이 연구는 부여 노에 의해 투자되었다. 국립 과학 재단 (National Science Foundation) 0,723,341 (KGL로). 우리는 또한 Schapiro 학부 연구 장학생 프로그램과 랜돌프 - 메이컨 대학에서 심리학과에서 제공하는 기부에 대해 감사하고 있습니다. 마지막으로, 우리는이 비디오 기사에 대한 R - MC 연구소를 준비하는이 연구와 아만다 Rzucidlo의 도움에 크랙 Kinsley의 공동 참여에 감사드립니다.

1. 동물 모델의 식별 <ol><li> 캘리포니아 사슴 마우스 (Peromyscus 포니)는 아버지의 반응을 탐험하는 이상적인 모델입니다. 당신이보다시피,이 마우스는 어머니와 마찬가지로 새끼를 grooms - 그들은 그럼에도 불구하고 새끼가 간호하는 것 같은데 그런 그들 위에 몸을 구부 리다. 캘리포니아 생쥐의 행동은 같은 속, 자주 탈출하거나 그들을 공격하려고, 새끼에 약간의 흥미를 전시하고 일반적인 사슴 마우스 (Peromyscus maniculatus)의 종 비교합니다. (새끼와 상호 작용이 수종의 사진을 그림 1을 참조하십시오.) </li><li> 종의 모델이 확인되면 다음의 여러 그룹이 설립해야합니다. 본 연구에서는 생물 학적 아버지, 아니 육아 경험 처녀, 그리고 두 종류의 제한 강아지 노출 (강아지 - 노출 또는 수양 아버지)와 처녀는 predisposed과 인수 모두 아버지의 특성 평가 수 있도록하는 데 사용됩니다. 이 특정 연구에서 우리는 또한 사회적 상호 작용은 새장에 배치하는 거 강아지가 아닌 대표적인 반응에 맞는다고 확신하는 강아지 장난감 마우스에 대한 모든 그룹을 노출 (그림 2 참조). </li><li> 신경 생물학 요인을 조사하기 전에, 그것은 선택된 종의 관심의 행동에 명확한 차이를 전시 있는지 확인하는 것이 중요합니다. 본 연구에서는, 남성은 접촉 보낸 시간의 강아지와 금액을 접근하기 위해 지연과 같은 점수 행동하는 데 사용되는 5 분 아버지의 행동 ethogram (ethogram의 예를 들어, 표 1 참조) 강아지와 케이지에 넣습니다 강아지. 공격적인 반응을 관찰하는 경우 강아지는 즉시 제거됩니다. 주의 행동 분석 후 실시 수 있도록 이러한 세션은 주로 촬영하고 있습니다. </li></ol> 2. 뇌 조직을 준비 <ol><li> 각 마우스의 표준 재관류 (프로토콜 첨부) 다음, 두뇌들은 관심의 특정 영역 (표시 뇌)에서 sectioned 수 있도록 제거됩니다. </li><li> 바소 프레신 (AVP) - 표준 마우스 뇌 아틀라스 (아틀라스 쇼)는 시상 하부에있는 paraventricular 핵, 본 연구에 대한 관심의 neuropeptide를 생산 세포에 풍부한 것으로 알려진 지역을 찾습니다하는 데 사용됩니다. </li><li> 조직이 마이크로톰와 sectioned되기 전에 동결 수 있도록 두뇌는 다음 차단 및 냉동 척에 장착됩니다. 구체적인 랜드마크가 다음 특정 뇌 두께,이 경우 30 마이크론은 분석에 사용되는 뇌 부분에 대한 설정, 확인되기 전까지는 두뇌 트림 모드에서 sectioned 있습니다. </li><li> 뇌 부분은 신중하게 인산 버퍼 식염수 (PBS)으로 가득 잘 접시에 배치됩니다, (첨부 PBS에 대한 프로토콜,이 표준 immunocytochemistry 프로토콜의 한 예입니다 것에주의하십시오.) </li></ol> 3. Immunocytochemistry <ol><li> 이 프로세스의 여러 단계에 걸쳐 (첨부 프로토콜을 참조), 그것은이 기법 (쇼 학생 pipetting)에 대한 화학 물질과 중요한 다른 재료의 정확한 측정을 보장하기 위해 정확한 pipetting 능력을 가지고하는 것이 중요합니다. </li><li> 이 과정의 첫 번째 단계는 잘 접시 3-5 번의 PBS를 교체 포함 두뇌를 세척되며 각 세척 사이에 잘​​ 플레이트는 10 분 로커에 표시됩니다 (학생 PBS를 교체하고 배기 락커에 잘 번호판을 배치 표시) . </li><li> 뇌 조각은 다음 주 항체 솔루션에 노출 4 로커 (쇼 프로세스)에서 ° C 하룻밤에 저장됩니다. </li><li> 다른 세척 다음, 뇌 조각은 다시 씻어, 상온에서 로커 한 시간 동안 차 항체에 노출됩니다. </li><li> 다음 두뇌는 neurochemical 양성 세포의 시각화를위한 준비 Avitin - 비오틴 복합 솔루션에 노출되어 있습니다. </li><li> 최종 시각화 단계에 대한, 두뇌는 DAB에 노출되어 있습니다. 이것은 위험한 제품으로 항상주의해서 취급해야합니다. 여기서 볼 수 있듯이, 뇌 조각이 (프로세스를 표시) 눈 앞에 어두운 얻을 시작합니다. </li><li> DAB 노출 다음, 두뇌는 세척의 마지막 시리즈 통과 후 조심스럽게 subbed 현미경 슬라이드에 배치하고 (슬라이드 뇌 슬라이스의 위치를​​ 보여, subbed 슬라이드 프로토콜에 대한 첨부 파일을 참조) 하룻밤 건조 사용할 수 있습니다. </li><li> 슬라이드는 다음 증류수와 알코올 세척 일련의 플랫폼에 착륙 마지막으로 안전하게 (이 과정의 다양한 측면을 보여, 삭제 과정에 대한 첨부 파일을 참조) slidebox에 coverslipped 및 저장되기 전에 Citrosolv에 빠져들되고. </li></ol> 4. Neuroquantification <ol><li> 슬라이드 말린 후에, 그들은 전문 neuroquantification 소프트웨어 평가하실 수 있습니다. 여기 Bioquant 소프트웨어 (화면에 소프트웨어 ... 그리고 현미경을 표시)을 마우스 두뇌의 paraventricular 핵에있는 바소 프레신 양성 세포와 섬유를 계량하는 데 사용됩니다. </li><li> 관심의 특정 영역은 측정 옵션을 사용하여 식별됩니다소프트웨어의 neuroquantification에 대한 시각적인 필드를 설정합니다. 