DE 배우기 (BFNL)의의 연결을 기초 우리는 원고의 이전 버전에 대한 귀중한 의견을 란돌프 멘젤 감사합니다 :이 작품은 교육 및 번스타인 초점 내에서 연구 (BMBF)의 독일 연방 교육부에서 교부금에 의해 지원되었다.

1. 하이브에서 밀린 꿀벌 <ol><li> 실험 2 4시 사이, 시작 하루 전에 하이브를 떠나 꿀벌 체포됩니다. 이렇게하려면, UV 빛을 투과 플렉시 글라스 피라미드 (높이 = 30cm, 아펙스 3,5가 X 3, 5cm,베이스 18 X 18cm) 꼭대기와 바닥에서 closable는, 20에서 열립니다 - 기본 열고 꼭대기로 벌집 입구 앞 30cm의 거리는 벌집을 떠나는 꿀벌은 피라미드의 기초를 입력되도록 마감했다. 기본은 다음 닫히고 캡처한 꿀벌은 추가 처리를 위해 실험실로 이동됩니다. </li></ol> 2. 유리 튜브 속으로 피라미드에서 꿀벌을 전송 <ol><li> 연구실에서 피라미드가 그 기지에 배치됩니다. 피라미드의 벽은 어두운 아르 (수건 등)하지만, 꼭대기가 밝혀낸 남아 있습니다. 열었을 때 때문에 그들의 긍정적인 phototaxis의 꿀벌은 꼭대기를 통해 피라미드를 벗어나게됩니다. 하나 하나는, 꿀벌은 열 꼭대기 위에 튜브를 개최하여 유리 튜브로 피라미드에서 전송됩니다. 한 병에은 꿀벌마다 사용됩니다. 따라서, 꼭대기 한 벌이 그 병을를 입력하면 닫힙니다. </li></ol> 3. 튜브의 Harnessing 비즈 <ol><li> 꿀벌은 2.5-3.5 분 얼음 유리 튜브에 냉각에 의해 움직일 수 있습니다. 비보고 즉시 움직 정류장으로 얼음을 제거하는 것이 좋습니다입니다. </li><li> 단일 고정 꿀벌은 그것이 자유롭게 아니지만 머리, 흉부 또는 다리의 코를 이동할 수 있습니다 이러한 끈적끈적한 테이프로 작은 플라스틱 튜브에 무력화됩니다. 목이 압축되지 않습니다 것이 중요합니다. </li><li> 플라스틱 튜브에서 수정된 모든 꿀벌들은 더 나은 핸들링과 식별을위한 선반에 정리 시추공 안으로 들어가게된다. 그것이 컨디셔닝 또는 메모리 검색을 위해 제거된 후 튜브는 항상 동일한 시추공에 반환됩니다. </li></ol> 4. 수유 비즈 <ol><li> 첫 번째 저녁 (4-6시)에, 잡은 후, 꿀벌은 자당 솔루션 (0,88 M, 수돗물에 녹아있는 흰색 정제 가정용 설탕)과 포만에 공급하고 있습니다. 꿀벌 먹이를 위해서는 PER은 자당 솔루션의 안테나를 감동 동물 자당 솔루션 중 하나 소적 (4 μL)를 소비 허용 의해 elicited 수 있습니다. 자신의 안테나가 자당 솔루션으로 만져 때 그들은 더 이상 빠르고 안정적​​인 PER를 표시하지 않을 때까지 반복 비즈 연이어 공급하고 있습니다. </li><li> 실험 꿀벌의 각 후속 저녁 (4-6시)에 자당 솔루션 1 소적 (4 μL, 0,88 M, 수돗물에서 해결 흰색 정제 설탕) 다른 네 번 이후를 공급하고 있습니다. 자당 솔루션 수유 동안 꿀벌의 안테나 또는 코와 튜브가 자당 솔루션으로 오염되지 않습니다 발랐습 없다는 것이 중요합니다. 꿀벌은 자당의 자극과 훈련 컨텍스트와 연결의 가능성을 제외하기 위해 에어컨의 사이트에서 또는 근처에 공급되지 않습니다. </li></ol> 5. 무력화 꿀벌이 숙박 유지 <ol><li> 꿀벌은 상온에서 플라스틱 그릇에 하룻밤 보관됩니다. 수돗물은 그릇 (약 0,5-1 cm 높이)로 가득 차 있습니다. 무력화 꿀벌과 랙은 플랫폼으로 엘리사 플레이트를 사용하여 워터 위의 그릇에 배치됩니다. 마지막으로, 그릇은 종이로 덮여 있습니다. </li></ol> 6. 후각 컨디셔닝 실험의 첫 아침 (오전 10시)에서 후각 시설이 수행됩니다. 에어컨 자극 (CS)가 냄새이며, 무조건 자극 (미국)는 자당 솔루션입니다. <ol><li> 냄새 (예 : 클로브 오일) 4 μL 그 다음 20 ML의 주사기에 삽입되는 원형 여과지 (1,3 cm 직경)에 pipetted 있습니다. 냄새는 후드 아래에 pipetted하고 필터 팁는 피펫의 오염을 방지하는 데 사용됩니다. </li><li> 무력화 꿀벌과 랙은 에어컨 절차가 시작되기 전에 에어컨 사이트 30 분 근처에 위치하지만, 거리에서 하나의 꿀벌이 에어컨 아르 배기 파이프 앞에있는 곳으로. 