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Site-specific Bacterial Chromosome Engineering: &#934;C31 Integrase Mediated Cassette Exchange (IMCE)

The bacterial chromosome may be used to stably maintain foreign DNA in the mega-base range1. Integration into the chromosome circumvents issues such as ...

University of Waterloo

&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x8C46;&#x79D1;&#x690D;&#x7269;&#x5171;&#x751F;&#x8D39;&#x6C0F;&#x4E2D;&#x534E;&#x6839;&#x7624;&#x83CC;&#x82DC;&#x84FF;&#x4E2D;&#x7684;&#x7837;&#x6BD2;&#x79CD;&#x65B0;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x591A;&#x6570; ars operons &#x7531;&#x4E09;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x3001; arsR (&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x8282;&#x5242;)&#x3001; [&#x4F5C;&#x4E3A; (OH) 3 / H + antiporter]&#xFF0C;arsB &#x548C; arsC &#xFF08;&#x7837;&#x9178;&#x76D0;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#xFF09; &#x7EC4;&#x6210;&#xFF0C;S.&#x82DC;&#x84FF;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x9C7C;&#x7901;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x5305;&#x62EC;&#x4EE3;&#x66FF; arsB aquaglyceroporin &#xFF08;aqpS&#xFF09;&#x3002;AqpS &#x7684;&#x7837;&#x6297;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x6709;&#x8DA3;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4EE5;&#x524D;&#x663E;&#x793A; aquaglyceroporin &#x9891;&#x9053; adventitiously &#x4FC3;&#x8FDB;&#x5438;&#x6536;&#x7837;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5448;&#x73B0;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x7837;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x4E86;&#x89E3;&#x5728;&#x6297;&#x7837; aqpS &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;S.&#x82DC;&#x84FF; aqpS &#x548C; arsC &#x53D7;&#x963B;&#x5206;&#x522B;&#x3002;AqpS &#x4E2D;&#x65AD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x589E;&#x52A0;&#x8010;&#x7837;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x7837;&#x9178;&#x76D0;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136; arsC &#x4E2D;&#x65AD;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x663E;&#x793A;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5BF9;&#x7837;&#x9178;&#x76D0;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x5B8C;&#x597D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x8FD0;&#x8F93;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; AqpS S.&#x82DC;&#x84FF;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x9C7C;&#x7901;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4FBF;&#x5229;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7684;&#x7837;&#x53EA;&#x6709;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;S.&#x82DC;&#x84FF; aqpS &#x548C; arsC &#x4E00;&#x682A;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7F3A;&#x4E4F; ars &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x4E2D;&#x7684;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x8865;&#x5145;&#x7837;&#x9178;&#x76D0;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E9A;&#x7837;&#x9178;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#xFF0C;&#x5F53;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x73AF;&#x5883;&#x7837;&#x9178;&#xFF0C;&#x7837;&#x9178;&#x76D0;&#x8FDB;&#x5165;&#x78F7;&#x9178;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x8FC7;&#x683C;&#x548C;&#x7531; ArsC &#x51CF;&#x81F3;&#x4E9A;&#x7837;&#x9178;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7; AqpS &#x4E0B;&#x5761;&#x8FD0;&#x52A8;&#x5185;&#x90E8;&#x751F;&#x6210;&#x4E9A;&#x7837;&#x9178;&#x6D41;&#x51FA;&#x8BE5;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;AqpS &#x8D4B;&#x4E88; ArsC &#x50AC;&#x5316;&#x51CF;&#x5C11;&#x8010;&#x8010;&#x7837;&#x9178;&#x76D0;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x5728;&#x6297;&#x7837;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0E; aquaglyceroporin &#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x62A5;&#x544A;&#x3002;

&#x8C46;&#x79D1;&#x690D;&#x7269;&#x5171;&#x751F;&#x8D39;&#x6C0F;&#x4E2D;&#x534E;&#x6839;&#x7624;&#x83CC;&#x82DC;&#x84FF;&#x4E2D;&#x7684;&#x7837;&#x6BD2;&#x79CD;&#x65B0;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;

We report a novel pathway for arsenic detoxification in the legume symbiont Sinorhizobium meliloti. Although a majority of ars operons consist of three genes, arsR (transcriptional regulator), arsB [As(OH)3/H+ antiporter], and arsC (arsenate reductase), the S. meliloti ars operon includes an aquaglyceroporin (aqpS) in place of arsB. The presence of AqpS in an arsenic resistance operon is interesting, since aquaglyceroporin channels have previously been shown to adventitiously facilitate uptake of arsenite into cells, rendering them sensitive to arsenite. To understand the role of aqpS in arsenic resistance, S. meliloti aqpS and arsC were disrupted individually. Disruption of aqpS resulted in increased tolerance to arsenite but not arsenate, while cells with an arsC disruption showed selective sensitivity to arsenate. The results of transport experiments in intact cells suggest that AqpS is the only protein of the S. meliloti ars operon that facilitates transport of arsenite. Coexpression of S. meliloti aqpS and arsC in a strain of E. coli lacking the ars operon complemented arsenate but not arsenite sensitivity. These results imply that, when S. meliloti is exposed to environmental arsenate, arsenate enters the cell through phosphate transport systems and is reduced to arsenite by ArsC. Internally generated arsenite flows out of the cell by downhill movement through AqpS. Thus, AqpS confers arsenate resistance together with ArsC-catalyzed reduction. This is the first report of an aquaglyceroporin with a physiological function in arsenic resistance.

Novel pathway for arsenic detoxification in the legume symbiont Sinorhizobium meliloti.

Nous rapportons une nouvelle voie pour la d&eacute;sintoxication de l&#39;arsenic dans le l&eacute;gumineuses symbiont Sinorhizobium meliloti. M&ecirc;me si une majorit&eacute; des op&eacute;rons d&#39;ars se composent de trois g&egrave;nes, arsR (r&eacute;gulateur transcriptionnel), arsB [comme antiport de 3 / H + (OH)] et arsC (r&eacute;ductase ars&eacute;niate), l&#39;op&eacute;ron ars de S. meliloti comprend une aquaglyceroporin (aqpS) &agrave; la place de l&#39;arsB. La pr&eacute;sence de l&#39;AqpS dans un op&eacute;ron de r&eacute;sistance de l&#39;arsenic est int&eacute;ressante, car aquaglyceroporin canaux ont &eacute;t&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment d&eacute;montr&eacute; que fortuitement faciliter l&#39;adoption d&#39;ars&eacute;nite dans les cellules, les rendant sensibles &agrave; l&#39;ars&eacute;nite. Pour comprendre le r&ocirc;le de l&#39;aqpS dans la r&eacute;sistance de l&#39;arsenic, arsC et S. meliloti aqpS ont &eacute;t&eacute; perturb&eacute;es individuellement. Perturbation des aqpS a entra&icirc;n&eacute; une tol&eacute;rance accrue d&#39;ars&eacute;nite, mais pas d&#39;ars&eacute;niate, tandis que les cellules avec un perturbation de l&#39;arsC ont montr&eacute; une sensibilit&eacute; s&eacute;lective &agrave; l&#39;ars&eacute;niate. Les r&eacute;sultats des exp&eacute;riences de transport dans les cellules intactes sugg&egrave;rent que l&#39;AqpS est la seule prot&eacute;ine de l&#39;op&eacute;ron d&#39;ars S. meliloti qui facilite le transport d&#39;ars&eacute;nite. Coexpression de S. meliloti aqpS et arsC dans une souche d&#39;Escherichia coli, manquant de l&#39;op&eacute;ron ars compl&eacute;t&eacute;e ars&eacute;niate mais pas sensibilit&eacute; d&#39;ars&eacute;nite. Ces r&eacute;sultats laissent entendre que, lorsque S. meliloti est expos&eacute;e &agrave; l&#39;ars&eacute;niate environnementale, ars&eacute;niate p&eacute;n&egrave;tre dans la cellule par le biais de syst&egrave;mes de transport de phosphate et est r&eacute;duit &agrave; l&#39;ars&eacute;nite de ArsC. En interne ont g&eacute;n&eacute;r&eacute; des flux de l&#39;ars&eacute;nite hors de la cellule par le mouvement de descente &agrave; travers l&#39;AqpS. Ainsi, AqpS conf&egrave;re la r&eacute;sistance chromat&eacute; avec r&eacute;duction catalys&eacute;e par l&#39;ArsC. Il s&#39;agit de la premi&egrave;re mention d&#39;un aquaglyceroporin avec une fonction physiologique dans la r&eacute;sistance de l&#39;arsenic.

Nouvelle voie pour la d&eacute;sintoxication de l&#39;arsenic dans le l&eacute;gumineuses symbiont Sinorhizobium meliloti.

Divulgamos un nuevo camino para la desintoxicaci&oacute;n de ars&eacute;nico en la leguminosa simbionte Sinorhizobium meliloti. Aunque una mayor&iacute;a de operones de ars consisten de tres genes, arsR (regulador transcripcional), arsB [como antiporter de 3 / H + (OH)] y arsC (reductasa de arseniato), el oper&oacute;n de S. meliloti ars incluye un aquaglyceroporin (aqpS) en lugar de arsB. La presencia de AqpS en un oper&oacute;n de resistencia de ars&eacute;nico es interesante, ya que aquaglyceroporin canales previamente han demostrado estando facilitar la absorci&oacute;n de arsenito en las c&eacute;lulas, haci&eacute;ndolas sensibles a arsenito. Para entender el papel de aqpS en resistencia de ars&eacute;nico, arsC y S. meliloti aqpS fueron interrumpidas individualmente. Interrupci&oacute;n de aqpS result&oacute; en mayor tolerancia a arsenito pero no arseniato, mientras que las c&eacute;lulas con una interrupci&oacute;n de la arsC demostraron sensibilidad selectiva a arseniato. Los resultados de experimentos de transporte en las c&eacute;lulas intactas sugieren que AqpS es la &uacute;nica prote&iacute;na del oper&oacute;n de ars de S. meliloti que facilita el transporte de arsenito. Coexpression de S. meliloti aqpS y arsC en una cepa de e. coli que carece el oper&oacute;n ars complementa arseniato pero no arsenito sensibilidad. Estos resultados implican que, cuando S. meliloti es expuesto al medio ambiente arseniato, arseniato entra en la c&eacute;lula a trav&eacute;s de sistemas de transporte de fosfato y se reduce a arsenito por ArsC. Generados internamente arsenito fluye fuera de la c&eacute;lula por el movimiento de descenso a trav&eacute;s de AqpS. As&iacute;, AqpS confiere resistencia de arseniato junto con la reducci&oacute;n de ArsC-catalizada. Este es el primer informe de un aquaglyceroporin con una funci&oacute;n fisiol&oacute;gica en la resistencia de ars&eacute;nico.

Nuevo camino para la desintoxicaci&oacute;n de ars&eacute;nico en la leguminosa simbionte Sinorhizobium meliloti.

