Microcoil 협와 가벼운 자궁내 Hypoperfusion의 쥐 모델

요약

가벼운 자궁내 hypoperfusion 배아 일 17에 쥐의 자 궁과 난소 동맥의 주위에 감싸인 금속 microcoils와 동맥 협 착 증에 의해 제작 되었다. 이 절차는 태아 hypoperfusion 및 자궁내 성장 제한 생산.

초록

자궁내 hypoperfusion/허 혈은 자궁내 태아 성장 제한, 조산, 낮은 출생 무게의 주요 원인 중 하나입니다. 이 현상의 대부분의 연구는 심한 자궁내 허 혈과 어느 모델이 나 자궁내 hypoperfusion의 그라데이션 정도 가진 모델에서 수행 되었습니다. 아니 연구 균일 한 가벼운 자궁내 hypoperfusion (MIUH)에 모델에서 수행 되었습니다. MIUH의 연구에 대 한 두 가지 모델 사용 되었습니다: 동맥 아케이드의 양쪽의 봉합 결 찰에 따라 모델 함께 자 궁과 난소 동맥과 과도 모델 기반으로 양측 난소 동맥과 대동맥 patency 데 클리핑. 그 두 가지 설치류 모델 MIUH의 몇 가지 한계를가지고, 예를 들어, 모든 태아는 자 궁 경적에서 그들의 위치에 따라 MIUH를 받게 됩니다. 우리의 MIUH 모델에서 모든 태아는 자궁내 hypoperfusion의 대 등 한 수준으로 받게 됩니다. MIUH는 모든 4 개의 동맥 먹이 자 궁, 즉, 양측 자 궁 및 난소 동맥의 가벼운 협 착에 의해 달성 되었다.

동맥 협 착 증 먹이 동맥의 주위에 감싸인 금속 microcoils에 의해 유도 했다. Microcoils 제어, 최적화, 그리고 아주 작은 간 동물 다양성 및 낮은 사망률 감소 혈액 흐름을 재현 하 동맥 협 착 증의 생산, 따라서 정확한 평가 활성화 합니다. 0.24 m m 내부 직경 microcoils 사용 된 태 반 및 태아 혈액 흐름은 약간 감소 (약 30%는 태 반에 사전 협 수준에서). 우리의 MIUH 모델의 자손은 명확 하 게 신경, 신경 해부학 및 행동 테스트 결과에 오랫동안 변경 보여 줍니다.

서문

자궁내 성장 금지 (IUGR) (태아 성장 제한 라고도 함)와 유아 (출생 체중 < 임신 나이 대 한 10^번째 백분위 수), (< 임신 37 주에 태어난), 조산 및 낮은 출생 무게 (< 2500 g) 계정에 대 한 모든 신생아 ^2,3의 거의 10%. 이러한 유아의 많은 뇌성 마비 및 발달 장애 (예를 들어, 관심-적자/과다 장애 (ADHD) 및 학습 장애) ^3,,45같은 신경학 적인 문제를 제시. 그 조건 유사성과 그들의 병 인 및 결과에 차이가 있다. IUGR의 병 인은 multifactorial, 그리고 자궁내 hypoperfusion와 관련 된 태 반 부족 아닌 비정상적인 태아 ⁷에서 가장 일반적인 것으로 간주 됩니다. Preterm의 병 뿐만 아니라, multifactorial 이며 자궁내 가장 빈번한 원인 ⁸입니다.

