형광 이미징을 위해 세포와 나노입자를 액적에 캡슐화

시작하려면 1밀리리터 주사기에 500마이크로리터의 연속상을 채웁니다. PTFE 마이크로튜빙을 27게이지 0.75인치 바늘에 부착합니다. 어셈블리를 주사기에 장착한 다음 주사기 펌프에 장착합니다.

그런 다음 0.75mm 생검 펀치를 사용하여 PDMS 컷아웃 중간에 구멍을 뚫습니다. 컷아웃의 구멍을 통해 약 3cm의 PTFE 튜브를 당기고 어셈블리를 200마이크로리터 피펫 팁의 상단으로 밀어 넣습니다. 피펫 상단의 UV 경화 접착제로 커넥터를 밀봉하고 튜브의 다른 쪽을 23 게이지 1.25인치 바늘에 부착합니다.

다음으로, 1밀리리터 주사기 2개에 500마이크로리터의 경질 미네랄 오일을 채웁니다. 맞춤형 부착물로 두 개의 23 게이지 바늘을 부착하고 주사기 펌프에 장착합니다. 주사기 펌프 제어 소프트웨어를 사용하여 기능성 나노입자 및 세포 용액을 수성의 피펫 팁에 흡입합니다.

준비된 관찰 챔버를 청소한 후 clamp 챔버를 30도에서 두 개의 네오디뮴 자석이 장착된 인쇄된 챔버 홀더에 넣습니다. 이제 두 포트를 모두 열고 상단 포트에 종이 타월을 꽂아 채우는 동안 과도한 외부 단계를 흡수합니다. 연속상을 미세유체 칩의 상단 입구에 연결합니다.

그런 다음 시간당 1800 마이크로 리터의 유속으로 약 30 초 동안 연속 상으로 칩을 플러시합니다. 수용액의 피펫 팁을 칩의 두 중간 입구에 부착합니다. 각 용액에 대해 시간당 200 마이크로 리터에서 수용액의 흐름을 시작하십시오.

액체가 배출구에 나타나면 시간당 800마이크로리터에서 불소화 오일상 흐름을 시작합니다. 배출구에서 균일한 회색의 반짝이는 용액으로 표시된 안정적인 액적 생성이 확립될 때까지 기다리십시오. 그런 다음 PTFE 마이크로튜브를 출구 포트에 연결하여 물방울을 수집합니다.

손가락으로 조이는 일체형 피팅의 페룰 모듈을 사용하여 관찰 챔버로 안내합니다. 챔버가 채워지면 흐름을 멈추고 손가락으로 꽉 조이는 압력을 사용하여 포트 플러그로 포트를 닫습니다. 액적 생성 후 칩을 불소화유로 세척한 다음 질소를 사용하여 남아 있는 액체를 불어냅니다.

챔버 홀더를 웰 플레이트 형식의 스테이지가 있는 현미경에 장착합니다. 그런 다음 10x 대물렌즈를 사용하여 현미경을 명시야 채널로 전환합니다. 명시야에서 움직이지 않는 액적에 초점을 맞추고 챔버 중앙으로 이동합니다.

그런 다음 자동 초점 시스템을 활성화합니다. 명시야 채널의 측정 평면을 조정하여 액적 가장자리가 오일 위상 및 배경에서 쉽게 구별할 수 있는 날카로운 검은색 원으로 나타나도록 합니다. 각 형광 채널을 통과하여 최적의 측정 평면을 설정합니다.

재배치 측정의 경우 FITC, TRITC 및 Cyanine5 채널의 나노 입자 응집체에 중점을 둡니다.