Wir berichten &uuml;ber einen neuartigen Weg f&uuml;r Arsen Entgiftung in die H&uuml;lsenfrucht Symbiont Sinorhizobium Meliloti. Obwohl eine Mehrheit der Ars Operone bestehen aus drei Gene, ArsR (transkriptionelle Regler), ArsB [als (OH) 3 / H +-Antiporter] und ArsC (Arsenat-Reduktase), enth&auml;lt die S. Meliloti Ars Operon ein Aquaglyceroporin (AqpS) anstelle ArsB. Das Vorhandensein von AqpS in eine Arsen-Widerstand-Operon ist interessant, da Aquaglyceroporin Kan&auml;le &ndash; Aufnahme von arsenit in Zellen, erleichtern sie empfindlich auf arsenit Rendern zuvor gezeigt worden sind. Um die Rolle der AqpS Arsen Widerstand zu verstehen, wurden S. Meliloti AqpS und ArsC individuell gest&ouml;rt. Unterbrechung der AqpS ergab erh&ouml;hte Toleranz zu arsenit aber nicht Arsenat, w&auml;hrend Zellen bei einer St&ouml;rung der ArsC selektive Sensibilit&auml;t f&uuml;r Arsenat zeigte. Die Ergebnisse der Transport Experimente in intakten Zellen deuten auf AqpS das einzige Protein von den S. Meliloti Ars Operon, die Bef&ouml;rderung von arsenit erleichtert. Coexpression von S. Meliloti AqpS und ArsC in einem Stamm von E. Coli fehlt die Ars-Operon erg&auml;nzt Arsenat aber nicht arsenit Empfindlichkeit. Diese Ergebnisse bedeuten, dass, wenn S. Meliloti Umwelt Arsenat ausgesetzt ist, Arsenat die Zelle durch Phosphat-Transportsysteme betritt und ArsC auf arsenit reduziert ist. Intern erzeugt arsenit flie&szlig;t aus der Zelle durch bergab-Bewegung durch AqpS. So verleiht AqpS Arsenat Widerstand zusammen mit ArsC-katalysierte Reduktion. Dies ist der erste Bericht von einer Aquaglyceroporin mit einer physiologischen Funktion im Arsen Widerstand.

Neuartige Wegbereiter f&uuml;r Arsen Entgiftung in die H&uuml;lsenfrucht Symbiont Sinorhizobium Meliloti.

Riportiamo un romanzo pathway per la disintossicazione di arsenico nel legume simbionte Sinorhizobium meliloti. Sebbene la maggioranza degli operoni ars consistono di tre geni, arsR (regolatore di transcriptional), arsB [come trasportatore del 3 / H + (OH)] e arsC (reduttasi arsenato), l&#39;operone di ars S. meliloti include un aquaglyceroporin (glicocalice) al posto di arsB. La presenza del glicocalice in un operone di resistenza di arsenico &egrave; interessante, in quanto aquaglyceroporin canali hanno dimostrati in precedenza casualmente facilitare assorbimento di arsenito nelle cellule, rendendoli sensibili alla arsenito. Per comprendere il ruolo del glicocalice nella resistenza di arsenico, arsC e S. meliloti glicocalice sono stati perturbati individualmente. Interruzione del glicocalice ha portato maggiore tolleranza a arsenito ma non arseniato, mentre le cellule con una perturbazione arsC ha mostrato sensibilit&agrave; selettiva di arseniato. I risultati degli esperimenti di trasporto nelle cellule intatte suggeriscono che il glicocalice &egrave; l&#39;unica proteina dell&#39;operone ars S. meliloti che facilita il trasporto di arsenito. Coexpression di S. meliloti glicocalice e arsC in un ceppo di e. coli manca l&#39;operone ars completato arsenato ma non arsenito sensibilit&agrave;. Questi risultati implicano che, quando S. meliloti &egrave; esposto a arsenato ambientale, arseniato entra nella cellula attraverso sistemi di trasporto di fosfato e viene ridotto a arsenito ArsC. Generato internamente arsenito tracima dalla cella di movimento in discesa attraverso il glicocalice. Cos&igrave;, glicocalice conferisce resistenza arsenato insieme con riduzione catalizzata ArsC. Questo &egrave; il primo rapporto di un aquaglyceroporin con una funzione fisiologica nella resistenza di arsenico.

Romanzo pathway per la disintossicazione di arsenico nel legume simbionte Sinorhizobium meliloti.

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&#xCF69;&#xACFC; &#xC2DD;&#xBB3C; symbiont Sinorhizobium meliloti&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xC18C; &#xD574;&#xB3C5;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBE44; &#xBC1C;&#xD55C; &#xD1B5;&#xB85C;.

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&#x7EFC;&#x5408;&#x6027;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5B66;: &#x65B0;&#x578B;&#x8BB0;&#x8005;&#x82DC;&#x84FF;&#x4E2D;&#x534E;&#x6839;&#x7624;&#x83CC;&#x57FA;&#x56E0;&#x878D;&#x5408;&#x5E93;&#x7684;&#x6784;&#x5EFA;&#x3002;

As a means of investigating gene function, we developed a robust transcription fusion reporter vector to measure gene expression in bacteria. The vector, pTH1522, was used to construct a random insert library for the Sinorhizobium meliloti genome. pTH1522 replicates in Escherichia coli and can be transferred to, but cannot replicate in, S. meliloti. Homologous recombination of the DNA fragments cloned in pTH1522 into the S. meliloti genome generates transcriptional fusions to either the reporter genes gfp(+) and lacZ or gusA and rfp, depending on the orientation of the cloned fragment. Over 12,000 fusion junctions in 6,298 clones were identified by DNA sequence analysis, and the plasmid clones were recombined into S. meliloti. Reporter enzyme activities following growth of these recombinants in complex medium (LBmc) and in minimal medium with glucose or succinate as the sole carbon source allowed the identification of genes highly expressed under one or more growth condition and those expressed at very low to background levels. In addition to generating reporter gene fusions, the vector allows Flp recombinase-directed deletion formation and gene disruption, depending on the nature of the cloned fragment. We report the identification of genes essential for growth on complex medium as deduced from an inability to recover recombinants from pTH1522 clones that carried fragments internal to gene or operon transcripts. A database containing all the gene expression activities together with a web interface showing the precise locations of reporter fusion junctions has been constructed (www.sinorhizobium.org).

An integrated approach to functional genomics: construction of a novel reporter gene fusion library for Sinorhizobium meliloti.

Le but d&#39;&eacute;tudier la fonction des g&egrave;nes, nous avons d&eacute;velopp&eacute; un vecteur de journaliste de fusion transcription robuste permettant de mesurer l&#39;expression g&eacute;nique chez les bact&eacute;ries. Le vecteur, pTH1522, fut utilis&eacute; pour construire une biblioth&egrave;que d&#39;insertion al&eacute;atoire pour le g&eacute;nome de Sinorhizobium meliloti. pTH1522 r&eacute;plique chez Escherichia coli et peuvent &ecirc;tre transf&eacute;r&eacute;es vers, mais ne peut pas r&eacute;pliquer en, S. meliloti. La recombinaison des fragments d&#39;ADN clon&eacute;s dans pTH1522 dans le g&eacute;nome de S. meliloti g&eacute;n&egrave;re des fusions de transcriptionnelles de la gfp(+) de g&egrave;nes de journaliste et lacZ ou gusA et DP, en fonction de l&#39;orientation du fragment clon&eacute;. Plus de 12 000 jonctions de fusion dans 6 298 clones ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;es par l&#39;analyse de s&eacute;quences d&#39;ADN, et les clones de plasmide sont recombin&eacute;s en S. meliloti. L&#39;activit&eacute; enzymatique journaliste suite &agrave; une croissance de ces recombinants dans un milieu complexe (LBmc) et dans un milieu minimal avec le glucose ou le succinate comme seule source de carbone a permis l&#39;identification de g&egrave;nes exprim&eacute;s fortement sous l&#39;une ou plus &eacute;tat de croissance et ceux &agrave; tr&egrave;s faible aux niveaux de fond. En plus de g&eacute;n&eacute;rer des fusions de g&egrave;nes de journaliste, le vecteur permet la formation ax&eacute;e sur la recombinase suppression Flp et d&eacute;sorganisation du g&egrave;ne, selon la nature du fragment clon&eacute;. Nous rapportons l&#39;identification de g&egrave;nes essentiels &agrave; la croissance sur milieu complexe comme le d&eacute;duire d&#39;une incapacit&eacute; &agrave; r&eacute;cup&eacute;rer des recombinants de clones de pTH1522 qui a effectu&eacute; les fragments internes aux transcriptions de g&egrave;ne ou op&eacute;ron. Une base de donn&eacute;es contenant toutes les activit&eacute;s d&#39;expression de g&egrave;ne avec une interface web montrant les emplacements pr&eacute;cis de reporter des jonctions de fusion a &eacute;t&eacute; construit (www.sinorhizobium.org).

Une approche int&eacute;gr&eacute;e pour la g&eacute;nomique fonctionnelle : construction d&#39;une biblioth&egrave;que de fusion de g&egrave;ne de journaliste roman pour Sinorhizobium meliloti.

Als Mittel der Genfunktion untersuchen entwickelten wir einen robuste Transkription Verschmelzung Reporter Vektor um Genexpression in Bakterien zu messen. Der Vektor, pTH1522, wurde verwendet, um eine zuf&auml;llige Insert-Bibliothek f&uuml;r das Sinorhizobium Meliloti Genom zu konstruieren. pTH1522 in Escherichia coli repliziert und k&ouml;nnen &uuml;bertragen werden, aber kann nicht replizieren in, S. Meliloti. Homologe Rekombination der DNA-Fragmente, die geklont in pTH1522 in das S. Meliloti Genom generiert transkriptionelle Fusionen auf den Reporter Gene gfp(+) und LacZ oder GusA und Rfp, je nach Ausrichtung des geklonten Fragments. Mehr als 12.000 Verschmelzung Kreuzungen in 6.298 Klone wurden durch DNA-Sequenzanalyse identifiziert und die Plasmid-Klone wurden in S. Meliloti rekombiniert. Reporter-Enzymaktivit&auml;ten Wachstum von diesen recombinants zu komplexen Medium (LBmc) und in Minimalmedium ausgestrichen mit Glukose oder Succinat zu folgen, wie die einzige Kohlenstoffquelle erlaubt die Identifizierung von Genen ausgedr&uuml;ckt sehr unter einem oder mehr Wachstum Zustand und diejenigen ausgedr&uuml;ckt bei sehr niedrig, um Hintergrund-Niveaus. Zus&auml;tzlich zum Generieren von Reporter-gen Fusionen erm&ouml;glicht der Vektor Flp Recombinase-verwiesene L&ouml;schung Bildung und gen St&ouml;rung, abh&auml;ngig von der Art des geklonten Fragments. Die Identifizierung von Genen, die unabdingbare Voraussetzung f&uuml;r Wachstum Berichten &uuml;ber komplexe Medium wir wie abgeleitet aus einer Unf&auml;higkeit, pTH1522 Klone recombinants zu erholen, die Fragmente f&uuml;r gen oder Operon Transkripte intern durchgef&uuml;hrt. Eine Datenbank, die alle die Gen-Ausdruck-Aktivit&auml;ten sowie ein Web-Interface, das zeigen die genauen Standorte der Reporter Verschmelzung Kreuzungen wurden gebaut (www.sinorhizobium.org).

Ein integriertes Konzept f&uuml;r funktionelle Genomik: Bau einer neuartigen Reporter-gen-Fusion-Bibliothek f&uuml;r Sinorhizobium Meliloti.