일관된 시각 필드 크기 (쇼 학생이 이런 일을) 각 동물 계량는 것이 중요합니다. </li><li> 여기 어둡게 스테인드 바소 프레신 - immunoreactive 세포 기관 및 섬유 분명 있습니다. 그것이 조직을 계산하거나 추적하기 어려운이기 때문에,이 소프트웨어의 특징은 관심의 지정된 영역 내에 적극적으로 스테인드 조직의 총 금액을 결정하는 조명 thresholding을 사용합니다. 이 thresholding는 바소 프레신 - 긍정적인 조직을 (컴퓨터 화면에 데이터 값을 표시) 포함된 얼마나 지정된 지역의 우리에게 알려줍니다. </li></ol> 5. 행동 분석 <ol><li> 하나 이상의 관찰자가 비디오 테이프를 채점되는 경우 그것은 관찰자가 일관성있는 방식으로 동작을 채점하는 보장에 간 제일 급의 신뢰성을 확립하는 것이 중요합니다. 실제 점수 세션에 대한, 행동 점수 시트 (스프레드 시트를 채점의 예를 들어, 표 2 참조) 관찰 세션 동안 행동을 쉽게 점수 있도록 준비되어야합니다. </li><li> 빠른 에피소드 응답되지 않은 동작을 위해, microsequencing 분석은 특정 반응의 진행에 대해 미묘을 확인할 수 있습니다. 예를 들어, 문제를 정리하는 것은 매우 빠른 반응의 사슬로 구성되어 있습니다. 한 개의 옵션을 간단하게 정리의 존재와 시간을 기록하지만, 또 다른이 응답과 함께 사건의 사슬을 문서화하는 것입니다. 이 microsequencing 소프트웨어를 사용하여 관측은 소프트웨어 (쇼 소프트웨어와 비디오)하라는 메시지가 특정 행동을 매 순간의 존재를 점수. </li><li> 데이터 수집에 따라 관심의 매개 변수가 결정되고 적절한 행동 점수는 분석입니다. 예 정리 순서 중단 (각 동물에 대한 입력 데이터를 스프레드 시트와 컴퓨터를 표시)의 강아지, 또는 번호와 접촉 보낸 시간의 총 기간 수 있습니다. </li><li> 문제가 채점되면 그것은 두 종의 연구에 대한 관심의 행동에 대해 서로 다른 응답 전략을 전시를 확인하는 것이 중요합니다. 이 경우에는 캘리포니아 사슴 마우스는 일반적인 사슴 마우스보다 아버지의 행동을 전시한다. 또한, 다양한 행동 조치와 관련된 영향에 더 정보를 볼 수를 얻을 두뇌 조치와 상관하실 수 있습니다. </li></ol> 6. 대표 결과 : <ol><li> 모델을 확인하려면 데이터가 명확하게 두 종류가 관심의 행동에 관해서는 다르게 수행되었음을 나타냅니다한다. 여기 표시되는 P. 포니의 수컷은 새끼, 아버지의 반응 두 가지 특징 (그림 4 참조)를 통해 정리하고 웅크리고 더 많은 시간을 보냈다. </li><li> 볼 수 있듯이, 아버지의 P.; 관심 neurobiologial 변수는, 아버지의 반응에 중요 바소 프레신의 양은 (AVP) - 긍정적인 조직이 여러 관련 뇌 영역에 대한 계량되었습니다 있는지 확인하기 위해 포니 동물이 뇌 영역의 여러 더 많은 면역 - 긍정적인 조직을했다. (그림 5 참조). </li><li> microsequencing 분석을 사용하여 관련 연구에서, 그것은 아버지의 캘리포니아 마우스가 처녀의 대응보다 적은 불안감을 전시 것이 가상했다, 따라서, 육식 동물의 냄새에 노출 때, 아버지는 (그림 참조 처녀 동물보다 정리 순서에 따라 적게 방해 전시 6). </li></ol><img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig1.jpg" /> 그림 1 : (A) conspecific 외국인 강아지 향한 아버지의 답변을 전시 남 캘리포니아 마우스. (B) 남자 사슴 마우스는 신중한 접근 (스트레치 참석)와 강아지 conspecific 외계인의 존재에 회피 응답을 전시. 참고 : 남자가 강아지 향해 적극적인 답변을 전시하는 경우 이러한 사회적 상호 작용 평가에서, 경험이 바로 남성주의를 분산하기 위해 케이지의 상단을 누르십시오. 이때 세션이 종료되고 강아지가 제거됩니다, 모든 상처에 대한 검사 및 어머니로 돌아왔습니다. 저희 연구실에서는, 이것은 거의 P. 함께 관찰되지 않습니다 포니의 남성이지만은 종종 P.과 관찰 maniculatus, 가까이 관찰과 즉각적인 개입을하지만, 동물 발생 피해를 방지. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig2.jpg" /> 그림 2 : 장난감 마우스 상호 작용 캘리포니아 마우스, 대부분의 이러한 자극에 씹어 했어요. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig3.jpg" /> 그림 3 : 연구의 실험 설계, 각 그룹에 약 6 동물은 각 종족에 대한있었습니다. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig4.jpg" /> 그림 4 : immunocytochemistry 프로세스의 그래픽. <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig5.jpg" /> 무화과ure 5 캘리포니아과 사슴 마우스의 아버지의 반응;. 자세한 아버지의 반응은 (신랑, 몸을 구부 리다, 빠른 접근) 캘리포니아 마우스에서 관찰되었다. 더 신축성 참석 (스트레스 응답)은 사슴 마우스에서 관찰되었다. <img alt="그림 6" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig6.jpg" /> 그림 6. 두 종류의 다양한 뇌 영역에서 바소 프레신의 immunoreactivity. 캘리포니아 마우스는 PVN 세포와 섬유에 더 많은 얼룩을했다. <img alt="그림 7" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig7.jpg" /> 그림 7 : 아버지의 캘리포니아 마우스는 강아지 노출과 처녀 그룹보다 육식 동물 냄새의 존재에서 정리 시퀀스에서 적은 혼란을 전시.