것입니다 </li><li> 에어컨은 10 분 간 재판 간격 (ITI) 세 냄새의 pairings (에어컨 자극, CS)과 자당 솔루션 (무조건 자극, 미국, 1,25 M)으로 구성되어 있습니다. 오디오 플레이어를 통해 실험자에게 전달 음향 신호는 자극 발병, 자극 오프셋, 자극 기간 및 배치의 정확한 타이밍을 보장합니다. 인수 재판은 배기 앞에서 동물의 10 초 배치와 함께 시작합니다. 곧 10 초이 끝나기 전에 그 냄새를 포함하는 주사기는 꿀벌의 안테나를 대상으로 꿀벌 앞에 3cm를 배치됩니다. 이후, 그 냄새는 주사기는 20 ML 공기를 추진하여 5 초를 위해 제공됩니다. 처음 3 초 후 두 안테나의 말초 flagella는 이쑤시개, 동물은 4 초에 대한 moistend 이쑤시개 핥아 허용하는 솔루션 - moistened 자당과 함께 감동하고 있습니다. 13 초 CS의 자극 종료, 꿀벌 후 훈련 컨텍스트 밖으로 촬영하고 있으며 랙에 다시 배치. 모두 한 교육 시범 28 초 지속. 꿀벌의 안테나이나 코도이 컨디셔닝 후 자당 덮여 것이 중요합니다. 따라서 그것은 이쑤시개에만 자당 솔루션과 이쑤시개에 대한 자당 솔루션 양식의 방울없이 그 moistened 것을 보장되어야한다. </li><li> 에어컨 후 랙에은 그릇에 다시 배치됩니다. </li><li> 실험 기간 동안 동물의 행동은, 배치 및 CS와 미국의 프레 젠 테이션 도중 PER의 발생 즉, 감시 및 실험자에 의해 아래로 지적했다. </li></ol> 7. 메모리 유지 <ol><li> 보존 시험은 어떤 간격 (일 분)에서 수행할 수 있습니다. 메모리 테스트가 시작되기 전에 꿀벌과 랙은 에어컨 사이트 30 분 근처에 배치됩니다. </li><li> 메모리 테스트는 미국의 프레 젠 테이션없이 5 초 CS 프레 젠 테이션으로 구성되어 있습니다. 테스트 배기 앞에서 동물의 10 초 배치와 함께 시작합니다. 위에서 설명한 후, 그 냄새는 5 초를 위해 제공됩니다. 동물의 행동은, 배치 중에 PER의 발생을 IE와 CS 프레 젠 테이션은 실험 기간 동안 아래 기록됩니다. </li><li> 실험의 끝에 코 엑스텐션 응답이 다시 동물이 여전히 코를 확장할 수 있는지 확인하기 위해 자당 솔루션 안테나를 만져 elicited 수 있습니다. </li></ol> 8. 체계적 사출 체계 분사의 시점은 실험 설계에 따라 달라집니다. <ol><li> 작은 구멍은 일회용 피하 바늘 (21 G)를 사용하여 비행 근육 17 위 scutal 터지게 옆에있는 순판의 후부 부분 cuticula에서 이루어집니다. </li><li> 유리 모세관을 사용, 1 μL 솔루션은 비행 근육에 cuticula에있는 구멍을 통해 주입합니다. 숙련된 경험은 분사와 컨디셔닝의 정확한 타이밍을 수 있도록, 매 30 초 벌 한 삽입할 수 있습니다. </li></ol> 9. 실험을 진행하는 동안 수유 꿀벌 <ol><li> 에어컨 후 저녁 (4-6시)에, 꿀벌은 자당 솔루션 1 소적 (4 μL, 0,88 M, 수돗물에 녹아있는 흰색 정제 설탕) 다른 네 번 이후를 공급하고 있습니다. 자당 솔루션 수유 동안 꿀벌의 안테나 또는 코와 튜브가 자당 솔루션으로 오염되지 않습니다 발랐습 없다는 것이 중요합니다. 꿀벌은 자당의 자극과 훈련 컨텍스트와 연결의 가능성을 제외하기 위해 에어컨의 사이트에서 또는 근처에 공급되지 않습니다. </li></ol> 10. 데이터 수집 및 데이터 분석 <ol><li> 실험 중에 코 확장 반응의 발생이 모니터링됩니다. 그것이 오픈 mandibles 사이에 가상 선을 넘어, CS의 발병과 미국의 프레 젠 테이션 (훈련 중에) 사이 또는 CS 프리젠 테이션 (시험 단계 동안) 동안의 코를 확장하면 벌은 긍정적인 점수입니다. </li><li> 분석 동물에 포함되는 것은이 기준을 충족해야합니다 : 그들은 모든 실험을 생존해야하며 그들은 실험 끝에 자당 솔루션에 무조건 코 확장 응답 (당) 표시해야합니다. 