저자는 니코 Zantl, 클라우스 파퍼, 그리고 베른 하르트 Holzmann 감사드립니다. 이 연구는 독일 Forschungsgemeinschaft, 본 - 나쁜 Godesberg, 독일 (; 할머니 450/10-1 GRK - 840)에 의해 지원되었다.

1. 마우스를 준비 <ol><li> 마약 유체의 intraperitoneal 주사로 마우스를 마취 (시약의 표 참조)하고 나태한 위치에 놓으십시오. </li><li> 마우스의 발이 작업하는 동안 동물의 안정적인 지위를 보장하기 위해 접시에 테이프로 고정해야합니다. </li></ol> 2. 조작 <ol><li> 일반적으로 인간 IV 주사에 사용되는 IV 정맥을 타고와 팁로부터 플라스틱 튜브 circularly 2mm를 개척. 우리는 사망률 속도 (; 16GA (1,7 x45mm, 180 ML / 분) 14GA (2,0 x45mm, 270 ML / 분) BD Venflon 18GA를 (1,2 x45mm, 80 ML / 분)) 제어 cannulas의 세 가지 다른 크기를 사용합니다. </li><li> 복부 피부의 철저한 소독 후, 15mm에 대한 자사의 정중선을 따라 그것을 절개. linea 알바 따라 복부 근육과 복막을 절개하여 복막 동굴을 엽니다. </li><li> cecal 장대를 확인하고 신중하게이게 맹장, 터미널 회장과 면화 면봉을 사용하여 복부 밖으로 오름차순 콜론을 빼낸다. </li><li> 15mm는 ileocecal 벨브에서 말초 하나는 은빛 7 / 0 봉합으로 오름차순 결장의 벽에있다. 따라서, 굿 혈관의 병변은 피할 수있다. 봉합사는 두 수술 노트로 colonic 벽면에 고정됩니다. </li><li> 지금 찔린 7 / 0 봉합에서 근위 준비 정맥 1~2밀리미터와 오름차순 콜론. 플라스틱 튜브에 주름살이 serosa있는 수준까지 조심스럽게 콜론에 정맥를 삽입합니다. </li><li> 정맥 주위 7 / 0 봉합의 자유로운 끝을 넣고 정확히 플라스틱 튜브의 준비 고랑에 두 배 매듭을 놓으십시오. </li><li> 자, 콜론의 antimesenteric 벽을 통해 7 / 0 봉합사와 바늘 그것의 바늘을. 연속적으로 두 수술 옹​​이 또한 colonic 벽에 플라스틱 튜브를 해결하기 위해 수행해야합니다. 봉합사의 끝을 잘라. </li><li> 정맥 약간의​​ 철분 부분을 검색하고 고정 7 / 0 봉합에 플라스틱 튜브를 가까이에서 (1mm)를 잘라. </li><li> 이제 하나가 의자에 작은 팁이 스텐트 상단에 나타날 때까지 조심스럽게 면화 면봉을 사용하여 결장 스텐트 향해이게 맹장에서 대변을 우유에있다. </li><li> 생리 식염수 0.5 ML의 intraperitoneal 행정부가 복막 동굴과 performe 유체 인공 호흡으로 다시 용기를 넣어. </li><li> 연속 봉합 (4 / 0)와 복막을 닫습니다. </li><li> 단수 봉합 (4 / 0)으로 피부를 닫습니다. </li></ol> 3. 수술후 관리 <ol><li> 충분한 음식과 물을 포함되어야 그 새장에 동물을 다시 갖다 놔라. 진통제 들어, 강력한 진통 물질 (우리가 buprenorphine를 사용)의 intraperitoneal 관리는 정기적으로 실시하여야한다. </li><li> 수술 후 처음 두 일 이내에, 하나는 동물마다 6 시간 제어할 수 있습니다. </li></ol> 4. 섐 CASP <ol><li> 1.1-2.4 단계를 수행합니다. </li><li> 소중히 콜론을하지 마십시오. 그냥 단계를 2.6-2.8를 수행합니다. </li><li> 2.10-3.2 단계를 수행합니다. </li></ol> 5. CASPI <ol><li> 14G 정맥의 다음 단계 1.1-3.1를 사용 CASP 수행 </li><li> 5h는 CASP 한, 다시 동물을 운영하고 있습니다. 1.1-1.2 단계에 따라 다시 마우스를 준비하고 마취 </li><li> 복벽의 봉합을 엽니다. </li><li> 삽입한 스텐 트와 함께 상승 콜론을 당겨. </li><li> 조심스럽게 스텐트을 고정 봉합을 잘라 스텐 트를 제거합니다. </li><li> 하나의 반전 봉합 (7 / 0)와 콜론의 결함을 닫습니다. </li><li> 복강에 다시 용기를 넣고 생리 식염수 10 ML과 함께 두 번 후자를 플러시. </li><li> 연속 봉합 (4 / 0)와 복막을 닫습니다. </li><li> 단수 봉합 (4 / 0)으로 피부를 닫습니다. </li><li> 3.1-3.2 단계를 따르십시오 </li></ol> 6. 대표 결과 작업 다음과 같은 몇 시간 내에 동물은 시작의 패혈증의 임상 증상을 보여줍니다. 질병의 전형적인 증상은 발한, 이동성, 곤두선 코트를 감소, 음식 섭취, 체중의 손실 또한 감소 도주 행동을 감소. 연속 전신 감염 심각한 복막염을 개발 동물은 일반적으로 48h 이내에 죽어. 삽입된 스텐 트의 크기에 따라 별개의 사망률 요금을 생성할 수 있습니다. 100 % 사망률에 14G 스텐트 결과 16G 70 %의 사망률을 제공하고, 50 % 사망률 가격은 18G 스텐트 (그림 1A)를 사용하여 도달할 수 있습니다. 100 % 생존율의 섐 운영 결과. 