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	<li>Tada, N., Sato, M., Yamanoi, J., Mizorogi, T., Kasai, K., Ogawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+mouse+spermatozoa+in+the+presence+of+raffinose+and+glycerol.">Cryopreservation of mouse spermatozoa in the presence of raffinose and glycerol.</a> J. Reprod. Fertil. 89, 511-516 (1990).</li><li>Yokoyama, M., Akiba, H., Katsuki, M., Nomura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+normal+young+following+transfer+of+mouse+embryos+obtained+by+in+vitro+fertilization+using+cryopreserved+spermatozoa.">Production of normal young following transfer of mouse embryos obtained by in vitro fertilization using cryopreserved spermatozoa.</a> Jikken Dobutsu. 39, 125-128 (1990).</li><li>Sztein, J. M., Farley, J. S., Young, A. F., Mobraaten, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motility+of+cryopreserved+mouse+spermatozoa+affected+by+temperature+of+collection+and+rate+of+thawing.">Motility of cryopreserved mouse spermatozoa affected by temperature of collection and rate of thawing.</a> Cryobiology. 35, 46-52 (1997).</li><li>Thornton, C. E., Brown, S. D., Glenister, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large+numbers+of+mice+established+by+in+vitro+fertilization+with+cryopreserved+spermatozoa:+implications+and+applications+for+genetic+resource+banks,+mutagenesis+screens,+and+mouse+backcrosses.">Large numbers of mice established by in vitro fertilization with cryopreserved spermatozoa: implications and applications for genetic resource banks, mutagenesis screens, and mouse backcrosses.</a> Mamm. Genome. 10, 987-992 (1999).</li><li>Sztein, J. M., Farley, J. S., Mobraaten, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+fertilization+with+cryopreserved+inbred+mouse+sperm.">In vitro fertilization with cryopreserved inbred mouse sperm.</a> Biol. Reprod. 63, 1774-1780 (2000).</li><li>Liu, L., Nutter, L. M., Law, N., McKerlie, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+freezing+and+in+vitro+fertilization+in+three+substrains+of+C57BL/6+mice.">Sperm freezing and in vitro fertilization in three substrains of C57BL/6 mice.</a> J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 48, 39-43 (2009).</li><li>Nakagata, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+mouse+spermatozoa+and+in+vitro+fertilization.">Cryopreservation of mouse spermatozoa and in vitro fertilization.</a> Methods. Mol. Biol. 693, 57-73 (2011).</li><li>Mazur, P., Koshimoto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+intracellular+ice+formation+the+cause+of+death+of+mouse+sperm+frozen+at+high+cooling+rates.">Is intracellular ice formation the cause of death of mouse sperm frozen at high cooling rates.</a> Biol. Reprod. 66, 1485-1490 (2002).</li><li>Jin, B., Yamasaki, C., Yamada, N., Seki, S., Valdez, D. M., Kasai, M., Edashige, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanism+by+which+mouse+spermatozoa+are+injured+during+freezing.">The mechanism by which mouse spermatozoa are injured during freezing.</a> J. Reprod. Dev. 54, 265-269 (2008).</li><li>Visconti, P. E., Westbrook, V. A., Chertihin, O., Demarco, I., Sleight, S., Diekman, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+signaling+pathways+involved+in+sperm+acquisition+of+fertilizing+capacity.">Novel signaling pathways involved in sperm acquisition of fertilizing capacity.</a> J. Reprod. Immunol. 53, 133-150 (2002).</li><li>Ostermeier, G. C., Wiles, M. V., Farley, J. S., Taft, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserving,+distributing+and+managing+genetically+modified+mouse+lines+by+sperm+cryopreservation.">Conserving, distributing and managing genetically modified mouse lines by sperm cryopreservation.</a> PLoS ONE. 3, e2792-e2792 (2008).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

