con un costo di fitness. Inoltre, un p (Y)-mutante eliminati hanno mostrato una riduzione nella virulenza nel modello del mouse STAT1(-/-), evidenziando il ruolo del RNA strutture nella patogenesi di norovirus. Questo lavoro mette in evidenza come, come con altri virus a RNA positivo-strand, strutture di RNA presenti a termini del genoma norovirus giocano un ruolo importante nel virus replica e virulenza.

Analisi funzionale di RNA strutture presente all&#39;estremit&agrave; 3&#39; del genoma murino norovirus: il tratto variabile polypyrimidine svolge un ruolo nella virulenza virale.

&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x9396;RNA&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;RNA&#x914D;&#x5217;&#x3068;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x3068;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D5;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6027;RNA&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x9032;&#x5316;&#x7684;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;RNA&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x9006;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4ECA;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;MNV&#xFF09;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;3 &#x26;#39;&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;RNA&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;2&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7AEF;&#x672B;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; - &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x69CB;&#x9020;&#x5185;&#x306E;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30D4;&#x30EA;&#x30DF;&#x30B8;&#x30F3;&#x7BA1;[P&#xFF08;Y&#xFF09;] MNV&#x5206;&#x96E2;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5909;&#x6570;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x3001;&#x3092;&#x542B;&#x3080;3&#x3064;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; - &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002;&#x3088;&#x304F;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D4;&#x30EA;&#x30DF;&#x30B8;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;PTB&#x3068;PCBP&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5909;&#x6570;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;3&#x26;#39;-&#x975E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x3002; P&#xFF08;Y&#xFF09;&#x7BA1;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8907;&#x88FD;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x6642;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x751F;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x4E2D;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;MNV&#x3068;&#x306E;&#x7AF6;&#x5408;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;p&#xFF08;Y&#xFF09;&#x7BA1;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x304C;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30B9;&#xB7;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x767A;&#x75C7;&#x306B;RNA&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#xFF08; -  /  - &#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x3001;AP&#xFF08;Y&#xFF09; - &#x524A;&#x9664;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;STAT1&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x9396;RNA&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;RNA&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8907;&#x88FD;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3001;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;3 &#x26;#39;&#x7AEF;&#x3067;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;RNA&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#xFF1A;&#x53EF;&#x5909;&#x30DD;&#x30EA;&#x30D4;&#x30EA;&#x30DF;&#x30B8;&#x30F3;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;

&#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC138;&#xD3EC; RNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC694;&#xC18C; &#xBC0F; &#xC591;&#xC131; &#xAC00;&#xB2E5; RNA &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAD6C;&#xC870; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xB77C;&#xC774;&#xD504; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xC2E0; &#xB178;&#xB85C;&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; RNA &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC81C;&#xD55C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xC9C4;&#xD654; &#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874; RNA &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xB178;&#xB85C;&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xC5ED; &#xC720;&#xC804;&#xD559;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC774;&#xC81C; RNA &#xAD6C;&#xC870; murine &#xB178;&#xB85C;&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (MNV) &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; 3&#39; &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC;&#xC758; &#xB354; &#xC790;&#xC138;&#xD55C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xCC29;&#xC218; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xB370;&#xC774;&#xD130; 3 &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC904;&#xAE30;-&#xB8E8;&#xD504;, &#xB9DE;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; 2 &#xAC1C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xACE0; MNV &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xAC00;&#xBCC0; &#xAE38;&#xC774;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; polypyrimidine&#xB85C; [p(Y)] &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC904;&#xAE30; &#xB8E8;&#xD504; &#xAD6C;&#xC870; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACA9;&#xB9AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Well-characterized &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140; pyrimidine &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; PTB&#xC640; PCBP&#xC774; &#xBCC0;&#xC218; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; 3&#39;-untranslated &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBC16;&#xC5D0; &#xC5C6;&#xB2E4;. P(y)&#xB85C; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xACFC;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC5C6;&#xC74C;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; MNV&#xC640; &#xACBD;&#xC7C1; &#xBD84;&#xC11D; &#xD45C;&#xC2DC; p(y)&#xB85C; &#xC190;&#xC2E4; &#xBE44;&#xC6A9; &#xD53C;&#xD2B8; &#xB2C8;&#xC2A4;&#xC640; &#xAD00;&#xB828;&#xC774; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, p (Y)-&#xC0AD;&#xC81C; &#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB178;&#xB85C;&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; pathogenesis &#xAD6C;&#xC870; RNA&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; STAT1(-/-) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3C5;&#xC131;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xD558;&#xC774;&#xB77C;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C;, &#xB2E4;&#xB978; &#xC591;&#xC131; &#xAC00;&#xB2E5; RNA &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC640; &#xAC19;&#xC740;&#xC774; &#xC791;&#xD488; RNA &#xAD6C;&#xC870; &#xB178;&#xB85C;&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8;&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; &#xB3C5;&#xC131; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RNA&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D; murine &#xB178;&#xB85C;&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; 3&#39; &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xAD6C;&#xC870;: &#xBCC0;&#xC218; polypyrimidine&#xB85C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB3C5;&#xC131;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;.

Las interacciones de los factores de la c&#xE9;lula hu&#xE9;sped con las secuencias de ARN y de las estructuras en los genomas de cadena positiva virus de ARN desempe&#xF1;an diversas funciones en los ciclos de vida de estos virus. Nuestra comprensi&#xF3;n de los elementos funcionales de ARN presentes en los genomas de norovirus hasta la fecha se ha limitado en gran medida en el an&#xE1;lisis in vitro. Sin embargo, recientemente hemos utilizado la gen&#xE9;tica inversa para identificar las estructuras de ARN evolutivamente conservados y secuencias necesarias para la replicaci&#xF3;n del norovirus. Ahora hemos realizado un an&#xE1;lisis m&#xE1;s detallado de estructuras de ARN presentes en la extremidad 3 &#x26;#39;del norovirus murino (MNV) genoma. Los datos bioqu&#xED;micos indican la presencia de tres estables tallo de bucles, incluyendo dos en la regi&#xF3;n no traducida, y un tracto monocatenario polipirimidina [P (Y)] de longitud variable entre los aislamientos MNV, dentro de la terminal del v&#xE1;stago-bucle estructura. El bien caracterizado de la c&#xE9;lula hu&#xE9;sped pirimidina uni&#xF3;n PTB prote&#xED;nas y PCBP obligado la regi&#xF3;n 3 &#x26;#39;no traducida a trav&#xE9;s de una interacci&#xF3;n con esta secuencia variable. Los virus que carecen de la p (y) las v&#xED;as eran viables, tanto en cultivos celulares y despu&#xE9;s de la infecci&#xF3;n del rat&#xF3;n, lo que demuestra que esta interacci&#xF3;n no es esencial para la replicaci&#xF3;n del virus. Sin embargo, el an&#xE1;lisis de competencia con tipo salvaje MNV en cultivo celular indica que la p&#xE9;rdida de la P (Y) tracto se asoci&#xF3; con un coste aptitud. Por otra parte, ap (Y)-suprimido mutante mostr&#xF3; una reducci&#xF3;n de la virulencia en el STAT1 (- / -) modelo de rat&#xF3;n, destacando el papel de las estructuras de ARN en la patog&#xE9;nesis causada por el norovirus. Este trabajo pone de relieve c&#xF3;mo, al igual que con otros virus ARN de cadena positiva, las estructuras de RNA presentes en las terminales del genoma del norovirus juegan un papel importante en la replicaci&#xF3;n del virus y la virulencia.

An&#xE1;lisis funcional de las estructuras de ARN se presenta en la extremidad 3 &#x26;#39;del genoma murino norovirus: el tracto polipirimidinas variable juega un papel en la virulencia del virus

&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x9396;RNA&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D5;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x5074;&#x9762;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;RNA&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;5 &#x26;#39;&#x307E;&#x305F;&#x306F;3&#x26;#39;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;RNA&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x56DB;&#x80A2;&#x306B;&#x901A;&#x5E38;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x914D;&#x5217;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x3082;&#x7279;&#x5FB4;&#x306E;&#x5BBF;&#x4E3B;RNA&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30D4;&#x30EA;&#x30DF;&#x30B8;&#x30F3;&#x9818;&#x57DF;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;PTB&#xFF09;&#x306F;&#x3001;FCV&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D5;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x30CD;&#x30B3;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;FCV&#xFF09;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;RNA&#x306E;5 &#x26;#39;&#x672B;&#x7AEF;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30CD;&#x30B3;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x8CA0;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30DD;&#x30EA;&#x30D4;&#x30EA;&#x30DF;&#x30B8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;

&#x6B63;&#x94FE; RNA &#x75C5;&#x6BD2;&#x4E25;&#x91CD;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4E3A;&#x5176;&#x751F;&#x547D;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x5404;&#x4E2A;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E0E;&#x5E8F;&#x5217;&#x901A;&#x5E38;&#x90FD;&#x5728; 5&#39; &#x6216; 3&#39; &#x56DB;&#x80A2;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2; RNA &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x89C4;&#x7BA1;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x548C;/&#x6216;&#x590D;&#x5236;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x5148;&#x524D;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x9053;&#x597D;&#x7279;&#x8272;&#x7684;&#x4E3B;&#x673A; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; polypyrimidine &#x9053;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D; (PTB) &#x4EA4;&#x4E92; 5&#39; &#x7AEF;&#x732B;&#x676F;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2; (&#x71C3;&#x6599;) &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x548C; subgenomic RNAs&#xFF0C;&#x71C3;&#x6599;&#x7535;&#x6C60;&#x6C7D;&#x8F66;&#x751F;&#x547D;&#x5468;&#x671F;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Polypyrimidine &#x9053;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x732B;&#x676F;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x8D1F;&#x76D1;&#x7BA1;&#x804C;&#x80FD;&#x3002;

Positive strand RNA viruses rely heavily on host cell RNA binding proteins for various aspects of their life cycle. Such proteins interact with sequences usually present at the 5' or 3' extremities of the viral RNA genome, to regulate viral translation and/or replication. We have previously reported that the well characterized host RNA binding protein polypyrimidine tract binding protein (PTB) interacts with the 5'end of the feline calicivirus (FCV) genomic and subgenomic RNAs, playing a role in the FCV life cycle.