획득 및 유지 시험 동안 PER를 보여주는 꿀벌의 비율은 각 CS 프레 젠 테이션을위한 꾸몄다입니다. </li></ol> 11. 대표 결과 : 두 실험이 여기에 표시됩니다. 첫 번째 실험에서는 인산염 버퍼 호수 (PBS의 체계 주입의 영향을 봐;의 MM : 137 NaCl, KCl 2,7, 10,1 나 2 HPO 4, 1,8 KH 2 PO 4, 산도 7 2) 학습과 장기 기억 형성에. 꿀벌의 세 그룹이 10 분 간 재판 간격 세 CS - US pairings와 함께 훈련했다 : 비 대우 그룹, 훈련 전에 1 μL PBS 30 분 맞았 었소 그룹, 그리고 사기 - 주입 그룹 치료 PBS - 주입된 그룹으로하지만, PBS를 주입하지 않고 같은 방법으로. 훈련 메모리 후 24 H는 세 그룹으로 한 CS 프레 젠 테이션에서 테스트되었습니다. 에어컨 동안 에어컨 응답을 보여주는 동물의 비율은 세 가지 교육 실험에 걸쳐 크게 증가 (Fig.1, 팩터 시간 반복 측정 ANOVA F 2378 = 340456, P &lt;0,05). PER에 차이 (ANOVA는 요소 그룹 F2, 189 = 1,299, P&gt; 0,05에 대한 반복 측정을위한) 시설 중 세 그룹 사이에 관찰 수 없습니다. PBS - 주입 및 사기 - 주입 동물이 아닌 동물 취급을 비교할 때 24 H 보존 시험 (F2, 187 = 0,752, P&gt; 0,05)에 대한 진정한 보유하고 있습니다. 두 번째 실험에서 우리는 메모리 보존 세 억제하고 단백질 합성 억제제를 anisomycin (10 MM)가 systemically 세 CS - US pairings 후 30 분 주입했습니다 훈련 후 나흘의 시간을 보여줍니다. PBS - 주입된 그룹 anisomycin - 주입된 그룹의 비교는 보존 t 동안 그룹 사이에 상당한 차이를 보여동부 표준시 (Fig.2, 요소 그룹 F1, 94에 대한 반복 측정 ANOVA = 8,86, P &lt;0,05). 큰 차이는 일 3 일 4 메모리 테스트에서 볼 수 있습니다. 이것은 Wüstenberg 외의 결과 유사합니다. 18도 다른 프로토콜과 함께이라도 세 CS - US pairings와 꿀벌을 갖추 사람. <img src="/files/ftp_upload/2282/2282fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. Cuticula의 장애 또는 PBS의 분사가 수집 및 메모리 보존을 변경하지 않습니다. 동물 세 CS - US의 pairings (인수)와 함께 훈련했다. 24 H 후, 메모리 (메모리 유지) 테스트되었습니다. 훈련하기 전에 30 분은 구멍이 두 그룹의 cuticula에서 만들어진 (병변, PBS)와 이러한 그룹 중 하나는 1 μL PBS (PBS)에 주입했다. 세 번째 그룹은 (NO 치료) 그대로 유지했다. 발표는 각 그룹 당과 냄새 프레 젠 테이션에 대한 대처 방법에 대한 동물의 비율입니다. ANOVA는 수집 단계에서 그룹 사이에 큰 차이를 밝혀 (F2, 189 = 1.299, P&gt; 0.05) 또는 메모리에 보존 (F2, 187 = 0.752, P&gt; 0.05)하지 않습니다. <img src="/files/ftp_upload/2282/2282fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. 마지막 CS - US의 페어링 후 anisomycin 40 분의 분사는 메모리 보존 사흘 사일 훈련 후을 줄일 수 있습니다. 동물은 세 CS - US의 pairings (인수)와 훈련 1 μL 10 MM anisomycin (Aniso) 또는 1 μL PBS로 주입되었다 첫 번째 훈련 시험 후 1 H. 메모리 (메모리 유지) 24 H 48 H 나중에, 72 H 및 96 H를 테스트했습니다. 제시하면 PER과 냄새 프레 젠 테이션에 응답 그룹당 동물의 비율입니다. anisomycin의 주입은 훈련 후에 메모리를 유지하고 72 H 96 H의 상당한 감소 (F1, 94 = 8.86, P는 &lt;0.05)로 ANOVA에 의해 공개로 연결됩니다.