이 문서는 세 필수 요소 행동 신경 과학 조사의 성공적 실행을 위해 중요한 것으로 생각 설​​명 : (2) 정확하고 민감한 immunocytochemistry 프로토콜, (1) 대표적인 유효 동물 모델과 (3) 대부분의 분석 (관측 및 통계 ) 행동 및 두뇌 데이터를 모두. 하나의 카테고리에서 실수 가장 확실하게 전체 연구의 결과를 손상됩니다. 따라서 신중하게 적절한 동물 모델을 선택한 후, 상당한 노력을 조종사가 두뇌의 성공적인 처리하여 다음 동작이 안정적으로 연구 관찰된다는 보장하기 위해 행동 및 histological 절차, 테스트 방향으로 이동해야합니다. 앞서 언급했듯이이 기법은 유전 공학이나 고통 외과 조작을 필요로하지 않기 때문에, 특정 응답의 신경 생물학 메커니즘을 식별하는 비교 종의 사용은 귀중한 방법론 접근이다. 따라서,이 방법 론적 접근은 덜 위협, 손상 동물을 활용합니다. 동물 실험실에 보관되어 경우에도 동물의 자연적인 변형의 사용은, 그러나, 자연과 같은 환경의 결합에 의해 강화됩니다. 실험실 연구가 더욱 관심의 동작 종의 차이의 진위를 확인하기 위해 필드로 확장될 수있다면 더 나아가,이 다음 단계를 권장합니다. 비교 방식은 많은 장점을 제공하지만, 제한은 데이터의 상호 성격이며 따라서 이러한 약리 조작과 같은 추가적인 기술은 더욱 관심의 동작에서 신경 생물학 타겟 시스템의 역할을 확인하는 데 사용해야합니다. 경험은, 행동 histological 및 통계 절차에 대한 확신하면, 치료가 동물의 생활 조건은 실험 조작에 대한, 물론 제외한 모든 그룹에 대해 지속적으로 유지되도록 주의해야한다. 이러한 빛의 일정, 소음 수준, 관리 인, 습도 수준 및 실험실에서 냄새로 변수의 변화는 동물들의 신경 생물학 반응에 상당한 영향을 미칠 수 있습니다. 이 문서에 나와있는 기본 항체는 바소 프레신 있지만 다른 차 항체가 관심의 다양한 neurochemicals의 과다 사용할 수의 검출을 위해 사용되었습니다. 실험자은 새로운 항체와 함께 일하고있다면, 그것은 새로운 항체의 최적의 희석을 결정하는 적정 연구를 수행하는 것이 중요합니다. 또한, 항체의 과다 사용은 매우 고가이며 대부분의 경우 너무 많은 항체는 신호를 차별화하는 데 너무 어두울 조직의 결과 (로 공급 업체에서 제안)이 사용됩니다. 한 통계 분석 이상이 대체 전망과 데이터의 해석을 제공하는 데 사용할 수있다면 마지막으로, 그들은 활용해야합니다. 이 특정 연구에서는 일반 선형 모델, correlational, 그리고 다차원 스케일링 분석은 데이터의 가장 유익한 전망을 제공하기 위해 사용되었습니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 쌍안경 복합 현미경 </td><td> Motic </td><td> BA400 </td><td></td></tr><tr><td> BIOQUANT 생명 과학 소프트웨어 </td><td> BioQuant 이미지 분석 주식 회사 </td><td> 버전 8.40.20 </td><td></td></tr><tr><td> 그라 이오 스탯 </td><td> Microm </td><td> HM525 </td><td></td></tr><tr><td> Masterflex 콘솔 드라이브 쉬운로드 L / S (재관류 펌프) </td><td> 콜 - Parmer 악기 회사 </td><td> 7518-00 </td><td></td></tr><tr><td> 24 자 세포 배양 클러스터 (조직 문화 처리, 비 pyrogenic 폴리스티렌, 무균) </td><td> 코닝 Costar </td><td> 3526 </td><td></td></tr><tr><td> 25x75x1mm 현미경 슬라이드 </td><td> 글로브 과학 주식 회사 </td><td> 1324W </td><td></td></tr><tr><td> 22x50mm 호 커버 슬립 </td><td> 글로브 과학 주식 회사 </td><td> 1414년부터 1410년까지 </td><td></td></tr><tr><td> 비 멸균 3mL 대형 벌브 전송 Pipettes를 졸업 </td><td> 전자 현미경 과학 </td><td> 70962-9 </td><td> &amp;nbps; </td></tr><tr><td> Alconox 세제 파우더 </td><td> Alconox </td><td> 1104 </td><td></td></tr><tr><td> 나트륨 염화물 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> S9888 - 1kg </td><td> CAS 7647-14-5 </td></tr><tr><td> 일염기의의 인산 나트륨 </td><td> 스펙트럼 </td><td> SO130 </td><td> CAS 10049-21-5 </td></tr><tr><td> 인산 나트륨 이염 이수화물 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> 30,412 </td><td> CAS 10028-24-7 </td></tr><tr><td> 트리톤 X </td><td> 스펙트럼 </td><td> TR135 </td><td> CAS 9002-93-1 </td></tr><tr><td> Permount </td><td> 어부 </td><td> SP15 - 500 </td><td> CAS 108-88-3 </td></tr><tr><td> 크롬 칼륨 황산 </td><td> 시그마 </td><td> C - 5926 </td><td> CAS 7788-99-0 </td></tr><tr><td> CitriSolv </td><td> 피셔 과학 </td><td> 22-143975 </td><td></td></tr><tr><td> 에탄올, 높은 Den.Poly 병, 200 증명, 24 × 1 파인트 </td><td> Pharmco - AAPER </td><td> 111000200CSPP </td><td></td></tr><tr><td> 정상 염소 혈청 </td><td> 벡터 </td><td> S - 1000 </td><td></td></tr><tr><td> 토끼 반대의 바소 프레신의 Analyte 특정 시약 </td><td> Immunostar 주식 회사 </td><td> 20,069 </td><td></td></tr><tr><td> Biotinylated 안티 - 토끼 IgG (H + L) - 친화력 정화 </td><td> 벡터 </td><td> BA - 1000 </td><td></td></tr><tr><td> 엘리트 표준 Vectastain ABC 키트 </td><td> 벡터 </td><td> PK - 6100 </td><td></td></tr><tr><td> DAB 퍼옥시데이즈 기판 키트 </td><td> 벡터 </td><td> SK - 4100 </td><td></td></tr><tr><td> 원본 Unflavored 다행 (4 - 카운트 봉투) 1 온스 상자 </td><td> 녹스 </td><td></td><td> 지역 식료품 가게에서 구입 </td></tr><tr><td> 3 % 과산화수소 </td><td> CareOne </td><td></td><td> 지역 약국에서 구입 </td></tr><tr><td> 표백제 </td><td> Clorox </td><td></td><td> 지역 식료품 가게에서 구입 </td></tr></tbody></table>