보통, 모든 동물은 CASP 후 첫 48 시간 inbetween 죽어라. 따라서,이 시점에서 살아있는 모든 동물은 생존으로 간주 될 수 있습니다. 그러나, 우리는 희귀 &quot;늦은 사망&quot;CASP 이후를 검색하는 최소한 72 시간 추가 관찰 기간을 권장합니다. CASPI의 결과는 스텐트 제거 CASP 후 시간의 기간에 따라 달라집니다. 개입 3H 45%의 생존율에 CASP 결과 후. 스텐트는 CASP의 10 % 이후 5h 제거하는 경우동물 절차를 생존. 100 % (그림 1B)의 사망률에 9h 결과 후 스텐트 제거. 섐 CASPI 100 % 생존 발생합니다. 일반적으로 나중에 CASP 후 48 시간 이상 죽는 동물이 있기 때문에 CASPI 설정을 위해, 우리는 10 일 관찰 기간을 권장합니다. 부종, vasodilatation, erythematic 굿 벽, Peyer의 패치의 날카로운 경계, 굿 마비, 무료 유체 및 발효 분비 (그림 2) : CASP 후 복부 시터스 24 시간 매크로 검사는 복막염의 전형적인 징후를 보여줍니다. 전신 감염이 세균 분석으로 표시된 수 있습니다. 12시간 CASP 후, 엄청난 양의 세균이 복막 세척에서 검색된 수있다, 혈액, 간, 폐, 비장, 신장. 박테리아의 질적 분석 E.와 같은 전형적인 굿 세균에 의해 감염을 체계적 공개 대장균, bacteroides 종, enterococcus 종 등 (그림 3). CASP 유도된 패혈증 프로 및 안티 - 염증 크린 시토킨 및 chemokines 지역 또한 체계적 릴리스에 승객 명단. TNF, IL - 1β, IL - 6, IL - 10, MCP - 1과 타인의 CASP, 상당한 양의 다음 12시간는뿐만 아니라 장기 suspensions, 예 : 간, 폐, 비장, 신장의 supernatants의 피로 엘리사에 의해 측정할 수 (그림 4). 당신의 실험실, 생존 요금, 세균학 및 시토킨 릴리스에 CASP를 확립하면 CASP의 정확한 성능을 제어 매개 변수로 이동한다. 표준은 모든 실험 설정에 대한 시스템을 읽은 상태로 나중에 이러한 매개 변수가 취할 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1A : CASP 후 존속. CASP 수술 다음과 생존의 속도가 삽입된 스텐 트의 직경에 따라 달라집니다. 사망률의 100 % 세율 70 %의 사망률에 16G CASP 결과 및 18G CASP에서 14G CASP 결과 50 % 사망률로 연결됩니다. 섐 CASP 100 %의 생존과 관련된 것입니다. . N = 20/group B : CASPI 수술은 스텐트 제거의 시간에 따라 다음과 같은 서바이벌 요금. 14G CASP 후 3H에서 스텐트 제거 55 %의 사망률로 연결됩니다. 100 % 사망률에 14G CASP 결과 후 9h에서 스텐트 제거 반면, 90 % 사망률에 14G CASP 결과 후 5h에서 스텐트 제거. 100 % 생존에 사기 CASPI (5h) 결과입니다. N = 10/group (섐 CASPI; CASPI 9h), N = 20/group (3H CASPI, 5h CASPI). <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2 : CASP 후 복부 원위치 24. 복벽은 각각 16G CASP 또는 가짜 CASP 후 24 시간 제거되었습니다. 가짜 운영 마우스 시터스는 생리 보입니다. 반대로, 부종, 충혈, dilatated 대변하고, Peyer의 패치의 경계에 CASP 결과는 심각한는 복막염 시연. <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3 : 세균학. CASP는 수술후 12h 안에 여러 개의 구획 및 내장 박테리아에 의해 기관의 심각한 감염으로 연결됩니다. 세균성 번호는 콜로니 형성 단위 (cfu) 당 ML, 각각으로 제공됩니다. 허위 조작 생쥐에서 가져온 세균성 문화 (표시되지 않음)을 완전히 멸균 수 있습니다. 16G CASP, N = 5/group. <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig4.jpg" alt="그림 4" /> 그림 4 : 크린 시토킨. 여러 크린 시토킨 및 chemokines은 장기 supernatants 또한 플라즈마에 감지하고 같은 CASP는 체계적 면역 반응을 트리거합니다. 그림 exemplarily 프로 염증성 크린 시토킨 종양 괴사에게 인자 (TNF)와 인터루킨 6 (IL - 6)뿐만 아니라 주로 안티 - 염증성 IL - 10을 보여줍니다. CASP 후 12h는 놀라운 수준 플라즈마, 간, 폐 및 비장에서 발견하실 수 있습니다. 그러나, IL - 10은 CASP 후 폐 및 비장에서 발견하실 수 없습니다. 섐 작업은 시토킨 분비 (표시되지 않음)에 연결되지 않습니다. 16G CASP, N = 5/group.