개발 두뇌에 가벼운 자궁내 hypoperfusion (MIUH)의 영향 명확 하지 않습니다. 현재 자궁내 hypoperfusion/허 혈의 사용할 수 있는 동물 모델은 주로 심한 hypoperfusion 또는 reperfusion ^9,,1011없이 hypoperfusion의 그라데이션 정도 포함 한다. 그러나 임상 설정에서, MIUH의 경우는 심각한 조건 포함 그 보다 훨씬 더 자주 해야 간주 됩니다. MIUH의 현재 사용할 수 있는 모델은 봉합 결 찰은 자 궁 또는 난소 동맥과 양측 난소 동맥과 대동맥 데 patency ^{12,13, 클리핑 관련 된 설치류 모델을 포함 하는 설치류 모델 14,15,,1617}. 이 모델의 단점 중 하나는 깊은 hypoperfusion와 태아에서 태아는 자 궁의 동맥 아케이드 내 태아의 위치에 따라 거의 그대로 관류와에 이르기까지 광범위 한 간 태아 변화, 그리고 난소 동맥입니다. 이 모델의 또 다른 단점은 출생; 후 각 태아의 위치를 구별 하는 그들의 무 능력 따라서, 연구자 자궁내 hypoperfusion 출생 후 개별 강아지에 의해 경험의 심각도 구분할 수 없습니다.

우리는 여러 동맥 협 착 증 ¹를 포함 하는 MIUH의 쥐 모델을 개발 했습니다. 난소 및 자 궁 동맥 주위 0.24 m m 내부 직경 금속 마이크로 코일을 배치 하면 협, 하지만 혈관 (그림 1)의 방해 하지. 중요 하지만 가벼운 감소 유도 배아 일 17 (인간 ¹⁸에 배아 주 20-25에 해당)에 모두 양측 자 궁 및 난소 동맥, 자 궁, 즉, 공급 동맥의 근 위 부분에 이러한 microcoils을 적용 반응과 및 태아 혈액 흐름입니다. 코일은 자 궁을 먹이 모든 4 개의 동맥에 적용 된 후 혈액 흐름의 감소는 크게 동일 하 각 태 반 및 태아. 태아 사망률은 20% 미만. 새끼는 1-2 일 이전 (배아 하루 21-22) 정상 보다 자발적인 노동을 통해 태어난 다. 거의 모든 강아지는 크게 낮은 출생 무게 ¹전시 태어난 다. 회색 및 흰색 물질 볼륨 없이 명백한 조직 손상 ¹감소 됩니다. 새끼 신생아 반사, 근육의 약점, 그리고 변경 된 자발적인 활동 ¹의 지연된 취득 제시. 이 모델을 모방 태어난 중간 또는 IUGR; 어린이의 임상 증상과 아이 태어난된 preterm 전시 감소 회색 및 백색 질 또는 백색 질 부상 ⁶, 존재 하지 않고, 신경 발달의 이정표를 지연 볼륨과 ADHD ^3,5; 같은 행동 문제가 발생할 수 있습니다. 어린이 IUGR와 최소한의 신경 해부학 변경, 전시 하 고 모터와 인지 지연 ^4,7등 장애인된 신경 개발의 증가 위험을가지고. 조산 및 IUGR 다른 조건, 하지만 기본적인 메커니즘, 즉 임신 전체 기간 전에 미 숙 두뇌에 게 모욕을 공유 하는 두 가지 조건.

프로토콜

모든 실험은 실험 동물 관리 및 사용 국가 대뇌와 순환기 센터, 스이타 시, 일본의 위원회에 의해 승인 하는 프로토콜에 따라 수행 했다.

1. 다음 동물 및 MIUH 수술에 대 한 자료 준비

1. 임신 주 17에 초과 임신 Sprague-Dawley 쥐 준비 즉, 배아 하루 17 (E17). 댐 평균 몸 무게는 307.0 ± 40.7 g (의미 ± SD, n = 9).
2. 금속 microcoils; 준비 내부 직경 0.24 m m, 금 코팅 강철로 만든.
3. 자료 테이블에 의하여 모든 재료를 준비 합니다.