using a comparative species approach to investigate the neurobiology of paternal responses

행동 신경 과학의 목표는 구체적인 행동을 규제 기본 신경 생물학 요소를 식별하는 것입니다. 이러한 목표를 달성하기 위해 동물 모델을 사용하여 많은 방법 론적 전략 침입 기술이 관심의 동작의 강도를 (예, 병변 방법, 약리 조작, microdialysis 기법, 유전 공학 - 동물 모델) 조작이 필요합니다. 비교 종의 방식의 활용이 연구팀은 자연적으로 밀접하게 관련 수종의 기존 대응 전략의 차이를 발생 활용할 수 있습니다. 우리가 실험실에서, 우리는 아버지의 반응에 차이가 Peromyscus의 속 두 종의을 사용합니다. 남성 캘리포니아 사슴 마우스 (Peromyscus 포니)가 자사의 사촌 반면, 여성과 같은 부모의 반응을 전시하고, 일반적인 사슴 마우스 (Peromyscus maniculatus) 새끼의 면전에서 거의 아무런 육성 / 부모의 응답을 전시하지 않습니다. 이 문서에있는 특정 관심의 아버지의 캘리포니아 사슴 마우스로 전시 affiliative 사회적 반응과 관련된 신경 생물학 요인 탐험입니다. 행동 신경 과학 접근 다각이기 때문에 연구의 다음과 같은 주요 구성 요소가 간단히 해결됩니다 : 연구의 유형에 적합한 수종을 식별, 행동 분석을위한 데이터 수집, 준비 및 두뇌의 sectioning, 대한 immunocytochemistry에 관련된 기본 단계를 바소 프레신 - immunoreactivity의 부량, 뇌 조직을 계량하는 소프트웨어를 neuroimaging의 사용, 행동을 점수를하고, 마지막으로, 적절한 통계 분석은 연구 결과의 가장 정보 해석을 제공하기 위해 microsequencing 비디오 분석의 사용.

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Using a Comparative Species Approach to Investigate the Neurobiology of Paternal Responses

비교 수종 접근 행동 neuroscientists가 특정 동물 모델의 특성으로 볼 구체적인 행동과 관련된 다양한 신경 생물학 요소를 탐험하실 수 있습니다. 자연 밀접하게 관련 종 사이의 행동의 차이를 발생의 활용이 기술은 침입 기법은 행동의 표현을 조작할 필요가 없습니다.

아버지의 응답의 신경 생물학을 맡은 이후로 비교 종의 접근법을 사용

A goal of behavioral neuroscience is to identify underlying neurobiological factors that regulate specific behaviors.  Using animal models to accomplish ...

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Multielectrode Array Recordings of the Vomeronasal Epithelium

Understanding neural circuits requires methods to record from many neurons simultaneously. For in vitro studies, one currently available technology is planar multielectrode array (MEA) recording. Here we document the use of MEAs to study the mouse vomeronasal organ (VNO), which plays an essential role in the detection of pheromones and social cues via a diverse population of sensory neurons expressing hundreds of types of receptors. Combining MEA recording with a robotic liquid handler to deliver chemical stimuli, the sensory responses of a large and diverse population of neurons can be recorded. The preparation allows us to remove the intact neuroepithelium of the VNO from the mouse and stimulate with a battery of chemicals or potential ligands while monitoring the electrical activity of the neurons for several hours. Therefore, this technique serves as a useful method for assessing ligand activity as well as exploring the properties of receptor neurons. We present the techniques needed to prepare the vomeronasal epithelium, MEA recording, and chemical stimulation.

Multielectrode array (MEA) recordings provide a method for studying the electrical activity of large populations of neurons. Here, we present the details of a MEA preparation to record from the mouse vomeronasal epithelium while simultaneously stimulating the tissue.

Vomeronasal 상피의 Multielectrode 배열 레코딩

Understanding neural circuits requires methods to record from many neurons simultaneously. For in vitro studies, one currently available technology is ...