Come un mezzo per indagare la funzione del gene, abbiamo sviluppato un vettore reporter fusione di trascrizione robusto per misurare l&#39;espressione genica nei batteri. Il vettore, pTH1522, &egrave; stato utilizzato per costruire una libreria di inserimento casuale per il genoma di Sinorhizobium meliloti. pTH1522 replica in Escherichia coli e pu&ograve; essere trasferito a, ma non possono replicare in, S. meliloti. Ricombinazione omologa dei frammenti di DNA clonato in pTH1522 nel genoma S. meliloti genera fusioni trascrizionali il reporter geni gfp(+) e lacZ o gusA e rfp, a seconda dell&#39;orientamento del frammento clonato. Oltre 12.000 giunzioni di fusione in 6.298 cloni sono state identificate mediante analisi di sequenza del DNA, e i cloni del plasmide sono stati ricombinati in S. meliloti. Le attivit&agrave; di enzima reporter seguendo la crescita di questi recombinants in complesso medio (LBmc) e in media minimo con glucosio o succinato come l&#39;unica fonte di carbonio ha permesso l&#39;identificazione di geni altamente espressi sotto una o pi&ugrave; condizioni di crescita e quelli espressi a bassissimi livelli di sfondo. Oltre a generare fusioni del gene reporter, il vettore consente formazione eliminazione diretto ricombinasi Flp e rottura del gene, a seconda della natura del frammento clonato. Riportiamo l&#39;identificazione di geni essenziali per crescita sul medio complesso come dedotto da un&#39;incapacit&agrave; di riprendersi i recombinants pTH1522 cloni che portava frammenti interni al gene o operone trascrizioni. Un database contenente tutte le attivit&agrave; di espressione genica insieme ad un&#39;interfaccia web mostrando i luoghi precisi del reporter di giunzioni di fusione &egrave; stato costruito (www.sinorhizobium.org).

Un approccio integrato alla genomica funzionale: costruzione di una libreria di fusione del gene reporter romanzo per Sinorhizobium meliloti.

&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x624B;&#x6BB5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x8EE2;&#x5199;&#x878D;&#x5408;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3001;pTH1522&#x3001;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x633F;&#x5165;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x6839;&#x7C92;&#x30CE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30E5;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9; &#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;pTH1522 &#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x3057;&#x8EE2;&#x9001;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C; S. &#x30CE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30E5;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x3067;&#x3001;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306E; pTH1522 S. &#x30CE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30E5;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9; &#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x8907;&#x88FD; DNA &#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; gfp(+) &#x3068; lacZ &#x307E;&#x305F;&#x306F; gusA &#x3068;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x65B9;&#x5411;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x3001;rfp &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x304C;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;12,000 &#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x63A5;&#x5408; 6,298 &#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E; dna &#x5869;&#x57FA;&#x914D;&#x5217;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; &#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3; S. &#x30CE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30E5;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x306B;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x305F;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x9175;&#x7D20;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x4E0B;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3088;&#x308A;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x6761;&#x4EF6;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x70AD;&#x7D20;&#x6E90;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; recombinants &#x3092;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5A92;&#x4F53; (LBmc) &#x3068;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B3;&#x30CF;&#x30AF;&#x9178;&#x3068;&#x6700;&#x5C0F;&#x5A92;&#x4F53;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x6B21;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF; &#x30B0;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9; &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4F4E;&#x3044;&#x3002;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;Flp recombinase &#x76E3;&#x7763;&#x524A;&#x9664;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7834;&#x58CA;&#x3092;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Recombinants &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x306B;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x65AD;&#x7247;&#x3092;&#x904B;&#x3093;&#x3060; pTH1522 &#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x30EA;&#x30AB;&#x30D0;&#x30EA;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304B;&#x3089;&#x307F;&#x305F;&#x8907;&#x5408;&#x5A92;&#x4F53;&#x4E0A;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x878D;&#x5408;&#x63A5;&#x5408;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x5834;&#x6240;&#x3092;&#x793A;&#x3059; web &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8868;&#x73FE;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9; (www.sinorhizobium.org) &#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7D71;&#x5408;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;: &#x5C0F;&#x8AAC;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x878D;&#x5408;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x6839;&#x7C92;&#x30CE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30E5;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x306E;&#x5EFA;&#x8A2D;&#x3002;

&#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xC218;&#xB2E8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC804;&#xC0AC; &#xD4E8;&#xC804; &#xAE30;&#xC790; &#xBCA1;&#xD130; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xBCA1;&#xD130;, pTH1522, Sinorhizobium meliloti &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC784;&#xC758; &#xC0BD;&#xC785; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. pTH1522 &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; &#xC804;&#xC1A1;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; S. meliloti&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC81C;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. S. meliloti &#xAC8C;&#xB188;&#xC73C;&#xB85C; Pth1522&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; DNA &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; transcriptional fusions &#xC911; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; gfp(+) &#xBC0F; lacZ &#xB610;&#xB294; gusA &#xBC0F; rfp, &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; &#xB2E8;&#xD3B8;&#xC758; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xD074;&#xB860; S. meliloti&#xB85C; &#xC62E;&#xAE30;&#xB294; &#xD588;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; 6,298 &#xD074;&#xB860;&#xC5D0; 12000 &#xD4E8;&#xC804; &#xC811;&#xD569; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBBF8;&#xB9CC; &#xD558;&#xB098; &#xB610;&#xB294; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xC131;&#xC7A5; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC640; &#xADF8; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xD0C4;&#xC18C; &#xC18C;&#xC2A4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; recombinants &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB9E4;&#xCCB4; (LBmc)&#xC640; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xB610;&#xB294; &#xD638;&#xBC15;&#xACFC; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAE30;&#xC790; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBC30;&#xACBD; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB0AE;&#xC740;. &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; fusions &#xC0DD;&#xC131; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xBCA1;&#xD130; Flp recombinase &#xAC10;&#xB3C5; &#xC0AD;&#xC81C; &#xD615;&#xC131;&#xACFC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC7A5;&#xC560;, &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC740; &#xC870;&#xAC01; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB610;&#xB294; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xB179;&#xCDE8; &#xB85D;&#xC744; &#xC804;&#xB2EC; &#xD558;&#xB294; pTH1522 &#xD074;&#xB860; recombinants &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xBB34; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD94;&#xB860;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD4E8;&#xC804; &#xC811;&#xD569; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xC6F9; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD568;&#xAED8; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xC791;&#xC5C5; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBAA8;&#xB450;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4; &#xC0DD;&#xC131; (www.sinorhizobium.org).

&#xAE30;&#xB2A5; &#xC720;&#xC804;&#xCCB4;&#xD559;&#xC744; &#xD1B5;&#xD569;&#xB41C; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;: Sinorhizobium meliloti&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC735;&#xD569; &#xB3C4;&#xC11C;&#xAD00;&#xC758; &#xAC74;&#xC124;.

A fin de investigar la funci&oacute;n del gen, hemos desarrollado un vector de reportero de fusi&oacute;n de transcripci&oacute;n robusto para medir la expresi&oacute;n g&eacute;nica en bacterias. El vector, pTH1522, se utiliz&oacute; para construir una biblioteca de insertar al azar para el genoma de Sinorhizobium meliloti. pTH1522 replica en Escherichia coli y pueden ser transferidos a, pero no pueden replicar en, S. meliloti. Recombinaci&oacute;n hom&oacute;loga de los fragmentos de ADN clonados en pTH1522 en el genoma de S. meliloti genera fusiones transcripcionales ya sea el reportero genes gfp(+) y lacZ o gusA y rfp, dependiendo de la orientaci&oacute;n del fragmento clonado. M&aacute;s de 12.000 uniones de fusi&oacute;n en 6.298 clones fueron identificados por el an&aacute;lisis de la secuencia de ADN, y los clones de pl&aacute;smido se recombinan en S. meliloti. Las actividades enzim&aacute;ticas de la reportera tras el crecimiento de estos recombinantes en medio complejo (LBmc) y en medio m&iacute;nimo con glucosa o succinato como la &uacute;nica fuente de carbono permiti&oacute; la identificaci&oacute;n de genes altamente expresada en una o m&aacute;s condiciones de crecimiento y los expresan por baj&iacute;simos niveles de fondo. Adem&aacute;s de generar fusiones de gen reportero, el vector permite Flp eliminaci&oacute;n dirigida por Recombinasa formaci&oacute;n y alteraci&oacute;n de genes, dependiendo de la naturaleza del fragmento clonado. Divulgamos la identificaci&oacute;n de genes esenciales para el crecimiento en medio complejo, como se deduce de la incapacidad de recuperarse recombinantes de clones de pTH1522 que llev&oacute; a fragmentos internos de las transcripciones del gene u oper&oacute;n. Una base de datos que contiene todas las actividades de expresi&oacute;n del gen junto con una interfaz web que muestra la ubicaci&oacute;n precisa del reportero uniones de fusi&oacute;n ha sido construido (www.sinorhizobium.org).

Un enfoque integrado para la gen&oacute;mica funcional: construcci&oacute;n de una biblioteca de fusi&oacute;n del gen reportero novela de Sinorhizobium meliloti.

&#x82DC;&#x84FF;&#x4E2D;&#x534E;&#x6839;&#x7624;&#x83CC;&#x8FDB;&#x5165;&#x591A;&#x5F62;&#x6027;&#x3001; &#x975E;&#x9664;&#x4EE5; N 2 &#x56FA;&#x6297;&#x82DC;&#x84FF;&#x6839;&#x7624;&#x5185;&#x533A;&#x5206;&#x4ECE;&#x6746;&#x5F62;&#x3001; &#x81EA;&#x7531;&#x751F;&#x6D3B;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x88AB;&#x7814;&#x7A76; minCDE &#x57FA;&#x56E0;&#x5728; bacteroid &#x5206;&#x5316;&#x548C;&#x81EA;&#x7531;&#x751F;&#x6D3B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x77FF;&#x4E95;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4E2D;&#x65AD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5927;&#x3001; &#x80BF;&#x3001; &#x5206;&#x652F;&#x81EA;&#x7531;&#x751F;&#x6D3B;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x5171;&#x751F;&#x77FF;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x56FA;&#x6C2E;&#x4E2D;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x4E0E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x7EA6; 70%&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x5B83;&#x8868;&#x660E; minCDE &#x57FA;&#x56E0;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x9A71;&#x52A8;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7A97;&#x4F53;&#x4F4D;&#x4E8E; 173 minC &#x7684;&#x4E0A;&#x6E38; bp&#x3002;MinCDE &#x57FA;&#x56E0;&#x6709;&#x4EBA;&#x5728;&#x81EA;&#x7531;&#x751F;&#x6D3B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x611F;&#x67D3;&#x533A;&#x548C;&#x5171;&#x751F;&#x533A;&#x7684;&#x82DC;&#x84FF;&#x7ED3;&#x6838; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x81EA;&#x7531;&#x751F;&#x6D3B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x3001; &#x751F;&#x957F;&#x6216;&#x5171;&#x751F; N(2) &#x56FA;&#x5B9A;&#x7684;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D8;&#x5316;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x5220;&#x9664;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x3002;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x6216;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x8BD5;&#x9A8C; Min &#x86CB;&#x767D;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x6539;&#x53D8;&#x5176;&#x6746;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684; S.&#x82DC;&#x84FF; Min &#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x804C;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x548C; S.&#x82DC;&#x84FF; min &#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; S.&#x82DC;&#x84FF;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x5197;&#x4F59;&#x3002;

&#x8D39;&#x6C0F;&#x4E2D;&#x534E;&#x6839;&#x7624;&#x83CC;&#x82DC;&#x84FF;&#x7164;&#x77FF;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5DF2;&#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x5C55;&#x54C1;&#x8C46;&#x79D1;&#x690D;&#x7269;&#x5171;&#x751F;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;

Sinorhizobium meliloti differentiates from rod-shaped, free-living cells into pleomorphic, non-dividing, N(2)-fixing bacteroids within alfalfa root nodules. Here, the role of the minCDE genes in bacteroid differentiation and in free-living cell division is examined. Disruption of the minE gene resulted in large, swollen and branched free-living cells, and in symbiosis a minE mutation resulted in a defect in nitrogen fixation with activity reduced by approximately 70 % compared to the wild-type. It has been demonstrated that the minCDE genes form an operon driven by a promoter located 173 bp upstream of minC. The minCDE genes were expressed in free-living cells and in both the infection zone and the symbiotic zone of alfalfa nodules; however, no changes in the free-living cell morphology, growth or symbiotic N(2) fixation were detected as a result of deletion of these genes. Induced production of individual or combinations of Min proteins in S. meliloti altered its rod-shaped cell morphology. Moreover, cell morphologies resulting from the overexpression of the S. meliloti Min proteins in Escherichia coli suggested similar functions for the E. coli and S. meliloti min genes. These data suggest that there is greater redundancy in the roles of cell division genes in S. meliloti compared with E. coli.

