시작하려면 hBM-MSC 튜브를 가져 와서 원심 분리로 펠렛을 만듭니다. 상층액을 버리고 펠릿을 적절한 양의 기본 배지에 재현탁하십시오. 그런 다음 각 성장 인자로 보충된 필요한 양의 기본 배지가 들어 있는 50밀리리터 원추형 원심분리기 튜브를 준비합니다.
마지막으로, 원액으로부터 hBM-MSC를 1 내지 66.67의 희석액으로 첨가하여 밀리리터당 1.5배 10 내지 5번째 세포의 농도를 달성한다. 96 웰 하이드로겔 플레이트를 덮고 있는 폴리프로필렌 접착 필름을 제거하여 플레이트를 시딩한다. 흡인기 팁을 웰 벽에 대고 내부 웰의 가장자리를 향해 천천히 움직여 하이드로겔을 덮고 있는 저장 버퍼를 조심스럽게 흡인합니다.
파종하는 동안, 혼합물을 균질하게 유지하기 위해 주기적으로 세포 현탁액을 혼합하고 플레이트의 각 웰에 200 마이크로 리터의 세포 현탁액을 첨가한다. 그런 다음 가습 된 대기에서 섭씨 37도 및 이산화탄소 5 %로 배양 물을 유지합니다. 또는 흡인 노즐이 플레이트 캐리어에서 웰 가장자리 쪽으로 최소 3.8mm 설정된 자동 플레이트 와셔를 사용하여 저장 버퍼를 흡인합니다.
세포를 혈청학적 피펫과 혼합하고 동일한 수의 세포를 플레이트의 웰에 분배하여 플레이트를 시드합니다. 5배 대물렌즈로 명시야 현미경으로 배양 발달을 모니터링하고 파종 후 약 30분 후에 참조 이미지를 획득하여 추가된 세포 수를 평가합니다.
