Homarus Americanus Stomatogastric 신경계의 해부

요약

우리는 미국의 바닷가재의 뱃속에서 stomatogastric 신경계의 미세 절개를 설명 ( Homarus americanus).

초록

시스템 활동을 생산 환경에 대응 얼마나 긴장 이해의 목적으로, neuroscientists 관심의 활동을 전시하고 접근 및 실험 방법 의무 아르 모델 시스템 설정. 미국의 바닷가재의 stomatogastric 신경계 (STNS) (

프로토콜

전에이 프로토콜을 처음으로 바다 가재의 뱃속은 동물에서 제거하고 동반자 조브 문서 (비어만 & 토빈, 2009)에서 설명한대로 준비합니다. 아래에 설명된 단계의 대부분은 해부 현미경 하에서 수행되어야하는 것입니다.

부품 Commissural 신경을 난 - 분리

1. 동양 요리 너무 앞쪽에 끝이 (입술로) 당신과 뒷부분 끝 (pylorus에서) 떨어져있다는 사실을 향해있다.
   
   
2. 그것은 접시에 가능한 평면 거짓말 있도록 위가 고정된되었는지 확인하십시오.
   1. 입술의 양쪽에있는 식도를 핀.
   2. 필요한 경우, 총 해부 동안 배치 다른 핀을 정렬.
3. hypodermis를 제거합니다.
   1. gm2/gm3 근육 근처 hypodermis을 잡으면,이 근육에서 분리하고 부드럽게 앞쪽에 방향으로 당기십시오.
   2. 모든 연결을 snipping하여 기본 지방에서 hypodermis를 구분한다. 사용 stomatogastric 신경계의 핵심 부분을 encloses 중심 동맥 주위에 관심 증가. gm1b 근육 사이에 위치 stomatogastric 신경절의 0.5 cm 반경에 대한 내에 그대로 hypodermis를 남겨주세요.
   3. 구분 hypodermis 잘라.
4. 기본 조직의 두뇌를 분리합니다.
   1. 복부의 앞쪽에 부분에 commissural 신경에 두뇌의 앞쪽에 부분에서 양자 프로젝트 두 개의 커다란 commissural 신경을 식별합니다.
   2. 이 신경은 그대로두면, 부드럽게 집게로 머리를 채취해서 조직의 나머지 부분에서 뇌를 분리 절단. stomatogastric 신경이 두뇌 아래이며 그대로 보관해야합니다으로 이렇게 같은주의하십시오.
5. 조직을 둘러싼에서 commissural 신경을 분리합니다.
   1. commissural 신경 중 하나에 하나 commissural 신경을 따르십시오.
   2. 이온과 아들을 식별 -이 신경은 그대로 유지합니다. commissural 신경절 밖으로 발산 많은 신경을 것입니다. (이온과 아들 제외) 대부분을 잘라 있지만 절개를 완성하는 동안 자리에 commissural 신경절를 잡아 연결된 한 개는 신경을 두십시오.
   3. 다른 commissural 신경절과 반복합니다.
6. 중간에 측면에서 이온과 아들을 청소하십시오. 복부에 신경 시스템을 앵커로 순음 신경 그대로 둡니다. 식도 신경절은 이온의이 교차했다 앉아있다. 당신은 열등 심실 신경을 잡아와 아래 절단까지 당겨 그 아래 지울 수 있습니다.

2 부 - 분리 Stomatogastric 신경절 (STG)와 남은 신경 있습니다.