연구

신경과학

Recording Behavioral Responses to Reflection in Crayfish

Social behavior depends on sensory input from the visual, mechanical and olfactory systems. One important issue concerns the relative roles of each sensory modality in guiding behavior. The role of visual inputs has been examined by isolating visual stimuli from mechanical and chemosensory stimuli. In some studies (Bruski &amp; Dunham, 1987: Delgado-Morales et al., 2004) visual inputs have been removed with blindfolds or low light intensity, and effects of remaining sensory modalities have been elucidated. An alternative approach is to study the effects of visual inputs in the absence of any appropriate mechanical and chemosensory cues. This approach aims to identify the exclusive role of visual inputs. 
We have used two methods to provide visual stimuli to crayfish without providing chemical and mechanical cues. In one method, crayfish are videotaped in an aquarium where half of the walls are covered in mirrors to provide a reflective environment, and the other half are covered in a non-reflective (matte finish) plastic. This gives the crayfish a choice between reflective and non-reflective environments. The reflective environment provides visual cues in the form of reflected images of the crayfish as it moves throughout half of the tank; these visual cues are missing from the non-reflective half of the tank. An alternative method is to videotape the behavior of crayfish in an aquarium separated by a smaller chamber at each end, with a crayfish in one small chamber providing visual cues and an inert object in the opposite small chamber providing visual input from a non-moving, non-crayfish source. 
Our published results indicate that responses of crayfish to the reflective environment depend on socialization and dominance rank. Socialized crayfish spent more time in the reflective environment and exhibited certain behaviors more frequently there than in the non-reflective environment; isolated crayfish showed no such differences. Crayfish that were housed in same-sex pairs developed a social rank of either dominant or subordinate. Responses to reflection differed between dominant and subordinate crayfish (May &amp; Mercier, 2006; May &amp; Mercier, 2007). Dominant crayfish spent more time on the reflective side, entered reflective corners more frequently and spent more time in reflective corners compared to the non-reflective side. Subordinate crayfish walked in reverse more often on the reflective side than on the non-reflective side. Preliminary data suggest similar effects from visual cues provided by a crayfish in a small adjoining chamber (May et al., 2008).

We have developed two methods for studying effects of visual cues on behavior in the absence of tactile and chemical cues. One method involves videotaping responses of crayfish to reflective walls in an aquarium; the other examines effects of visual inputs provided by a live crayfish behind a transparent partition.

크레이 피쉬에 리플렉션하는 행동 응답 녹음

Social behavior depends on sensory input from the visual, mechanical and olfactory systems.  One important issue concerns the relative roles of each ...

Chronic Imaging of Mouse Visual Cortex Using a Thinned-skull Preparation

In vivo imaging using two-photon laser scanning microscopy (2PLSM) allows the study of living cells and neuronal processes in the intact brain. The technique presented here allows the imaging of the same area of the brain at several time points (chronic imaging) with microscopic resolution allowing the tracking of dendritic spines which are the small structures that represent the majority of postsynaptic excitatory sites in the CNS. The ability to clearly resolve fine cortical structures over several time points has many advantages, specifically in the study of brain plasticity in which morphological changes at synapses and circuit remodeling may help explain underlying mechanisms. In this video and supplementary material, we show a protocol for chronic in vivo imaging of the intact brain using a thinned-skull preparation. The thinned-skull preparation is a minimally invasive approach, which avoids potential damage to the dura and/or cortex, thus reducing the onset of an inflammatory response. When this protocol is performed correctly, it is possible to clearly monitor changes in dendritic spine characteristics in the intact brain over a prolonged period of time.

In this video and supplemental material, we show a protocol for chronic in vivo imaging of the intact brain using a thinned-skull preparation.

Thinned - 해골 준비를 사용하여 마우스 시각 피질의 만성 이미징

In vivo imaging using two-photon laser scanning microscopy (2PLSM) allows the study of living cells and neuronal processes in the intact brain. The ...

Measuring the Subjective Value of Risky and Ambiguous Options using Experimental Economics and Functional MRI Methods

Most of the choices we make have uncertain consequences. In some cases the probabilities for different possible outcomes are precisely known, a condition termed "risky". In other cases when probabilities cannot be estimated, this is a condition described as "ambiguous". While most people are averse to both risk and ambiguity1,2, the degree of those aversions vary substantially across individuals, such that the subjective value of the same risky or ambiguous option can be very different for different individuals. We combine functional MRI (fMRI) with an experimental economics-based method3 to assess the neural representation of the subjective values of risky and ambiguous options4. This technique can be now used to study these neural representations in different populations, such as different age groups and different patient populations.
In our experiment, subjects make consequential choices between two alternatives while their neural activation is tracked using fMRI. On each trial subjects choose between lotteries that vary in their monetary amount and in either the probability of winning that amount or the ambiguity level associated with winning. Our parametric design allows us to use each individual's choice behavior to estimate their attitudes towards risk and ambiguity, and thus to estimate the subjective values that each option held for them. Another important feature of the design is that the outcome of the chosen lottery is not revealed during the experiment, so that no learning can take place, and thus the ambiguous options remain ambiguous and risk attitudes are stable. Instead, at the end of the scanning session one or few trials are randomly selected and played for real money. Since subjects do not know beforehand which trials will be selected, they must treat each and every trial as if it and it alone was the one trial on which they will be paid. This design ensures that we can estimate the true subjective value of each option to each subject. We then look for areas in the brain whose activation is correlated with the subjective value of risky options and for areas whose activation is correlated with the subjective value of ambiguous options.

Using functional MRI and behavioral methods to determine the neural representation of the subjective value of risky and ambiguous options in the human brain.

