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Method Article
우리는 전신 마 취를 사용 하 여 프로시저 동안 쥐에 복지를 평가 하기 위해 프로토콜을 개발. 복지의 수준 뿐만 아니라 glucocorticoid 대사 산물 분석 했다 나타내는 행동 매개 변수의 시리즈. 프로토콜은 과학, 동물 중심 방식에서 심각도의 정도 추정 하는 일반적인 보조로 사용할 수 있습니다.
3R 원칙 (대체, 감소, 구체화) 개발 Russel과 뉴욕 생명에 의해, 따라 과학 연구 가능한 동물 실험에 대 한 대안을 사용 해야 합니다. 동물 실험에 대안이 있을 때, 사용 하는 실험실 동물의 총 수는 귀중 한 데이터를 얻는 데 필요한 최소 이어야 한다. 또한, 고통, 고통, 및 실험 절차를 동반 하는 고통을 최소화 하기 위해 적절 한 수정 조치를 적용 합니다. 고통, 고통, 및 조 난의 정도 분류 하는 데 사용 하는 카테고리는 비-복구, 가벼운, 중간, 또는 심한 (EU 지침 2010/63). 확인 하려면 개별 경우에는 카테고리 적용, 과학적으로 소리 도구를 사용 하 여 결정적 이다.
여기 잘이 평가 프로토콜 절차는 전신 마 취는 설계 되었습니다. 프로토콜 내과 복지의 지표로 동작을 구축 하는 둥지 같은 집 케이지 활동, 마우스 얼굴을 찡 그리기 규모와 럭셔리 동작에 초점을 맞추고. 그것은 또한 불안 관련 행동 특성에 대 한 무료 탐구 패러다임을 사용합니다. 급성 스트레스의 지표로 지저분한 corticosterone metabolites 24 h 후 마 취 기간 동안 측정 된다.
프로토콜은 마우스 따라 전신 마 취의 과학적으로 단단한 정보를 제공 합니다. 그것의 단순 프로토콜 수 있습니다 쉽게 적응 되며 계획 된 연구에서 통합. EU 지침 2010/63에 따라 카테고리에서 조 난을 분류 하는 규모를 제공 하지는 않습니다, 그것은 과학적으로 사운드 데이터를 사용 하 여 프로시저의 심각의 정도 추정 하는 연구를 도울 수 있다. 과학, 동물을 중심으로 복지의 평가 개선할 수 있는 방법을 제공 합니다.
EU 지침 2010/631 규정 Russel과 Burch2 를 개발한 3R 원칙 (대체, 감소, 구체화) 동물 실험은 필요 때마다 적용 하는 것입니다. EU 지침의 궁극적인 목표는 모든 동물 실험, 밖으로 위상 하지만 지시문 인정, 시간이 되 고, 일부 동물 실험은 여전히 필요 인간과 동물 건강을 보호 하는 연구를 수행. 따라서, 동물 실험은 어떤 다른 방법으로 바꿀 수 없습니다, 경우는 최소한 실험실 동물의 신뢰할 수 있는 결과 얻을 하는 데 사용 될 것 이다. 또한, 고통, 고통, 및 실험 절차를 동반 하는 조 난의 양은 적절 한 수정 조치를 사용 하 여 최소화 합니다. EU 지침 2010/63 규정 한 절차의 심각도 prospectively 비 복구, 가벼운, 중간, 또는 심한1으로 분류 되어야 합니다. 심각도 분류에 사건-의해-사건을 기준으로 결정이 주어진된 절차의 심각도 평가를 과학적으로 소리 도구를가지고 중요 합니다.
모 튼과 그리피스3 에 의해 제안 된로 점수 시트 웰빙4에 부정적인 영향을 포함 하 여 정상 상태에서 어떤 편차를 감지에 필수적인 도구입니다. 점수 시트를 사용 하 회 결정 고통, 고통, 그리고 실험으로 인 한 조 난 및 개별 동물 (예를 들어, 몸 무게, 모피, 걸음 걸이)의 물리적 상태에 보이는 변화에 초점. 별관 8 세의 EU 지침 2010/63 각 심각도 카테고리의 예를 제공 합니다, 하지만 과학적으로 사용 하 여 주어진된 프로시저의 심각의 정도 추정 하 연구원은 아직도 부족 도구 데이터를 기반으로 합니다.
