소포막을 염색하기 위해 형광 지질 염료 FM4-64를 2마이크로몰의 최종 농도로 정제된 소포에 첨가하고 이미징 전에 10분 동안 배양합니다. 대장균 배양물로부터 단백질로 채워진 소포를 분리한 후, 정제된 소포를 1밀리미터 미만의 얇은 원형 2%LB 아가로스 패드에 피펫팅하여 깨끗한 유리 슬라이드 상에 형성하고 세팅하였다. 액체가 마르면 패드의 소포 위에 50mm x 25mm 덮개 슬립을 놓습니다.
스페이서와 접착 테이프로 덮개 슬립을 제자리에 고정합니다. 그런 다음 오일 이멀젼 대물렌즈를 사용하여 도립 현미경에 슬라이드를 장착하고 샘플이 가라앉고 온도가 평형을 이루도록 2-3분 동안 그대로 둡니다. 단일 프레임 이미지의 경우 세 가지 이미지 평균을 사용하여 하드웨어에 종속된 임의 배경 노이즈를 줄입니다.
타임랩스 이미징의 경우 개별 프레임 사이에 3-5분이 소요됩니다. 광시야 형광 현미경 이미징은 소포를 함유한 정제된 양막 녹색을 보여주었습니다. 친유성 형광 염료인 FM4-64는 소포막의 존재를 확인했습니다.
내막 단백질인 CydB를 발현하는 살아있는 박테리아 세포의 구조화된 조명 현미경은 양막 녹색 및 VNp6-mCherry2에 융합되어 소포 생산 및 화물 삽입을 보여주었습니다.