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	<li>Maier, S., Traeger, T., Entleutner, M., Westerholt, A., Kleist, B., Huser, N., Holzmann, B., Stier, A., Pfeffer, K., Heidecke, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cecal+ligation+and+puncture+versus+colon+ascendens+stent+peritonitis:+two+distinct+animal+models+for+polymicrobial+sepsis.">Cecal ligation and puncture versus colon ascendens stent peritonitis: two distinct animal models for polymicrobial sepsis.</a> Shock. 21, 505-511 (2004).</li><li>Bougaki, M., Searles, R. J., Kida, K., Yu, J. D. e., Buys, E. S., Ichinose, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOS3+protects+against+systemic+inflammation+and+myocardial+dysfunction+in+murine+polymicrobial+sepsis.">NOS3 protects against systemic inflammation and myocardial dysfunction in murine polymicrobial sepsis.</a> Shock. , (2009).</li><li>Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+sepsis:+setting+the+stage.">Animal models of sepsis: setting the stage.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).</li><li>Busse, M., Traeger, T., Potschke, C., Billing, A., Dummer, A., Friebe, E., Kiank, C., Grunwald, U., Jack, R. S., Schutt, C., Heidecke, C. D., Maier, S., Broker, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrimental+role+for+CD4++T+lymphocytes+in+murine+diffuse+peritonitis+due+to+inhibition+of+local+bacterial+elimination.">Detrimental role for CD4+ T lymphocytes in murine diffuse peritonitis due to inhibition of local bacterial elimination.</a> Gut. 57, 188-195 (2008).</li><li>Daubeuf, B., Mathison, J., Spiller, S., Hugues, S., Herren, S., Ferlin, W., Kosco-Vilbois, M., Wagner, H., Kirschning, C. 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D., Lehmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colon+ascendens+stent+peritonitis--a+model+of+sepsis+adopted+to+the+rat:+physiological,+microcirculatory+and+laboratory+changes.">Colon ascendens stent peritonitis--a model of sepsis adopted to the rat: physiological, microcirculatory and laboratory changes.</a> Shock. 28, 59-64 (2007).</li><li>Traeger, T., Kessler, W., Assfalg, V., Cziupka, K., Koerner, P., Dassow, C., Breitbach, K., Mikulcak, M., Steinmetz, I., Pfeffer, K., Heidecke, C. D., Maier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrimental+role+of+CC+chemokine+receptor+4+in+murine+polymicrobial+sepsis.">Detrimental role of CC chemokine receptor 4 in murine polymicrobial sepsis.</a> Infect Immun. 76, 5285-5293 (2008).</li><li>Traeger, T., Kessler, W., Hilpert, A., Mikulcak, M., Entleutner, M., Koerner, P., Westerholt, A., Cziupka, K., Rooijen, N. v. a. n., Heidecke, C. D., Maier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+depletion+of+alveolar+macrophages+in+polymicrobial+sepsis+increases+lung+injury,+bacterial+load+and+mortality+but+does+not+affect+cytokine+release.">Selective depletion of alveolar macrophages in polymicrobial sepsis increases lung injury, bacterial load and mortality but does not affect cytokine release.</a> Respiration. 77, 203-213 (2009).</li><li>Traeger, T., Mikulcak, M., Eipel, C., Abshagen, K., Diedrich, S., Heidecke, C. D., Maier, S., Vollmar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kupffer+cell+depletion+reduces+hepatic+inflammation+and+apoptosis+but+decreases+survival+in+abdominal+sepsis.">Kupffer cell depletion reduces hepatic inflammation and apoptosis but decreases survival in abdominal sepsis.</a> Eur J Gastroenterol Hepatol. , (2010).</li><li>Weighardt, H., Kaiser-Moore, S., Schlautkotter, S., Rossmann-Bloeck, T., Schleicher, U., Bogdan, C., Holzmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+I+IFN+modulates+host+defense+and+late+hyperinflammation+in+septic+peritonitis.">Type I IFN modulates host defense and late hyperinflammation in septic peritonitis.</a> J Immunol. 177, 5623-5630 (2006).</li><li>Zantl, N., Uebe, A., Neumann, B., Wagner, H., Siewert, J. R., Holzmann, B., Heidecke, C. D., Pfeffer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+role+of+gamma+interferon+in+survival+of+colon+ascendens+stent+peritonitis,+a+novel+murine+model+of+abdominal+sepsis.">Essential role of gamma interferon in survival of colon ascendens stent peritonitis, a novel murine model of abdominal sepsis.</a> Infect Immun. 66, 2300-2309 (1998).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