A Sinorhizobium meliloti minE mutant has an altered morphology and exhibits defects in legume symbiosis.

Sinorhizobium meliloti se diff&eacute;rencie des cellules en forme de b&acirc;tonnet, libres en pl&eacute;omorphes, non-divisant, N 2-fixation bact&eacute;ro&iuml;des dans les nodosit&eacute;s de racines de luzerne. Ici, on examine le r&ocirc;le des g&egrave;nes dans la diff&eacute;renciation des bact&eacute;ro&iuml;de et dans la division cellulaire chez minCDE. Perturbation du g&egrave;ne de la minE a entra&icirc;n&eacute; en gros, gonfl&eacute;s et ramifi&eacute;es de cellules libres et en symbiose, une mutation de la minE aboutit &agrave; un d&eacute;faut de fixation de l&#39;azote avec activit&eacute; r&eacute;duite d&#39;environ 70 % par rapport &agrave; la souche sauvage. Il a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute; que la forme de g&egrave;nes de minCDE un op&eacute;ron pilot&eacute;e par un promoteur situ&eacute; 173 PB en amont de minC. Les g&egrave;nes de minCDE ont &eacute;t&eacute; exprim&eacute;s dans les cellules libres et dans la zone de l&#39;infection et la zone symbiotique des nodules de luzerne ; Toutefois, aucun changement dans la morphologie des cellules libres, la croissance ou la fixation symbiotique de n (2) ont &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;s &agrave; la suite de la suppression de ces g&egrave;nes. Induit la production d&#39;individu ou de combinaisons de prot&eacute;ines Min chez S. meliloti alt&eacute;r&eacute; sa morphologie de cellules en forme de b&acirc;tonnet. En outre, les morphologies cellule r&eacute;sultant de la surexpression de prot&eacute;ines S. meliloti Min chez Escherichia coli propos&eacute;e des fonctions similaires pour les e. coli et S. meliloti min g&egrave;nes. Ces donn&eacute;es sugg&egrave;rent qu&#39;il y a une plus grande redondance dans les r&ocirc;les des g&egrave;nes de la division cellulaire chez S. meliloti contre e. coli.

Un mutant de minE Sinorhizobium meliloti a une morphologie alt&eacute;r&eacute;e et pr&eacute;sente des d&eacute;fauts dans la symbiose de la l&eacute;gumineuse.

Sinorhizobium Meliloti unterscheidet sich von Stabf&ouml;rmig, frei lebende Zellen in pleomorphes, nicht teilenden, N 2-Befestigung Bacteroids in Luzerne WURZELKN&Ouml;LLCHEN. Hier wird die Rolle der MinCDE Gene bacteroid Differenzierung und freilebenden Zellteilung untersucht. St&ouml;rung des Gens MinE f&uuml;hrte zu gro&szlig;e, geschwollene und verzweigte frei lebende Zellen, und in Symbiose f&uuml;hrte eine MinE-Mutation einen Defekt im Stickstoff-Fixierung mit T&auml;tigkeit reduziert um etwa 70 % im Vergleich zu den Wildtyp. Es hat gezeigt, dass MinCDE Gene Form ein Operon, angetrieben von einem Projekttr&auml;ger 173 befindet sich bp stromaufw&auml;rts von MinC. Die MinCDE-Gene wurden in frei lebende Zellen und sowohl die Infektion und die symbiotische Zone von Luzerne Kn&ouml;tchen ausgedr&uuml;ckt; jedoch wurden keine &Auml;nderungen in der freilebenden Zellmorphologie, Wachstum oder symbiotische f&ouml;rmlich Fixierung durch L&ouml;schung dieser Gene entdeckt. Induzierte Produktion von einzelnen oder Kombinationen von Min Proteine in S. Meliloti ver&auml;ndert seine st&auml;bchenf&ouml;rmigen Zellmorphologie. Dar&uuml;ber hinaus schlug Zelle Morphologien infolge der &Uuml;berexpression der S. Meliloti Min Proteine in Escherichia coli &auml;hnliche Funktionen f&uuml;r die E. Coli und S. Meliloti min Gene. Diese Daten legen nahe, da&szlig; es mehr Redundanz in den Rollen der Zellteilung Gene in S. Meliloti verglichen mit E. Coli.

Sinorhizobium Meliloti MinE Mutanten hat eine ver&auml;nderte Morphologie und Exponate M&auml;ngel in H&uuml;lsenfrucht Symbiose.

Sinorhizobium meliloti si differenzia da cellule a forma di bastoncello, libero-vivente in pleomorfo, non dividere, N (2)-fissaggio bacteroids all&#39;interno di erba medica noduli della radice. Qui, viene esaminato il ruolo dei geni minCDE in bacteroid differenziazione e nella divisione cellulare libero-vivente. Interruzione del gene della miniera ha provocato grandi, gonfie e ramificate di cellule libero-vivente, e in simbiosi una mutazione miniera ha portato in un difetto nella fissazione dell&#39;azoto con attivit&agrave; ridotta di circa il 70% rispetto al wild-type. &Egrave; stato dimostrato che la forma di geni minCDE un operone guidato da un promotore trova 173 bp a Monte di minC. I geni di minCDE sono stati espressi nelle cellule libero-vivente e la zona di infezione sia la zona simbiotica di noduli di erba medica; Tuttavia, nessun cambiamento nella morfologia cellulare libero-vivente, crescita o fissazione simbiotica del conto sono stato rilevato a seguito di eliminazione di questi geni. Produzione indotta di singoli o combinazioni di proteine Min in S. meliloti alterato la morfologia delle cellule a forma di bastoncello. Inoltre, morfologie di cella risultanti dalla sovraespressione di proteine Min S. meliloti in Escherichia coli suggerito funzioni analoghe per i geni di min e. coli e S. meliloti. Questi dati suggeriscono che c&#39;&egrave; una maggiore ridondanza nei ruoli di divisione delle cellule geni in S. meliloti confrontato con e. coli.

Un mutante di Sinorhizobium meliloti miniera ha una morfologia alterata e presenta difetti in simbiosi leguminose.

&#x6839;&#x7C92;&#x30CE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30E5;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x5F62;&#x306E;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x3001;&#x81EA;&#x7531;&#x751F;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304B;&#x3089;&#x591A;&#x5F62;&#x6027;&#x3001;&#x975E;&#x5206;&#x88C2;&#x3001;N &#xFF08;2&#xFF09;-bacteroids &#x5185;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x6839;&#x7C92;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;minCDE &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; bacteroid &#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x81EA;&#x7531;&#x751F;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9271;&#x5C71;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7834;&#x58CA;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x81EA;&#x7531;&#x751F;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x816B;&#x308C;&#x3084;&#x5206;&#x5C90;&#x7D50;&#x679C;&#x3057;&#x3001;&#x5171;&#x751F;&#x306E;&#x9271;&#x5C71;&#x5909;&#x7570;&#x7A92;&#x7D20;&#x56FA;&#x5B9A;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x3067;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306B;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x7D04; 70 &#xFF05; &#x524A;&#x6E1B;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3068;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;MinCDE &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; &#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x99C6;&#x52D5;&#x3001;173 &#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; bp &#x4E0A;&#x6D41;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C4;&#x306E;&#x3002;MinCDE &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x81EA;&#x7531;&#x751F;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x611F;&#x67D3;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x3068;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x6839;&#x7C92;&#x306E;&#x5171;&#x751F;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x81EA;&#x7531;&#x751F;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5171;&#x751F; N(2) &#x56FA;&#x5B9A;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;.&#x500B;&#x4EBA;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067; S. &#x30CE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30E5;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9; Min &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x305D;&#x306E;&#x68D2;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x5909;&#x5316;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;S. &#x30CE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30E5;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9; Min &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x306F;&#x30A8;&#x30B7;&#x30A7;&#x30EA;&#x30D2;&#x30A2;&#x5C5E;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x304A;&#x3088;&#x3073; S. &#x30CE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30E5;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x5206;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x305F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;S. &#x30CE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30E5;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3067;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x5197;&#x9577;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;.

&#x6839;&#x7C92;&#x30CE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30E5;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x9271;&#x5C71;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x5909;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5F62;&#x614B;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30DE;&#x30E1;&#x79D1;&#x7267;&#x8349;&#x306E;&#x5171;&#x751F;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Sinorhizobium meliloti pleomorphic, &#xBE44; &#xB098;&#xB208; N (2)-&#xC218;&#xC815; bacteroids &#xC54C; &#xD314; &#xD30C; &#xBFCC;&#xB9AC; &#xD639; &#xB0B4;&#xB85C; &#xB9C9;&#xB300; &#xBAA8;&#xC591;&#xAC00; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xD654; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, bacteroid &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xACE0;&#xAC00; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; minCDE &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD06C;&#xACE0; &#xBD80; &#xC5B4; &#xBD84;&#xAE30;&#xAC00; &#xC140; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; &#xAD11;&#xC0B0; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC911;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xACF5;&#xC0DD;&#xC5D0; &#xAD11;&#xC0B0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC57D; 70%&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C8;&#xC18C; &#xACE0;&#xC815;&#xC5D0; &#xACB0;&#xD568;&#xC5D0; &#xACB0;&#xACFC;. &#xBAA8;&#xD130;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xC624; &#xD398;&#xB860;&#xC740; minCDE &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC591;&#xC2DD; &#xC788;&#xB294; 173 &#xC785;&#xC99D; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC0C1;&#xB958; Minc&#xC758; &#xD608;&#xC555;. MinCDE &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xAC00; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC601;&#xC5ED;&#xACFC; &#xC54C; &#xD314; &#xD30C; &#xD639;;&#xC758; &#xACF5;&#xC0DD; &#xC601;&#xC5ED; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xAC00; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;, &#xC131;&#xC7A5; &#xB610;&#xB294; &#xACF5;&#xC0DD; N(2) &#xACE0;&#xC815; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC0AD;&#xC81C;&#xAC00;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC1C;&#xBCC4; &#xB610;&#xB294; &#xC870;&#xD569;&#xC758; &#xBD84; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; S. meliloti&#xC5D0; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xB9C9;&#xB300; &#xBAA8;&#xC591;&#xC758; &#xC140; &#xD615;&#xD0DC; &#xBCC0;&#xACBD;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xBBF8; meliloti &#xBBFC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; overexpression&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB798; &#xC140; &#xBB38;&#xBC95;&#xACFC; E. coli&#xC640; S. meliloti &#xBD84; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC81C;&#xC548;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; S. meliloti&#xC5D0; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xD070; &#xC911;&#xBCF5; &#xC774;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Sinorhizobium meliloti &#xAD11;&#xC0B0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xD615;&#xD0DC;&#xB294; &#xACE0; &#xACB0;&#xD568; &#xCF69;&#xACFC; &#xACF5;&#xC0DD;&#xC5D0; &#xC804;&#xC2DC;.