Polypyrimidine tract binding protein functions as a negative regulator of feline calicivirus translation.

Positive virus &#xE0; ARN comptent beaucoup sur prot&#xE9;ines de l&#x26;#39;h&#xF4;te d&#x26;#39;ARN cellulaires contraignants pour les diff&#xE9;rents aspects de leur cycle de vie. Ces prot&#xE9;ines interagissent avec des s&#xE9;quences habituellement pr&#xE9;sents &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; 5 &#x26;#39;ou 3&#x26;#39; des extr&#xE9;mit&#xE9;s de l&#x26;#39;ARN g&#xE9;nomique viral, pour r&#xE9;guler la traduction virale et / ou la r&#xE9;plication. Nous avons pr&#xE9;c&#xE9;demment rapport&#xE9; que l&#x26;#39;h&#xF4;te ainsi caract&#xE9;ris&#xE9; l&#x26;#39;ARN prot&#xE9;ine de liaison des voies de liaison des prot&#xE9;ines polypyrimidine (PTB) interagit avec l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; 5 &#x26;#39;du calicivirus f&#xE9;lin (FCV) en g&#xE9;nomique et en ARN subg&#xE9;nomiques, jouant un r&#xF4;le dans le cycle de vie FCV.

Polypyrimidine fonctions du tractus Binding Protein comme un r&#xE9;gulateur n&#xE9;gatif de la traduction calicivirus f&#xE9;lin

Positive Strang RNA-Viren setzen verst&auml;rkt auf Host Zelle RNA-bindende Proteine f&uuml;r verschiedene Aspekte ihres Lebenszyklus. Solche Proteine interagieren mit Sequenzen an den 5&#39; oder 3&#39;-Enden der das virale RNA-Genom, virale &Uuml;bersetzung bzw. Replikation regulieren in der Regel anwesend. Wir haben bereits berichtet, dass die gut gekennzeichnete Host RNA verbindliches Protein Polypyrimidine Trakt Proteins (PTB) mit dem 5&#39;-Ende des das feline Calicivirus (FCV) genomischen und subgenomic RNAs, eine Rolle im Lebenszyklus FCV interagiert.

Polypyrimidine Trakt verbindliches Protein fungiert als ein negativer Regulator der feline Calicivirus &Uuml;bersetzung.

Virus a RNA filamento positivo si basano pesantemente su host cell RNA binding proteins per vari aspetti del loro ciclo di vita. Tali proteine interagiscono con sequenze di solito presenti alle estremit&agrave; 5&#39; o 3&#39; del genoma virale RNA, di regolare traduzione virale e/o replica. In precedenza abbiamo segnalato che l&#39;ospite ben caratterizzati RNA polypyrimidine tratto proteina (PTB) interagisce con l&#39;estremit&agrave; 5&#39; del calicivirus felino (FCV) RNAs genomiche e subgenomic, giocando un ruolo nel ciclo di vita FCV.

Proteina obbligatoria del tratto Polypyrimidine funziona come un regolatore negativo della traduzione calicivirus felino.

&#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xAC00;&#xB2E5; RNA &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xB77C;&#xC774;&#xD504; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140; RNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC758;&#xC874;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xBC88;&#xC5ED; &#xBC0F;/&#xB610;&#xB294; &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xADDC;&#xC81C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; RNA &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; 5&#39; &#xB610;&#xB294; 3&#39; &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xADF8; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774; &#xC798; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; RNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; polypyrimidine&#xB85C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (PTB) &#xAC8C;&#xB188; &#xBC0F; subgenomic RNAs, FCV &#xB77C;&#xC774;&#xD504; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD560; &#xACE0;&#xC591;&#xC774; calicivirus (FCV)&#xC758; 5&#39; &#xB05D; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBCF4;&#xACE0;.

Polypyrimidine&#xB85C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACE0;&#xC591;&#xC774; calicivirus &#xBC88;&#xC5ED;&#xC758; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Virus ARN de cadena positiva dependen en gran medida de la c&#xE9;lula hu&#xE9;sped prote&#xED;nas de uni&#xF3;n al ARN de diversos aspectos de su ciclo de vida. Tales prote&#xED;nas interact&#xFA;an con secuencias normalmente presentes en el extremo 5 &#x26;#39;o 3&#x26;#39; extremidades del genoma viral ARN, para regular la traducci&#xF3;n viral y / o replicaci&#xF3;n. Hemos informado anteriormente de que el host bien caracterizado ARN prote&#xED;na de uni&#xF3;n a prote&#xED;nas polypyrimidine v&#xED;as vinculante (PTB) interact&#xFA;a con el extremo 5 &#x26;#39;del calicivirus felino (FCV) gen&#xF3;mico y ARN subgen&#xF3;mico, jugando un papel en el ciclo de vida del FCV.

Polypyrimidine funciones del tracto unida a prote&#xED;nas como un regulador negativo de la traducci&#xF3;n calicivirus felino

&#x5C0F;&#x9F20;&#x8BFA;&#x6C83;&#x514B; &#xFF08;&#x8F6C;&#x5411;&#x8282;&#x7528;&#xFF09;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86; 2003 &#x5E74;&#xFF0C;&#x662F;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x8BFA;&#x6C83;&#x514B;&#x7EC4;&#x57F9;&#x4E2D;&#x6709;&#x6548;&#x590D;&#x5236;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x5DF2;&#x88AB;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7528;&#x4F5C;&#x6A21;&#x578B;&#x4E3A;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x68C0;&#x75AB;&#x79D1;&#x5B66;&#xFF0C;&#x6025;&#x6027;&#x80A0;&#x80C3;&#x708E;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x626D;&#x8F6C;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5B9A;&#x4E49;&#x8F6C;&#x5411;&#x8282;&#x7528;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x4F53;&#x5916;&#x8F6C;&#x5F55;&#x4E0A;&#x9650; RNA &#x76F4;&#x63A5;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x6062;&#x590D;&#x7684;&#x53D1;&#x7535;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6700;&#x8FD1;&#x5F00;&#x53D1; ScriptCap &#x8F6C;&#x5F55;&#x9176;&#x5C01;&#x76D6;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x5BBD;&#x5BB9;&#x7684;&#x539F;&#x59CB; 2.647 &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x9713;&#x8679;&#x706F;&#x4F18;&#x5316;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x8F6C;&#x5411;&#x8282;&#x7528;&#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x7A33;&#x5065;&#x590D;&#x82CF;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80FD;&#x591F;&#x652F;&#x6301;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x7EB5;&#x5BB9;&#x5BF9;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x5373;&#x4EBA;&#x6743;&#x6216;&#x4ED3;&#x9F20;&#x80BE;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x6CA1;&#x6709;&#x540E;&#x7EED;&#x6269;&#x589E;&#x591A;&#x4E2A;&#x56DE;&#x5408;&#x7684;&#x4E8C;&#x6B21;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x75C5;&#x6BD2;&#x9020;&#x6210;&#x5F3A;&#x52B2;&#x590D;&#x82CF;&#x3002;&#x8FD9;&#x540E;&#x4E00;&#x79CD;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53EF;&#x80FD;&#x63D0;&#x4F9B;&#x53EF;&#x91CD;&#x73B0;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x7279;&#x5B9A;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8;&#x8BFA;&#x6C83;&#x514B; RNA &#x5BF9;&#x8BFA;&#x6C83;&#x514B;&#x590D;&#x5236;&#x5141;&#x8BB8;&#x7CBE;&#x786E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

&#x4F18;&#x5316;&#x57FA;&#x4E8E; RNA &#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8BFA;&#x5982;&#x75C5;&#x6BD2;&#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

Murine norovirus (MNV), identified in 2003, is the only norovirus which replicates efficiently in tissue culture and as a result has been used extensively as a model for human noroviruses, a major cause of acute gastroenteritis. The current report describes the generation of a new approach to reverse genetics recovery of genetically defined MNV that relies on the transfection of in vitro transcribed capped RNA directly into cells. The use of the recently developed ScriptCap post-transcriptional enzymatic capping system, followed by optimized Neon mediated electroporation of the highly permissive RAW 264.7 cells, resulted in the rapid and robust recovery of infectious MNV. Transfection of cells capable of supporting virus replication but not permissive to virus infection, namely human or hamster kidney cells, also resulted in robust recovery of infectious virus without subsequent amplification by multiple rounds of re-infection. This latter system may provide a reproducible method to measure the specific infectivity of mutant norovirus RNA allowing the accurate quantitation of the effect of mutations on norovirus replication.

