먼저 콜라겐, 수산화나트륨, 멸균 초순수, PBS 10배, 마이크로 원심분리기 튜브 1개, 메타크릴레이트 히알루론산, 포토 개시제를 얼음 위에 놓습니다. 그런 다음 조직 배양 삽입물을 플레이트에 넣고 라벨을 붙입니다. 밀리리터당 3mg의 콜라겐 용액을 준비하려면 고농도 콜라겐, 일반 수산화나트륨 1개, 초순수 및 PBS 10배를 결합합니다.
마이크로 원심분리기 튜브에 구성 요소를 추가하고 혼합할 때 피펫 팁을 물에 담가 두어 기포 형성을 방지합니다. 그 후, 실온에서 5분 동안 200G에서 셀을 원심분리합니다. 그런 다음 각 세포 상태 용액의 상단에서 여분의 미디어를 부드럽게 제거하고 상태에 필요한 미디어의 양을 남겨 둡니다.
이 용액을 얼음 위에 놓으십시오. 계산된 부피의 콜라겐 용액을 각 세포 상태 용액에 추가합니다. 다음으로, 계산된 부피 1%메타크릴레이트 히알루론산을 첨가한 다음 각 세포 상태 용액에 밀리리터당 17mg의 LAP를 추가합니다.
기포가 형성되지 않도록 피펫 팁을 물에 담근 상태에서 각 컨디션 튜브를 한 번에 하나씩 혼합하고 각 조직 배양 삽입물에 100-150 마이크로리터를 추가합니다. 이제 정전류로 385나노미터 자외선 램프를 켭니다. 각 젤을 사진으로 교차 연결하려면 각 웰을 한 번에 하나씩 45초 동안 자외선에 노출시킵니다.
그런 다음 플레이트를 섭씨 37도에서 30-45분 동안 두어 콜라겐을 가교합니다. 비타민 A가 없는 0.5%와 2부피 및 1%부피 B27이 함유된 아스트랄 기초 배지를 사용하여 유체 압력 헤드를 겔에 적용합니다. net zero 흐름을 위해 웰 플레이트 및 조직 배양 삽입물에 배지를 추가합니다.
접시를 섭씨 37도, 이산화탄소 5%에 최소 18시간 또는 최대 5일 동안 놓습니다.