7. 조직을 둘러싼에서 STG를 구분한다.
   1. STG는 gm1b 근육 아래 gm2a, B 근육을 사이에 실행 동맥 안에 앉아있다. gm2a, B 근육 부근 동맥의 절단 끝을 찾습니다.
   2. DVN을 폭로, 위 anteriorly 동맥의 절단 끝을 당겨. 당신이 나머지 hypodermis의 수준에 도달할 때까지 계속 뽑고. 일단 분리, 동맥이 남아있는 hypodermis을 만지는 수준으로 줄어들 수 있습니다.
   3. 바닷가재의 연단에 위치해 있던 근육 플랩을 잘라.
   4. 동맥이 STG 위 지방 내에 터널을 만드는 것을 관찰, 동맥 위의 hypodermis을 올려요. 동맥 안에 가위 중 하나 블레이드를 넣고 그 위에 근육을 잘라. 당신이 안전하게 STG 위에 있는지 확인하는 상처로 당신이 DVN을 볼 수 있는지 확인합니다. 동맥 다음, anteriorly 절단 계속합니다. 당신이 STG 위의 컷으로, 당신은 역이 근육에 STG 다이빙 아래에서 anteriorly 냄새가 나는데 볼 수 있습니다. 완전히 STG 위의 근육을 분리 anteriorly 절단 계속합니다.
   5. 거리 역에서 어떤 조직을 취소합니다.
8. 주변 조직에서 agn S를 구분한다. (당신이 agn에서 레코드 계획하지 않더라도, 당신이 세포 레코딩에 대해 신경을 아래로 핀에 손상 신경의 일부가 필요합니다.)
   1. 더 agn S를 보려면, 나머지 hypodermis과 기본 근육의 얇은 레이어를 제거합니다.
   2. STG에 단지 사후, DVN의 양쪽에있는 지방과 근육의 어두운 터널을 식별합니다.
   3. 터널 안으로 한 가위 블레이드를 심어 신경 위의 조직을 잘라. 그것을 분리, 신경 다음, 옆으로 절단 계속합니다. (몇 mm가 신경절을 달아 충분하지만, 당신이 그것에서 기록하려는 경우 agn 최소한 5mm 노출.)
   4. 연결을 절단하여이 innervates 근육에서 agn를 분리합니다.
   5. 다른 agn을 분리하기 위해 반대편에 반복합니다.
   6. 두 agn S가 해부되고 나면 배가 STG를 연결하는 모든 근육과 조직을 잘라.
9. mvn S.를 분리 그들은 lvn를 분기하고 지방 아래에 옆으로 선법 작은 신경의 양자 쌍의 수 있습니다.
   1. 어느 근처, DVN 한쪽에있는 지방이 잘리는 가위 또는 두 개의 집게를 사용하여 어디에 두 lvn S.으로이 지점 여기까지 mvn의 s에서하고 그들을 절단 위험하지 않습니다.
   2. 지방 레이어를 올려, 그리고 작은 mvn의 아래를 확인합니다. 이 신경은 gm1b 근육의 수준으로 옆으로 그저 사후에 중간 실행합니다.
   3. 지금은 그래서 그것이 얽힌 될 것이다 신경은 그대로두고, mvn 위 지방의 레이어를 제거합니다. 당신은 절개 끝에 배를 내려로부터 측면 끝부분을 절단합니다.
   4. 다른 mvn을 분리하기 위해 반대편에있는 과정을 반복합니다.
10. lvn S 및 사후 신경을 분리.
    1. lvn S 브랜치가 옆으로 DVN에서, 그 위에 기름기를 절단하여 lvn를 수행 어디서 시작. 준비에 따라 때로는 신경 위의 전체 지방 계층은 뽑아하실 수 있습니다.
    2. PSN의 지점에서 지점까지 lvn을 드러내는 계속합니다.
11. pyn을 분리.
    1. pyn을 찾아, 그것은 pylorus 이상 뒤로 여행 신경이다.
    2. 이 지역을 덮고있는 얇은 막을 제거합니다.
    3. pyn에 첨부된 pylorus의 작은 섹션을 절단하여 pyn을 분리.
    4. 부드럽게 pyloric 섹션을 리프트하고 pdn에 부착 지점에 도달할 때까지 pyn의 양쪽에있는 조직을 버려야.
12. pdn을 분리.
    1. pdn을 찾아, 그것은 pyloric 확장시키는 근육을 뒤로 여행 신경이다.
    2. pdn에 연결된 pyloric 확장시키는 근육의 작은 섹션을 잘라 버릴거야.
    3. 부드럽게, pyloric 확장시키는 근육 섹션을 리프트가 pyn에 부착 지점에 도달할 때까지 pdn의 양쪽에있는 조직을 버려야.
13. lvn에 pyn과 pdn를 연결하는 복부 lvn을 분리.
    1. pyn과 pdn은 복부 lvn에 연결하는 삼각 지점 시점에서, 신경의 작은 섹션을 분리 이러한 vpln로 복부 lvn에서 지점. 이것은 복부 lvn에 당기에 대한 핸들로 사용됩니다.
    2. 손잡이에 허용하고 지점을 어디 PSN 지점이 꺼져 도달할 때까지 앞의 방향으로 노력하고, 배면의 lvn의 양쪽에있는 조직을 버려야.
14. 반대편에있는 lvn 및 사후 신경을 분리하기 위해 13 - 단계 10를 반복합니다.
    