2. MIUH 수술에 대 한 준비

1. 쥐 배치에 대 한 37 ° C에 난방 패드를 따뜻한
2. 장소는 생리대에 메 마른 기저귀
3. 따뜻한 물 욕조에 37 ° C에서 살 균 식 염 수

3. MIUH 수술을 수행

1. 무 균 조건 하에서 수술 절차를 수행 합니다. 코일, 집게, 사용 하기 전에 70% 에탄올과 바늘을 소독. 때때로 에탄올 스프레이 적용 하 여 소독 및 멸 균 장갑, 사용 합니다.
2. 마 취 유도 상자에 쥐를 놓습니다. 4 %isoflurane 상자 (약 5 분)에 소개.
3. 동물 철저 하 게 유도 상자에 마 취 후 부정사 위치에 생리대에 메 마른 기저귀에 쥐를 놓습니다. 발가락 핀치에 대 한 응답의 부족에 의해 마 취의 깊이를 확인 합니다. 코 콘 1.5-2.0 %isoflurane 유지 합니다.
4. 골반 아치 지역 아래로 배꼽에서 복 부에 탈모 거품을 적용 합니다. 몇 분 후 종이 타월로 depilatory 거품을 닦아내십시오. 면도기 depilatory 거품에 대 한 대용으로 사용할 수 있습니다.
5. 거 즈 피부 depilated 영역에 요오드 살 균 제 솔루션에 배어 적용 됩니다.
6. 수술 절 개 영역 이외의 복 부를 커버 하는 라운드 오프닝 수술 드 레이프를 놓습니다. 거 즈의 여러 부분에 드 레이프에 대 한 대용으로 사용할 수 있습니다.
7. 절 약 2.5 cm를 만들어 수술 메스를 사용 하 여 배꼽을 향해 위로 치 골의 위쪽 가장자리에서 낮은 복 부에 오래. 그런 다음, 아래 근육 층을 통해 절 개를 확인 합니다.
8. 드 레이프, 오프닝 주위 멸 균 거 즈의 여러 조각을 놓고 예 열된 염 분으로 거 즈를 젖은.
9. 자 궁 경적의 부분 절 개에서 나온다 그렇게 부드럽게, 복 부의 양쪽 측면을 밀어.
10. 70% 에탄올과 외과 의사의 손을 소독.
11. 부드럽게 당겨 전체 자 궁 경적 복 부 구멍에서 수동으로 집게를 사용 하지 않고. 그들은 쉽게 그들을 강하게 하 고 unevenly 압축 하 여 허약한 자 궁, 태아, 및 혈관 손상 될 수 있습니다 대로 수술 집게를 사용 하 여 권장, 되지 않습니다.
12. 젖은 거 즈에 자 궁 경적을 놓습니다.
13. 다른 자 궁 경적을 위한 동일한 절차를 수행 합니다.
14. 태아의 수를 계산 합니다.
15. 수술을 통해 자 궁을 따뜻하고 젖은 계속을 자주 예 열된 염 분을 적용 합니다.
    1. 그것은 너무 많은 염 분을 흡수 하고있다 때 기저귀를 변경 합니다. 안정성을 유지 하기 위해 소독 장갑 70% 에탄올 및 요오드와 악기의 팁을 반복 합니다. 악기의 멸 균 팁에서 비 멸 균 손가락을 유지 하는 것이 중요 합니다.
16. 아래는 stereomicroscope 난소 및 자 궁 동맥의 주요 아케이드의 근 위 부분을 식별 합니다.
    참고: 가지에서는 반응과 주요 아케이드를 구별 하는 것이 결정적 이다. 참고 자 궁 경적 대칭 이동 될 경우 외과 수술 쉽게 있을 수 있습니다. 때때로, 아케이드의 매우 인접 부분에 코일을 적용 어렵습니다, 때문에 복 강 내 깊이 위치 하 고 태 반에 동맥은 아케이드의 근 위 부분에 가까운 매우. 이 경우에, 코일에서 첫 번째 분기 포크 후 아케이드의 부분에 적용할 수 있습니다.
17. 집게와 그것을 병렬 실행 하는 정 맥에서 동맥을 분리 하 고 그들 사이 공간.
18. 동맥 아래 문자열 (실크 봉합 4.0, 길이 5 c m)의 조각을 넣으십시오.
19. 동맥은 해제 하 고 깨지기 쉬운 정 맥에서 분리 집게와 문자열의 양쪽 끝 위로 올립니다.
20. 반면에 좋은 집게로는 microcoil의 가장자리를 잡고, microcoil 해제 동맥 (그림 2.1) 옆에 놓습니다.
21. 해제 동맥 동맥 주위 microcoil 포장은 microcoil 주위에 문자열을 사용 하 여 회전 합니다. 동맥 동맥 (그림 2.2) 주위 코일 회전 보다 코일 주위를 회전 하는 것이 쉽습니다.
22. (코일은 5 회전) 동맥 3 또는 4 회전, 회전 후 다른 가장자리에 코일 유지 됩니다 사이트를 변경 합니다. 집게와 동맥 주위 포장 된 코일의 가장자리를 잡으십시오. 문자열 리프트 코일의 다른 측면을 동맥 사이트를 변경 합니다. 회전 하는 코일 주위 동맥을 코일 완전히 (5 회전) 동맥 (그림 2.3, 2.4)를 래핑합니다.
23. 문자열을 제거 합니다.
24. 다른 3 개의 동맥에 대 한 동일한 절차를 수행 합니다.
25. 참고는 자 궁에 식 염 수를 따뜻하게 자주 적용은 매우 중요; 그렇지 않으면,는 태아의 사망률 증가, 고 저체온증 신경 수 있습니다.
26. 부드럽게 복 부 구멍으로 자 궁 경적을 반환 합니다. 집게와 복 벽 절 개의 가장자리를 리프팅이 이렇게 쉽게 만들 수 있습니다.
27. Stich는 복 부 근육, 그리고 stich 봉합 (실크 봉합 4.0)와 복 부 피부. 각 stich, 즉 중단된 한 봉합 후 봉합을 묶어.
28. 과 수술 절 개 주변 요오드 살 균 제 솔루션에 젖은 거 즈를 적용 합니다.
29. 피하 0.5 mg/kg 몸 무게에서 진통 meloxicam를 관리 합니다.
30. 따뜻하게 장에 복구의 30 분을 허용 한다. 동물 집 케이지를 반환 하는 경우 완전히 깨어 케이지, 주위를 움직이고 확인 합니다.

