먼저 추출된 응축수 용액이 최소 5분 동안 가라앉도록 하여 RNA-Templating C-star 응축수를 세척합니다. 그런 다음 응축수 제거를 최소화하기 위해 액체 레벨의 상단에서 피펫팅하면서 상층액 부피의 약 절반을 추출합니다. tris-EDTA에 동일한 부피의 0.3몰 염화나트륨을 추가하여 제거된 상층액을 교체하고 피펫팅으로 혼합합니다.
상층액 제거 및 완충액 교체 주기를 총 3주기 동안 반복합니다. T7 전사 혼합물의 경우 dimethyl sulfoxide에 10 millimolar DFHBI의 원액을 준비합니다. 그런 다음 RNAse 및 DNAse 유리수를 사용하여 분취액을 최종 농도인 600마이크로몰로 희석합니다.
전사 키트 구성 요소를 얼음에서 해동합니다. 그런 다음 멸균 피펫 팁을 사용하여 표시된 구성 요소를 실온에서 오토클레이브 마이크로 원심분리기 튜브에 피펫팅합니다. 피펫팅으로 용액을 부드럽게 혼합하고 RNA 전사체 합성에 즉시 사용합니다.
이를 위해 RNA-Templating C-Stars에서 준비한 세척된 응축수 3.3마이크로리터를 현미경 이미징에 적합한 챔버에 피펫팅합니다. 그리고 갓 준비한 전사 혼합물의 총 부피를 추가합니다. 18시간 동안 현미경 이미지를 획득하며, 전사 혼합물을 응축수에 첨가한 직후부터 시작합니다.
RNA Aptamers의 전사를 위해, 현미경을 통해 시간이 지남에 따라 플로리젠의 형광이 증가함에 따라 성공적인 결과가 확인되었습니다.