Sinorhizobium meliloti distingue de las c&eacute;lulas en forma de bastoncillos, vida libre en pleom&oacute;rficos, no se dividen, N 2-fijaci&oacute;n Bacteroides dentro de n&oacute;dulos de ra&iacute;z de alfalfa. Aqu&iacute;, se examina el papel de los genes minCDE bacteroid diferenciaci&oacute;n y divisi&oacute;n de c&eacute;lula de vida libre. Interrupci&oacute;n del gen mina dio lugar a c&eacute;lulas de vida libre grandes, hinchadas y ramificadas, y en simbiosis una mutaci&oacute;n de la mina dio lugar a un defecto en la fijaci&oacute;n de nitr&oacute;geno con actividad reducida en aproximadamente un 70% comparado con el salvaje-tipo. Se ha demostrado que la forma de genes de minCDE un oper&oacute;n impulsado por un promotor situado 173 bp aguas arriba de minC. Los genes de minCDE fueron expresados en c&eacute;lulas de vida libre y en la zona de la infecci&oacute;n y la zona simbi&oacute;tica de n&oacute;dulos de alfalfa; sin embargo, no hay cambios en la morfolog&iacute;a de la c&eacute;lula de vida libre, crecimiento o fijaci&oacute;n simbi&oacute;tica de N(2) fueron detectados como resultado de la eliminaci&oacute;n de estos genes. Producci&oacute;n inducida del individuo o combinaciones de prote&iacute;nas Min en S. meliloti hab&iacute;a alterado su morfolog&iacute;a de la c&eacute;lula en forma de bastoncillos. Por otra parte, morfolog&iacute;a de la c&eacute;lula resultante de la sobreexpresi&oacute;n de las prote&iacute;nas de Min S. meliloti en Escherichia coli sugiri&oacute; funciones similares para las e. coli y S. meliloti min genes. Estos datos sugieren que hay mayor redundancia en las funciones de los genes de la divisi&oacute;n celular en S. meliloti en comparaci&oacute;n con e. coli.

Un mutante de Sinorhizobium meliloti mina tiene una morfolog&iacute;a alterada y exhibe defectos en simbiosis leguminosa.

&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#x5728;&#x8D39;&#x6C0F;&#x4E2D;&#x534E;&#x6839;&#x7624;&#x83CC;&#x82DC;&#x84FF;&#xFF0C;&#x6307;&#x5B9A; cbtJKL&#xFF0C;&#x8FD9;&#x5DF2;&#x8BC1;&#x660E;&#x5BF9; ABC &#x578B;&#x94B4;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8FDB;&#x884C;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7C07;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x53CA;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x3002;CbtJKL &#x8F6C;&#x5F55;&#x542F;&#x52A8; cbtJ &#x7FFB;&#x8BD1;&#x8D77;&#x59CB;&#x5BC6;&#x7801;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x4E0A;&#x6E38; 384 &#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x548C;&#x6240;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x533A;&#x57DF; 5&#39; &#x8F7D;&#x5047;&#x5B9A; B (12) &#x6838;&#x7CD6;&#x5F00;&#x5173;&#x3002;CbtJKL &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x7531; &#xFF08;&#x94B4;&#x52A0;&#x8F7D;&#xFF09; &#x94B4; (i) &#x5047;&#x5B9A; B (12) &#x6838;&#x7CD6;&#x5F00;&#x5173;&#x662F;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x5E7F;&#x5927;&#x7684;&#x4E0A;&#x6E38;&#x5730;&#x533A;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5728; B (12) &#x6838;&#x7CD6;&#x5F00;&#x5173;&#xFF0C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x63A7;&#x5236; (ii) cbtJ &#x8F6C;&#x5F55;&#x538B;&#x6291;&#x540E;&#x7684;&#x94B4;&#x6216;&#x7EF4;&#x751F;&#x7D20; B(12)&#xFF0C;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;(iii) &#x5728; B (12) &#x6838;&#x7CD6;&#x5F00;&#x5173;&#x5220;&#x9664;&#x5BFC;&#x81F4;&#x672C;&#x6784; cbtJKL &#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x63D2;&#x5165;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; cbtJKL &#x672A;&#x80FD;&#x5728; LB &#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x4E2D;&#x751F;&#x957F;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x6DFB;&#x52A0;&#x94B4;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x5176;&#x4ED6;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7684;&#x6062;&#x590D;&#x589E;&#x957F;&#x3002;&#x6B64;&#x589E;&#x957F;&#x8868;&#x578B;&#x51FA;&#x73B0;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x94B4;&#x672C;&#x5728;&#x78C5;&#xFF0C;&#x87AF;&#x5408;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C; cbtJKL &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E5F;&#x672A;&#x80FD;&#x5728;&#x542B; EDTA &#x7684;&#x87AF;&#x5408;&#x5242;&#xFF0C;&#x9664;&#x975E;&#x989D;&#x5916;&#x6216;&#x8FC7;&#x5269;&#x7684;&#x94B4;&#xFF0C;&#x8865;&#x5145;&#x4E86;&#x4ECB;&#x8D28;&#x7684;&#x6700;&#x4F4E;&#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x4E2D;&#x751F;&#x957F;&#x3002;&#x5728;&#x5438;&#x6536;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D; (57) Co (2 +) &#x79EF;&#x7D2F;&#x662F;&#x9AD8;&#x5728;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; cbtJKL &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x800C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x538B;&#x6291;&#x800C;&#x5728;&#x54EA; cbtJKL &#x8868;&#x660E;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;CbtJKL &#x7A81;&#x53D8;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; (57) Co (2 +) &#x79EF;&#x7D2F;&#x548C;&#x636E;&#x63A8;&#x6D4B;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x6B8B;&#x4F59;&#x7684;&#x94B4;&#x8FD0;&#x8F93;&#x53D1;&#x751F;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0D;&#x662F;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x94B4;&#x7684;&#x5907;&#x7528;&#x79BB;&#x5B50;&#x5438;&#x6536;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x5728;&#x5171;&#x751F;&#x4E2D;&#x7684;&#x5907;&#x7528;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x5230; bacteroid &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8C03;&#x89E3;&#x94B4;&#x8FD0;&#x8F93;&#xFF0C;&#x5982;&#x6297;&#x4E2D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x4F4E; cbtJKL &#x8868;&#x8FBE;&#x548C; cbtJKL &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210; N 2 &#x56FA;&#x7ED3;&#x6838;&#x82DC;&#x84FF;&#x3002;

ABC &#x578B;&#x94B4;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5BF9;&#x5FAE;&#x91CF;&#x91D1;&#x5C5E;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5728;&#x8D39;&#x6C0F;&#x4E2D;&#x534E;&#x6839;&#x7624;&#x83CC;&#x82DC;&#x84FF;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;

We report expression and mutant phenotypes for a gene cluster in Sinorhizobium meliloti, designated cbtJKL, that has been shown to encode an ABC-type cobalt transport system. Transcription of cbtJKL initiated 384 nucleotides upstream from the cbtJ translation start codon, and the resulting 5' region contained a putative B(12)riboswitch. Expression of the cbtJKL genes appeared to be controlled by (cobalt-loaded) cobalamin interacting at the B(12)riboswitch, since (i) a putative B(12)riboswitch was located within this large upstream region, (ii) cbtJ transcription was repressed upon addition of cobalt or vitamin B(12), and (iii) deletions in the B(12)riboswitch resulted in constitutive cbtJKL transcription. Insertion mutants in cbtJKL failed to grow in LB medium, and growth was restored through the addition of cobalt but not other metals. This growth phenotype appeared to be due to the chelation of cobalt present in LB, and cbtJKL mutants also failed to grow in minimal medium containing the chelating agent EDTA unless the medium was supplemented with additional or excess cobalt. In uptake experiments, (57)Co(2+)accumulation was high in wild-type cells expressing the cbtJKL genes, whereas wild-type cells in which cbtJKL expression was repressed showed reduced accumulation. In cbtJKL mutant cells, (57)Co(2+)accumulation was reduced relative to that of the wild type, and presumably, this residual cobalt transport occurred via an alternate ion uptake system(s) that is not specific to cobalt. In symbiosis, the alternate system(s) appeared to mediate cobalt transport into bacteroid cells, as low cbtJKL expression was detected in bacteroids and cbtJKL mutants formed N(2)-fixing nodules on alfalfa.

An ABC-type cobalt transport system is essential for growth of Sinorhizobium meliloti at trace metal concentrations.

Divulgamos fenotipos expresi&oacute;n y mutante para un racimo del gene en Sinorhizobium meliloti, se&ntilde;alada cbtJKL, que se ha demostrado para codificar un sistema de transporte de cobalto de tipo ABC. Transcripci&oacute;n de cbtJKL hab&iacute;a iniciada 384 nucle&oacute;tidos aguas arriba desde el cod&oacute;n de inicio de traducci&oacute;n de cbtJ, y la regi&oacute;n 5&#39; resultante contiene una supuesta riboswitch B (12). Expresi&oacute;n de los genes de cbtJKL parece ser controlado por la cobalamina (cobalto-cargado) interactuando en el riboswitch B (12), puesto que (i) una supuesta riboswitch B (12) se encuentra dentro de esta gran regi&oacute;n r&iacute;o arriba, (ii) cbtJ transcripci&oacute;n fue reprimida con adici&oacute;n de cobalto o vitamina b (12), y (iii) las canceladuras en el riboswitch B (12) dio lugar a la transcripci&oacute;n cbtJKL constitutiva. Mutantes de inserci&oacute;n en cbtJKL no ha podido crecer en medio LB y crecimiento fue restaurada a trav&eacute;s de la adici&oacute;n de cobalto pero no de otros metales. Este fenotipo de crecimiento parece deberse a la quelaci&oacute;n de cobalto presente en LB, y tampoco cbtJKL mutantes crecer en un medio m&iacute;nimo que contiene al agente quelante EDTA, a menos que el medio fue suplementado con cobalto adicional o exceso. En experimentos de captaci&oacute;n, acumulaci&oacute;n de Co (2 +) (57) era alto en c&eacute;lulas de tipo salvaje expresando los genes de cbtJKL, mientras que las c&eacute;lulas de tipo salvaje en que cbtJKL fue reprimida la expresi&oacute;n demostraron la acumulaci&oacute;n reducida. En las c&eacute;lulas mutantes cbtJKL, (57) acumulaci&oacute;n de Co (2 +) se redujo en relaci&oacute;n a la del tipo salvaje, y presumiblemente, este transporte de cobalto residual ocurri&oacute; v&iacute;a un sistema de absorci&oacute;n de ion alternativo que no es espec&iacute;fico de cobalto. En simbiosis, los sistemas alternos parecen mediar transporte de cobalto en c&eacute;lulas bacteroid, como expresi&oacute;n de baja cbtJKL fue detectada en Bacteroides y cbtJKL mutantes forman n&oacute;dulos de fijaci&oacute;n 2 N en alfalfa.

Un sistema de transporte tipo ABC cobalto es esencial para el crecimiento de Sinorhizobium meliloti en concentraciones de metales traza.

