시작하려면 멸균 후드에서 오토클레이브 24 웰 포트를 에탄올 멸균 셀 모듈에 나사로 고정합니다. 각 냄비에 900마이크로리터의 기본 매체를 추가합니다. 이제 오토클레이브 침지 전극을 셀 모듈 덮개에 자기적으로 연결합니다.
그런 다음 침지 전극이 하단 전극 포트에 맞도록 웰 위의 뚜껑을 닫습니다. 그런 다음 셀 모듈을 인큐베이터의 어댑터에 부착합니다. 그런 다음 소프트웨어를 실행하고 레이아웃 탭을 클릭하여 실험용 플레이트 맵을 로드하고 주석을 달 수 있습니다.
멸균 24웰 배양 플레이트를 사용하여 멤브레인 인서트를 고정합니다. 코팅이 필요한 경우 단일 채널 피펫을 사용하여 웰의 교차점에 세포외 기질 용액을 추가하고 뇌 내피 세포를 각 웰 삽입물의 정점 챔버에 조심스럽게 파종합니다. cell-free well을 생성하기 위해 피펫팅은 인서트 중 하나에 완전한 매체만 주입합니다.
그런 다음 인큐베이터의 세포 모듈을 멸균 후드로 옮깁니다. 핀셋을 사용하여 준비된 인서트를 전극 포트에 조심스럽게 옮깁니다. 셀 모듈을 어댑터 위의 인큐베이터에 다시 놓습니다.
그런 다음 실험 제어 탭에서 스펙트럼 섹션을 찾고 100kHz에서 시작하여 100kHz에서 중지를 선택하여 전체 주파수 범위에 대한 데이터를 수집합니다. 그런 다음 대기 시간에서 15분을 선택하여 가장 빠른 속도로 연속 측정을 허용합니다. 시작을 눌러 데이터 수집을 시작합니다.
약 48시간 후, 내피 저항성의 정체기에 도달하면 준비된 처리제를 인큐베이터에 넣어 최적의 온도를 유지합니다. 15분 측정 직후부터 시작되는 선택한 치료 시간에 셀 모듈을 제거합니다. 멸균 후드에서 세포 모듈을 엽니다.
그런 다음 70 마이크로 리터의 처리물을 각 삽입물의 정점 챔버에 조심스럽게 피펫팅합니다. 다음 측정이 시작되기 전에 즉시 셀 모듈을 어댑터에 반환하십시오. 실험을 종료하려면 중지 버튼을 누른 다음 파일을 클릭한 다음 내보내기를 클릭하여 데이터를 XLS 파일로 직접 내보내고 적절하게 이름을 지정합니다.
반복 웰 간에 약간의 변동이 관찰되었지만, 데이터 정규화는 이 변동을 줄이고 대조군과 처리를 더 잘 비교할 수 있게 해주었습니다. 트랜스 내피 전기 저항의 일시적인 감소는 사이토카인이 추가되었을 때 관찰되었습니다. 흑색종 세포주는 5시간 이내에 저항성을 크게 감소시켰습니다.