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Neurosci. 25, 4485-4492 (2005).</li><li>Stollhoff, N., Eisenhardt, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consolidation+of+an+extinction+memory+depends+on+the+unconditioned+stimulus+magnitude+previously+experienced+during+training.">Consolidation of an extinction memory depends on the unconditioned stimulus magnitude previously experienced during training.</a> J. Neurosci. 29, 9644-9650 (2009).</li><li>Snodgrass, R. 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관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

<ol><li> 꿀벌 잡기 : 경험이 풍부한 식량 약탈을 배워 꿀벌을 수집하려면, 꿀벌은 젊은 꿀벌은 오리 엔테이션 항공편 19에있는 시간을 피하기 위해, 아침이나 오후에 들키지 수 있습니다. Foragers는 화분이나 꿀을 중 하나를 수집합니다. 꽃가루와 꿀은의 foragers 차이들은 설탕 응답과 학습 능력에 따라 20 관찰되었습니다. 단 넥타 foragers을 잡기 위해서, 자당 솔루션으로 가득 인공 음식 소스가 벌통과 동물 근처에 설치할 수있는 거기 수집하실 수 있습니다. 하이브로 돌아가고 꽃가루 foragers들은 뒷다리로 20 꽃가루 바구니에서 확인할 수 있습니다. </li><li> 고정 및 처리 : 그것은 실험이 끝날 때까지 배우와 생존 능력에 영향을 미칠 수 있기 때문에 얼음에 꿀벌의 확장 냉각은 피해야한다. Tarsi은 자당 솔루션 실수로 자극을 피하기 위해 튜브 내에서 신중하게 고정해야합니다. 꿀벌이 succrose 솔루션 3,21와 tarsal 자극에 의해 배울 표시 되었기 때문에 이것은 중요합니다. </li><li> 후각 에어컨 : 에어컨 재판의 번호가, 남북 재판 간격 및 테스트 시점이 연구 3,22의 초점에 따라 다양한하실 수 있습니다. </li><li> 먹이 : 꿀벌의 포만 수준이 학습 성능과 메모리 ​​보존 3,23 영향을 미치는 것으로 알려져 있습니다. 이것은 실험을 계획 할 때 고려되어야한다. </li><li> 사출 : 에어 주머 니나는 꿀벌의 흉부의 17에 위치하고 있습니다. 호흡 시스템의 이러한 중요한 부분은 생존을 위해 필요합니다. 그러므로주의를 주입하는 동안 공기 주머 니나을 손상하지 않도록해야합니다. 기포의 릴리스는 공기 주머 니나에 손상을 나타냅니다. </li></ol>

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Syringe Omnifix 20 ml</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>B.Braun, Melsungen, Germany </td>
<td>4616200 V</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>White refined household sugar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Kaisers Supermarket, Berlin, Germany</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Clove oil</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bombastus, Freital, Germany </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Multipette plus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Eppendorf, Hamburg, Germany</td>
<td>4981 000.019</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rack for 30 bee tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Self-made</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Self-made</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>UV light-permeable plexiglass pyramid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Self-made</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>height = 30cm, 
apex 3.5 x 3.5cm, 
base 18x18cm</td>
</tr>
<tr>
<td>Sticky tape</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tesa, Hamburg, Germany</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillator sticks 1-5&mu;l</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Selzer, Driedorf-Roth, Germany</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillator tips 1-5&mu;l</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Selzer, Driedorf-Roth, Germany</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Filter paper 0.16-0.2 mm thick</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Macherey-Nagel, D&uuml;ren, Germany</td>
<td>MN 616 or MN615</td>
<td>Adjusted to circular pieces with a 1.3 cm diameter</td>
</tr>
<tr>
<td>Disposable hypodermic needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>B. Braun, Melsungen, Germany</td>
<td>4657683</td>
<td>0.45 mm diameter</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

behavioural pharmacology in classical conditioning of the proboscis extension response in honeybees (apis mellifera)

꿀벌 (아피스 mellifera)은 잘 그들의 의사 소통 및 오리 엔테이션 기술에 대한 그들의 인상적인 학습 능력 1,2 알려져 있습니다. 꿀벌 콜로니의 생존 식량 자원의 착취에 의존하기 때문에, 마초 징발 대원의 꿀벌 배우고 변수 꽃 사이트뿐만 아니라 수익성을 외워 두세요. 마초 징발 대원의 꿀벌은 쉽게 자연 설정에서 훈련을 될 수있는 그들이 먹이 사이트에서 마초와 같은 냄새 또는 색상으로 관련 신호를 배웁니다. Appetitive 연관 학습도 컨디셔닝 개별적으로 무력화 꿀벌 3,4의 코 확장 응답 (당)에 의해 실험실에서 제어 조건에서 공부하실 수 있습니다. 이 학습 패러다임은 간단하고 신뢰성이 높은 방법으로 5-12에서 학습과 기억 형성을 기초의 연결 및 분자 메커니즘 연구를 수 있습니다. 행동 약리학 접근은 분자 메커니즘을 연구하는 데 사용됩니다. 마약은 학습과 기억 형성 13-16 동안이나 이후에 특정 분자의 기능을 방해 systemically 주입하고 있습니다. 여기 PER 시설의 무력화 꿀벌을 훈련하는 방법과 비 비행 근육에 주사로 약물 systemically을 적용하는 방법을 보여줍니다.