    
15. 위장에서 stomatogastric 신경계를 분리합니다.
    1. 완전히 위장에서 lvn를 분리하려면 PSN에 뽑아 pdn 및 pyn를 제외하고, lvn 및 복부 lvn에 연결된 모든 조직과 신경을 절단. 반대편에서이 과정을 반복합니다.
    2. 각 mvn의 측면 끝부분을 잘라 버릴거야. 측면 끝부분을 허용하고 신경 및 기본 위 조직 간의 관계없는 첨부 파일을 했네요.
    3. 앞쪽에 끝에서 commissural 신경 어떠한 관계없는 첨부 파일을 잘라, 각 측면에 입술​​ 신경을 절단.
    4. 시각 위장 조직에 추가 첨부 파일을 절단 후 식별하고 stomatogastric 신경계 시스템을 검사합니다.
    5. commissural 신경 이상, 그리고 위장에서 stomatogastric 신경계 껍질 두 commissural 신경의 앞쪽에 끝에 잡아요과 접시의 측면으로 이동합니다. 이렇게 있듯이, 신경 시스템을 무료로 남아있는 첨부 파일을 했네요.
16. 작은 Sylgard 요리를 준비합니다.
    1. 작은 접시에 Sylgard의 표면에 철저하게 몇 위 조직을 문지 르세요. 이것은 생리가 접시에 걸쳐 균등하게 배포할 수 있도록 Sylgard의 소수성을 감소합니다.
    2. 씻어 냉장 식염수에 Sylgard 요리를 입력합니다.
17. 두 commissural 신경의 앞쪽에 끝을 잡아 큰 접시의 신경계를 운반하고, 작은 접시에 누워하여 준비 Sylgard 요리에 신경 시스템을 전송합니다.
    
    
18. 텅스텐 와이어의 절단 minuten 핀과 얇은 핀을의 조합을 사용하여 작은 접시에 STNS을 핀.
    1. 준비가 하부 심실 신경 멀리 Sylgard에서 가리키는 것을 선택하여 지느러미 측면까지 있는지 확인하십시오.
    2. 두뇌를 제거하고 commissural 신경을 핀.
    3. 부드럽게 뒤로하고 옆으로 PSN의 각각 당기, 그들을 달아하여 신경계가 꽉 및 평면 당기십시오.
    4. pdn S에서 pyloric 확장시키는 근육을 제거하고, pdn s을 (를) 핀
    5. 를 제거pyn s에서 pyloric 세그먼트와 pyn s을 (를) 핀
    6. 같은 순음 신경으로 남아있는 격리 신경을 핀, mvn S 및 agn S.
19. Desheath STG합니다.
    1. STG는 Sylgard에 대한 평면이며 측면 agn S, 앞쪽에 역 및 사후 DVN에 의해 긴장 개최 있는지 확인합니다.
    2. DVN 이내 axons의 시각화를 활성화하기 위해 조명을 정렬.
    3. 작은 핀 또는 미세 텅스텐 바늘을 사용하여 STG 단 후부 DVN을 둘러싼 껍질에 작은 얕은 구멍을합니다.
    4. 신경 칼집에서 수평 눈물을 만들려면 axons에 지느러미, DVN 건너 바늘을 당겨.
    5. STG에 후부 신경 칼집의 플랩을 잡고 STG의 등의 측면에서 껍질을 제거 anteriorly 당기십시오.

