탈세포화된 폐 세포외 기질 하이드로겔 형성을 위한 소 폐 조직의 수확, 탈세포화 및 펩신 소화

1 시작하려면 얼린 소의 폐 조직2를 섭씨 80도에서 3 제거하고 실온에서 해동시킵니다. 4 멸균 메스와 가위를 사용하여 조직을 절개하고 5 기관과 연골기도를 제거한 다음 6 조직을 작은 조각으로 민트합니다. 7 : 8 % 페니실린과 스트렙토 마이신이 함유 된 초순수 9로 2 번 씻습니다.

10 다진 조직 샘플 11을 2% 요오드 용액에 1분 동안 담그고, 12 멸균 증류수에서 13을 2회 연속 세척합니다. 14 티슈 조각을 50 밀리리터 튜브 15에 최대 15 밀리리터 표시까지 옮깁니다. 16 : 증류수 17로 튜브를 맨 위까지 채우고 액체 질소에 2 분 동안 얼립니다.

18 그런 다음 즉시 튜브를 섭씨 19도의 물이 들어 있는 비커 37에 10분 동안 옮깁니다. 20 5회의 동결 해동 주기 후, 21은 샘플을 DNase 용액 30밀리리터(22)에 넣고 섭씨 37도에서 1시간 23년 동안 일정한 교반으로 배양합니다. 24 습식 탈세포화된 세포외 기질 샘플 25를 섭씨 80도에서 24시간 동안 동결합니다.

26: 동결 샘플을 동결건조기(27)로 이송하고 완전히 건조될 때까지 3-4일 동안 진공 28 하에서 건조 모드로 작동한다. 29 동결 건조 후, 30 드라이 아이스를 함유하는 분쇄 장치에서 샘플을 미세한 분말 (31)로 밀링합니다. 32 폐 조직을 1 % Triton-X-100 33으로 3 일 동안 섭씨 4도에서 34 부드럽게 회전하면서 35 24 시간마다 용액을 교체합니다.

36 : DNase 용액 37에서 일정한 교반으로 섭씨 37도에서 1 시간 동안 샘플을 배양합니다. 38 증류수로 조직을 세척하십시오 39 일정한 롤링하에 3 일 동안 40 24 시간마다 물을 보충합니다. 41 마지막 세척 후 이전에 설명한 대로 동결건조 및 극저온 밀링 42를 수행합니다.

43 44 분말 탈세포화 세포외 기질 샘플 45를 1 밀리리터 펩신 용액 46에 넣고 실온에서 48시간 동안 일정하게 교반하면서 분해한다. 47 효과적인 소화를 위해 용액 pH를 2로 유지하십시오. 48 5, 10 분 동안 000 g에 조직 소화를 분리한다 49 상층액을 제거한다.