부정적인 복지를 보여주는 지표의 부재; 동물의 상태를 확인 하는 유일한 방법은 아니다. 긍정적인 복지를 가리키는 지표의 존재 또한 중요 한5,6,,78이다. 예를 들어 동물 내 같은 고급 동작을 표시 하 고 그들의 모든 필수 요구 충족 하는 경우에 건물 동작을 중첩. 고급 동작을 복지 감소 있다면5,7감소 처음. 복지를 평가에 사용 되는 프로토콜 상세 하 고 포괄적인 방식으로9에 웰빙을 평가 하기 위해 물리, 생리/생화학, 및 동물의 심리 상태를 가리키는 지표를 포함 해야 합니다.
세련미의 컨텍스트 내에서 프로토콜은 이러한 요구 사항을 충족 하 고 쥐10의에 전신 마 취와 관련 된 절차의 효과 평가 하기 위해 개발 되었다. 동시에 목표에 주어진된 실험 프로토콜의 쉽게 통합할 수 있도록 추가적인 스트레스를 최소화 했다. 프로토콜 내 행동, 활동, 음식 섭취, 중첩 등 홈 케이지 동작 및 특성 불안 관련 행동을 고려 합니다. 또한, 그것은 포함 마우스 얼굴을 찡 그리기 규모 (MGS), 및 비-침략 적 분석 corticosterone 대사 산물의 배설물. 과학 고 동물을 중심으로 복지의 평가 촉진 하 고 심각성의 정도의 분류를 지 원하는 복지에 정보를 제공 하는 프로토콜은 설계 되었습니다. 점수 시트, 뿐만 아니라 그것은 절차의 심각도 분류에 대 한 유용한 정보를 제공할 수 있습니다. 프로토콜 수행 하기 쉬운 하 고 광범위 한 장비를 필요로 하지 않습니다, 연구의 결과 영향을 주지 않고 지속적인 실험으로 통합 될 수 있습니다. 주목 해야 한다 그 동물 연구: 보고의 Vivo 실험 (도착) 지침11 동물 실험, 설계, 분석, 개선 및 보고의 목표와 관련 된 모든 연구에서 관찰 될 것 이다.
학문과 독일 동물 복지 행위에 의해 규정 하는 지침에 따라 수행 했다 베를린 국가 기관에 의해 승인 되었다 ("Landesamt 위한 Gesundheit und Soziales", 허가 번호: G0053/15).
참고:이 프로토콜의 주요 목적은 glucocorticoid metabolites에 반복 된 마 취의 효과 조사 했다. 샘플 크기를 계산 하는 사용 되는 동물의 수를 결정 하기 위해 수행 되었다: n ≥ 2 × (s/μ1-μ2)2 × (zα +βz)2. μ1-μ2 는 전력 및 샘플 크기 계산 만들어집니다 모집단 평균 차이 (α = 5%, β = 80%); zα = 1.96 및 zβ = 0.84는 표준 정규 분포의 quantiles. 그림 1 에서는이 프로토콜의 타임 라인을 보여 줍니다. 매개 변수는 프로토콜의 제어 수준 차이 보여줍니다, 동물을 밀접 하 게 모니터링 해야 하 고 적당 한 기간 후에 다시 매개 변수를 측정 한다. 예를 들어 특성 불안 관련 행동을 증가 하는 경우이 동작이 테스트 해야 다시 1 주일 후, 전체 복구까지 기간을 결정할 수 있도록. 시간 포인트 및이 프로토콜에 정의 된 다른 프로시저와 함께 사용 하기 위해 적용할 수 있습니다. 시간 포인트를 변경할 때 프로토콜에 설명 된 대로 habituation 기간 유지 되어야 한다. 마우스의 동작에 영향을 줄 수 있는 요소를 줄이기 위해 마우스의 정상적인 동작을 방해 하지 않는 테스트 후 더 조작 해야 하는 테스트를 실시 한다. 그림 2 에 요약 점수 시트를 사용 하 여 프로토콜의 모든 테스트 요약 되어 있습니다. 그림 3 테스트 결과 해석 하는 방법에 대 한 개요를 주는 웰빙, 등급의 단순화 된 스케일을 제공 합니다.