실험 경제 기능 MRI 방법을 사용하여 위험하고 모호한 옵션의 주관적 가치를 측정

Most of the choices we make have uncertain consequences. In some cases the probabilities for different possible outcomes are precisely known, a condition ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of the dendritic tree, which eventually leads to neuronal output of action potentials at the axon. The influence of diverse spatial and temporal parameters of specific synaptic input on neuronal output is currently under investigation, e.g. the distance-dependent attenuation of dendritic inputs, the location-dependent interaction of spatially segregated inputs, the influence of GABAergig inhibition on excitatory integration, linear and non-linear integration modes, and many more.
With fast micro-iontophoresis of glutamate and GABA it is possible to precisely investigate the spatial and temporal integration of glutamatergic excitation and GABAergic inhibition. Critical technical requirements are either a triggered fluorescent lamp, light-emitting diode (LED), or a two-photon scanning microscope to visualize dendritic branches without introducing significant photo-damage of the tissue. Furthermore, it is very important to have a micro-iontophoresis amplifier that allows for fast capacitance compensation of high resistance pipettes. Another crucial point is that no transmitter is involuntarily released by the pipette during the experiment.
Once established, this technique will give reliable and reproducible signals with a high neurotransmitter and location specificity. Compared to glutamate and GABA uncaging, fast iontophoresis allows using both transmitters at the same time but at very distant locations without limitation to the field of view. There are also advantages compared to focal electrical stimulation of axons: with micro-iontophoresis the location of the input site is definitely known and it is sure that only the neurotransmitter of interest is released. However it has to be considered that with micro-iontophoresis only the postsynapse is activated and presynaptic aspects of neurotransmitter release are not resolved. In this article we demonstrate how to set up micro-iontophoresis in brain slice experiments.

In this article we introduce fast micro-iontophoresis of neurotransmitters as a technique to investigate integration of postsynaptic signals with high spatial and temporal precision.

글루타민산 염과 GABA의 빠른 마이크로 이온 도입 : 시냅틱 통합을 조사하는 유용한 도구

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Laser-scanning Photostimulation of Optogenetically Targeted Forebrain Circuits

The sensory forebrain is composed of intricately connected cell types, of which functional properties have yet to be fully elucidated. Understanding the interactions of these forebrain circuits has been aided recently by the development of optogenetic methods for light-mediated modulation of neuronal activity. Here, we describe a protocol for examining the functional organization of forebrain circuits&#160;in vitro using laser-scanning photostimulation of channelrhodopsin, expressed optogenetically via viral-mediated transfection. This approach also exploits the utility of cre-lox recombination in transgenic mice to target expression in specific neuronal cell types. Following transfection, neurons are physiologically recorded in slice preparations using whole-cell patch clamp to measure their evoked responses to laser-scanning photostimulation of channelrhodopsin expressing fibers. This approach enables an assessment of functional topography and synaptic properties. Morphological correlates can be obtained by imaging the neuroanatomical expression of channelrhodopsin expressing fibers using confocal microscopy of the live slice or post-fixed tissue. These methods enable functional investigations of forebrain circuits that expand upon more conventional approaches.

We describe a method for characterizing the functional topography and synaptic properties of forebrain circuits using an optogenetic approach to photostimulate neuronal populations&#160;in vitro.

The sensory forebrain is composed of intricately connected cell types, of which functional properties have yet to be fully elucidated. Understanding the ...

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

Aggressive behavior in Drosophila melanogaster is composed of the sequential expression of stereotypical behavioral patterns (for analysis see 1). This complex behavior is influenced by genetic, hormonal and environmental factors. As in many organisms, previous fighting experience influences the fighting strategy of flies and the outcome of later contests: losing a fight increases the probability of losing later contests, revealing &#34;loser&#34; effects that likely involve learning and memory 2-4. The learning and memory that accompanies expression of complex social behaviors like aggression, is sensitive to pre-test handling of animals 5,6. Many experimental procedures are used in different laboratories to study aggression 7-9, however, no routinely used protocol that excludes handling of flies is currently available. Here, we report a new behavioral apparatus that eliminates handling of flies, using instead their innate negative geotactic responses to move animals into or out of fighting chambers. In this protocol, small circular fight arenas containing a food cup are divided into two equal halves by a removable plastic slider prior to introduction of flies. Flies enter chambers from their home isolation vials via sliding chamber doors and geotaxis. Upon removal of plastic sliders, flies are free to interact. After specified time periods, flies are separated again by sliders for subsequent experimentation. All of this is done easily without handling of individual flies. This apparatus offers a novel approach to study aggression and the associated learning and memory, including the formation of &#34;loser&#34; effects in fly fights. In addition, this new general-purpose behavioral apparatus can be employed to study other social behaviors of flies and should, in general, be of interest for investigating experience-related changes in fundamental behavioral processes.

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the &quot;Loser&quot; Effect in Drosophila melanogaster

During fruit fly fights, the behavioral patterns observed, fight dynamics, and associated learning and memory are influenced by experimental conditions. The protocol presented here describes a novel procedure that entirely eliminates handling of flies during experiments. This improves fight dynamics and allows formation of strong &#34;loser&#34; effects.

침략 유학을위한 처리 제거하는 새로운 접근하고 &quot;낙오자&quot;효과<em&gt; 초파리</em

Aggressive behavior in Drosophila melanogaster is composed of the sequential expression of stereotypical behavioral patterns (for analysis see 1). This ...