Development of an optimized RNA-based murine norovirus reverse genetics system.

Norovirus murin (MNV), identifi&#xE9; en 2003, est le seul qui norovirus se r&#xE9;plique efficacement dans la culture de tissus et, par cons&#xE9;quent a &#xE9;t&#xE9; largement utilis&#xE9; comme un mod&#xE8;le pour les norovirus humains, une cause majeure de gastro-ent&#xE9;rite aigu&#xEB;. Le pr&#xE9;sent rapport d&#xE9;crit la g&#xE9;n&#xE9;ration d&#x26;#39;une nouvelle approche pour inverser la r&#xE9;cup&#xE9;ration de la g&#xE9;n&#xE9;tique g&#xE9;n&#xE9;tiquement d&#xE9;fini MNV qui repose sur la transfection in vitro des transcrits d&#x26;#39;ARN plafonn&#xE9;s directement dans les cellules. L&#x26;#39;utilisation de l&#x26;#39;r&#xE9;cemment mis au point ScriptCap post-transcriptionnelle syst&#xE8;me de plafonnement enzymatique, suivie par &#xE9;lectroporation Neon optimis&#xE9; m&#xE9;diation des tr&#xE8;s permissives des cellules RAW 264.7, a abouti &#xE0; la r&#xE9;cup&#xE9;ration rapide et robuste de MNV infectieuse. La transfection de cellules capables de supporter la r&#xE9;plication du virus, mais pas permissive &#xE0; l&#x26;#39;infection par le virus, &#xE0; savoir humain ou des cellules de rein de hamster, a &#xE9;galement entra&#xEE;n&#xE9; reprise vigoureuse de virus infectieux sans amplification ult&#xE9;rieure par de multiples s&#xE9;ries de r&#xE9;-infection. Ce dernier syst&#xE8;me peut fournir une m&#xE9;thode reproductible pour mesurer l&#x26;#39;infectiosit&#xE9; sp&#xE9;cifique de l&#x26;#39;ARN norovirus mutantes permettant la quantification pr&#xE9;cise de l&#x26;#39;effet des mutations sur la r&#xE9;plication des norovirus.

D&#xE9;veloppement d&#x26;#39;un optimis&#xE9;e &#xE0; base d&#x26;#39;ARN inverse norovirus murin syst&#xE8;me g&#xE9;n&#xE9;tique

Murine Norovirus (MNV), identifizierte im Jahr 2003 ist die einzige Norovirus die Replikation effizient in Gewebekulturen und infolgedessen bet&auml;tigt wurde weitgehend als Modell f&uuml;r menschliche Noroviren, eine wichtige Ursache der akuten Gastroenteritis. Der aktuelle Bericht beschreibt die Generierung eines neuen Ansatzes Genetik Verwertung von genetisch definierten MNV umzukehren, die auf die Transfektion von in-vitro-transkribierte RNA aufgestellter direkt in Zellen beruht. Die Verwendung des neu entwickelten ScriptCap Posttranskriptionale enzymatische Abdeckfl&auml;che Systems, gefolgt von optimierten Neon vermittelte Electroporation sehr freiz&uuml;gigen RAW 264.7 Zellen, f&uuml;hrte die schnelle und robuste Erholung der infekti&ouml;sen MNV. Transfektion von Zellen unterst&uuml;tzen die Replikation des Virus, aber nicht f&uuml;r eine Virusinfektion permissive, n&auml;mlich menschliche oder Zwerghamster Niere Zellen, auch f&uuml;hrte kr&auml;ftige Erholung des ansteckenden Virus ohne anschlie&szlig;ende Verst&auml;rkung durch mehrere Runden der Reinfektion. Dieses letztere System kann eine reproduzierbare Methode zur Messung der spezifischen Infektiosit&auml;t der mutant Norovirus RNA erm&ouml;glicht die genaue quantitative Bestimmung der Wirkung von Mutationen auf Norovirus Replikation bieten.

Entwicklung eines optimierten RNA-basierten murinen Norovirus-Reverser-Systems.

Norovirus murino (MNV), identificato nel 2003, &egrave; l&#39;unico norovirus che replica in modo efficiente nella coltura del tessuto e di conseguenza &egrave; stato usato estesamente come un modello per norovirus umana, delle principali cause di gastroenterite acuta. La presente relazione descrive la generazione di un nuovo approccio per invertire recupero genetica di MNV geneticamente definita che si basa sulla transfezione in vitro RNA trascritto tappate direttamente nelle celle. L&#39;uso dello sviluppata di recente ScriptCap espresione tappante sistema enzimatico, seguito da ottimizzato elettroporazione Neon mediato delle cellule RAW 264.7 altamente permissive, ha portato il recupero rapido e affidabile di MNV infettive. Transfezione delle cellule in grado di supportare la replicazione del virus ma non permissive all&#39;infezione del virus, vale a dire umani o criceto Rene cellule, anche portato in robusta ripresa di virus infettivo senza amplificazione successiva di pi&ugrave; cicli di infezione. Questo sistema di quest&#39;ultimo pu&ograve; fornire un metodo riproducibile per la misura dell&#39;infettivit&agrave; specifiche del mutante norovirus RNA che permette la precisa quantificazione dell&#39;effetto delle mutazioni sulla replica di norovirus.

Sviluppo di un sistema di genetica inversa ottimizzato basato su RNA murino norovirus.

2003&#x5E74;&#x306B;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;MNV&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x57F9;&#x990A;&#x3067;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x8907;&#x88FD;&#x3057;&#x3001;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x6025;&#x6027;&#x80C3;&#x8178;&#x708E;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x539F;&#x56E0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;in vitro&#x8EE2;&#x5199;RNA&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;MNV&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x306E;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3092;&#x9006;&#x8EE2;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x306A;RAW 264.7&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30CD;&#x30AA;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x6700;&#x8FD1;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;ScriptCap&#x8EE2;&#x5199;&#x5F8C;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;MNV&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x306A;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x30D2;&#x30C8;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x814E;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x518D;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x5897;&#x5E45;&#x305B;&#x305A;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x6027;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5F8C;&#x8005;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x306B;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x5B9A;&#x91CF;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;RNA&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x6027;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x518D;&#x73FE;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;RNA&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30EA;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x958B;&#x767A;

Murine &#xB178;&#xB85C;&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (MNV), 2003 &#xB144;&#xC5D0; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; &#xC870;&#xC9C1; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xBAA8;&#xB378;&#xB85C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; noroviruses, &#xAE09;&#xC131; &#xC704;&#xC7A5;&#xC5FC;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC6D0;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xB178;&#xB85C;&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB294;. &#xD604;&#xC7AC; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xC811; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCA0;&#xB080;&#xB41C; &#xCD9C;&#xC7A5;&#xB41C; RNA&#xC758; transfection&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC815;&#xC758; MNV&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xD559; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xC5ED;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC811;&#xADFC;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB41C; ScriptCap post-transcriptional &#xD6A8;&#xC18C; &#xC0C1;&#xD55C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;, &#xB4A4;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xAD00;&#xB300; &#xD55C; RAW 264.7 &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xB124;&#xC628; &#xC911;&#xC7AC; electroporation &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC10;&#xC5FC; MNV&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. Transfection&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xAC00; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0;, &#xC989; &#xC778;&#xAC04;&#xC774; &#xB098; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;, &#xB610;&#xD55C; &#xC7AC;&#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xC774;&#xD6C4; &#xC99D;&#xD3ED; &#xC5C6;&#xC774; &#xC804;&#xC5FC; &#xC131; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xBCF5;&#xAD6C;. &#xC774; &#xD6C4;&#xC790;&#xC758; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB178;&#xB85C;&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC815;&#xB7C9; &#xB178;&#xB85C;&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; RNA&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; infectivity &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC7AC;&#xD604;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; RNA &#xAE30;&#xBC18; murine &#xB178;&#xB85C;&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC5ED;&#xBC29;&#xD5A5; &#xC720;&#xC804;&#xD559; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;.