, CASP은 작은 동물에서 수행할 수 있습니다 쉽게 표준 매개 변수에 의해 모니터, 높은 재현성이다, 좋은가 가능성을 읽을 제공하고 긴밀히의 임상 설정을 모방 : CASP는 귀중한 패혈증 모델에 postulated 대부분의 기준을 충족하는 복부 패혈증의 polymicrobial 모델 복부 패혈증. 비교 연구에서 우리는 cecal 내고 주사 (CLP)가 함께 내부 복부 농양 형성의 모델을 보여줍니다 반면 CASP는 일찍 꾸준히 증가 전신 감염 및 염증 (전신 염증 반응 증후군)와 복막염 확산에 이르게 것을 보여줄 수있는 지속과 부 체계 염증의 흔적 (1). CASPI의 기술은 인간에서 가장 중요한 치료 원칙이다 연속 외과 초점 위생과 복막염의 임상 과정을 시뮬레이션할 수있는 가능성을 제공합니다. CASP는 패혈증이나 복막염 주위 모든 질문에 대한 적용 그러므로 패혈증 연구 다루는 모든 분야에 유용 예를 들어 면역학, 약리학, 수술, 집중 치료 의학 등 CASP 모델을 사용하여 패혈증의 다양한 주제에 관한 출판물의 선택 수 있습니다 (1-14) 아래에 주어집니다. CASP 시작하면, 하나는 연습 정확하고 신속하게 작업을 수행할 필요가있다는 것을 알고 있어야한다. 수술 경험이 도움이 될 수 있지만 필요하지 않습니다. 우리는 CASP의 정확한 성능을 매개 변수로 letality의 탐지를 권장합니다. 대형 스텐트 한 얇은보다 처리하기 쉽습니다와 같은 하나는 14G CASP로 시작한다. 훈련 CASP의 외과의 10 분 내의 마우스를 작동할 수 있습니다. 어떤 실험을 시작하기 전에, 당신은 그 기간이 근처에 있는지 확인합니다. 당신은 수술​​과 어떤 경험을했을 때, 당신은 능력을 확인하는 생존 운동을 실시해야합니다. 14G CASP는 100 % 파괴 장면을 보여 주죠가 발생한다. 저희 연구실에 초심자는 그들이 실험을 시작하기 전에 14G CASP와 100 % 파괴 장면을 보여 주죠를 생성할 수있는 것을 증명해야합니다. 또한, 세균학 및 시토킨 측정은 패혈증을 확인하기 위해 수행되어야합니다. 당신은 CASP의 microsurgical 단계로 시작에 문제가있다면, 돋보기 안경이나 수술 현미경의 사용이 도움이 될 수 있습니다. 그러나 원칙적으로, CASP 잘 이러한 유틸리티없이도 수행할 수 있습니다. 우리의 생존 요금의 복제의 경우, 같은 재료, 특히 stents (BD Venflon, 아래 참조)가, 사용하는 것이 절대적으로 필요합니다. 그렇지 않으면, 결과의 상당한 변화가 가능합니다. 또한, 우리는 예를 들어,에 대한 외과 의사의 개성에 따라 결과의 차이가있을 수 있습니다하는 것이 좋습니다. 그러나, 그런 요인의 영향은 작은되어야합니다. 요약, CASP는 밀접​​하게 복부 패혈증의 임상 상황을 일일 실행이, 단순 재현할 가치 패혈증 모델입니다. 그러므로 패혈증 연구의 모든 분야에 적합합니다.

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Narcotic fluid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mix 0.5 mL Rompun with 4.0 mL Ketanest, and add 5.5 mL of saline solution (0.9%). 
For complete anesthesia, inject intraperitoneally 10 &mu;L/g body weight</td>
</tr>
<tr>
<td>Rompun (20 mg/ml Xylazine)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bayer AG 51368 Leverkusen, Germany</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ketanest (25mg/ml Esketamine)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pfizer Pharma GmbH, 10785 Berlin, Germany</td>
<td>647028001E</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Venflon 18GA (1,2x45mm, 80ml/min)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ USA 07417</td>
<td>391457</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Venflon 16GA (1,7x45mm, 180ml/min)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ USA 07417</td>
<td>391455</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Venflon 14GA (2,0x45mm, 270ml/min)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ USA 07417</td>
<td>391456</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Catgut Polyester 4/0 white, non absorbable</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Catgut GmbH, 08258 Markneukirchen, Germany</td>
<td>17218113</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mariderm black 7/0, non absorbable</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Catgut GmbH, 08258 Markneukirchen, Germany</td>
<td>18104900</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

colon ascendens stent peritonitis (casp) - a standardized model for polymicrobial abdominal sepsis