약어 :
STNS	Stomatogastric 신경계
STG	Stomatogastric 신경절
코그	Commissural 신경절
역	stomatogastric 신경
mvn	중간 심실 신경
이온	열등 oesophageal 신경
아들	뛰어난 oesophageal 신경
agn	앞쪽에 위의 신경
DVN	지느러미 심실 신경
lvn	측면 심실 신경
PSN	후부 위 신경
vpln	복부 측면 후부 신경
pyn	pyloric 신경
pdn	pyloric 확장시키는 신경

토론

랍스터 위장과 STNS의 해부학은 물론 이전에 ^5,6 설명하고 있으며,이 해부 절차의 변화는 수많은 연구에서 널리 사용되었습니다. 우리는 이전부터 해부하는 ^5-7과 STNS ^5,8 위의 해부에 익숙한되고 좋습니다. 이러한 친숙는 신경 조직에 손상 사고의 위험을 감소합니다.

준비의 건강을 유지하기 위해서는 시원한 온도에서 준비를 유지하기 위해 중요합니다. 이것은 쉽게 호수에게 ˚ C 생리가 냉장고에 보관 4 매 30 분를 교환하여 이루어진다. 차가운 호수에 열중하면, 절연 STNS 준비는 많은 시간 동안 가능한 것입니다. 관련 Homarus의 gammarus의 레코딩은 체외 ⁹ 오일 내내 STG에서 안정적인 리듬 활동을 보여준, 유사한 견고은 H.에서 볼되었습니다 americanus (obs pers..).

commissural 신경에서 STG에 Modulatory 입력은 지속 모터 패턴을 유지하기 위해 필요합니다. 따라서, 정상적인 리듬 활동이 신경 및 이온, 아들을 유지하고, 역의 신경은 그대로 보관해야합니다. (위의 밀 (GM) axons를 포함), mvn S (래터럴 위장 (LG)와 인퍼리어 심장 (IC) axons를 포함), pyn S agn S : 우리가 설명 해부 여러 모터 신경을 (모터 신경 세포 axons를 포함)의 보존 (Pyloric 신경 세포 (PY) axons를 포함), pdn S 및 lvn S (래터럴 Pyloric (LP), 중간 위장 (MG), LPG의 axons뿐만 아니라 GM의 사람들을 포함하는 (Pyloric 확장시키는 (PD) axons를 포함) PD와 PY). 추가 (또는 다른) 신경을 해부함으로써, 다른 모터 신경의 axons가 기록될 수 있습니다. 모터 신경 축삭의 각 유형은 해부 및 신경에서 녹화하는하는 근육 innervating에 의해 개별적으로 기록될 수 있습니다 뉴런 프로젝트의 유형입니다.

이 준비는 신경계의 기능에 초점을 맞춘 연구의 다양한 사용할 수 있습니다. 뉴런의 활동은 somata 또는 axons에서 세포, 날카로운 전극 기록을 사용하여, 또는 신경의 전기 자극 extracellularly 녹음을 통해 기록됩니다. STG 뉴런에 많은 이온 채널은 부분적으로 복제된하고 mRNA는 수동으로 뽑아 somata ^10,11에서 측정할 수 있습니다.

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Fine Tungsten Wire (0.001 in. diameter)	Tool	California Fine Wire Company		Cut into 1-2mm pieces to use as fine pins.
Forceps #5	Tool	Fine Science Tools	91150-20
Minuten Pins	Tool	Fine Science Tools	26002-10
Moria Spring Scissors (7mm blades)	Tool	Fine Science Tools	15370-52	These are the top of the line. There are more economical spring scissors available from the same company.
Petri Dish (100x15mm)	Tool	Fisher Scientific	08-757-12	Fill 2-4mm with Sylgard 182.
Sylgard 182	Other	Dow Corning	182
Pin Holder	Tool	Fine Science Tools	26018-17	Optional. Desheathing can be done with scissors and fine forceps alone.
Super fine forceps #5SF	Tool	Fine Science Tools	11252-00
Tungsten Needles	Tool	Fine Science Tools	10130-05	Optional. Desheathing can be done with scissors or with pins cut from fine tungsten wire.
Dissection microscope