Establishing the 3D Stromal-Endothelial Cell Co-Culture

시작하려면 80-100%의 합류 수준으로 성장한 GFP-HUVEC의 펠릿을 취하여 적절한 부피의 기본 배지에 세포를 재현탁하여 원액 밀리리터당 10-7번째 세포의 1배 농도를 달성합니다. 각 성장 인자로 보충된 필요한 양의 기본 배지가 들어 있는 50밀리리터 원추형 원심분리기 튜브를 준비합니다. 원액으로부터 GFP-HUVECs를 1 내지 66.67의 희석액으로 첨가하여 마이크로리터당 1.5 내지 5번째 세포에 1.5배의 농도를 달성한다.

이어서, 기질 단일배양물을 함유하는 플레이트로부터 배지를 흡인하고, 제조된 GFP-HUVECs 현탁액을 웰 당 200 마이크로리터 첨가한다. 섭씨 37도에서 5 % 이산화탄소로 가습 된 대기에서 배양하고 3-4 일마다 배지를 교체합니다. 5배 대물렌즈를 사용하여 명시야 및 형광 현미경으로 배양물의 발달을 모니터링합니다.

배양 간의 차이는 GFP-HUVEC만 보여주는 명시야 및 형광 이미지에서 관찰할 수 있었습니다. 배양물은 어떠한 성장 인자도 없이 덜 발달된 것으로 나타났지만, FGF-2의 존재 하에서 더 빠른 발달이 관찰되었다. 대조적으로, 명시야 이미지는 BMP-2의 존재 하에서 가장 밀도가 높은 배양을 보여주었습니다.

그러나, 성장 인자-함유 조건 및 가장 광범위하고 상호연결된 네트워크 둘 다에서 형성된 혈관 유사 네트워크는 FGF-2로 형성되었다.