패혈증 전세계 집중 치료 단위에서 지속적인 문제가 남아있다. 패혈증의 복잡한 메커니즘을 이해하는 것은이 분야에 새로운 치료 방법을 확립을위한 조건입니다. 따라서, 동물 모델은 밀접하게 인간의 질병을 모방하며 충분한 과학적 질문을 다룰 수있다는 점을이 필요합니다. 콜론은 (CASP) 복막염 스텐트은 설치류에 polymicrobial 복부 패혈증에 대한 높은 표준 모델입니다 Ascendens. 이 모델에서, 작은 스텐 트가 수술 복막 구멍으로 창자 박테리아의 지속적인 유출로 이어지는 마우스 또는 쥐의 상승 결장에 삽입됩니다. 절차 복막염, 체계 bacteraemia, 굿 세균에 의해 장기 감염, 그리고 여러 프로 및 안티 - 염증성 크린 시토킨의 체계뿐만 아니라 지역 릴리스에 발생합니다. CASP의 파괴 장면을 보여 주죠가 삽입된 스텐 트의 직경에 의해 제어할 수 있습니다. 이 모델의 변종, 개입 (CASPI)과 함께 소위 CASP은 임상 연습에있는 일반적인 절차에 따라 두 번째 작업으로 발효 포커스를 제거하는 기회를시킵니다. CASP는 밀접​​하게 복부 패혈증의 임상 과정을 모방 쉽게 learnable과 높은 재현성 모델입니다. 그것은 여러 과학 분야 예 : 면역학, infectiology, 또는 수술의 질문에 대한 공부 방법을 주도하고 있습니다.

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Colon Ascendens Stent Peritonitis CASP - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

콜론은 (CASP) 복막염 스텐트은 설치류에 polymicrobial 복부 패혈증에 대한 높은 표준 모델입니다 Ascendens. 이 문서는 CASP의 수술에 대해 설명합니다. CASP 모델 및 그 변종은 패혈증의 주제에 관한 다양한 문제의 체계적인 조사를 허용합니다.

콜론은 (CASP) 복막염 스텐트 Ascendens - Polymicrobial 복부 패혈증에 대한 표준 모델

Sepsis remains a persistent problem on intensive care units all over the world. Understanding the complex mechanisms of sepsis is the precondition for ...

colon-ascendens-stent-peritonitis-casp-standardized-model-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Colon Ascendens Stent Peritonitis (CASP) - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

19.4K 조회수.  University of Greifswald. 콜론은 (CASP) 복막염 스텐트은 설치류에 polymicrobial 복부 패혈증에 대한 높은 표준 모델입니다 Ascendens. 이 문서는 CASP의 수술에 대해 설명합니다. CASP 모델 및 그 변종은 패혈증의 주제에 관한 다양한 문제의 체계적인 조사를 허용합니다.

비디오: Colon Ascendens Stent Peritonitis CASP - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

Cecal Ligation and Puncture-induced Sepsis as a Model To Study Autophagy in Mice

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method, which causes polymicrobial sepsis. Here, a protocol is provided to induce sepsis of varying severity in mice using the CLP technique. Autophagy is a fundamental tissue response to stress and pathogen invasion. Two current protocols to assess autophagy in vivo in the context of experimental sepsis are also presented here. (I) Transgenic mice expressing green fluorescence protein (GFP)-LC3 fusion protein are subjected to CLP. Localized enhancement of GFP signal (puncta), as assayed either by immunohistochemical or confocal assays, can be used to detect enhanced autophagosome formation and, thus, altered activation of the autophagy pathway. (II) Enhanced autophagic vacuole (autophagosome) formation per unit tissue area (as a marker of autophagy stimulation) can be quantified using electron microscopy. The study of autophagic responses to sepsis is a critical component of understanding the mechanisms by which tissues respond to infection. Research findings in this area may ultimately contribute towards understanding the pathogenesis of sepsis, which represents a major problem in critical care medicine.

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method. Current protocols to assess autophagy in vivo in the context of CLP-induced sepsis are presented here: A protocol for measuring autophagy using (GFP)-LC3 mice, and a protocol for measuring autophagosome formation by electron microscopy.

맹장 결찰 및 마우스에서 autophagy에 공부를 모델로 패혈증 관통 유도

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method, which causes polymicrobial sepsis. Here, a protocol is ...

