이전에 얻은 A2780 세포 펠릿에 500 마이크로 리터의 용해 완충액을 첨가하고 최소 개구 직경이 2 밀리미터 인 절단 팁을 사용하여 부드럽게 혼합합니다. 갓 준비한 RNase를 밀리리터당 20마이크로그램 첨가하고 부드럽게 반전시켜 혼합합니다. 섭씨 37도에서 30 분 동안 배양하십시오.
배양이 끝나면 proteinase K를 밀리리터 당 100 마이크로 그램의 최종 농도에 첨가하고 부드럽게 10 회 반전시킵니다. 섭씨 55도에서 1시간 동안 다시 배양하여 10분마다 튜브를 뒤집습니다. 페놀:클로로포름:이소아밀 알코올 시약 500마이크로리터를 튜브에 넣고 튜브를 약 20회 부드럽게 뒤집습니다.
실온에서 15 분 동안 9, 391 G에서 원심 분리한다. 상부 수성 점성 층을 새 튜브에 피펫팅합니다. 같은 양의 클로로포름을 첨가하고 부드러운 반전으로 혼합하십시오.
튜브를 한 번 원심분리한 후 수층을 수집합니다. 튜브에 적절한 양의 5몰 염화나트륨을 첨가하여 농도를 0.2몰 증가시킵니다. 튜브에 100% 에탄올 2개를 넣고 부드럽게 20회 뒤집습니다.
실온에서 5 분 동안 15, 871 G에서 원심 분리한다. 상청액을 버린 후 500 마이크로 리터의 70 % 에탄올을 첨가하십시오. 동일한 조건에서 다시 원심분리한 다음 상층액을 버립니다.
펠릿이 공기 건조되면, 50 마이크로리터의 멸균 뉴클레아제가 없는 물을 추가하고 재수화시킵니다. 그런 다음 절단된 팁을 사용하여 피펫팅하여 DNA를 혼합합니다. UV 분광 광도법을 사용하여 DNA의 농도를 측정합니다.
DNA를 소화한 후 0.8% agarose를 사용하여 분리합니다. 아가로스 겔을 0.25 몰 염산 용액에 담가두고, 실온에서 10분 동안 부드럽게 교반한다. 그런 다음 증류수로 젤을 두 번 헹굽니다.
DNA를 변성시키려면 겔을 수산화나트륨과 염화나트륨 용액에 담그십시오. 그런 다음 증류수로 젤을 두 번 헹굽니다. 입증된 바와 같이 DNA를 중화하기 위해, 겔을 pH 7에서 0.5몰 염산 및 3몰 염화나트륨의 용액에 담근다.
추출기 게놈 DNA는 텔로미어 제한 단편의 추가 다운스트림 처리에 사용됨을 나타내는 우수한 무결성을 보여주었습니다.