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Behavioural Pharmacology in Classical Conditioning of the Proboscis Extension Response in Honeybees Apis mellifera

우리는 마약 조직의 응용 프로그램에서 꿀벌의 후각 appetitive 에어컨 패러다임 (아피스 mellifera)의 행동 약리학 방법을 구현하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 메커니즘 기본 학습과 간단하고 안정적​​인 방식으로 메모리 형성의 조사를 허용합니다.

꿀벌의 코 확장 응답 클래식 컨디셔닝에 Behavioural 약리학 ( 아피스 mellifera)

Honeybees (Apis mellifera) are well known for their communication and orientation skills and for their impressive learning capability1,2. Because the ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Behavioural Pharmacology in Classical Conditioning of the Proboscis Extension Response in Honeybees (Apis mellifera)

19.2K 조회수.  Freie Universität Berlin. 우리는 마약 조직의 응용 프로그램에서 꿀벌의 후각 appetitive 에어컨 패러다임 (아피스 mellifera)의 행동 약리학 방법을 구현하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 메커니즘 기본 학습과 간단하고 안정적​​인 방식으로 메모리 형성의 조사를 허용합니다.

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Recording Large-scale Neuronal Ensembles with Silicon Probes in the Anesthetized Rat

Large scale electrophysiological recordings from neuronal ensembles offer the opportunity to investigate how the brain orchestrates the wide variety of behaviors from the spiking activity of its neurons. One of the most effective methods to monitor spiking activity from a large number of neurons in multiple local neuronal circuits simultaneously is by using silicon electrode arrays1-3.
Action potentials produce large transmembrane voltage changes in the vicinity of cell somata. These output signals can be measured by placing a conductor in close proximity of a neuron. If there are many active (spiking) neurons in the vicinity of the tip, the electrode records combined signal from all of them, where contribution of a single neuron is weighted by its 'electrical distance'. Silicon probes are ideal recording electrodes to monitor multiple neurons because of a large number of recording sites (+64) and a small volume. Furthermore, multiple sites can be arranged over a distance of millimeters, thus allowing for the simultaneous recordings of neuronal activity in the various cortical layers or in multiple cortical columns (Fig. 1). Importantly, the geometrically precise distribution of the recording sites also allows for the determination of the spatial relationship of the isolated single neurons4. Here, we describe an acute, large-scale neuronal recording from the left and right forelimb somatosensory cortex simultaneously in an anesthetized rat with silicon probes (Fig. 2).

Extracellular recordings of neuronal activity using silicon probes in the anesthetized rat will be described. This technique allows information to be obtained across multiple brain areas from more than 100 neurons simultaneously. It provides information with single cell resolution about neuronal ensembles dynamics in multiple local circuits.

Anesthetized 쥐의 실리콘 프로브와 함께 대규모의 연결 Ensembles 녹음하기

Large scale electrophysiological recordings from neuronal ensembles offer the opportunity to investigate how the brain orchestrates the wide variety of ...

연구

신경과학

Behavioral Determination of Stimulus Pair Discrimination of Auditory Acoustic and Electrical Stimuli Using a Classical Conditioning and Heart-rate Approach

Acute animal preparations have been used in research prospectively investigating electrode designs and stimulation techniques for integration into neural auditory prostheses, such as auditory brainstem implants1-3 and auditory midbrain implants4,5. While acute experiments can give initial insight to the effectiveness of the implant, testing the chronically implanted and awake animals provides the advantage of examining the psychophysical properties of the sensations induced using implanted devices6,7.
Several techniques such as reward-based operant conditioning6-8, conditioned avoidance9-11, or classical fear conditioning12 have been used to provide behavioral confirmation of detection of a relevant stimulus attribute. Selection of a technique involves balancing aspects including time efficiency (often poor in reward-based approaches), the ability to test a plurality of stimulus attributes simultaneously (limited in conditioned avoidance), and measure reliability of repeated stimuli (a potential constraint when physiological measures are employed).
Here, a classical fear conditioning behavioral method is presented which may be used to simultaneously test both detection of a stimulus, and discrimination between two stimuli. Heart-rate is used as a measure of fear response, which reduces or eliminates the requirement for time-consuming video coding for freeze behaviour or other such measures (although such measures could be included to provide convergent evidence). Animals were conditioned using these techniques in three 2-hour conditioning sessions, each providing 48 stimulus trials. Subsequent 48-trial testing sessions were then used to test for detection of each stimulus in presented pairs, and test discrimination between the member stimuli of each pair. 
This behavioral method is presented in the context of its utilisation in auditory prosthetic research. The implantation of electrocardiogram telemetry devices is shown. Subsequent implantation of brain electrodes into the Cochlear Nucleus, guided by the monitoring of neural responses to acoustic stimuli, and the fixation of the electrode into place for chronic use is likewise shown.