연구

면역학 및 감염병학

A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse polymicrobial sepsis can be induced by injecting cecal slurry intraperitoneally into day of life 7 mice and monitoring them for the following week. Presented here are the detailed steps necessary for the implementation of this neonatal sepsis model. This includes making a homogeneous cecal slurry stock, diluting it to a weight- and litter-adjusted dose, an outline of the monitoring schedule, and a definition of observed health categories used to define humane endpoints. The generation of a homogeneous cecal slurry stock from pooled donors allows for the administration into many litters over time, reducing the variation between donors, and preventing the use of potentially toxic glycerol. The monitoring strategy used allows for the anticipation of survival outcome and the identification of mice that would later progress to death, allowing for an earlier identification of the humane endpoint. Two main behavioral features are used to define the health scores, namely, the ability of the neonatal mice to right themselves when placed on their back and their level of mobility. These criteria could potentially be applied to address humane endpoints in other studies of neonatal disease in mice, as long as a pilot study is performed to confirm accuracy. In conclusion, this approach provides a standardized method to model newborn sepsis in mice, while providing resources to assess animal welfare used to define early humane endpoints for challenged animals.

This protocol provides the necessary steps to establish and evaluate neonatal sepsis in 7-day-old mice.

신생아 Polymicrobial 패 혈 증에 대 한 제어 마우스 모델

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse ...

Design of Cecal Ligation and Puncture and Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple organs. With the development of therapies, most patients survive the hyperinflammatory phase but progress to an immunosuppressive phase, which increases the emergence of secondary infections. Therefore, improved understanding of the pathogenesis underlying secondary hospital-acquired infections in the immunosuppressive phase during sepsis is of tremendous importance. Reported here is a model to test infectious outcomes by creating double-hit infections in mice. A standard surgical procedure is used to induce polymicrobial peritonitis by cecal ligation and puncture (CLP) and followed by intranasal infection of Staphylococcus aureus to simulate pneumonia occurring in immune suppression that is frequently seen in septic patients. This dual model can reflect the immunosuppressive state occurring in patients with protracted sepsis and susceptibility to secondary infection from nosocomial pneumonia. Hence, this model provides a simple experimental approach to investigate the pathophysiology of sepsis-induced secondary bacterial pneumonia, which may be used for discovering novel treatments for sepsis and its complications.

This protocol describes techniques to measure infectious outcomes underlying secondary hospital-acquired infections in the immunosuppressive condition, first by establishing cecal ligation/puncture mice then challenging them with intranasal infection to create a clinically relevant model of immunosuppression sepsis.

세칼 결찰 및 천자 및 비강 내 감염 이중 모델 패혈증 유발 면역 억제 설계

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple ...

Measurement of Pulse Propagation Velocity, Distensibility and Strain in an Abdominal Aortic Aneurysm Mouse Model

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is defined as a localized dilation of the abdominal aorta that exceeds the maximal intraluminal diameter (MILD) by 1.5 times of its original size. Clinical and experimental studies have shown that small aneurysms may rupture, while a subpopulation of large aneurysms may remain stable. Thus, in addition to the measurement of intraluminal diameter of the aorta, knowledge of structural traits of the vessel wall may provide important information to assess the stability of the AAA. Aortic stiffening has recently emerged as a reliable tool to determine early changes in the vascular wall. Pulse propagation velocity (PPV) along with the distensibility and radial strain are highly useful ultrasound-based methods relevant for assessing aortic stiffness. The primary purpose of this protocol is to provide a comprehensive technique for the use of ultrasound imaging system to acquire images and analyze the structural and functional properties of the aorta as determined by MILD, PPV, distensibility and radial strain.

This manuscript describes a detailed protocol for using high frequency ultrasound imaging to measure luminal diameter, pulse propagation velocity, distensibility and radial strain on a mouse model of abdominal aortic aneurysm.

복부 대동맥류 마우스 모델에서 맥박 전파 속도, 감도 및 변형률 측정

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is defined as a localized dilation of the abdominal aorta that exceeds the maximal intraluminal diameter (MILD) by 1.5 ...

A Neonatal Imaging Model of Gram-Negative Bacterial Sepsis

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a protocol for studying the pathogenesis of E. coli O1:K1:H7, a serotype responsible for high mortality rates in neonates. Our method utilizes intravital imaging of neonatal pups at different time points during the progression of infection. This imaging, paralleled by measurement of bacteria in the blood, inflammatory profiling, and tissue histopathology, signifies a rigorous approach to understanding infection dynamics during sepsis. In the current report, we model two infectious inoculums for comparison of bacterial burdens and severity of disease. We find that subscapular infection leads to disseminated infection by 10 h post-infection. By 24 h, infection of luminescent E. coli was abundant in the blood, lungs, and other peripheral tissues. Expression of inflammatory cytokines in the lungs is significant at 24 h, and this is followed by cellular infiltration and evidence of tissue damage that increases with infectious dose. Intravital imaging does have some limitations. This includes a luminescent signal threshold and some complications that can arise with neonates during anesthesia. Despite some limitations, we find that our infection model offers an insight for understanding longitudinal infection dynamics during neonatal murine sepsis, that has not been thoroughly examined to date. We expect this model can also be adapted to study other critical bacterial infections during early life.

Infection of neonatal mice with bioluminescent E. coli O1:K1:H7 results in a septic infection with significant pulmonary inflammation and lung pathology. Here, we describe procedures to model and further study neonatal sepsis using longitudinal intravital imaging in parallel with enumeration of systemic bacterial burdens, inflammatory profiling, and lung histopathology.