Norovirus murino (MNV), identificado en 2003, es el norovirus &#xFA;nico que se replica de manera eficiente en el cultivo de tejidos y como resultado se ha utilizado ampliamente como un modelo para los norovirus humanos, una causa importante de gastroenteritis aguda. El presente informe describe la generaci&#xF3;n de un nuevo enfoque para revertir la recuperaci&#xF3;n de la gen&#xE9;tica de organismos gen&#xE9;ticamente definido MNV que se basa en la transfecci&#xF3;n de ARN transcrito in vitro cubiertas directamente en las c&#xE9;lulas. El uso del recientemente desarrollado ScriptCap post-transcripcional sistema enzim&#xE1;tico tapado, seguido por electroporaci&#xF3;n ne&#xF3;n optimizado mediada de los altamente permisivas c&#xE9;lulas RAW 264.7, dio como resultado la recuperaci&#xF3;n r&#xE1;pida y robusta de MNV infecciosa. La transfecci&#xF3;n de c&#xE9;lulas capaces de soportar la replicaci&#xF3;n del virus, pero no permisiva a la infecci&#xF3;n por el virus, es decir, humano o las c&#xE9;lulas de h&#xE1;mster renales, tambi&#xE9;n dio lugar a la recuperaci&#xF3;n robusta del virus infeccioso sin amplificaci&#xF3;n posterior por m&#xFA;ltiples rondas de la re-infecci&#xF3;n. Este &#xFA;ltimo sistema puede proporcionar un m&#xE9;todo reproducible para medir la infectividad espec&#xED;fica del ARN norovirus mutantes que permiten la cuantificaci&#xF3;n precisa del efecto de las mutaciones en la replicaci&#xF3;n del norovirus.

Desarrollo de una optimizada basada en el ARN inverso murino Sistema de Norovirus Gen&#xE9;tica

&#x5C0F; RNA &#x75C5;&#x6BD2;&#x8FDB;&#x5316;&#x8BB8;&#x591A;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x5176;&#x77ED;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x548C;&#x5F00;&#x653E;&#x9605;&#x8BFB;&#x6846;&#x67B6; &#xFF08;ORF4&#xFF09; &#x7684;&#x91CD;&#x53E0; VP1 &#x66FF;&#x4EE3;&#x9605;&#x8BFB;&#x6846;&#x67B6;&#x4E2D;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8BFA;&#x6C83;&#x514B; &#xFF08;&#x8F6C;&#x5411;&#x8282;&#x7528;) subgenomic RNA&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801;&#x7F16;&#x7801;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;ORF4 &#x5728;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x8F6C;&#x6362;&#x548C;&#x7531;&#x6B64;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x8BC1;&#x660E; ORF4 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x7EC4;&#x57F9;&#x4E2D;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5176;&#x635F;&#x5931;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x5065;&#x8EAB;&#x8D39;&#x7528;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x80FD;&#x591F;&#x8868;&#x8FBE; ORF4 &#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8FD8;&#x539F;&#x540E;&#x53CD;&#x590D;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x57F9;&#x517B;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6CDB;&#x51FD;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x4EA7;&#x751F; ORF4 &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x62EE;&#x6297;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x975E;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x901A;&#x8FC7;&#x5148;&#x5929;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x603B;&#x6570;&#x7684;&#x4E0A;&#x8C03;&#x3002;RAW264.7 &#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1; ORF4 &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x4E2D;&#x6CA1;&#x6709;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x671F;&#x95F4;&#x4E5F;&#x5728;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;WT &#x548C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x80FD;&#x529B;&#x8868;&#x8FBE; ORF4 &#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F53;&#x5185;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x611F;&#x67D3;&#x548C;&#x81F4;&#x75C5;&#x529B;&#x7684; ORF4 &#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;STAT1/&#x5C0F;&#x9F20;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x80FD;&#x529B;&#x8868;&#x8FBE; ORF4 &#x663E;&#x793A;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x65F6;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;WT &#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x75C7;&#x72B6;&#x7684;&#x53D1;&#x4F5C;&#x3002;&#x8367;&#x5149;&#x5B9A;&#x91CF; PCR &#x548C;&#x6837;&#x54C1;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x611F;&#x67D3;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x611F;&#x67D3;&#x4E0D;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x6B64;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684; ORF4 &#x7ED3;&#x679C;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x611F;&#x67D3;&#x75C5;&#x6BD2;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x540D;&#x79F0;&#x6BD2;&#x529B;&#x56E0;&#x5B50; 1&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684; VF1&#x3002;VF1 &#x9274;&#x5B9A;&#x8868;&#x793A;&#x7B2C;&#x4E00;&#x8868;&#x5F81;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x66FF;&#x4EE3;&#x6027;&#x7684;&#x5F00;&#x653E;&#x9605;&#x8BFB;&#x6846;&#x67B6;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x676F;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5BB6;&#x65CF;&#x3002;&#x8F6C;&#x5411;&#x8282;&#x7528; VF1 &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x8C03;&#x8282;&#x673A;&#x80FD;&#x5230;&#x8BFA;&#x6C83;&#x514B;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x548C;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x4E3A;&#x672A;&#x6765;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x89C2;&#x70B9;&#x3002;

&#x8BFA;&#x6C83;&#x514B;&#x8C03;&#x8282;&#x975E;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x53D1;&#x751F;&#x901A;&#x8FC7;&#x66FF;&#x4EE3;&#x6027;&#x5F00;&#x653E;&#x9605;&#x8BFB;&#x6846;&#x67B6; 4 &#x7684;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3002;

Small RNA viruses have evolved many mechanisms to increase the capacity of their short genomes. Here we describe the identification and characterization of a novel open reading frame (ORF4) encoded by the murine norovirus (MNV) subgenomic RNA, in an alternative reading frame overlapping the VP1 coding region. ORF4 is translated during virus infection and the resultant protein localizes predominantly to the mitochondria. Using reverse genetics we demonstrated that expression of ORF4 is not required for virus replication in tissue culture but its loss results in a fitness cost since viruses lacking the ability to express ORF4 restore expression upon repeated passage in tissue culture. Functional analysis indicated that the protein produced from ORF4 antagonizes the innate immune response to infection by delaying the upregulation of a number of cellular genes activated by the innate pathway, including IFN-Beta. Apoptosis in the RAW264.7 macrophage cell line was also increased during virus infection in the absence of ORF4 expression. In vivo analysis of the WT and mutant virus lacking the ability to express ORF4 demonstrated an important role for ORF4 expression in infection and virulence. STAT1-/- mice infected with a virus lacking the ability to express ORF4 showed a delay in the onset of clinical signs when compared to mice infected with WT virus. Quantitative PCR and histopathological analysis of samples from these infected mice demonstrated that infection with a virus not expressing ORF4 results in a delayed infection in this system. In light of these findings we propose the name virulence factor 1, VF1 for this protein. The identification of VF1 represents the first characterization of an alternative open reading frame protein for the calicivirus family. The immune regulatory function of the MNV VF1 protein provide important perspectives for future research into norovirus biology and pathogenesis.

Norovirus regulation of the innate immune response and apoptosis occurs via the product of the alternative open reading frame 4.

Les petits virus &#xE0; ARN ont &#xE9;volu&#xE9; de nombreux m&#xE9;canismes pour accro&#xEE;tre la capacit&#xE9; de leurs g&#xE9;nomes courts. Nous d&#xE9;crivons ici l&#x26;#39;identification et la caract&#xE9;risation d&#x26;#39;un cadre de lecture ouvert roman (ORF4) cod&#xE9;e par le norovirus murin (MNV) ARN sous-g&#xE9;nomique, dans un cadre de lecture alternatif chevauchant la r&#xE9;gion VP1 de codage. ORF4 est traduit au cours de l&#x26;#39;infection virale et la prot&#xE9;ine r&#xE9;sultante localise principalement dans les mitochondries. Utilisation de la g&#xE9;n&#xE9;tique inverse nous avons d&#xE9;montr&#xE9; que l&#x26;#39;expression de l&#x26;#39;ORF4 n&#x26;#39;est pas n&#xE9;cessaire pour la r&#xE9;plication du virus en culture de tissu, mais ses r&#xE9;sultats de perte de remise en forme &#xE0; un co&#xFB;t puisque les virus n&#x26;#39;ayant pas la capacit&#xE9; d&#x26;#39;exprimer ORF4 restaurer l&#x26;#39;expression lors du passage r&#xE9;p&#xE9;t&#xE9; dans la culture de tissus. Analyse fonctionnelle a indiqu&#xE9; que la prot&#xE9;ine produite &#xE0; partir de l&#x26;#39;ORF4 antagonise la r&#xE9;ponse immunitaire &#xE0; une infection par retarder la r&#xE9;gulation positive d&#x26;#39;un certain nombre de g&#xE8;nes cellulaires activ&#xE9;s par la voie naturelle, comprenant l&#x26;#39;IFN-b&#xEA;ta. L&#x26;#39;apoptose dans la lign&#xE9;e des macrophages RAW264.7 cellules a &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; augment&#xE9; au cours de l&#x26;#39;infection du virus en l&#x26;#39;absence de l&#x26;#39;ORF4 expression. Dans l&#x26;#39;analyse in vivo du virus WT et mutante d&#xE9;pourvue de l&#x26;#39;aptitude &#xE0; exprimer ORF4 d&#xE9;montr&#xE9; un r&#xF4;le important pour l&#x26;#39;ORF4 expression de l&#x26;#39;infection et la virulence. STAT1-/ - souris infect&#xE9;es par un virus n&#x26;#39;ayant pas la capacit&#xE9; d&#x26;#39;exprimer ORF4 a montr&#xE9; un retard dans l&#x26;#39;apparition des signes cliniques par rapport &#xE0; des souris infect&#xE9;es par le virus de la WT. La PCR quantitative et l&#x26;#39;analyse histopathologique des &#xE9;chantillons provenant de ces souris infect&#xE9;es d&#xE9;montr&#xE9; que l&#x26;#39;infection par un virus n&#x26;#39;exprimant pas ORF4 r&#xE9;sultats dans un infection retard&#xE9;e dans ce syst&#xE8;me. &#xC0; la lumi&#xE8;re de ces constatations, nous proposons le facteur de virulence nom 1, VF1 pour cette prot&#xE9;ine. L&#x26;#39;identification des VF1 repr&#xE9;sente la premi&#xE8;re caract&#xE9;risation d&#x26;#39;une prot&#xE9;ine de remplacement cadre de lecture ouvert pour toute la famille calicivirus. La fonction immunitaire r&#xE9;glementaire de la prot&#xE9;ine MNV VF1 fournissent des perspectives importantes pour la recherche future en mati&#xE8;re de biologie des norovirus et la pathogen&#xE8;se.

