시작하려면 세포가 80% 합류하면 인간 지방 유래 중간엽 줄기 세포 배양에서 상층액을 수집합니다. 피펫을 사용하여 상층액을 조심스럽게 수집하고 50밀리리터 원심분리기 튜브로 옮깁니다. 튜브를 300 x g에서 실온에서 10분 동안 원심분리하여 부유 세포를 제거한 다음 피펫을 사용하여 펠릿을 방해하지 않고 상층액을 수집합니다.
상층액을 2000 x g에서 섭씨 4도에서 10분 동안 원심분리하여 세포 파편을 제거합니다. 생성된 상층액을 피펫으로 수집하고 0.22미크론 멤브레인을 통해 여과하여 큰 입자와 세포 파편을 제거합니다. 여과액을 10, 000 x g에서 섭씨 4도에서 30분 동안 매우 원심분리하도록 합니다.
그런 다음 섭씨 4도에서 70분 동안 100, 000 x g에서 최종 원심분리를 수행합니다. 피펫을 사용하여 펠릿을 수집하지 않고 상층액을 제거합니다. 100, 4 섭씨 온도에 70 분 동안 000 x g에 관을 분리하기 전에 PBS에 있는 펠릿을 다시 현탁시키십시오.
상층액을 제거하고 얻어진 세포외 소포체 또는 EV의 펠릿을 PBS 1밀리리터에 재현탁시킵니다. 마지막으로 EV 현탁액을 1밀리리터 원심분리기 튜브에 옮기고 추가 분석이 있을 때까지 섭씨 4도에서 보관합니다. 투과 전자 현미경은 이중층 멤브레인을 가진 EV의 컵 모양 구조를 명확하게 드러냈습니다.
나노 입자 추적 분석은 약 50-150 나노 미터의 입자 크기 분포를 가지고 있음을 나타 냈습니다. 웨스턴 블롯 분석은 EV의 특징적인 마커 단백질이 원활하게 발현되는 것을 보여주었습니다.
