먼저 TNF 알파, 인터루킨-1 베타 및 인터루킨-6 검출을 위해 스트렙타비딘 기능성 나노입자를 튜브에 추가합니다. 스트렙타비딘과 나노입자를 동일한 부피의 PBS로 희석합니다. 그런 다음 비오틴화된 포획 항체 용액을 튜브에 추가하고 실온에서 30분 동안 배양합니다.
다음으로, 각 튜브에 0.01%의 1mMOL D-Biotin 용액을 추가하고 5분 동안 배양합니다. 그런 다음 네오디뮴 자석을 튜브 가까이에 대고 입자를 수집합니다. 투명한 상층액을 버리고 즉시 Pluronic F-127과 PBS의 혼합물에 나노 입자를 재현탁시키고 30분 동안 배양합니다.
저장 버퍼에서 30분 동안 입자를 배양한 후 균일한 혼합물이 되도록 저어줍니다. 캡슐화 직전에 인터루킨-6, TNF 알파 및 인터루킨-1 베타에 대한 복합 나노입자를 결합합니다. 이제 앞에서 설명한 것처럼 자석을 사용하여 완전한 매체로 입자를 세척하고 비드를 완전한 매체에 재현탁시킵니다.
그 후, 인터루킨-6, TNF 알파 및 인터루킨-1 베타에 대한 검출 항체를 추가하여 최종 농도 10나노몰을 얻습니다.