Optical Control of a Neuronal Protein Using a Genetically Encoded Unnatural Amino Acid in Neurons

Photostimulation is a noninvasive way to control biological events with excellent spatial and temporal resolution. New methods are desired to photo-regulate endogenous proteins expressed in their native environment. Here, we present an approach to optically control the function of a neuronal protein directly in neurons using a genetically encoded unnatural amino acid (Uaa). By using an orthogonal tRNA/aminoacyl-tRNA synthetase pair to suppress the amber codon, a photo-reactive Uaa 4,5-dimethoxy-2-nitrobenzyl-cysteine (Cmn) is site-specifically incorporated in the pore of a neuronal protein Kir2.1, an inwardly rectifying potassium channel. The bulky Cmn physically blocks the channel pore, rendering Kir2.1 non-conducting. Light illumination instantaneously converts Cmn into a smaller natural amino acid Cys, activating Kir2.1 channel function. We express these photo-inducible inwardly rectifying potassium (PIRK) channels in rat hippocampal primary neurons, and demonstrate that light-activation of PIRK ceases the neuronal firing due to the outflux of K+ current through the activated Kir2.1 channels. Using in utero electroporation, we also express PIRK in the embryonic mouse neocortex in vivo, showing the light-activation of PIRK in neocortical neurons. Genetically encoding Uaa imposes no restrictions on target protein type or cellular location, and a family of photoreactive Uaas is available for modulating different natural amino acid residues. This technique thus has the potential to be generally applied to many neuronal proteins to achieve optical regulation of different processes in brains. The current protocol presents an accessible procedure for intricate Uaa incorporation in neurons in vitro and in vivo to achieve photo control of neuronal protein activity on the molecular level.

Here, a procedure to selectively activate a neuronal protein with a short pulse of light by genetically encoding a photo-reactive unnatural amino acid into a target neuronal protein expressed in neurons in culture or in vivo is presented.

뉴런의 유전자 인코딩 된 부 자연스러운 아미노산을 사용하여 신경 세포 단백질의 광 제어

Photostimulation is a noninvasive way to control biological events with excellent spatial and temporal resolution. New methods are desired to ...

Stripe Assay to Study the Attractive or Repulsive Activity of a Protein Substrate Using Dissociated Hippocampal Neurons

Growing axons develop a highly motile structure at their tip, termed the growth cone. The growth cone contacts extracellular environmental cues to navigate axonal growth. Netrin, slit, semaphorin, and ephrins are known guidance molecules that can attract or repel axons upon binding to receptors and co-receptors on the axon. The activated receptors initiate various signaling molecules in the growth cone that alter the structure and movement of the neuron. Here, we describe the detailed protocol for a stripe assay to assess the ability of a guidance molecule to attract or repel neurons. In this method, dissociated hippocampal neurons from E15.5 mice are cultured on laminin-coated dishes processed with alternating stripes of ectodomain of fibronectin and leucine-rich transmembrane protein-2 (FLRT2) and control immunoglobulin G (IgG) fragment crystallizable region (Fc) protein. Both axons and cell bodies were strongly repelled from the FLRT2-coated stripe regions after 24 h of culture. Immunostaining with tau1 showed that ~90% of the neurons were distributed on the Fc-coated stripes compared to the FLRT2-Fc-coated stripes (~10%). This result indicates that FLRT2 has a strong repulsive effect on these neurons. This powerful method is applicable not only for primary cultured neurons but also for a variety of other cells, such as neuroblasts.

Axon guidance molecules regulate neuronal migration and targeted growth-cone navigation. We present a powerful method, the stripe assay, to assess the ability of guidance molecules to attract or repulse neurons. In this protocol, we demonstrate the stripe assay by showing FLRT2's ability to repel cultured hippocampal neurons.

스트라이프 분석은 해리 해마 신경 세포를 사용하여 단백질 기판의 매력적인 또는 혐오감 활동을 연구하는

Growing axons develop a highly motile structure at their tip, termed the growth cone. The growth cone contacts extracellular environmental cues to ...

A Novel Behavioral Assay to Investigate Gustatory Responses of Individual, Freely-moving Bumble Bees (Bombus terrestris)

Generalist pollinators like the buff-tailed bumble bee, Bombus terrestris, encounter both nutrients and toxins in the floral nectar they collect from flowering plants. Only a few studies have described the gustatory responses of bees toward toxins in food, and these experiments have mainly used the proboscis extension response on restrained honey bees. Here, a new behavioral assay is presented for measuring the feeding responses of freely-moving, individual worker bumble bees to nutrients and toxins. This assay measures the amount of solution ingested by each bumble bee and identifies how tastants in food influence the microstructure of the feeding behavior.
The solutions are presented in a microcapillary tube to individual bumble bees that have been previously starved for 2-4 hr. The behavior is captured on digital video. The fine structure of the feeding behavior is analyzed by continuously scoring the position of the proboscis (mouthparts) from video recordings using event logging software. The position of the proboscis is defined by three different behavioral categories: (1) proboscis is extended and in contact with the solution, (2) proboscis is extended but not in contact with the solution and (3) proboscis is stowed under the head. Furthermore the speed of the proboscis retracting away from the solution is also estimated.
In the present assay the volume of solution consumed, the number of feeding bouts, the duration of the feeding bouts and the speed of the proboscis retraction after the first contact is used to evaluate the phagostimulatory or the deterrent activity of the compounds tested.
This new taste assay will allow researchers to measure how compounds found in nectar influence the feeding behavior of bees and will also be useful to pollination biologists, toxicologists and neuroethologists studying the bumble bee&#39;s taste system.

A Novel Behavioral Assay to Investigate Gustatory Responses of Individual, Freely-moving Bumble Bees Bombus terrestris

A novel behavioral assay is described for investigating the short term gustatory responses of the mouthparts of freely-moving bumble bees (Bombus terrestris) toward nutrients and toxins in solution.

소설 행동 분석은 (엉망으로 꿀벌을 자유롭게 이동 개인의 미각 응답을 조사하기<em&gt; 뒤의 terrestris</em&gt;)

Generalist pollinators like the buff-tailed bumble bee, Bombus terrestris, encounter both nutrients and toxins in the floral nectar they collect from ...