인간 수막 세포(HMC) 조절 배지의 준비 및 순환 종양 세포 배양을 위한 뇌척수액 수집

시작하려면 T175 플라스크에 Poly-L-Lysine을 사전 코팅합니다. 플라스크를 섭씨 37도의 인큐베이터에 1시간 동안 넣습니다. 이제 멸균 혈청학적 피펫을 사용하여 라이신 용액을 흡입합니다.

피펫 30 밀리리터는 인간의 수막 세포를 플라스크에 포함하는 완전한 수막 배양 배지입니다. 섭씨 37도에서 5%이산화탄소 보충 이하로 세포를 배양합니다. 세포가 대략 75%에서 80%confluency에 도달하면 50 밀리리터 원뿔형 관에 있는 HMC 배양된 매체를 모으고 저장하십시오.

그런 다음 완전한 수막 배양 배지를 1:1 비율로 튜브에 추가합니다. 마지막으로, 성장 인자를 튜브에 피펫팅하여 HMC 컨디셔닝 배지를 생성합니다. 뇌척수액을 처리하려면 먼저 얼음 위에 놓인 15밀리리터 원뿔형 튜브에 넣어 식힙니다.

257G의 사전 냉각된 원심분리기에서 유체를 섭씨 4도에서 5분 동안 원심분리합니다. 세포 펠릿을 방해하지 않고 상층액을 피펫팅하고 다른 튜브에서 분취액을 만듭니다. 이제 세포 펠릿에 PBS 1밀리리터를 추가하여 재현탁액을 만듭니다.

1, 500 G에 세포를 4개의 섭씨 온도에 5 분 동안 분리한다. 튜브 바닥에 약 50마이크로리터의 PBS 상층액을 흡입합니다. 세포를 배양하기 전에 세포 현탁액으로 세포 계수를 수행합니다.

몇 가지 성장 인자는 인간 수막 세포로 배양된 배지에서 상향 조절되었습니다.