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02:03 min
March 29th, 2024
DOI :
10.3791/201630-v
필기록
먼저 연수막 질환(LMD)이 있는 암컷 면역 결핍 NSG 마우스를 식별합니다. 마취된 쥐를 수술대에 놓습니다. 정위 장치의 수정된 L자형 원뿔에 마우스의 코를 배치하여 콧구멍이 막히지 않도록 합니다.
양쪽 귓바퀴의 복부 표면을 가로질러 피부를 부드럽게 앞으로 당긴 다음 테이프로 코뿔에 고정합니다. 수술용 가위 끝을 귓바퀴에서 후두골을 가로질러 아래쪽으로 안내합니다. 촉진된 오목한 부분 바로 위에 5-7mm 크기의 작은 정중선 절개를 만듭니다.
끝이 1-2mm인 한 쌍의 뭉툭한 끝 집게를 사용하여 수조 마그나에 부드럽게 압력을 가합니다. 팁을 닫힌 위치에 넣고 경막에 아래쪽 압력을 가하면서 엽니다. 경막이 명확하게 식별되고 관련 혈관이 노출된 부위 내에서 보일 때까지 둔기 절개를 계속 수행합니다.
이제 집게를 열어 주변 근육을 수축시킵니다. 그런 다음 27-29 게이지 바늘을 1 밀리리터 주사기에 부착합니다. 경막 아래에 주사기를 삽입하여 베벨을 시각화합니다.
주사기 플런저를 점차적으로 집어넣어 가능한 한 많은 뇌척수액을 수집합니다. 유체를 미세 원심분리기 튜브로 옮깁니다. 즉시 얼음 위에 놓으십시오.
257g에서 샘플을 섭씨 4도에서 5분 동안 원심분리합니다. 상층액을 흡인한 후 500 마이크로리터의 멸균 PBS를 세포 펠릿에 피펫팅합니다. 펠릿을 257g에서 실온에서 5분 동안 원심분리합니다.
상층액을 버린 다음 펠릿을 HMC 컨디셔닝 매체가 들어 있는 96웰 플레이트로 옮깁니다.
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