Nous rapportons des ph&eacute;notypes expression et mutant pour un groupe de g&egrave;nes de Sinorhizobium meliloti, nomm&eacute; cbtJKL, qui a &eacute;t&eacute; montr&eacute; pour coder un syst&egrave;me de transport de cobalt de type ABC. La transcription de cbtJKL initi&eacute;e 384 nucl&eacute;otides en amont du codon start cbtJ traduction, et la r&eacute;gion 5&#39; r&eacute;sultant contenait un putatif ribor&eacute;gulateurs de B (12). L&#39;expression des g&egrave;nes cbtJKL semble &ecirc;tre contr&ocirc;l&eacute; par la cobalamine (cobalt-charg&eacute;) interagissant &agrave; le ribor&eacute;gulateurs B (12), car (i) un putatif ribor&eacute;gulateurs de B (12) se trouvait dans cette vaste r&eacute;gion en amont, transcription du cbtJ (ii) est r&eacute;prim&eacute;e par l&#39;addition de cobalt ou de vitamine tuberculines, et (iii) les destructions dans les ribor&eacute;gulateurs B (12) a donn&eacute; lieu &agrave; transcription cbtJKL constitutive. Mutants d&#39;insertion dans les cbtJKL n&#39;ont pas pouss&eacute; dans un milieu LB, et la croissance a &eacute;t&eacute; restaur&eacute;e gr&acirc;ce &agrave; l&#39;ajout de cobalt, mais pas d&#39;autres m&eacute;taux. Ce ph&eacute;notype croissance semble &ecirc;tre due &agrave; la ch&eacute;lation de cobalt pr&eacute;sents dans des livres et des mutants de cbtJKL a &eacute;galement omis de se d&eacute;velopper dans un milieu minimal contenant l&#39;agent de ch&eacute;lation EDTA, &agrave; moins que le milieu a &eacute;t&eacute; compl&eacute;t&eacute; avec cobalt suppl&eacute;mentaire ou d&#39;exc&egrave;s. Dans des exp&eacute;riences d&#39;absorption, accumulation de Co (2 +) (57) a &eacute;t&eacute; &eacute;lev&eacute;e dans les cellules de type sauvage exprimant les g&egrave;nes cbtJKL, alors que les cellules de type sauvage dans lequel cbtJKL expression est r&eacute;prim&eacute;e une accumulation r&eacute;duite. En cbtJKL les cellules mutantes, accumulation de Co (2 +) (57) a &eacute;t&eacute; r&eacute;duite par rapport &agrave; celle du type sauvage, et vraisemblablement, ce transport de cobalt r&eacute;siduelle s&#39;est produite par un ou des syst&egrave;mes de captation autre ion qui ne sont pas sp&eacute;cifique au cobalt. En symbiose, les syst&egrave;mes de rechange semblaient m&eacute;diation transport de cobalt dans les cellules bact&eacute;ro&iuml;des, comme expression de faible cbtJKL a &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;e chez les bact&eacute;ro&iuml;des et mutants cbtJKL forment des nodules fixateurs 2 N sur la luzerne.

Un syst&egrave;me de transport de type ABC cobalt est essentiel pour la croissance de Sinorhizobium meliloti, &agrave; des concentrations en m&eacute;taux traces.

Wir berichten Ausdruck und Mutant Ph&auml;notypen f&uuml;r einen gen-Cluster in Sinorhizobium Meliloti, benannt CbtJKL, die nachweislich ein ABC-Typ-Kobalt-Verkehrssystem zu codieren. Transkription von CbtJKL initiiert 384 Nukleotide stromaufw&auml;rts von der CbtJ &Uuml;bersetzung Startcodon, und der resultierende 5&#39;-Bereich enthalten einen vermeintlichen B (12) Riboswitch. Ausdruck der Gene CbtJKL schien gesteuert werden, indem (Kobalt-geladen) Cobalamin Interaktion bei der Riboswitch B (12), da (i) eine vermeintliche B (12) Riboswitch innerhalb dieser gro&szlig;en Region stromaufw&auml;rts, (Ii) CbtJ Transkription wurde nach Zusatz von Kobalt oder Vitamin B(12) unterdr&uuml;ckt, und (Iii) L&ouml;schungen in der Riboswitch B (12) f&uuml;hrte zu konstitutiven CbtJKL Transkription. Einf&uuml;gen von Mutanten in CbtJKL scheiterte in LB-Medium wachsen, und Wachstum wurde durch den Zusatz von Kobalt aber nicht andere Metalle restauriert. Dieses Wachstum-Ph&auml;notyp aufgrund der Chelat von Kobalt in LB vorhanden zu sein schien, und CbtJKL-Mutanten auch nicht wachsen in Minimalmedium ausgestrichen, Chelatbildner EDTA enthalten, es sei denn, das Medium mit zus&auml;tzlichen oder &uuml;bersch&uuml;ssige Kobalt erg&auml;nzt wurde. (57) Co (2 +) Anh&auml;ufung war Aufnahme Experimente in Wild-Typ-Zellen, die Ausdruck der Gene CbtJKL hoch, w&auml;hrend Wild-Typ-Zellen, in denen, die cbtjkl Ausdruck unterdr&uuml;ckt wurde, reduzierte Akkumulation zeigte. In CbtJKL mutierten Zellen (57) Co (2 +) Akkumulation im Verh&auml;ltnis zu dem von den Wildtyp gesenkt wurde und vermutlich dieser residual Kobalt-Transport &uuml;ber eine Alternative Ionen-Aufnahme-Systeme, die nicht spezifisch f&uuml;r Kobalt aufgetreten. In Symbiose erschien die alternativen Systemen, Kobalt-Transport in bacteroid Zellen, zu vermitteln, wie niedrige CbtJKL Ausdruck, in Bacteroids festgestellt wurde und CbtJKL-Mutanten N 2-Fixierung Kn&ouml;tchen auf Luzerne gebildet.

Ein ABC-Typ-Kobalt-Verkehrssystem ist essentiell f&uuml;r Wachstum von Sinorhizobium Meliloti bei Trace Metal Konzentrationen.

Riportiamo fenotipi espressione e mutante per un cluster di gene in Sinorhizobium meliloti, designato cbtJKL, che ha dimostrato di codificare un sistema di trasporto del cobalto ABC-tipo. Trascrizione di cbtJKL avviato 384 nucleotidi a monte dal codone di inizio traduzione cbtJ, e la regione 5&#39; risultante conteneva un putativo riboswitch B (12). Espressione dei geni cbtJKL sembrava essere controllato da cobalamina (cobalto-caricato) interagendo presso il riboswitch B (12), dal momento che (i) un putativo riboswitch B (12) era situato all&#39;interno di questa regione a Monte grande, (ii) cbtJ trascrizione fu repressa con l&#39;aggiunta di cobalto o vitamina b, e (iii) le eliminazioni nel riboswitch B (12) ha provocato cbtJKL costitutiva trascrizione. Mutanti di inserimento in cbtJKL non &egrave; riuscita a crescere in mezzo LB e crescita &egrave; stata restaurata attraverso l&#39;aggiunta di cobalto, ma non altri metalli. Questo fenotipo crescita sembrava essere dovuto la chelazione di cobalto presente in LB, e cbtJKL mutanti non &egrave; riuscita a crescere in terreno minimo contenente l&#39;agente chelante EDTA a meno che il mezzo &egrave; stato completato con cobalto aggiuntiva o in eccesso. In esperimenti di assorbimento, accumulo di Co (2++) (57) era alta nel selvaggio-tipo cellule che esprimono i geni cbtJKL, considerando che il selvaggio-tipo celle in cui cbtJKL fu repressa espressione ha mostrato ridotto accumulo. In cbtJKL cellule mutanti, accumulo di Co (2++) (57) &egrave; stato ridotto rispetto a quello del tipo selvatico, e presumibilmente, si &egrave; verificato questo trasporto di cobalto residua mediante un sistemi di assorbimento dello ione alternativo che non sono specifico di cobalto. In simbiosi, i sistemi alternativi &egrave; apparso a mediare il trasporto di cobalto nelle cellule bacteroid, come espressione di cbtJKL basso &egrave; stato rilevato in bacteroids e cbtJKL mutanti formata N (2)-noduli di fissaggio su erba medica.

Un sistema di trasporto ABC-tipo cobalto &egrave; essenziale per la crescita di Sinorhizobium meliloti a concentrazioni di metallo traccia.

&#x5F0F;&#x3068;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x6839;&#x7C92;&#x30CE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30E5;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x3001;ABC &#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; &#x30B3;&#x30D0;&#x30EB;&#x30C8;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; cbtJKL&#x3001;&#x6307;&#x5B9A;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;384 &#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4E0A;&#x6D41; cbtJ &#x7FFB;&#x8A33;&#x958B;&#x59CB;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x304B;&#x3089; cbtJKL &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B; B (12) &#x30EA;&#x30DC;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x7D50;&#x679C; 5&#39; &#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CbtJKL &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE; (&#x30B3;&#x30D0;&#x30EB;&#x30C8;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x3066;) &#x30B3;&#x30D0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3; &#xFF08;i&#xFF09; &#x306F;&#x3001;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B; B (12) &#x30EA;&#x30DC;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x4E0A;&#x6D41;&#x5730;&#x57DF;&#x5185;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x306E;&#x3067; B (12) &#x30EA;&#x30DC;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x767B;&#x5834; (ii) cbtJ &#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x30B3;&#x30D0;&#x30EB;&#x30C8;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D3;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3; B(12)&#x3001;&#x52A0;&#x7B97;&#x3092;&#x93AE;&#x5727;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;(iii) B (12) &#x30EA;&#x30DC;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x69CB;&#x6210; cbtJKL &#x8EE2;&#x5199;&#x3067;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x633F;&#x5165;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; cbtJKL &#x306E; LB &#x57F9;&#x5730;&#x3067;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x30B3;&#x30D0;&#x30EB;&#x30C8;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x4ED6;&#x306E;&#x91D1;&#x5C5E;&#x3092;&#x8FFD;&#x52A0;&#x5FA9;&#x5143;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x8868;&#x73FE;&#x578B; lb &#x819C;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30B3;&#x30D0;&#x30EB;&#x30C8;&#x306E;&#x30AD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x767B;&#x5834;&#x3057;&#x3001;cbtJKL &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x5A92;&#x4F53;&#x3092;&#x8FFD;&#x52A0;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x904E;&#x5270;&#x306E;&#x30B3;&#x30D0;&#x30EB;&#x30C8;&#x3092;&#x88DC;&#x3063;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3092;&#x9664;&#x304D;&#x30AD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x5264; EDTA &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x6700;&#x5C0F;&#x5A92;&#x4F53;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5438;&#x53CE;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;, &#x3069;&#x306E; cbtJKL &#x3067;&#x5F0F;&#x3092;&#x93AE;&#x5727;&#x3057;&#x305F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; &#xFF08;57&#xFF09; Co (2++) &#x84C4;&#x7A4D; cbtJKL &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x9AD8;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;CbtJKL &#x5909;&#x7570;&#x7D30;&#x80DE; (57) Co (2++) &#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x3001;&#x30B3;&#x30D0;&#x30EB;&#x30C8;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x4EE3;&#x66FF;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x6B8B;&#x7559;&#x30B3;&#x30D0;&#x30EB;&#x30C8; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4F4E; cbtJKL &#x5F0F; bacteroids &#x304A;&#x3088;&#x3073; cbtJKL &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5171;&#x751F;&#x3067;&#x306F;&#x30B3;&#x30D0;&#x30EB;&#x30C8; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8; bacteroid &#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x4EE3;&#x66FF;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x767B;&#x5834;&#x306B;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F; N (2)-&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x306E;&#x7D50;&#x7BC0;&#x3092;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

