SW1222 초단파 자기 조립 펩타이드 매트릭스에서 세포주 유래 대장암 오가노이드 제조

먼저, 2X 펩타이드 용액 10마이크로리터 방울을 24웰 플레이트의 웰 중앙으로 피펫팅합니다. 배양 후 10마이크로리터의 2X PBS를 각 웰에 피펫팅합니다. 피펫의 끝을 사용하여 용액을 부드럽게 혼합하고 겔 방울이 최소 20분 동안 안정화되도록 하여 방울이 손상되지 않도록 합니다.

다음으로, 2백만 개의 SW1222 인간 결장직장 선암종 세포가 들어있는 플라스크에 0.0125 % 트립신 EDTA의 2.5 밀리리터를 피펫팅합니다. 플라스크에서 분리될 때까지 섭씨 37도에서 5-10분 동안 트립신으로 세포를 배양합니다. 트립신을 비활성화하기 위해 5ml의 완전한 배지를 추가합니다.

그런 다음 30마이크로미터 세포 여과기를 사용하여 세포 현탁액을 여과합니다. 10 마이크로리터 마이크로 피펫을 사용하여 각 펩타이드 방울에 2마이크로리터의 세포 현탁액을 주입합니다. SW1222 세포주의 800개 세포를 4일 동안 각 웰에 파종합니다.

이산화탄소 5% 미만인 섭씨 37도에서 30분 동안 물방울을 배양합니다. 그런 다음 각 웰에 0.5ml의 보충 매체를 추가합니다. 대조군을 준비하려면 기저막 매트릭스 대조군의 스톡을 보충된 매체로 희석합니다.

세포 현탁액을 희석된 멤브레인 기저 용액에 로드합니다. 20 마이크로리터의 희석된 기저막 매트릭스를 세포와 함께 각 웰에 피펫팅합니다. 섭씨 37도에서 20분 동안 세포를 배양합니다.

물방울이 응고된 후 0.5ml의 완전한 매체를 첨가하십시오. 1일, 4일, 7일에 명시야 현미경을 사용하여 세포를 이미지화하여 오가노이드 성장을 평가합니다. 일주일 동안 세포의 명시야 이미징은 작은 세포 클러스터가 오가노이드로 조립되고 있음을 보여주었습니다.

펩타이드 하이드로겔에서 배양된 SW1222 유래 오가노이드는 가벼운 외관의 둥근 형태를 가졌습니다. 더 어두운 외관은 7일째에 펩타이드 P의 콜로니에서 볼 수 있는 바람직하지 않은 더 높은 밀도를 나타냈습니다.