그람 음성 세균 패혈증의 신생아 화상 진찰 모형

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a ...

Isolation of Adipogenic and Fibro-Inflammatory Stromal Cell Subpopulations from Murine Intra-Abdominal Adipose Depots

The stromal-vascular fraction (SVF) of white adipose tissue (WAT) is remarkably heterogeneous and consists of numerous cell types that contribute functionally to the expansion and remodeling of WAT in adulthood. A tremendous barrier to studying the implications of this cellular heterogeneity is the inability to readily isolate functionally distinct cell subpopulations from WAT SVF for in vitro and in vivo analyses. Single-cell sequencing technology has recently identified functionally distinct fibro-inflammatory and adipogenic PDGFR&#946;+ perivascular cell subpopulations in intra-abdominal WAT depots of adult mice. Fibro-inflammatory progenitors (termed, &#8220;FIPs&#8221;) are non-adipogenic collagen producing cells that can exert a pro-inflammatory phenotype. PDGFR&#946;+ adipocyte precursor cells (APCs) are highly adipogenic both in vitro and in vivo upon cell transplantation. Here, we describe multiple methods for the isolation of these stromal cell subpopulations from murine intra-abdominal WAT depots. FIPs and APCs can be isolated by fluorescence-activated cell sorting (FACS) or by taking advantage of biotinylated antibody-based immunomagnetic bead technology. Isolated cells can be used for molecular and functional analysis. Studying the functional properties of stromal cell subpopulation in isolation will expand our current knowledge of adipose tissue remodeling under physiological or pathological conditions on the cellular level.

This protocol describes the technical approach to isolate adipogenic and fibro-inflammatory stromal cell subpopulations from murine intra-abdominal white adipose tissue (WAT) depots by fluorescence-activated cell sorting or immunomagnetic bead separation.

The stromal-vascular fraction (SVF) of white adipose tissue (WAT) is remarkably heterogeneous and consists of numerous cell types that contribute ...

A Contemporary Warming/Restraining Device for Efficient Tail Vein Injections in a Murine Fungal Sepsis Model

In rodent models, tail vein injections are important methods for intravenous administration of experimental agents. Tail vein injections typically involve warming of the animal to promote vasodilation, which aids in both the identification of the blood vessels and positioning of the needle into the vessel lumen while securely restraining the animal. Although tail vein injections are common procedures in many protocols and are not considered highly technical if performed correctly, accurate and consistent injections are crucial to obtain reproducible results and minimize variability. Conventional methods for inducing vasodilation prior to tail vein injections generally depend on the use of a heat source such as a heat lamp, electrical/rechargeable heat pads, or pre-heated water at 37 &#176;C. Despite being readily accessible in a standard laboratory setting, these tools evidently suffer from poor/limited thermo-regulatory capacity. Similarly, although various forms of restraining devices are commercially available, they must be used carefully to avoid trauma to the animals. These limitations of the current methods create unnecessary variables in experiments or result in varying outcomes between experiments and/or laboratories.
In this article, we demonstrate an improved protocol using an innovative device that combines an independent, thermally regulated, warming device with an adjustable restraining unit into one system for efficient streamlined tail vein injection. The example we use is an intravenous model of fungal bloodstream infection that results in sepsis. The warming apparatus consists of a heat-reflective acrylic box installed with an adjustable automatic thermostat to maintain the internal temperature at a pre-set threshold. Likewise, the width and height of the cone restraining apparatus can be adjusted to safely accommodate various rodent sizes. With the advanced and versatile features of the device, the technique shown here could become a useful tool across a range of research areas involving rodent models that employ tail vein injections.

Here, we present an effective and efficient method for rodent tail vein injections using a uniquely designed warming/restraining device. By streamlining the initiation of vasodilation and restraining processes, this protocol allows accurate and timely intravenous injections of large groups of animals with minimal distress.

뮤린 곰팡이 패혈증 모델에서 효율적인 꼬리 정맥 주사를위한 현대 온난화 / 억제 장치

In rodent models, tail vein injections are important methods for intravenous administration of experimental agents. Tail vein injections typically involve ...

Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water while preventing passage of luminal bacteria and exogenous substances. A breach of this layer results in increased permeability to luminal contents and recruitment of immune cells, both of which are hallmarks of pathologic states in the gut including inflammatory bowel disease (IBD). 
Mechanisms regulating epithelial barrier function and transepithelial migration (TEpM) of polymorphonuclear neutrophils (PMN) are incompletely understood due to the lack of experimental in vivo methods allowing quantitative analyses. Here, we describe a robust murine experimental model that employs an exteriorized intestinal segment of either ileum or proximal colon. The exteriorized intestinal loop (iLoop) is fully vascularized and offers physiological advantages over ex vivo chamber-based approaches commonly used to study permeability and PMN migration across epithelial cell monolayers.
We demonstrate two applications of this model in detail: (1) quantitative measurement of intestinal permeability through detection of fluorescence-labeled dextrans in serum after intraluminal injection, (2) quantitative assessment of migrated PMN across the intestinal epithelium into the gut lumen after intraluminal introduction of chemoattractants. We demonstrate feasibility of this model and provide results utilizing the iLoop in mice lacking the epithelial tight junction-associated protein JAM-A compared to controls. JAM-A has been shown to regulate epithelial barrier function as well as PMN TEpM during inflammatory responses. Our results using the iLoop confirm previous studies and highlight the importance of JAM-A in regulation of intestinal permeability and PMN TEpM in vivo during homeostasis and disease. 
The iLoop model provides a highly standardized method for reproducible in vivo studies of intestinal homeostasis and inflammation and will significantly enhance understanding of intestinal barrier function and mucosal inflammation in diseases such as IBD.