ABC &#x578B;&#x30B3;&#x30D0;&#x30EB;&#x30C8;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x6210;&#x9577;&#x6839;&#x7C92;&#x30CE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30E5;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x5FAE;&#x91CF;&#x91D1;&#x5C5E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC; Sinorhizobium meliloti, cbtJKL, ABC &#xD615; &#xCF54;&#xBC1C;&#xD2B8; &#xC804;&#xC1A1; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC9C0;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xACE0;&#xAE30;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0;. Cbtjkl&#xC758; &#xC804;&#xC0AC; &#xC2DC;&#xC791; cbtJ &#xBC88;&#xC5ED; &#xC2DC;&#xC791; codon&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xB958; 384 &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xBC0F; &#xACB0;&#xACFC; 5&#39; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xD3EC;&#xD568; &#xC0C1; B (12) riboswitch. CbtJKL &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; (&#xCF54;&#xBC1C;&#xD2B8; &#xB85C;&#xB4DC;) cobalamin &#xC774;&#xD6C4; &#xC0C1; B (12) riboswitch (i)&#xB294;&#xC774; &#xD070; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC601;&#xC5ED; &#xB0B4;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; B (12) riboswitch&#xC5D0; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC81C;&#xC5B4;&#xD560; &#xC218; &#xB4F1;&#xC7A5; (ii) cbtJ &#xC804;&#xC0AC;&#xB294; &#xCF54;&#xBC1C;&#xD2B8; &#xB610;&#xB294; &#xBE44;&#xD0C0;&#xBBFC; B(12)&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xB530;&#xB77C; &#xC5B5;&#xC555; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC81C;&#xC815; cbtJKL &#xC804;&#xC0AC; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; (3) B (12) riboswitch&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AD;&#xC81C;&#xB97C;. Cbtjkl&#xC5D0; &#xC0BD;&#xC785; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC2E4;&#xD328; &#xD30C;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xC9C0; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE08;&#xC18D; &#xCF54;&#xBC1C;&#xD2B8;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xD1B5;&#xD574; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xB41C;. &#xC131;&#xC7A5; &#xD615;&#xC774; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xD30C;&#xC6B4;&#xB4DC;, &#xCF54;&#xBC1C;&#xD2B8; chelation &#xB4F1;&#xC7A5; &#xBC0F; cbtJKL &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCD94;&#xAC00; &#xB610;&#xB294; &#xCD08;&#xACFC; &#xCF54;&#xBC1C;&#xD2B8;&#xC640; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xB294; &#xBCF4;&#xCDA9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC73C;&#xBA74; chelating &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; EDTA&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xC911;&#xAC04;&#xC5D0; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; (57) &#xACF5;&#xB3D9; (2 +) &#xCD95;&#xC801;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4; &#xB192;&#xC740; cbtJKL &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xD604; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC140; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; cbtJKL &#xC2DD; &#xC5B5;&#xC555; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xAC10;&#xC18C; &#xCD95;&#xC801; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;. CbtJKL &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC; (57) &#xACF5;&#xB3D9; (2 +) &#xCD95;&#xC801; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4;,&#xC774; &#xC794;&#xC5EC; &#xCF54;&#xBC1C;&#xD2B8; &#xC804;&#xC1A1; &#xCF54;&#xBC1C;&#xD2B8; &#xD2B9;&#xC815; &#xB300;&#xCCB4; &#xC774;&#xC628; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD;. &#xACF5;&#xC0DD;, &#xB300;&#xCCB4; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0AE;&#xC740; cbtJKL &#xC2DD; bacteroids&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; cbtJKL &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC54C; &#xD314; &#xD30C;&#xC5D0; N (2)-&#xACE0;&#xC815; &#xD639; &#xD615;&#xC131; bacteroid &#xC140;&#xC73C;&#xB85C; &#xCF54;&#xBC1C;&#xD2B8; &#xC804;&#xC1A1; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xB4F1;&#xC7A5;.

ABC &#xD615; &#xCF54;&#xBC1C;&#xD2B8; &#xC804;&#xC1A1; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; Sinorhizobium meliloti &#xCD94;&#xC801; &#xAE08;&#xC18D; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;.

&#x4ECE;&#x571F;&#x58E4;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269; DNA &#x7684;&#x7EAF;&#x5316;&#x6311;&#x6218;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A; co-extraction &#x7684;&#x8150;&#x6B96;&#x9178;&#x548C;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x915A;&#x7C7B;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x6291;&#x5236;&#x540E;&#x7EED;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#xFF0C;&#x6269;&#x589E;&#x6216;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6C61;&#x67D3;&#x7269;&#x7684;&#x53BB;&#x9664;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x5B8F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x56FE;&#x4E66;&#x9986;&#x5EFA;&#x8BBE;&#x7684;&#x6210;&#x529F;&#x548C;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x63D0;&#x53D6; DNA &#x6D4B;&#x5E8F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E09;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x590D;&#x5408;&#x571F;&#x58E4;&#x6837;&#x54C1;&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4F7F;&#x7528;&#x5907;&#x7528;&#x51C0;&#x5316;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6BD4;&#x5982;&#x76F4;&#x6D41;&#x7535; (DC) &#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3;&#x51DD;&#x80F6;&#x8FC7;&#x6EE4;&#x6216;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5;&#x3001; &#x5411;&#x5BFC; DNA &#x6E05;&#x7406;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x548C; PowerSoil DNA &#x5206;&#x79BB;&#x8BD5;&#x5242;&#x76D2;&#x8DDF;&#x540C;&#x6B65;&#x7CFB;&#x6570;&#x62D6;&#x6539;&#x5EFA; &#xFF08;&#x67EF;&#x8FBE;&#xFF09; &#x4EEA;&#x5668;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x975E;&#x7EBF;&#x6027;&#x7535;&#x6CF3;&#x7684;&#x65B0;&#x578B; DNA &#x7EAF;&#x5316;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x4E24;&#x4E2A;&#x975E;&#x7EBF;&#x6027;&#x548C;&#x76F4;&#x6D41;&#x7535;&#x6CF3;&#x88AB;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x68C0;&#x7D22;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF; DNA &#x7EAF;&#x5EA6;&#x9AD8;&#x3001; &#x9002;&#x5408;&#x5927;&#x578B;&#x63D2;&#x5165;&#x56FE;&#x4E66;&#x9986;&#x5EFA;&#x8BBE;&#x3002;PowerSoil DNA &#x5206;&#x79BB;&#x8BD5;&#x5242;&#x76D2;&#x548C;&#x975E;&#x7EBF;&#x6027;&#x7684;&#x7535;&#x6CF3;&#x4E86;&#x9AD8;&#x56DE;&#x6536;&#x7684; DNA &#x6D4B;&#x5E8F;&#x76EE;&#x7684;&#x9002;&#x5408;&#x7EAF;&#x5EA6;&#x9AD8;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x65B9;&#x6CD5;&#x90FD;&#x8BC1;&#x660E;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684; DNA &#x63D0;&#x53D6;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x793E;&#x533A;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x7684;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4E00;&#x81F4;&#x6027;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x67EF;&#x8FBE;&#x6587;&#x4E66;&#x7684;&#x975E;&#x7EBF;&#x6027;&#x7535;&#x6CF3;&#x662F;&#x571F;&#x58E4;&#x6837;&#x54C1;&#x5236;&#x5907;&#x7684; DNA &#x9002;&#x5408;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x548C;&#x5927;&#x578B;&#x63D2;&#x5165;&#x514B;&#x9686;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x7406;&#x60F3;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x51C0;&#x5316;&#x571F;&#x58E4; DNA &#x7684;&#x5B8F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5B66;&#x7684;&#x975E;&#x7EBF;&#x6027;&#x7535;&#x6CF3;&#x3002;

Purification of microbial DNA from soil is challenging due to the co-extraction of humic acids and associated phenolic compounds that inhibit subsequent cloning, amplification or sequencing. Removal of these contaminants is critical for the success of metagenomic library construction and high-throughput sequencing of extracted DNA. Using three different composite soil samples, we compared a novel DNA purification technique using nonlinear electrophoresis on the synchronous coefficient of drag alteration (SCODA) instrument with alternate purification methods such as direct current (DC) agarose gel electrophoresis followed by gel filtration or anion exchange chromatography, Wizard DNA Clean-Up System, and the PowerSoil DNA Isolation kit. Both nonlinear and DC electrophoresis were effective at retrieving high-molecular weight DNA with high purity, suitable for construction of large-insert libraries. The PowerSoil DNA Isolation kit and the nonlinear electrophoresis had high recovery of high purity DNA suitable for sequencing purposes. All methods demonstrated high consistency in the bacterial community profiles generated from the DNA extracts. Nonlinear electrophoresis using the SCODA instrument was the ideal methodology for the preparation of soil DNA samples suitable for both high-throughput sequencing and large-insert cloning applications.

Nonlinear electrophoresis for purification of soil DNA for metagenomics.

Purification de l&#x26;#39;ADN microbien du sol est difficile en raison de la co-extraction des acides humiques et des compos&#xE9;s ph&#xE9;noliques associ&#xE9;s qui inhibent la suite du clonage, l&#x26;#39;amplification ou le s&#xE9;quen&#xE7;age. La suppression de ces contaminants est essentielle pour la r&#xE9;ussite de construction de la biblioth&#xE8;que m&#xE9;tag&#xE9;nomique et s&#xE9;quen&#xE7;age &#xE0; haut d&#xE9;bit de l&#x26;#39;ADN extrait. En utilisant trois diff&#xE9;rents &#xE9;chantillons de sol composites, nous avons compar&#xE9; une technique de purification d&#x26;#39;ADN nouveau en utilisant l&#x26;#39;&#xE9;lectrophor&#xE8;se non lin&#xE9;aire sur le coefficient de tra&#xEE;n&#xE9;e de la modification synchrone (SCODA) instrument avec des m&#xE9;thodes de purification de rechange tels directe &#xE9;lectrophor&#xE8;se (DC) en cours sur gel d&#x26;#39;agarose suivie d&#x26;#39;une filtration sur gel ou la chromatographie &#xE9;changeuse d&#x26;#39;anions , Assistant d&#x26;#39;ADN syst&#xE8;me de nettoyage, et le kit ADN PowerSoil isolement. La fois non lin&#xE9;aire et continue &#xE9;lectrophor&#xE8;se sont efficaces pour extraire l&#x26;#39;ADN de haut poids mol&#xE9;culaire avec une grande puret&#xE9;, convient pour la construction de biblioth&#xE8;ques d&#x26;#39;insertion grande. Le kit d&#x26;#39;ADN PowerSoil isolement et l&#x26;#39;&#xE9;lectrophor&#xE8;se non lin&#xE9;aire avait &#xE9;lev&#xE9; de r&#xE9;cup&#xE9;ration de l&#x26;#39;ADN de haute puret&#xE9; convenable pour le s&#xE9;quen&#xE7;age des fins. Toutes les m&#xE9;thodes ont d&#xE9;montr&#xE9; la coh&#xE9;rence &#xE9;lev&#xE9; dans les profils des communaut&#xE9;s bact&#xE9;riennes g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;s &#xE0; partir des extraits d&#x26;#39;ADN. &#xC9;lectrophor&#xE8;se non lin&#xE9;aire en utilisant l&#x26;#39;instrument est SCODA la m&#xE9;thode id&#xE9;ale pour la pr&#xE9;paration d&#x26;#39;&#xE9;chantillons d&#x26;#39;ADN du sol appropri&#xE9;es &#xE0; la fois pour s&#xE9;quen&#xE7;age &#xE0; haut d&#xE9;bit et des applications de clonage &#xE0; grande insert.

