먼저 생쥐 심장 조직이 들어 있는 5 밀리리터 수송 바이알에 2 밀리리터의 분해 완충액을 넣고, 생쥐 골격 조직이 들어있는 15 밀리리터 원심분리 튜브에 4 밀리리터의 분해 완충액을 넣습니다. 가시 쥐에서 분리 된 심장과 대퇴사두근 조직을 페트리 접시의 뚜껑에 놓습니다. 티슈 가위를 사용하여 1 입방 밀리미터보다 작은 조각으로 다집니다.
다진 조직을 각각의 소화관으로 옮깁니다. 튜브의 내용물을 저속으로 2초 동안 소용돌이칩니다. 20분 후 로테이터에서 튜브를 제거합니다.
티슈 조각이 가라앉을 때까지 기다립니다. P 1000 피펫을 사용하여 상층액을 흡입합니다. 상층액을 20ml의 얼음처럼 차가운 FACS 완충액이 들어 있는 50ml의 원심분리기 튜브로 옮깁니다.
분해 튜브에 각각의 부피의 분해 완충액을 보충합니다. 로테이터에서 다시 배양합니다. 근육을 또 다른 소화 라운드에 실시한 후 얼음처럼 차가운 FACS 버퍼를 추가하여 소화를 촉진합니다.
50밀리리터 원심분리기 튜브 위에 40마이크로미터 셀 스트레이너를 놓습니다. 소화 현탁액을 여과하고 여과기를 통해 supineate하십시오. 셀 현탁액을 500G에서 섭씨 4도에서 8분 동안 원심분리합니다.
상층액을 제거한 후 3ml의 ACK 용해 완충액을 펠릿에 첨가하고 재현탁합니다. 얼음 위에서 5분 동안 현탁액을 배양합니다. FACS 버퍼로 부피를 40밀리리터까지 보충합니다.
샘플을 다시 500G에서 섭씨 4도에서 5분 동안 원심분리합니다. 상층액을 디캔팅한 후 펠릿을 0.5밀리리터의 FACS 완충액에 재현탁시킵니다. 마지막으로, 5밀리리터 폴리스티렌 원형 바닥 튜브에 놓인 40마이크로미터 셀 스트레이너 캡을 통해 현탁액을 여과합니다.