결과

양측 자 궁 및 난소 동맥, 자 궁, 즉, 먹이 동맥의 모든 microcoils를 적용 한 후 모든 태아 hypoperfusion의 대 등 한 수준으로 받게 됩니다. 0.24 m m 내부 직경 microcoils의 응용 하면 그로 인하여 가벼운 감소 반응과 태아에 혈액 흐름을 일으키는 그 동맥의 가벼운 협 (그림 3; 약 30%는 태 반에 사전 협 수준에서 참조 자세한 내용은 1 참조). 댐에서 태어난 새끼 IUG...

토론

모두 자 궁 뿔에 난소와 자 궁 동맥의 microcoil 협 일관 되 고 재현 가능한 모든 반응과 태아에서 자궁내 hypoperfusion을 생성합니다. Hypoperfusion의 수준은 다른 내부 직경을 가진 microcoils를 사용 하 여 수정할 수 있습니다. Microcoils 0.24 m m 내경 동맥 협 착 증에 수행 된 댐에서 태어난 쥐 새끼 IUGR과 조산 (자세한 내용은 참조 1 참조)를 보여 줍니다. 새끼 신경 해부학 및 행동 변경 preterm 어린이 관찰 증상과...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Stereomicroscope
Isoflurane anesthesia machine
Anesthesia induction box
Heating pad
Diaper 30x40 cm
Depilatory foam or shaver
Iodine disinfectant solution
Gauze 10x20 cm
Surgical drape 45x45 cm with a round opening 5 cm in diameter
Spray bottle with ethanol for disinfection
Cotton swab
Forceps with large blunt tips
Forceps with angled fine tips
Scissors
Surgical scalpel, blade size is 27mm long (no.10, Axel, AS ONE Corporation, Osaka, Japan)
Surgical suture needle
Metal microcoils; inner diameter 0.24 mm, made from gold-coated steel (SAMINI Co. Ltd., Shizuoka, Japan)
Silk suture 4-0
Sterile saline (0.9% sodium chloride)
Heating water bath
Plastic syringes (50ml) and needles (18G)