&#xC9;lectrophor&#xE8;se non lin&#xE9;aire pour la purification de l&#x26;#39;ADN du sol pour m&#xE9;tag&#xE9;nomique

Reinigung von mikrobiellen DNA aus dem Boden ist schwierig, aufgrund der Co-extraction von Humins&auml;uren und zugeh&ouml;rigen Phenolverbindungen, die nachfolgende Klonen hemmen, Verst&auml;rkung oder Sequenzierung. Entfernung diese Verunreinigungen ist entscheidend f&uuml;r den Erfolg der durchgef&uuml;hrte metagenomische Bibliotheksbau und Hochdurchsatz-Sequenzierung der extrahierten DNA. Mit drei verschiedenen zusammengesetzten Bodenproben, verglichen wir eine neue DNA-Reinigung-Technik mit nichtlinearen Elektrophorese auf der synchronen Koeffizient des Drag &amp;amp; Ver&auml;nderung (SCODA) Instrument mit alternativen Reinigungmethoden wie Gleichstrom (DC)-Agarose-Gelelektrophorese, gefolgt von Gel-Filtration oder Anionen-Austausch-Chromatographie, Wizard-DNA-Clean-Up-System und die PowerSoil DNA-Lokalisierung-Kit. Beide nichtlineare und DC-Elektrophorese waren wirksam bei hochmolekularer Gewicht DNA mit hoher Reinheit, geeignet f&uuml;r den Bau der gro&szlig;en-Insert-Bibliotheken abrufen. Das PowerSoil-DNA-Isolierung-Kit und die nichtlineare Elektrophorese hatte hohe Recovery von hoher Reinheit DNA Sequenzierung Zwecken geeignet. Alle Methoden nachgewiesen hohe Konsistenz in den bakteriellen Gemeinschaft-Profilen aus der DNA-Extrakte erzeugt. Nichtlineare Elektrophorese mit das SCODA-Instrument war die ideale Methode f&uuml;r die Vorbereitung des Bodens DNA-Proben f&uuml;r Hochdurchsatz-Sequenzierung und gro&szlig;e-Insert-Klonen-Anwendungen geeignet.

Nichtlineare Elektrophorese zur Reinigung des Bodens DNA f&uuml;r Metagenomik.

Purificazione di DNA microbico dal suolo &egrave; impegnativo a causa della co-extraction di acidi umici e composti fenolici associati che inibiscono la successiva clonazione, amplificazione o sequenziamento. La rimozione di questi contaminanti &egrave; critica per il successo della costruzione della libreria metagenomica e high-throughput sequenziamento del DNA estratto. Utilizzando tre campioni differenti del terreno composito, abbiamo confrontato una romanzo tecnica di purificazione del DNA usando elettroforesi non lineare sul coefficiente di drag strumento alterazione (SCODA) sincrono con metodi alternativi di purificazione come elettroforesi del gel dell&#39;agarosi corrente continua (DC) seguita dalla cromatografia di gel filtrazione o anione exchange, sistema di pulitura guidata del DNA e il kit di isolamento del DNA PowerSoil. Entrambi non lineare e l&#39;elettroforesi DC sono stati efficaci nel recupero di alto peso molecolare del DNA con elevata purezza, adatto per la costruzione di librerie di grande inserto. Il kit di isolamento del DNA PowerSoil e l&#39;elettroforesi non lineare aveva elevato recupero di elevata purezza del DNA adatto per scopi di sequenziamento. Tutti i metodi hanno dimostrato elevata consistenza dei profili di comunit&agrave; batteriche generate dagli estratti del DNA. L&#39;elettroforesi non lineare utilizzando lo strumento SCODA era la metodologia ideale per la preparazione di campioni di DNA terreno adatti sia per il sequenziamento ad alta velocit&agrave; e grande inserto clonazione applicazioni.

Elettroforesi non lineare per la purificazione del DNA di terreno per la metagenomica.

&#x571F;&#x58CC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;DNA&#x306E;&#x7CBE;&#x88FD;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x5897;&#x5E45;&#x3084;&#x30B7;&#x30FC;&#x30AF;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x30D5;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3068;&#x306E;&#x5171;&#x62BD;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6311;&#x6226;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6C5A;&#x67D3;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x306F;&#x3001;&#x30E1;&#x30BF;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3068;&#x62BD;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;DNA&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6210;&#x529F;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x8907;&#x5408;&#x6750;&#x6599;&#x306E;&#x571F;&#x58CC;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30B2;&#x30EB;&#x308D;&#x904E;&#x3084;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3001;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x76F4;&#x6D41;&#xFF08;DC&#xFF09;&#x30A2;&#x30AC;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x306E;&#x7CBE;&#x88FD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x30C9;&#x30E9;&#x30C3;&#x30B0;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x540C;&#x671F;&#x4FC2;&#x6570;&#xFF08;SCODA&#xFF09;&#x5668;&#x306B;&#x975E;&#x7DDA;&#x5F62;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x65B0;&#x898F;DNA&#x7CBE;&#x88FD;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A3;&#x30B6;&#x30FC;&#x30C9;DNA&#x306E;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;PowerSoil DNA&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30C3;&#x30C8;&#x3002;&#x975E;&#x7DDA;&#x5F62;&#x304A;&#x3088;&#x3073;DC&#x96FB;&#x6C17;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x5927;&#x633F;&#x5165;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x9AD8;&#x7D14;&#x5EA6;&#x3067;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;&#x306E;DNA&#x3092;&#x53D6;&#x5F97;&#x3059;&#x308B;&#x6642;&#x306B;&#x6709;&#x52B9;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; PowerSoil DNA&#x5358;&#x96E2;&#x30AD;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x975E;&#x7DDA;&#x5F62;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x305F;&#x9AD8;&#x7D14;&#x5EA6;DNA&#x306E;&#x9AD8;&#x56DE;&#x53CE;&#x7387;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;DNA&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x83CC;&#x7FA4;&#x96C6;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002; SCODA&#x5668;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x975E;&#x7DDA;&#x5F62;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x305F;&#x571F;&#x58CC;DNA&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7406;&#x60F3;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

&#x30E1;&#x30BF;&#x30B2;&#x30CE;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x571F;&#x58CC;DNA&#x306E;&#x7CBE;&#x88FD;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x975E;&#x7DDA;&#x5F62;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;

&#xD1A0;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; DNA&#xC758; &#xC815;&#xD654; humic &#xC0B0; &#xBC0F; &#xD6C4;&#xC18D; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD398; &#xB180; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;, &#xC99D;&#xD3ED; &#xB610;&#xB294; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1;&#xC758; co-extraction &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC804; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC624;&#xC5FC; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xB294; metagenomic &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xAC74;&#xC124;&#xC758; &#xC131;&#xACF5; &#xBC0F; &#xCD94;&#xCD9C; &#xB41C; DNA&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC; &#xC21C;&#xC11C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB4A4;&#xC5D0; &#xC824; &#xC5EC;&#xACFC; &#xB610;&#xB294; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;, &#xB9C8;&#xBC95;&#xC0AC; DNA &#xCCAD;&#xC18C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xBC0F; PowerSoil DNA &#xBD84;&#xB9AC; &#xD0A4;&#xD2B8;&#xB294; &#xC9C1;&#xB958; (DC) agarose &#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95; &#xB4F1; &#xB300;&#xCCB4; &#xC815;&#xD654; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xB04C;&#xC5B4;&#xC11C; &#xBCC0;&#xACBD; (SCODA) &#xC545;&#xAE30;&#xC758; &#xB3D9;&#xAE30; &#xACC4;&#xC218;&#xC5D0; &#xBE44;&#xC120;&#xD615; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; DNA &#xC815;&#xD654; &#xAE30;&#xBC95;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBCF5;&#xD569; &#xD1A0;&#xC591; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xB458; &#xB2E4; &#xBE44;&#xC120;&#xD615; DC &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD070; &#xC0BD;&#xC785; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC758; &#xAC74;&#xC124;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xACE0; &#xC21C;&#xB3C4;&#xC640; &#xB192;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xBB34;&#xAC8C; DNA&#xB97C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD588;&#xB2E4;. PowerSoil DNA &#xBD84;&#xB9AC; kit &#xBC0F; &#xBE44;&#xC120;&#xD615; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95;&#xC758; &#xACE0; &#xC21C;&#xB3C4; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xBAA9;&#xC801;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xBC29;&#xBC95; DNA &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xC138;&#xADE0; &#xCEE4;&#xBBA4;&#xB2C8;&#xD2F0; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; &#xC77C;&#xAD00;&#xC131;&#xC744; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. SCODA &#xC545;&#xAE30;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBE44;&#xC120;&#xD615; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95;&#xC740; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xBC0F; &#xD070; &#xC0BD;&#xC785; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xD1A0;&#xC591; DNA &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xC900;&#xBE44;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;.

&#xD1A0;&#xC591; DNA metagenomics&#xC758; &#xC815;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBE44;&#xC120;&#xD615; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95;.

La purificaci&#xF3;n de ADN microbiano del suelo es un reto debido a la co-extracci&#xF3;n de &#xE1;cidos h&#xFA;micos y los compuestos fen&#xF3;licos asociados que inhiben la posterior clonaci&#xF3;n de amplificaci&#xF3;n, o la secuenciaci&#xF3;n. La eliminaci&#xF3;n de estos contaminantes es cr&#xED;tica para el &#xE9;xito de construcci&#xF3;n de la biblioteca metagen&#xF3;mica y alto rendimiento de secuenciaci&#xF3;n de ADN extra&#xED;do. Utilizando tres muestras diferentes de suelos compuestos, se compar&#xF3; una t&#xE9;cnica de purificaci&#xF3;n de ADN mediante electroforesis novela no lineal en el coeficiente s&#xED;ncrono de alteraci&#xF3;n de arrastre (SCODA) instrumento con m&#xE9;todos de purificaci&#xF3;n alternativos tales como la corriente directa de electroforesis (CC) en gel de agarosa seguida por filtraci&#xF3;n en gel o cromatograf&#xED;a de intercambio ani&#xF3;nico , Asistente de ADN sistema de limpieza, y el kit de aislamiento de ADN PowerSoil. Ambos no lineal y la electroforesis de CC fueron eficaces en la recuperaci&#xF3;n de alto peso molecular del ADN con alta pureza, conveniente para la construcci&#xF3;n de grandes bibliotecas de inserci&#xF3;n. El kit de ADN Aislamiento PowerSoil y la electroforesis no lineal ten&#xED;a una alta recuperaci&#xF3;n de ADN de alta pureza adecuado para la secuenciaci&#xF3;n prop&#xF3;sitos. Todos los m&#xE9;todos demostrado una alta consistencia en los perfiles de la comunidad bacterianas generados a partir de los extractos de ADN. Electroforesis no lineal utilizando el instrumento SCODA era la metodolog&#xED;a ideal para la preparaci&#xF3;n de muestras de ADN de suelo adecuados tanto para secuenciaci&#xF3;n de alto rendimiento y gran inserci&#xF3;n aplicaciones de clonaci&#xF3;n.

Jiujun Cheng

Biology

University of Waterloo

Site-specific Bacterial Chromosome Engineering: ΦC31 Integrase Mediated Cassette Exchange (IMCE)

Jiujun Cheng

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Biology

University of Waterloo

Site-specific Bacterial Chromosome Engineering: ΦC31 Integrase Mediated Cassette Exchange (IMCE)

Biology