시작하려면 표면 멸균된 Arabidopsis thaliana Col-0 씨앗을 종자 발아 배지가 들어 있는 접시에 놓습니다. 이틀 동안 저온 성층화 후 접시를 섭씨 21도, 긴 낮의 광주기와 50% 습도로 설정된 재배실로 옮깁니다. 1주일 된 묘목을 식물 성장 배지가 있는 식물 배양 상자에 옮깁니다.
LB 배지에서 Agrobacterium tumefaciens 배양액이 0.9 대 1의 600 나노미터에서 광학 밀도에 도달할 때까지 성장시킵니다. 인슐린 주사기에 장착된 바늘을 사용하여 1개월 된 애기장대 묘목의 1차 꽃차례 줄기 기저부에 약 50마이크로리터의 박테리아 배양액을 주입합니다. 주사기로 1차 줄기 표면의 조직을 긁습니다.
2-4주 후, 떠오르는 털이 많은 뿌리를 절제하고 농균 성장을 억제하기 위해 항생제가 보충된 털이 많은 뿌리 성장 배지와 함께 페트리 접시에서 재배합니다. 어둠 속에서 섭씨 24도에서 털이 많은 뿌리를 배양합니다. 1-2주 후, 접시에 있는 털이 많은 뿌리를 털이 많은 뿌리 성장 배지로 개별화하고 선택한 털이 많은 뿌리 라인을 4-5주마다 새로운 배지로 옮깁니다.
털이 많은 뿌리를 재생 배지가 있는 접시에 옮겨 굳은살 형성을 유도하고 긴 하루 동안 섭씨 21도에서 배양합니다. 굳은살에서 싹이 나오면 싹을 자르고 2-3주 동안 싹 신장 배지로 옮겨 성장과 신장을 촉진합니다. 그런 다음 길쭉한 싹을 뿌리 유도 매체로 옮깁니다.
마지막으로 뿌리가 있는 식물을 토양으로 옮겨 유전자 변형 선택을 수행합니다. A.thaliana에서, 노란색 캘리는 테스트된 모든 털이 많은 뿌리 라인에서 14일 이내에 유도되었습니다. 짙은 녹색 반점으로 보이는 첫 번째 싹 원시(primordia)는 재생 배지로 옮긴 후 3주 이내에 나타났습니다.
4주 후, 싹은 선의 90%에서 털이 많은 뿌리를 덮었고 일부 경우에는 우발적인 뿌리 형성을 보였습니다. 그러나 3개월이 지나도 한 줄이 재생되지 않았습니다. 야생형과 비교했을 때, A.thaliana의 털이 많은 뿌리 재생제는 빽빽한 뿌리 시스템, 주름진 잎 및 변경된 개화 시기를 가진 왜소한 표현형을 나타냈습니다.