The application of a classical fear conditioning behavioral paradigm for auditory prosthetic research in rats is described. This paradigm provides a mechanism for identifying both detection of, and discrimination between, distinct acoustic and electrical stimuli using heart-rate as an outcome measure.

Acute animal preparations have been used in research prospectively investigating electrode designs and stimulation techniques for integration into neural ...

The Mouse Forced Swim Test

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental manipulations that are aimed at rendering or preventing depressive-like states. Mice are placed in an inescapable transparent tank that is filled with water and their escape related mobility behavior is measured. The forced swim test is straightforward to conduct reliably and it requires minimal specialized equipment. Successful implementation of the forced swim test requires adherence to certain procedural details and minimization of unwarranted stress to the mice. In the protocol description and the accompanying video, we explain how to conduct the mouse version of this test with emphasis on potential pitfalls that may be detrimental to interpretation of results and how to avoid them. Additionally, we explain how the behaviors manifested in the test are assessed.

The forced swim test is validated as an experimental approach to assess potential antidepressant efficacy in rodents. Experimental animals are placed in a tank of water and escape-related mobility behavior is quantified. The common procedures for the mouse version of this test are described.

마우스 강제 수영 시험

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental ...

The Tail Suspension Test

The tail-suspension test is a mouse behavioral test useful in the screening of potential antidepressant drugs, and assessing of other manipulations that are expected to affect depression related behaviors. Mice are suspended by their tails with tape, in such a position that it cannot escape or hold on to nearby surfaces. During this test, typically six minutes in duration, the resulting escape oriented behaviors are quantified. The tail-suspension test is a valuable tool in drug discovery for high-throughput screening of prospective antidepressant compounds. Here, we describe the details required for implementation of this test with additional emphasis on potential problems that may occur and how to avoid them. We also offer a solution to the tail climbing behavior, a common problem that renders this test useless in some mouse strains, such as the widely used C57BL/6. Specifically, we prevent tail climbing behaviors by passing mouse tails through a small plastic cylinder prior to suspension. Finally, we detail how to manually score the behaviors that are manifested in this test.

The tail-suspension test is validated as an experimental procedure to assess antidepressant efficacy of drug treatments in mice. Mice are suspended by their tails for six minutes and escape-related behaviors are assessed. We describe procedures used in conducting the tail suspension test.

꼬리 서스펜션 테스트

The tail-suspension test is a mouse behavioral test useful in the screening of potential antidepressant drugs, and assessing of other manipulations that ...

Tactile Conditioning And Movement Analysis Of Antennal Sampling Strategies In Honey Bees (Apis mellifera L.)

Honey bees (Apis mellifera L.) are eusocial insects and well known for their complex division of labor and associative learning capability1, 2. The worker bees spend the first half of their life inside the dark hive, where they are nursing the larvae or building the regular hexagonal combs for food (e.g. pollen or nectar) and brood3. The antennae are extraordinary multisensory feelers and play a pivotal role in various tactile mediated tasks4, including hive building5 and pattern recognition6. Later in life, each single bee leaves the hive to forage for food. Then a bee has to learn to discriminate profitable food sources, memorize their location, and communicate it to its nest mates7. Bees use different floral signals like colors or odors7, 8, but also tactile cues from the petal surface9 to form multisensory memories of the food source. Under laboratory conditions, bees can be trained in an appetitive learning paradigm to discriminate tactile object features, such as edges or grooves with their antennae10, 11, 12, 13. This learning paradigm is closely related to the classical olfactory conditioning of the proboscis extension response (PER) in harnessed bees14. The advantage of the tactile learning paradigm in the laboratory is the possibility of combining behavioral experiments on learning with various physiological measurements, including the analysis of the antennal movement pattern.

Tactile Conditioning And Movement Analysis Of Antennal Sampling Strategies In Honey Bees Apis mellifera L.

In this protocol we show how to condition harnessed honey bees to tactile stimuli and introduce a 2D motion capture technique for analyzing the kinematics of fine-scale antennal sampling pattern.

촉각 시설과 꿀벌에 Antennal 샘플링 전략의 움직임 분석 (<em&gt; API를 mellifera</em&gt; L.)