R&#xE8;glement Norovirus de la r&#xE9;ponse immunitaire inn&#xE9;e et l&#x26;#39;apoptose se produit par le produit du cadre de lecture ouvert Alternative 4

Kleine RNA-Viren haben viele Mechanismen zur Erh&ouml;hung der Kapazit&auml;t ihrer kurzen Genome entwickelt. Hier beschreiben wir die Identifizierung und Charakterisierung eines Romans open Frame (ORF4) durch das murine Norovirus (MNV) Subgenomic RNA, in eine alternative Leseraster &Uuml;berlappung der VP1 kodiert Codierung Region lesen. ORF4 wird &uuml;bersetzt, w&auml;hrend der Virusinfektion und das resultierende Protein vorwiegend in den Mitochondrien lokalisiert. Mit Reverser zeigten wir, dass Ausdruck ORF4 nicht f&uuml;r die Replikation des Virus in Gewebekultur aber ihren Gewichtsverlust Ergebnisse in Eignung Kosten erforderlich, ist da Viren fehlt die F&auml;higkeit, ORF4 Ausdruck auf wiederholt Passagen in Gewebekultur wiederherstellen. Funktionale Analyse ergab, dass das Protein aus ORF4 produziert der angeborenen Immunantwort auf eine Infektion antagonizes durch die Verz&ouml;gerung die Hochregulation von einer Anzahl von zellul&auml;ren Genen, die durch die angeborene Pathway, einschlie&szlig;lich IFN-Beta aktiviert. Apoptosis in den RAW264.7 Makrophagen-Zelllinie wurde auch w&auml;hrend der Virusinfektion in Ermangelung von ORF4 Ausdruck erh&ouml;ht. In-vivo-Analyse der WT und mutierten Virus fehlt die F&auml;higkeit, ORF4 zeigte eine wichtige Rolle f&uuml;r ORF4 Ausdruck bei Infektion und Virulenz. STAT1-/-M&auml;use infiziert mit einem fehlt die F&auml;higkeit, ORF4 zeigte eine Verz&ouml;gerung bei der Entstehung von klinischen Symptomen im Vergleich zu M&auml;usen mit WT-Virus infiziert Virus. Quantitative PCR und histopathologische Analyse der Proben von diesen infizierten M&auml;usen demonstriert dieser Infektion mit einem Virus nicht ausdr&uuml;cken ORF4 Ergebnisse in eine verz&ouml;gerte Infektion in diesem System. Angesichts dieser Ergebnisse schlagen wir den Namen Virulenzfaktoren 1, VF1 f&uuml;r dieses Protein. Die Identifizierung des VF1 stellt die erste Charakterisierung eines alternativen offenen Frame Protein f&uuml;r das Calicivirus-Familie zu lesen. Die regulatorische Immunfunktion des Proteins MNV VF1 liefern wichtige Perspektiven f&uuml;r die k&uuml;nftige Forschung in Norovirus Biologie und Pathogenese.

Norovirus Regulierung der angeborenen Immunantwort und Apoptosis erfolgt &uuml;ber das Produkt aus der alternative offene Leseraster 4.

Piccolo virus a RNA si sono evoluti molti meccanismi per aumentare la capacit&agrave; dei loro genomi breve. Qui descriviamo l&#39;identificazione e la caratterizzazione di un romanzo open reading frame (ORF4) codificati dal norovirus murino (MNV) subgenomic RNA, in una cornice di lettura alternativa sovrapponendo il VP1 codifica regione. ORF4 &egrave; tradotto durante l&#39;infezione del virus e la proteina risulta si localizza prevalentemente ai mitocondri. Utilizzando la genetica inversa abbiamo dimostrato che espressione di ORF4 non &egrave; richiesto per la replicazione del virus in coltura di tessuti, ma i risultati di perdita in un costo di fitness dal virus manca la capacit&agrave; di esprimere ORF4 ripristinare espressione al passaggio ripetuto nella coltura del tessuto. Analisi funzionale indicano che la proteina prodotta da ORF4 antagonizza la risposta immunitaria innata all&#39;infezione ritardando la sovraregolazione di un certo numero di geni cellulari attivati dal pathway innato, tra cui IFN-Beta. Apoptosi nella linea cellulare dei macrofagi RAW264.7 inoltre &egrave; stato aumentato durante l&#39;infezione del virus in assenza di espressione di ORF4. L&#39;analisi in vivo del WT e virus mutante manca la capacit&agrave; di esprimere ORF4 ha dimostrato un ruolo importante per l&#39;espressione ORF4 in infezione e la virulenza. Stat1/topi infettati da un virus manca la capacit&agrave; di esprimere i ORF4 hanno mostrato un ritardo nell&#39;insorgenza dei segni clinici rispetto ai topi infettati con virus WT. PCR quantitativa e analisi istopatologiche di campioni da questi topi infetti hanno dimostrato che l&#39;infezione con un virus non esprimendo ORF4 risultati in ritardo infezione in questo sistema. Alla luce di questi risultati vi proponiamo il fattore di virulenza di nome 1, VF1 per questa proteina. L&#39;identificazione di VF1 rappresenta la prima caratterizzazione di un&#39;alternativa open proteina cornice di lettura per la famiglia calicivirus. La funzione immunitaria e regolamentazione della proteina MNV VF1 forniscono importanti prospettive per la ricerca futura in patogenesi e norovirus biologia.

Norovirus regolazione della risposta immunitaria innata e apoptosi avviene tramite il prodotto di alternativa open reading frame del 4.

&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;RNA&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x77ED;&#x3044;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x5BB9;&#x91CF;&#x3092;&#x5897;&#x3084;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x9032;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;VP1&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x9818;&#x57DF;&#x304C;&#x91CD;&#x8907;&#x3059;&#x308B;&#x5225;&#x306E;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;MNV&#xFF09;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;RNA&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x65B0;&#x898F;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#xFF08;ORF4&#xFF09;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7279;&#x5FB4;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; ORF4&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x6642;&#x306B;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306B;&#x4E3B;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9006;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x304C;&#x7D44;&#x7E54;&#x57F9;&#x990A;&#x3067;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x901A;&#x904E;&#x6642;&#x306B;&#x5F0F;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3059;&#x308B;ORF4&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30B9;&#x306E;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x305D;&#x306E;ORF4&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x7D44;&#x7E54;&#x57F9;&#x990A;&#x3067;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8907;&#x88FD;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;ORF4&#x304B;&#x3089;&#x7523;&#x751F;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;IFN-&#x3B2;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x751F;&#x5F97;&#x7684;&#x306A;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6570;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x9045;&#x3089;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x62EE;&#x6297;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; RAW264.7&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;ORF4&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6709;&#x7121;&#x3067;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x6642;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6025;&#x884C;ORF4&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;WT&#x3068;&#x5909;&#x7570;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x3084;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306E;ORF4&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002; STAT1  -  /  -  WT&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x660E;&#x793A;&#x7684;&#x306A;ORF4&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x81E8;&#x5E8A;&#x75C7;&#x72B6;&#x306E;&#x767A;&#x75C7;&#x306E;&#x9045;&#x5EF6;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B9A;&#x91CF;PCR&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x75C5;&#x7406;&#x7D44;&#x7E54;&#x5B66;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x9045;&#x5EF6;&#x611F;&#x67D3;&#x306B;ORF4&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306B;&#x7167;&#x3089;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x540D;&#x524D;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x56E0;&#x5B50;1&#x3001;VF1&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002; VF1&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; MNV VF1&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x75C5;&#x56E0;&#x306B;&#x4ECA;&#x5F8C;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8996;&#x70B9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3068;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x30CE;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306F;&#x3001;&#x4EE3;&#x66FF;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;4&#x88FD;&#x54C1;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3059;

