Fluorescence-Activated Cell Sorting and Culture of Fibro-Adipogenic Progenitors (FAPs)의 형광 활성화 세포 분류 및 배양

시작하려면 단색 및 FMO 제어를 위해 30 마이크로리터의 염색 완충액을 2배 작업 농도로 준비합니다. 단색 및 FMO 제어 염색 완충액을 96웰 플레이트의 웰로 옮깁니다. 20마이크로리터의 FACS 버퍼로 볼륨을 채우십시오.

샘플을 염색하려면 1.5ml의 원심분리 튜브에 0.5ml의 2x FACS 염색 완충액을 준비합니다. 셀 현탁액 10 마이크로리터를 단색 및 FMO 제어 웰에 피펫팅합니다. 그런 다음 2x FACS 염색 완충액을 세포 현탁액의 나머지 부분에 추가하고 배양합니다.

다음으로, 100마이크로리터의 FACS 완충액을 웰에 추가하고 2밀리리터의 완충액을 샘플 튜브에 추가합니다. 500G에서 섭씨 4도에서 5분 동안 원심분리합니다. 상층액을 흡인한 다음 세포 펠릿을 생존도 완충액에 재현탁시킵니다.

300마이크로리터의 증식 매체를 1.5밀리리터 원심분리 튜브에 추가합니다. 이들은 세포 분류를 위한 수집 튜브 역할을 합니다. FACS를 사용하여 세포를 분류한 후 수집된 세포를 800G에서 섭씨 4도에서 10분 동안 원심분리합니다.

P1000 피펫을 사용하여 펠릿을 방해하지 않고 상층액을 조심스럽게 제거합니다. 펠릿을 증식 매체에 재현탁시켜 마이크로리터당 100개 세포의 최종 밀도로 만듭니다. 세포 현탁액을 48웰 조직 배양 플레이트의 웰에 파종합니다.

마지막으로 세포가 합류할 때까지 각각의 가스 보충 하에 섭씨 37도의 인큐베이터로 플레이트를 옮깁니다. 전형적인 섬유아세포 형태를 가진 confluent cell은 배양 후 5일 이내에 수득되었습니다.