Honey bees (Apis mellifera L.) are eusocial insects and well known for their complex division of labor and associative learning capability1, 2. The worker ...

RNAi-mediated Double Gene Knockdown and Gustatory Perception Measurement in Honey Bees (Apis mellifera)

This video demonstrates novel techniques of RNA interference (RNAi) which downregulate two genes simultaneously in honey bees using double-stranded RNA (dsRNA) injections. It also presents a protocol of proboscis extension response (PER) assay for measuring gustatory perception.	
	RNAi-mediated gene knockdown is an effective technique downregulating target gene expression. This technique is usually used for single gene manipulation, but it has limitations to detect interactions and joint effects between genes. In the first part of this video, we present two strategies to simultaneously knock down two genes (called double gene knockdown). We show both strategies are able to effectively suppress two genes, vitellogenin (vg) and ultraspiracle (usp), which are in a regulatory feedback loop. This double gene knockdown approach can be used to dissect interrelationships between genes and can be readily applied in different insect species.	
	The second part of this video is a demonstration of proboscis extension response (PER) assay in honey bees after the treatment of double gene knockdown. The PER assay is a standard test for measuring gustatory perception in honey bees, which is a key predictor for how fast a honey bee's behavioral maturation is. Greater gustatory perception of nest bees indicates increased behavioral development which is often associated with an earlier age at onset of foraging and foraging specialization in pollen. In addition, PER assay can be applied to identify metabolic states of satiation or hunger in honey bees. Finally, PER assay combined with pairing different odor stimuli for conditioning the bees is also widely used for learning and memory studies in honey bees.

RNAi-mediated Double Gene Knockdown and Gustatory Perception Measurement in Honey Bees Apis mellifera

In this protocol, we describe two strategies that simultaneously suppress two genes (double gene knockdown) in honey bees. Then we present how to use the proboscis extension response (PER) assay to study the effect of double gene knockdown on honey bee gustatory perception.

꿀벌의 RNAi를 매개로 두 유전자 넉다운과 미각 지각 측정 (<em&gt; 아피스 mellifera</em&gt;)

This video demonstrates novel techniques of RNA  interference (RNAi) which downregulate two genes simultaneously in honey bees  using double-stranded RNA ...

A Proboscis Extension Response Protocol for Investigating Behavioral Plasticity in Insects: Application to Basic, Biomedical, and Agricultural Research

Insects modify their responses to stimuli through experience of associating those stimuli with events important for survival (e.g., food, mates, threats). There are several behavioral mechanisms through which an insect learns salient associations and relates them to these events. It is important to understand this behavioral plasticity for programs aimed toward assisting insects that are beneficial for agriculture. This understanding can also be used for discovering solutions to biomedical and agricultural problems created by insects that act as disease vectors and pests. The Proboscis Extension Response (PER) conditioning protocol was developed for honey bees (Apis mellifera) over 50 years ago to study how they perceive and learn about floral odors, which signal the nectar and pollen resources a colony needs for survival. The PER procedure provides a robust and easy-to-employ framework for studying several different ecologically relevant mechanisms of behavioral plasticity. It is easily adaptable for use with several other insect species and other behavioral reflexes. These protocols can be readily employed in conjunction with various means for monitoring neural activity in the CNS via electrophysiology or bioimaging, or for manipulating targeted neuromodulatory pathways. It is a robust assay for rapidly detecting sub-lethal effects on behavior caused by environmental stressors, toxins or pesticides.
We show how the PER protocol is straightforward to implement using two procedures. One is suitable as a laboratory exercise for students or for quick assays of the effect of an experimental treatment. The other provides more thorough control of variables, which is important for studies of behavioral conditioning. We show how several measures for the behavioral response ranging from binary yes/no to more continuous variable like latency and duration of proboscis extension can be used to test hypotheses. And, we discuss some pitfalls that researchers commonly encounter when they use the procedure for the first time.

The Proboscis Extension Response (PER) conditioning protocol, developed for the honey bee (Apis mellifera), provides an ecologically-relevant and easily quantifiable means for studying several different mechanisms of learning in many insect species.

코 확장 응답 곤충의 행동 소성을 조사하기위한 프로토콜 : 기본, 바이오 메디컬에 응용 프로그램, 및 농업 연구

Insects modify their responses to stimuli through experience of associating those stimuli with events important for survival (e.g., food, mates, threats). ...