&#xC791;&#xC740; RNA &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC9E7;&#xC740; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC9C4;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC18C;&#xC124; &#xC624;&#xD508; &#xD504;&#xB808;&#xC784; (ORF4)&#xB294; VP1 &#xACB9;&#xCE58;&#xB294; &#xB300;&#xCCB4; &#xB3C5;&#xC11C; &#xD504;&#xB808;&#xC784;&#xC5D0;&#xC11C; murine &#xB178;&#xB85C;&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (MNV) subgenomic RNA, &#xC758;&#xD574; &#xCF54;&#xB529; &#xC601;&#xC5ED; &#xC77D;&#xAE30;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC; orf4&#xB294; &#xBCC0;&#xD658; &#xD558; &#xACE0; &#xACB0;&#xACFC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; localizes. &#xC5ED; &#xC720;&#xC804;&#xD559;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC; orf4&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825; &#xBD80;&#xC871; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xC2DD; &#xC870;&#xC9C1; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC18;&#xBCF5; &#xB41C; &#xD1B5;&#xB85C; &#xB530;&#xB77C; &#xC774;&#xD6C4; &#xC2DD; orf4&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xBC30;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD53C;&#xD2B8; &#xB2C8;&#xC2A4; &#xBE44;&#xC6A9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC190;&#xC2E4; &#xACB0;&#xACFC; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC785;&#xC99D;. &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D; orf4&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB418;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; IFN-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xBC84;&#xC804;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xC758; upregulation &#xC9C0;&#xC5F0; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xBC18;&#xAC10;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC;. RAW264.7 macrophage &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; Apoptosis&#xB3C4; ORF4 &#xC2DD;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. WT orf4&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xACB0;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xBD84;&#xC11D; ORF4 &#xC2DD; &#xAC10;&#xC5FC; &#xBC0F; &#xB3C5;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. STAT1/&#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; ORF4 WT &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC784;&#xC0C1; &#xC99D;&#xC0C1;&#xC758; &#xBC1C;&#xBCD1;&#xC744; &#xC9C0;&#xC5F0; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825; &#xBD80;&#xC871; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC;. &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; PCR &#xBC0F; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; histopathological &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xC9C0;&#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5F0;&#xB41C; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0;&#xC11C; ORF4 &#xACB0;&#xACFC; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xADF8; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBE44;&#xCD94;&#xC5B4; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC774;&#xB984; &#xB3C5;&#xC131; &#xC694;&#xC778; 1, vf1&#xC774;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xC548;. VF1 id &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB300;&#xCCB4; &#xC624;&#xD508;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; calicivirus &#xAC00;&#xC871;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC77D;&#xAE30;. MNV VF1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBA74;&#xC5ED; &#xADDC;&#xC81C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB178;&#xB85C;&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xBC0F; pathogenesis &#xBBF8;&#xB798; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD00;&#xC810;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; &#xBC0F; apoptosis&#xC758; &#xB178;&#xB85C;&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xADDC;&#xC81C; &#xB300;&#xCCB4; &#xC5F4;&#xB824;&#xC788;&#xB294; &#xB3C5;&#xC11C; &#xD504;&#xB808;&#xC784; 4&#xC758; &#xC81C;&#xD488;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Peque&#xF1;os virus de ARN se han desarrollado muchos mecanismos para aumentar la capacidad de sus genomas cortos. Aqu&#xED; se describe la identificaci&#xF3;n y caracterizaci&#xF3;n de un marco de lectura abierto de la novela (ORF4) codificada por el norovirus murino (MNV) ARN subgen&#xF3;mico, en un marco de lectura alternativa de la superposici&#xF3;n de la regi&#xF3;n VP1 de codificaci&#xF3;n. ORF4 se traduce en infecci&#xF3;n por el virus y la prote&#xED;na resultante se localiza principalmente en la mitocondria. Usando la gen&#xE9;tica inversa hemos demostrado que la expresi&#xF3;n de ORF4 no es necesaria para la replicaci&#xF3;n del virus en cultivo de tejidos, pero sus resultados en la p&#xE9;rdida de un costo de fitness ya que los virus que carecen de la capacidad de expresar ORF4 restaurar la expresi&#xF3;n en el paso repetido en cultivos de tejidos. El an&#xE1;lisis funcional indica que la prote&#xED;na producida a partir de ORF4 antagoniza la respuesta inmune innata a la infecci&#xF3;n por retrasar la regulaci&#xF3;n positiva de un n&#xFA;mero de genes celulares activados por la v&#xED;a innata, incluyendo el IFN-beta. Apoptosis en la l&#xED;nea celular de macr&#xF3;fagos RAW264.7 tambi&#xE9;n se increment&#xF3; durante la infecci&#xF3;n por virus en ausencia de ORF4 expresi&#xF3;n. En el an&#xE1;lisis in vivo del virus WT y mutantes que carecen de la capacidad de expresar ORF4 demostrado un papel importante para ORF4 expresi&#xF3;n de la infecci&#xF3;n y la virulencia. STAT1-/ - ratones infectados con un virus que carecen de la capacidad para expresar ORF4 mostr&#xF3; un retraso en la aparici&#xF3;n de signos cl&#xED;nicos en comparaci&#xF3;n con los ratones infectados con el virus de WT. PCR cuantitativa y an&#xE1;lisis histopatol&#xF3;gico de muestras de estos ratones infectados demostrado que la infecci&#xF3;n con un virus que no expresan ORF4 resultados en una infecci&#xF3;n retardada en este sistema. A la luz de estos resultados se propone el nombre de un factor de virulencia, VF1 de esta prote&#xED;na. La identificaci&#xF3;n de VF1 representa la primera caracterizaci&#xF3;n de una prote&#xED;na alternativa marco de lectura abierto para la familia calicivirus. La funci&#xF3;n inmunol&#xF3;gica de la prote&#xED;na reguladora MNV VF1 ofrecen perspectivas importantes para investigaciones futuras sobre la biolog&#xED;a y la patog&#xE9;nesis causada por el norovirus.

Norovirus Reglamento de la respuesta inmune innata y la apoptosis se produce a trav&#xE9;s del producto del marco de lectura abierto alternativo 4

&#x6D88;&#x706D;&#x725B;&#x761F;&#x75C5;&#x6BD2; &#xFF08;&#x53CD;&#x5E94;&#x5806;&#x538B;&#x529B;&#x5BB9;&#x5668;) &#x5728;&#x5168;&#x7403;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B89;&#x5168;&#x7684;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x548C;&#x6709;&#x6548;&#x6D3B;&#x5F31;&#x6BD2;&#x7684;&#x75AB;&#x82D7;&#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5408;&#x9002;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x7684;&#x8BCA;&#x65AD;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x80FD;&#x4EE5;&#x8840;&#x6E05;&#x5B66; &#39;&#x533A;&#x5206;&#x81EA;&#x7136;&#x611F;&#x67D3;&#x548C;&#x63A5;&#x79CD;&#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#39; (DIVA)&#xFF0C;&#x8FD9;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x80FD;&#x591F;&#x5B8C;&#x6210;&#x6839;&#x9664;&#x65B9;&#x6848;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x548C;&#x6240;&#x6D89;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684;&#x7ECF;&#x6D4E;&#x8D1F;&#x62C5;&#x662F;&#x5927;&#x5927;&#x5927;&#x4E8E;&#x662F;&#x5426;&#x5C65;&#x884C; DIVA &#x6982;&#x5FF5;&#x7684;&#x75AB;&#x82D7;&#x548C;&#x540C;&#x4F34;&#x7684;&#x8BCA;&#x65AD;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x8FC7;&#x53EF;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x53CD;&#x5E94;&#x5806;&#x538B;&#x529B;&#x5BB9;&#x5668;&#x6839;&#x9664;&#x8FD0;&#x52A8;&#x671F;&#x95F4;&#x53CD;&#x5E94;&#x5806;&#x538B;&#x529B;&#x5BB9;&#x5668;&#x7684; serosurveillance&#xFF0C;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4F7F;&#x7528;&#x53CD;&#x5E94;&#x5806;&#x538B;&#x529B;&#x5BB9;&#x5668;&#x7279;&#x5B9A; (C1) &#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53; (&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;) &#x9488;&#x5BF9;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8840;&#x51DD;&#x7D20; (H) &#x86CB;&#x767D;&#x7ADE;&#x4E89;&#x9176;&#x8054;&#x514D;&#x75AB;&#x5438;&#x9644;&#x8BD5;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6B64;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5E76;&#x4E0D;&#x80FD;&#x6EE1;&#x8DB3; DIVA &#x8981;&#x6C42;&#x3002;&#x5C0F;&#x8BF4;&#x7684;&#x4E00;&#x4EE3;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6982;&#x5FF5;&#x8BC1;&#x660E; morbillivirus DIVA &#x75AB;&#x82D7;&#x6211;&#x4EEC;&#x7531;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x663E;&#x793A;&#x6807;&#x8BC6;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8;&#x6B8B;&#x7559; C1 &#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x548C;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x878D;&#x5408;&#x529F;&#x80FD;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#x6211;&#x4EEC;&#x7EB3;&#x5165;&#x5168;&#x957F;&#x514B;&#x9686;&#x7A81;&#x53D8;&#x6297;&#x539F;&#x51B3;&#x5B9A;&#x7C07;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6551;&#x51FA;&#x91CD;&#x7EC4;&#x53CD;&#x5E94;&#x5806;&#x538B;&#x529B;&#x5BB9;&#x5668;&#x4F7F;&#x7528;&#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x6807;&#x8BB0; morbillivirus &#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x673A;&#x5236;&#x4F7F;&#x7528;&#x53CD;&#x5E94;&#x5806;&#x538B;&#x529B;&#x5BB9;&#x5668;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BC1;&#x660E;&#x7684;&#x6982;&#x5FF5;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x6807;&#x8BB0;&#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x7814;&#x5236;&#x5C0F;&#x53CD;&#x520D;&#x517D;&#x75AB;&#x75C5; des &#x5C0F;&#x5144;&#x5F1F;&#x4E4B;&#x53CB;&#x53CD;&#x520D;&#x52A8;&#x7269;&#x75C5;&#x6BD2; (PPRV) &#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x9002;&#x7528;&#x6027;&#x3002;