1. 실험에 의해 처리를 마우스 habituating
2. 행동 시험장 및 기구 준비
참고: 테스트를 위해, 이상적으로 동물 지켜진다 룸 근처 별도 룸을 제공 합니다. 절차를 수행 하기 전에 테스트 룸 적어도 60 분에 자신의 홈 새에 쥐를 전송 합니다. 만약에 가능 하다 면, 절차를 실시 하는 동일한 테스트 룸에서이 프로토콜의 모든 테스트를 수행 합니다.
3. 마우스 얼굴을 찡 그리기 규모
참고:는 MGS 3 시간 지점에서 관측 장에 촬영에 대 한 사진: (i) 2 일전 기록 기준선 MGS 수준, 후 절차, (ii) 30 분 및 (iii) 150 분 후에 절차에 절차. 웰빙은 장애인, 점수는 MGS에 증가 합니다. 증가 MGS 점수는 아직도 150 분 후, 관찰 하는 경우 나중 단계에서 추가 사진 걸릴.
4. 내 행동8,,1516
5. 24 시간 관찰 기간
참고: 마우스 2.2에 설명 된 대로 개별적으로 보관 됩니다. (그림 5), 24 h 동안 식품을 측정 하기 위해 섭취, 홈 케이지 활동, 둥지 건물 행동과 FCM 수준. 24 시간 관찰 두번 일어난다: (i) 2 일전 절차 초기 레벨, (ii) 절차의 날에.
6. 무료 탐구 패러다임
이 프로토콜은 원래 C57BL/6JRj 마우스 isoflurane 마 취에의 한 경험을 다음의 평가를 개발 (일 분 마 취 세션, n = 13 여성) 또는 반복된 isoflurane 마 취 (6 45 분 마 취 세션 3-4 일 마 취 세션, n = 13 여성) 컨트롤 마우스의 비교 (n = 6 여성)10, 아니 마 취를 받은 하지만 같은 조치에 따라 시험. 우리는 isoflurane 마 취와 반복된 isoflurane 마 취의 치료 되지 않는 통제 쥐에 ?...
프로토콜은 단일 마 취 또는 반복된 isoflurane 마 취를 받은 C57BL/6JRj 쥐의 평가에 원래 개발 되었다. 결과 확인 고급 동작을 테스트 뿐만 아니라 다른 조치 (예: 자유 탐구 패러다임, MGS, 내 음식 섭취 량) 복지를 평가 하기 위한 중요 한 방법 이었다. 반복된 isoflurane 마 취 특성 불안 관련 행동, MGS, 내 행동에 단기 효과 발생합니다. 또한, 반복된 isoflurane 마 취 영향 음식 섭취10?...
저자는 공개 없다.
샘플 컬렉션,에 디스 Klobetz-Rassam FCM의 분석에 대 한 지원에 대 한 Sabine 제이콥스 감사 PD 박사 중견 기업 수 의사. habil입니다. 통계 분석을 위한 Roswitha Merle 그리고 Wiebke Gentner 원고를 교정에 대 한. 연구의 일부인 베를린-브란덴부르크 연구 플랫폼 BB3R (www.bb3r.de)와 독일 연방 교육부의 연구에 의해 투자 되었다 (허가 번호: 031A262A) (www.bmbf.de/en/index.html).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Isofluran | CP-Pharma Handelsgesellschaft mbH | 1214 | |
InfraMot - Sensore Units | TSE Systems | 302015-SENS | |
InfraMot - Control Units | TSE Systems | 302015-C/16 | |
InfraMot - Software | TSE Systems | 302015-S | |
Nestlet N | Ancare - Plexx | NES3600 | |
Camera EOS 350D | Canon |
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