Dysregulated intestinal epithelial barrier function and immune responses are hallmarks of inflammatory bowel disease that remain poorly investigated due to a lack of physiological models. Here, we describe a mouse intestinal loop model that employs a well-vascularized and exteriorized bowel segment to study mucosal permeability and leukocyte recruitment in vivo.

표준화된 장 루프 모델을 사용하여 마우스에서 장 투과성 및 호중구 환전 이동의 기능 평가

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water ...

Characterizing Salmonella Typhimurium-induced Septic Peritonitis in Mice

Sepsis is a dysregulated host immune response to microbial invasion or tissue damage, leading to organ injury at a site distant from that of the infection or damage. Currently, the widely used mice models of sepsis include lipopolysaccharide (LPS)-induced endotoxemia, cecal ligation and puncture (CLP), and monobacterial infection model systems. This protocol describes a method to study the host responses during Salmonella Typhimurium infection-induced septic peritonitis in mice. S. Typhimurium, a Gram-negative intracellular pathogen, causes typhoid-like disease in mice.
This protocol elaborates the culture preparation, induction of septic peritonitis in mice through intraperitoneal injection, and methods to study systemic host responses. Furthermore, the assessment of bacterial burden in different organs and the flow cytometric analysis of increased neutrophil numbers in the peritoneal lavage is presented. Salmonella Typhimurium-induced sepsis in mice leads to an increase in proinflammatory cytokines and rapid infiltration of neutrophils in the peritoneal cavity, leading to lower survival.
Every step in this protocol has been optimized, resulting in high reproducibility of the pathogenesis of septic peritonitis. This model is useful for studying immunological responses during bacterial sepsis, the roles of different genes in disease progression, and the effects of drugs to attenuate sepsis.

Characterizing Salmonella Typhimurium-induced Septic Peritonitis in Mice

This protocol describes the induction of Gram-negative monobacterial sepsis in a mouse model system. The model is useful in investigating the inflammatory and lethal host responses during sepsis.

살모넬라 티피뮤리움-유도된 마우스의 패혈성 복막염의 특징

Sepsis is a dysregulated host immune response to microbial invasion or tissue damage, leading to organ injury at a site distant from that of the infection ...

Evaluation of a Reliable Biomarker in a Cecal Ligation and Puncture-Induced Mouse Model of Sepsis

Sepsis is a severe life-threatening and rapidly developing disease that causes millions of deaths annually worldwide. Researchers have made tremendous efforts to elucidate the pathophysiology of sepsis using various animal models; the mouse model of sepsis induced by cecal ligation and puncture (CLP) is widely used in laboratories. The three technical aspects that affect the severity and replicability of the CLP model are the percentage of cecum ligated, the size of the needle used for cecal puncture, and the volume of feces squeezed into the abdominal cavity. The rapid and specific diagnosis of sepsis is a crucial factor that affects the outcome. The gold standard for sepsis diagnosis is microbial culture; however, this process is time-consuming and sometimes inaccurate. The detection of sepsis-specific biomarkers is fast, but the existing biomarkers are unsatisfactory due to a short half-life, non-specificity, and insufficient sensitivity. Therefore, there is an urgent need for a reliable biomarker of sepsis in the early stages. Previous publications suggest that excessive neutrophil extracellular traps (NETs) occur in sepsis. Citrullinated histone H3 (CitH3), as a NET component, is elevated both in septic animals and patients, and the presence of CitH3 is a reliable diagnostic biomarker of sepsis. The present study aimed to describe a standardized mouse model of CLP-induced sepsis and establish a reliable blood biomarker of sepsis. Our work may contribute to the early and accurate diagnosis of sepsis in the future.

This protocol presents the operative details of cecal ligation and puncture (CLP) in a mouse model of sepsis. CLP is one of the most widely used techniques to create an animal model of sepsis. Therefore, a standardized CLP protocol is required for the attainment of reliable research results.

패혈증의 맹장 결찰 및 천자 유도 마우스 모델에서 신뢰할 수 있는 바이오마커의 평가

Sepsis is a severe life-threatening and rapidly developing disease that causes millions of deaths annually worldwide. Researchers have made tremendous ...

콜론은 (CASP) 복막염 스텐트 Ascendens - Polymicrobial 복부 패혈증에 대한 표준 모델

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