&#x751F;&#x6210; morbillivirus &#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x65B0;&#x9014;&#x5F84;&#xFF1A; &#x6D88;&#x6781;&#x6807;&#x8BB0;&#x725B;&#x761F;&#x75AB;&#x82D7;&#x3002;

The eradication of rinderpest virus (RPV) from the globe was possible through the availability of a safe and effective live attenuated vaccine and a suitable companion diagnostic test. However, the inability to serologically 'Differentiate between naturally Infected and Vaccinated Animals' (DIVA) meant that both the time taken to complete the eradication programme and the economic burden on countries involved was significantly greater than if a vaccine and companion diagnostic test that fulfilled the DIVA concept had been available. During the RPV eradication campaign serosurveillance for RPV was primarily based on a competitive ELISA using a RPV specific (C1) monoclonal antibody (mAb) directed against the viral haemagglutinin (H) protein but this test was not able to meet DIVA requirements. To provide proof of concept for the generation of novel morbillivirus DIVA vaccines we have identified, by phage display, and mutated residues critical for C1 mAb binding and assessed the functionality of mutants in an in vitro fusion assay. Finally we have incorporated mutated epitopes into a full length clone and rescued recombinant RPV using reverse genetics techniques. Here we describe a novel mechanism of marking morbillivirus vaccines, using RPV as a proof of concept, and discuss the applicability of this method to the development of marked vaccines for peste des petits ruminants virus (PPRV).

A novel approach to generating morbillivirus vaccines: Negatively marking the rinderpest vaccine.

L&#39;&eacute;radication du virus de la peste bovine (RPV) du globe a &eacute;t&eacute; possible gr&acirc;ce &agrave; la disponibilit&eacute; d&#39;un s&ucirc;r et efficace vivent vaccin att&eacute;nu&eacute; et un test de diagnostic compagnon appropri&eacute;. Cependant, l&#39;incapacit&eacute; de s&eacute;rologiquement &laquo; distinguer entre naturellement infect&eacute;s et des animaux vaccin&eacute;s &raquo; (DIVA) signifiait que les deux le temps n&eacute;cessaire pour compl&eacute;ter le programme d&#39;&eacute;radication et le fardeau &eacute;conomique sur les pays concern&eacute;s a &eacute;t&eacute; significativement plus &eacute;lev&eacute; que si un test de diagnostic vaccin et compagnon qui rempli le concept DIVA avait &eacute;t&eacute; disponible. Au cours de la campagne d&#39;&eacute;radication de RPV s&eacute;rosurveillance des drones reposant principalement sur un ELISA concurrent &agrave; l&#39;aide d&#39;un RPV sp&eacute;cifique (C1) anticorps monoclonal (ACM) dirig&eacute; contre la prot&eacute;ine virale h&eacute;magglutinine (H), mais ce test n&#39;&eacute;tait pas en mesure de r&eacute;pondre aux exigences de DIVA. De fournir une preuve de concept pour la g&eacute;n&eacute;ration du roman les vaccins DIVA morbillivirus nous avons identifi&eacute;e par le phage display et mut&eacute; &agrave; r&eacute;sidus critiques pour la liaison de mAb C1 et &eacute;valuer les fonctionnalit&eacute;s de mutants dans une fusion in vitro de dosage. Enfin, nous avons incorpor&eacute; des &eacute;pitopes mut&eacute;s dans un clone de pleine longueur et secouru recombinant RPV en utilisant des techniques de g&eacute;n&eacute;tique inverse. Nous d&eacute;crivons ici un nouveau m&eacute;canisme de marquage morbillivirus vaccins, &agrave; l&#39;aide de drones comme une preuve de concept et discuter de l&#39;applicabilit&eacute; de cette m&eacute;thode pour le d&eacute;veloppement de vaccins marqu&eacute;s pour le virus de la peste des petits ruminants (VPPR).

Une nouvelle approche pour g&eacute;n&eacute;rer des vaccins morbillivirus : marquage n&eacute;gativement le vaccin contre la peste bovine.

Die Ausrottung der Rinderpest-Virus (RPV) aus der ganzen Welt wurde m&ouml;glich durch die Verf&uuml;gbarkeit einer sicheren und effektiven Leben, abgeschw&auml;chte Impfstoffe und einen passenden Begleiter-Diagnosetest. Jedoch die Unf&auml;higkeit zur &#39; nat&uuml;rlich Infected und geimpften Tieren unterscheiden &#39; (DIVA) bedeutete, dass sowohl die Zeit, die Tilgung abzuschlie&szlig;en und die wirtschaftliche Belastung der betroffenen L&auml;nder war deutlich gr&ouml;&szlig;er, wenn ein Impfstoff und Begleiter diagnostischer Test, der das DIVA-Konzept erf&uuml;llt verf&uuml;gbar gewesen. W&auml;hrend der RPV-Tilgung-Kampagne Serosurveillance f&uuml;r RPV beruhte in erster Linie auf einem kompetitiven ELISA mit einen RPV spezifischen (C1) monoklonaler Antik&ouml;rper (mAb) gegen das Protein virales H&auml;magglutinin (H), aber dieser Test war nicht DIVA-Anforderungen erf&uuml;llen. Konzept zur Erzeugung von Roman nachweisen Brutversuch Morbillivirus DIVA Impfstoffe haben wir identifiziert, von Phagen-Display, und mutiert R&uuml;ckst&auml;nde f&uuml;r C1-mAb-Bindung entscheidend und beurteilt die Funktionalit&auml;t von Mutanten in eine in-vitro-Fusion. Wir haben schlie&szlig;lich einen full Length Klon mutierte Epitopes eingegliedert und rekombinante RPV mit Reverser Techniken gerettet. Hier beschreiben wir einen neuen Mechanismus der Kennzeichnung Morbillivirus Impfstoffe, mit RPV als Proof of Concept, und diskutieren die Anwendbarkeit dieser Methode zur Entwicklung von markierten Impfstoffen f&uuml;r Peste des Petits Wiederk&auml;uer Virus (PPRV).

Ein neuartiger Ansatz f&uuml;r die Erzeugung von Morbillivirus Impfstoffe: negativ Kennzeichnung des Rinderpest-Impfstoffs.

L&#39;eradicazione del virus di peste bovina (RPV) dal globo &egrave; stata possibile grazie alla disponibilit&agrave; di un sicuro ed efficace dal vivo vaccino attenuato e un test diagnostico compagno adatto. Tuttavia, l&#39;incapacit&agrave; di sierologicamente &#39;distinguere tra naturalmente infetti e animali vaccinati&#39; (DIVA) ha fatto s&igrave; che sia il tempo impiegato per completare il programma di eradicazione e l&#39;onere economico per i paesi coinvolti era significativamente maggiore se un test diagnostico vaccino e compagno che ademp&igrave; il concetto DIVA era stato disponibile. Durante la campagna di eradicazione RPV serosurveillance per RPV era basata principalmente su un ELISA competitivo utilizzando un RPV specifico (C1) anticorpo monoclonale (mAb) diretto contro la proteina virale emoagglutinina (H), ma questo test non era in grado di soddisfare i requisiti di DIVA. A fornire la prova di concetto per la generazione del romanzo di analisi di morbillivirus vaccini DIVA abbiamo identificato, dall&#39;esposizione dei fagi e mutato residui critici per l&#39;associazione mAb C1 e valutato la funzionalit&agrave; dei mutanti in una fusione in vitro. Infine abbiamo incorporato epitopi mutati in un clone di piena lunghezza e salvato RPV ricombinante mediante tecniche di genetica inversa. Qui descriviamo un nuovo meccanismo di marcatura morbillivirus vaccini, utilizzando RPV come un proof of concept e discutere l&#39;applicabilit&agrave; di questo metodo per lo sviluppo di vaccini contrassegnati per peste des petits virus ruminanti (PPRV).

