시작하려면 Brassica napus DH12075의 씨앗을 마이크로 튜브에 넣으십시오. 씨앗을 탈지하기 위해 마이크로 튜브에 물과 0.1% 세제를 넣고 60초 동안 흔듭니다. 이제 씨앗을 물로 헹구고 70 % 에탄올을 각각 60 초 동안 헹굽니다.
다음으로 씨앗을 차아염소산나트륨 10% 용액에 넣고 20분 동안 흔듭니다. 표백제를 제거한 후 멸균수로 씨앗을 각각 60초 동안 4회 씻습니다. 씨앗 발아 배지가 들어있는 페트리 접시에 씨앗을 놓습니다.
씨앗을 섭씨 4도에서 밤새 차갑게 층화시킨 후 접시를 재배실로 옮깁니다. 5일 후, 묘목을 식물 성장 배지가 들어 있는 식물 배양 상자에 옮깁니다. 5 밀리리터의 LB 배지에 털이 많은 뿌리 유도 플라스미드 PRIA 4B를 운반하는 Ti less agrobacterium tumefaciens C58C1을 접종하십시오.
0.9 대 1의 600 나노 미터에서 광학 밀도에 도달 할 때까지 섭씨 28도에서 밤새 배양액을 성장시킵니다. 박테리아 접종물을 주사기로 옮깁니다. 주사기에 장착된 26게이지 바늘을 사용하여 생후 18일 된 묘목의 자엽을 성장 배지에서 약 1cm 위에 뚫습니다.
약 50 마이크로 리터의 접종물을 상처에 주입하고 hypocotyl 표면의 조직을 긁습니다. 식물을 섭씨 21도의 재배실로 2-4주 동안 되돌립니다. 다음으로, hypocotyl에서 털이 많은 뿌리가 나온 굳은살을 잘라냅니다.
털이 많은 뿌리가 있는 굳은살을 털이 많은 뿌리 성장 배지와 농균 성장을 억제하는 항생제가 들어 있는 페트리 접시에 놓습니다. 섭씨 24도에서 배양하기 전에 가스 투과성 테이프로 접시를 밀봉하십시오. 배양 후 굳은살에서 털이 많은 뿌리를 분리하고 개별 뿌리를 털이 많은 뿌리 성장 배지로 옮깁니다.
또는 야생형 새싹과 형질전환 털이 많은 뿌리로 구성된 복합 식물을 생성하려면 식물의 토착 뿌리를 제거합니다. 그런 다음 털이 많은 뿌리가 있는 식물을 식물 성장 배지와 농균 성장을 억제하는 항생제가 들어 있는 배양 상자에 옮깁니다.
