Live 3D Imaging을 위한 인간 암 세포주에서 다세포 스페로이드의 고처리량 생성

3D 페트리 접시를 주조하려면 마이크로몰드를 증류수로 헹구고 고압멸균을 위해 고압멸균 가능한 용기에 넣습니다. 0.9ml의 유리병에 담긴 오토클레이브 아가로스 분말에 200%의 멸균 식염수를 첨가합니다. 압력이 상승하지 않도록 뚜껑을 느슨하게 조이고 병을 휘저어 아가로스 분말을 섞습니다.

아가로스 가루를 전자레인지에 넣고 간헐적으로 흔들어 끓입니다. 아가로스 용액이 냉각되면 용융된 아가로스를 마이크로 몰드에 피펫팅하고 응고될 때까지 기다립니다. 그런 다음 마이크로 몰드를 조심스럽게 구부려 3D 페트리 접시를 제거하고 12웰 조직 배양 플레이트로 옮깁니다.

3D 페트리 접시의 평형을 맞추기 위해 웰당 McCoy's 5A 배지 2.5ml를 넣고 섭씨 37도에서 15분 동안 배양하고 5% 이산화탄소를 배양합니다. 최종 평형 후 3D 페트리 접시와 접시 내부를 둘러싼 모든 배양 배지를 완전히 제거합니다. Dropwise, 씨를 뿌리는 약실로 40, 500개의 세포를 포함하는 세포 현탁액의 190 마이크로리터를 씨를 뿌리고 세포가 10 분 동안 침전하는 것을 허용한다.

McCoy의 5A 배지 2ml를 3D 페트리 접시 외부에 넣고 섭씨 37도에서 이산화탄소 5%에서 배양합니다. 4일 후, 스페로이드는 현미경 검사를 할 수 있을 만큼 충분히 작아집니다. 200 마이크로리터의 코팅 용액을 96웰 U-바닥 배양 플레이트의 각 웰에 추가하고 1분 동안 배양합니다.

여분의 코팅 용액을 제거하고 플레이트를 1시간 동안 건조시킵니다. 각 웰에 500개의 세포가 들어 있는 200마이크로리터의 세포 현탁액을 보고 섭씨 37도에서 최소 4일 동안 이산화탄소 5%에서 배양합니다.