Un nuovo approccio alla generazione di vaccini morbillivirus: marcatura negativamente il vaccino peste bovina.

&#x725B;&#x75AB;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (RPV)&#x3001;&#x4E16;&#x754C;&#x4E2D;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x6839;&#x7D76;&#x304C;&#x5B89;&#x5168;&#x306A;&#x306E;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x5F31;&#x6BD2;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30CB;&#x30AA;&#x30F3;&#x8A3A;&#x65AD;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x8840;&#x6E05;&#x5B66;&#x7684; &#39;&#x9593;&#x81EA;&#x7136;&#x611F;&#x67D3;&#x3068;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x52D5;&#x7269;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#39; &#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068; &#xFF08;&#x6B4C;&#x59EB;&#xFF09; &#x610F;&#x5473;&#x306F;&#x6839;&#x7D76;&#x8A08;&#x753B;&#x3092;&#x5B8C;&#x4E86;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x304B;&#x304B;&#x308B;&#x6642;&#x9593;&#x3068;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3059;&#x308B;&#x56FD;&#x306E;&#x7D4C;&#x6E08;&#x7684;&#x306A;&#x8CA0;&#x62C5;&#x306F;&#x6B4C;&#x59EB;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BB;&#x30D7;&#x30C8;&#x3092;&#x6210;&#x5C31;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30CB;&#x30AA;&#x30F3;&#x8A3A;&#x65AD;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x304C;&#x5229;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;RPV &#x64B2;&#x6EC5;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30DA;&#x30FC;&#x30F3;&#x4E2D;&#x306B;&#x8840;&#x6E05; RPV &#x3092;&#x4E3B;&#x306B;&#x3001;RPV &#x7279;&#x5B9A; (C1) &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30D8;&#x30DE;&#x30B0;&#x30EB;&#x30C1;&#x30CB;&#x30F3; (H) &#x86CB;&#x767D;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x76E3;&#x7763;&#x6297;&#x4F53; (mAb) &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7AF6;&#x5408; ELISA &#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x306F;&#x6B4C;&#x59EB;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3092;&#x6E80;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x4E16;&#x4EE3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BB;&#x30D7;&#x30C8;&#x306E;&#x8A3C;&#x660E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x8868;&#x793A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068; C1 mAb &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3057;&#x3001;in vitro &#x3067;&#x306E;&#x6838;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30DF;&#x30AF;&#x30BD; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6B4C;&#x59EB;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x9577;&#x3055;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x5909;&#x7570;&#x3057;&#x305F;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x3080;&#x3001;&#x9006;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; RPV &#x3092;&#x6551;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x30D1;&#x30E9;&#x30DF;&#x30AF;&#x30BD; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x6982;&#x5FF5;&#x306E;&#x8A3C;&#x660E;&#x3068;&#x3057;&#x3066; RPV &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x8AAC;&#x660E;&#x3068;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B; peste des &#x30D7;&#x30C6;&#x30A3;&#x53CD;&#x82BB;&#x52D5;&#x7269;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (PPRV) &#x3053;&#x306E;&#x6CD5;&#x306E;&#x9069;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x8A71;&#x3057;&#x5408;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D1;&#x30E9;&#x30DF;&#x30AF;&#x30BD; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;: &#x725B;&#x75AB;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x5426;&#x5B9A;&#x7684;&#x306B;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Rinderpest &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (RPV) &#xC9C0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC15;&#xBA78; &#xC548;&#xC804; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xAC10;&#xC1E0; &#xBC31;&#xC2E0; &#xD558; &#xACE0; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xB3D9;&#xBC18;&#xC790; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, serologically &#39;&#xAD6C;&#xBCC4; &#xC790;&#xC5F0;&#xC2A4;&#xB7FD; &#xAC8C; &#xAC10;&#xC5FC; &#xBC0F; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885; &#xB3D9;&#xBB3C;&#39; &#xBB34; &#xB2A5;&#xB825; (&#xB514;&#xBC14;)&#xB97C; &#xBAA8;&#xB450; &#xBC15;&#xBA78; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xC644;&#xB8CC; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xAC78;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC744; &#xC758;&#xBBF8; &#xD558; &#xACE0; &#xAD6D;&#xAC00; &#xAD00;&#xC5EC;&#xC758; &#xACBD;&#xC81C;&#xC801; &#xBD80;&#xB2F4; &#xD06C;&#xAC8C; &#xACBD;&#xC6B0; &#xB514;&#xBC14; &#xCEE8;&#xC149;&#xC774; &#xD589; &#xBC31;&#xC2E0; &#xBC0F; &#xB3D9;&#xBC18;&#xC790; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294;. RPV &#xBC15;&#xBA78; &#xCEA0;&#xD398;&#xC778; &#xAE30;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; RPV&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; serosurveillance&#xB294; &#xC8FC;&#xB85C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xACBD;&#xC7C1;&#xB825; &#xC788;&#xB294; ELISA&#xB294; RPV &#xD2B9;&#xC815; (C1) &#xD074;&#xB860; &#xD56D; &#xCCB4; (mAb) &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; haemagglutinin (H) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC10;&#xB3C5;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;&#xC774; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB514;&#xBC14; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC744; &#xCDA9;&#xC871; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC18C;&#xC124;&#xC758; &#xC138;&#xB300;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC1C;&#xB150;&#xC758; &#xC99D;&#xBA85;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; morbillivirus &#xB514;&#xBC14; &#xBC31;&#xC2E0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xC804;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC0F; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; C1 mAb &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558; &#xACE0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; &#xC678; &#xD4E8;&#xC804;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD3C9;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD5D8;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC804;&#xC7A5; &#xD074;&#xB860;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; epitopes&#xB97C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558; &#xACE0; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; RPV &#xC5ED;&#xBC29;&#xD5A5; &#xC720;&#xC804;&#xD559; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD6C;&#xC870;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; RPV &#xAC1C;&#xB150;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD45C;&#xC2DC; morbillivirus &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; peste des petits ruminants &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (PPRV)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC801;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xB17C;&#xC758; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Morbillivirus &#xBC31;&#xC2E0;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744;: &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; rinderpest &#xBC31;&#xC2E0;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La erradicaci&oacute;n del virus de la peste bovina (RPV) del mundo fue posible gracias a la disponibilidad de caja fuerte y eficaz viven atenuada de la vacuna y una prueba de diagn&oacute;stico de compa&ntilde;ero adecuado. Sin embargo, la imposibilidad de distinguir serol&oacute;gico &#39; entre naturalmente infectados y animales vacunados &#39; (DIVA) signific&oacute; que ambos el tiempo necesario para completar el programa de erradicaci&oacute;n y la carga econ&oacute;mica en los pa&iacute;ses involucrados fue significativamente mayor que si una vacuna y compa&ntilde;ero prueba diagn&oacute;stica que cumplieron con el concepto DIVA hubiera estado disponible. Durante la campa&ntilde;a de erradicaci&oacute;n de RPV vigilancia serol&oacute;gica para RPV se bas&oacute; principalmente en un ELISA competitivo utilizando un RPV espec&iacute;fico (C1) anticuerpo monoclonal (mAb) dirigido contra la prote&iacute;na viral hemaglutinina (H) pero esta prueba no fue capaz de cumplir con los requisitos de la DIVA. Para dar una prueba de concepto para la generaci&oacute;n de la novela ensayo vacunas DIVA de morbillivirus hemos identificado, por phage display y transformado residuos cr&iacute;ticos para el enlace de mAb C1 y evaluar la funcionalidad de los mutantes en una fusi&oacute;n in vitro. Finalmente hemos incorporado epitopos mutado en un clon de longitud completa y rescatado a RPV recombinante mediante t&eacute;cnicas de gen&eacute;tica inversa. Aqu&iacute; describimos un nuevo mecanismo de marca morbillivirus vacunas, usando RPV como una prueba de concepto y discutir la aplicabilidad de este m&eacute;todo para el desarrollo de vacunas marcadas para virus de peste des petits rumiantes (PPRV).

Dalan Bailey

Section of Virology,
Department of Medicine,
Section of Virology, Department of Medicine

Imperial College London

Identification of Protein Interacting Partners Using Tandem Affinity Purification

Dalan Bailey

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Imperial College London

Identification of Protein Interacting Partners Using Tandem Affinity Purification

Section of Virology,
Department of Medicine,
Section of Virology, Department of Medicine