Simultaneous Long-term Recordings at Two Neuronal Processing Stages in Behaving Honeybees

In both mammals and insects neuronal information is processed in different higher and lower order brain centers. These centers are coupled via convergent and divergent anatomical connections including feed forward and feedback wiring. Furthermore, information of the same origin is partially sent via parallel pathways to different and sometimes into the same brain areas. To understand the evolutionary benefits as well as the computational advantages of these wiring strategies and especially their temporal dependencies on each other, it is necessary to have simultaneous access to single neurons of different tracts or neuropiles in the same preparation at high temporal resolution. Here we concentrate on honeybees by demonstrating a unique extracellular long term access to record multi unit activity at two subsequent neuropiles1, the antennal lobe (AL), the first olfactory processing stage and the mushroom body (MB), a higher order integration center involved in learning and memory formation, or two parallel neuronal tracts2 connecting the AL with the MB.&#160;The latter was chosen as an example and will be described in full. In the supporting video the construction and permanent insertion of flexible multi&#160;channel wire electrodes is demonstrated. Pairwise differential amplification of the micro&#160;wire electrode channels drastically reduces the noise and verifies that the source of the signal is closely related to the position of the electrode tip. The mechanical flexibility of the used wire electrodes allows stable invasive long&#160;term recordings over many hours up to days, which is a clear advantage compared to conventional extra&#160;and intracellular in vivo recording techniques.

Simultaneous extracellular long term recordings from two different brain neuropiles or two different anatomical tracts were established in honeybees. These recordings allow the investigation of temporal aspects of neuronal processing across different brain areas at the single neuron as well as at the ensemble level in a behaving animal.

행동을 한 꿀벌 두 신경 처리 단계에서 동시 장기 녹음

In both mammals and insects neuronal information is processed in different higher and lower order brain centers. These centers are coupled via convergent ...

Electroretinogram Analysis of the Visual Response in Zebrafish Larvae

The electroretinogram (ERG) is a noninvasive electrophysiological method for determining retinal function. Through the placement of an electrode on the surface of the cornea, electrical activity generated in response to light can be measured and used to assess the activity of retinal cells in vivo. This manuscript describes the use of the ERG to measure visual function in zebrafish. Zebrafish have long been utilized as a model for vertebrate development due to the ease of gene suppression by morpholino oligonucleotides and pharmacological manipulation. At 5-10 dpf, only cones are functional in the larval retina. Therefore, the zebrafish, unlike other animals, is a powerful model system for the study of cone visual function in vivo. This protocol uses standard anesthesia, micromanipulation and stereomicroscopy protocols that are common in laboratories that perform zebrafish research. The outlined methods make use of standard electrophysiology equipment and a low light camera to guide the placement of the recording microelectrode onto the larval cornea. Finally, we demonstrate how a commercially available ERG stimulator/recorder originally designed for use with mice can easily be adapted for use with zebrafish. ERG of larval zebrafish provides an excellent method of assaying cone visual function in animals that have been modified by morpholino oligonucleotide injection as well as newer genome engineering techniques such as Zinc Finger Nucleases (ZFNs), Transcription Activator-Like Effector Nucleases (TALENs), and Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR)/Cas9, all of which have greatly increased the efficiency and efficacy of gene targeting in zebrafish. In addition, we take advantage of the ability of pharmacological agents to penetrate zebrafish larvae to evaluate the molecular components that contribute to the photoresponse. This protocol outlines a setup that can be modified and used by researchers with various experimental goals.

We present a method for the electroretinographic (ERG) analysis of zebrafish larvae utilizing micromanipulation and electroretinography techniques. This is a simple and straightforward method for assaying visual function of zebrafish larvae in vivo.

Zebrafish의 애벌레에서 비주얼 응답의 전위도 분석

The electroretinogram (ERG) is a noninvasive electrophysiological method for determining retinal function. Through the placement of an electrode on the ...

Neuropharmacological Manipulation of Restrained and Free-flying Honey Bees, Apis mellifera

Honey bees demonstrate astonishing learning abilities and advanced social behavior and communication. In addition, their brain is small, easy to visualize and to study. Therefore, bees have long been a favored model amongst neurobiologists and neuroethologists for studying the neural basis of social and natural behavior. It is important, however, that the experimental techniques used to study bees do not interfere with the behaviors being studied. Because of this, it has been necessary to develop a range of techniques for pharmacological manipulation of honey bees. In this paper we demonstrate methods for treating restrained or free-flying honey bees with a wide range of pharmacological agents. These include both noninvasive methods such as oral and topical treatments, as well as more invasive methods that allow for precise drug delivery in either systemic or localized fashion. Finally, we discuss the advantages and disadvantages of each method and&#160;describe common hurdles and how to best overcome them. We conclude with a discussion on the importance of adapting the experimental method to the biological questions rather than the other way around.

Neuropharmacological Manipulation of Restrained and Free-flying Honey Bees, Apis mellifera

This manuscript describes several protocols for administering pharmacological agents to honey bees, including simple noninvasive methods for free-flying bees, as well as more invasive variants that allow precise localized treatment of restrained bees.

절제된 자유 비행 꿀 꿀벌의 Neuropharmacological 조작,<em&gt; API를 mellifera이</em

Honey bees demonstrate astonishing learning abilities and advanced social behavior and communication. In addition, their brain is small, easy to visualize ...