Rats에서 유래한 Decellularized Spleen Matrix의 제작

요약

탈세포화된 비장 매트릭스(DSM)는 간 조직 공학 분야에서 유망한 응용 분야를 보유하고 있습니다. 이 프로토콜은 쥐 비장 채취, 관류를 통한 탈세포화, 결과 DSM을 평가하여 특성을 확인하는 것을 포함하는 쥐 DSM을 준비하는 절차를 간략하게 설명합니다.

초록

간 이식은 말기 간 질환의 주요 치료법입니다. 그러나 기증 장기의 부족과 불충분한 품질로 인해 대체 요법의 개발이 필요합니다. 탈세포화된 간 기질(DLM)을 활용하는 생체 인공 간(BAL)이 유망한 솔루션으로 부상하고 있습니다. 그러나 적절한 DLM을 소싱하는 것은 여전히 어려운 과제입니다. 탈세포화 비장 기질(DSM)의 사용은 BAL의 기초로 연구되어 쉽게 사용할 수 있는 대안을 제공합니다. 이 연구에서는 쥐의 비장을 채취하고 동결-해동 주기와 탈세포화 시약을 사용한 관류를 조합하여 탈세포화했습니다. 이 프로토콜은 DSM 내에서 세포외 기질(ECM)의 미세 구조와 구성 요소를 보존했습니다. 완전한 탈세포화 공정에는 약 11시간이 소요되어 DSM 내에서 온전한 ECM을 얻을 수 있었습니다. 조직학적 분석을 통해 ECM의 구조와 조성을 유지하면서 세포 성분이 제거되는 것을 확인했습니다. 제시된 프로토콜은 DSM을 획득하기 위한 포괄적인 방법을 제공하여 간 조직 공학 및 세포 치료에 잠재적인 응용 분야를 제공합니다. 이러한 발견은 말기 간 질환 치료를 위한 대체 접근법 개발에 기여합니다.

서문

간 이식은 말기 간 질환에 대한 유일한 최종 치료법으로 남아^{있습니다 1,2,3}. 그러나 기증 장기의 심각한 부족과 품질 저하로 인해 대체 치료법의 필요성이 높아졌다⁴. 재생 의학 분야에서는 탈세포화 간 매트릭스(DLM)를 활용하는 생체 인공 간(BAL)이 유망한 솔루션으로 부상했습니다 ^5,6,7. DLM은 복잡한 미세혈관 네트워크와 ECM의 구성 요소를 포함한 원래의 간 구조를 보존하여 간 질환을 완화할 수 있는 이식 가능한 BAL을 만들기 위한 골격을 제공합니다.

이러한 약속에도 불구하고 이 기술의 채택은 특히 적합한 DLM을 소싱하는 데 어려움을 겪고 있습니다. 인간 유래 DLM은 공급이 부족한 반면 동물에서 유래한 DLM은 질병 전염 및 면역 거부 반응의 위험이 있습니다. 혁신적인 접근 방식으로, 우리의 연구는 BAL

프로토콜

이 연구는 Xi'an Jiaotong University의 동물 실험 윤리위원회의 승인을 받았으며 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 지침에 따라 수행되었습니다.

1. 비장 적출

1. 무게가 250-280g인 수컷 Sprague Dawley 쥐를 사용하십시오. 온도와 습도가 조절되는 방에 쥐를 수용하고 수술 전 금식을 제외하고는 즉시 음식과 물을 제공하십시오.
2. 수술 1시간 전에 진통제로 부프레노르핀(0.05mL/kg)을 피하 주사합니다. 이소플루란 흡입으로 쥐를 마취시킵니다. 플렉시글라스 상자에서 유도 마취를 위해 5% 이소플루란의 1.5L/min의 유속을 사용하고 마스크를 통해 2% 이소플루란의 0.6-0.8L/min의 유속으로 마취를 유지합니다. 발가락을 끼워 마취의 깊이를 확인합니다.
3. 전기 면도기를 사용하여 복부 전체의 피부를 면도하십시오. 수술 테이블에 쥐를 누운 자세로 고정합니다. 음경 등쪽 정맥을 통해 헤파린화 식염수 2mL(헤파린 1,000U)를 주입하여 전신 항응고를 달성합니다. 포비돈 요오드 용액으로 면도한 피부를 소독하고 멸균 드레이핑 천으로 덮습니다.
4. 수술용 가위를 사용하여 복부를 십자형으로 절개하고, 지혈 겸자....

토론

BAL은 말기 간 질환의 치료를 위한 효과적인 접근법이며, 특히 현재 기증 장기의 부족으로 인해 간 이식이 방해를 받는 경우에 효과적이다⁶. BAL을 생성하기 위한 유망한 옵션은 고유 간의 자연적인 ECM과 혈관 구조를 보존하는 DLM을 활용하는 것입니다. 그러나 인간 DLM의 희소성과 동물 DLM과 관련된 감염 및 면역원성의 잠재적 위험은 상당한 한계를 제시합니다. 이 문제를 해결하기 .......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anesthesia Machine	Harvard Apparatus	tabletop	animal anesthesia
bubble trap	Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd.	pore diameter: 5 μm	prevent air bubbles
Buprenorphine	TIPR Pharmaceutical Responsible Co.,Ltd		an analgesic
Hemostatic Forceps	Shanghai Medical Instruments  Co., Ltd	J31020	surgical tool
Heparinized Saline	SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co., LTD		prevent the formation of thrombosis
Isoflurane	RWD life Science Co.		anesthetic:for the induction and maintenanceof anesthesia
Penicillin-Streptomycin	Beyotime Biotechnology Co., Ltd.	C0222	antibiotics in vitro to prevent microbial contamination
Peristaltic Pump	Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd.	BT100-1L
Phosphate-Buffered Saline	Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.	4481228	phosphoric acid buffer salt solution
Silicone Tube	Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd.	2.4×0.8mm
Silk Suture	Yangzhou Jinhuan Medical Instrument Factory	6-0 and 3-0	ligate blood vessels
Sodium Dodecyl Sulfate	Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.	151-21-3	ionic detergent, dissolves both cell and nuclear membranes
Syringe Pump	Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd	BeneFusion SP5	intravenous infusion
Triton X-100	Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.	9002-93-1	non-ionic detergent, disrupts lipid-lipid, lipid-protein, and DNA-protein interactions
Venous Catheter	B. Braun Company	24G	inserting the spleen artery