The Satchi-Fainaro research laboratory is partially supported by The Association for International Cancer Research (AICR), German-Israel Foundation (GIF), THE ISRAEL SCIENCE FOUNDATION (Grant No. 1309/10), Swiss Bridge Award, and by grants from the Israeli National Nanotechnology Initiative (INNI), Focal Technology Area (FTA) program: Nanomedicine for Personalized Theranostics, and by The Leona M. and Harry B. Helmsley Nanotechnology Research Fund.

참고 : 모든 동물 절차 승인 및 의료 기관 동물 관리 및 사용위원회의 텔 아비브 대학 Sackler하십시오 학교 (IACUC)의 표준을 준수 하였다. 1. 조정 배지 준비 <ol><li> 의 체적 10cm 배양 플레이트에 씨앗 2 × 106 U-87 MG 세포를 8 ml의 둘 베코 변형 된 이글 배지, 10 % 소 태아 혈청 (FBS) 및 1 % pencillin / 스트렙토 마이신 / 니 스타틴 용액 보충 (DMEM). </li><li> 37 세포를 품어 C를 °; 48 시간에서 완전 포화 상태를 달성 할 때까지 5 % CO 2. </li><li> 10 ㎖ 주사기를 사용하여, 15 ㎖의 튜브에 0.45 ㎛의 필터를 통해 모든 플레이트로부터 배지를 회수하고 필터링. </li><li> 세포 플레이트를 세척하지 않고, 1 ml의 트립신 용액 (0.25 %)를 첨가하고, 배양한다. </li><li> 모든 세포가 분리되는 경우, 10 % FBS가 보충 된 최소 5 ㎖의 DMEM을 사용하여 트립신을 불 활성화하고 세포 수 프리폼. </li><li<html> &gt; 또는 다른 혈구 세포 계산 장치를 이용하여 세포의 수를 계산하고 사용 계산 방법에 따라 세포의 수를 계산한다. 주 : CM 농도를 정상화하기 위해 나중에 사용됩니다. </li><li> 유리 둥근 바닥 플라스크에 CM을 전송하고 높은 진공 회전 증발기하에 농축. 원하는 경우, 프로세스를 가속화하기 위해, 37 ° C로 욕 온도를 증가시킨다. CM가 붙여 넣기 같은 질감을 달성 할 때까지 계속합니다. </li><li> 400 μL 식염수의 각 문화 판에서 CM을 재현 탁. 하나 이상의 플레이트를 사용하는 경우, 동등한 볼륨을 사용한다. 예를 들어, 2 배양 플레이트를 들어, 800 μl를 사용합니다. 4 마우스 각 플레이트를 사용합니다. </li><li> 다른 세포주 또는 치료를 비교하기 위하여, 단계 160에서 수신 된 셀의 비율에 따라 볼륨을 조정한다. 한 플레이트는 1.5 이상의 셀을 포함하는 경우, 예를 들어, 기존에 400 μL의 생리 식염수 200 μl를 추가. 이 조정 된 CM됩니다 </li></ol>마우스로 제목 &quot;&gt; 2. ECM-모방 젤 플러그 접종 <ol><li> 마우스로 ECM-모방 젤을 접종하기 전에 다음 자료를 준비 : <ol><li> 성장 요인은 (얼음에 4 ° C에서, 실험 전에 하루 밤새 해동) 페놀없는 ECM-모방 젤을 감소시켰다. </li><li> 전기 면도기. </li><li> 쥐를 마취하기 위해 케타민과 자일 라진 (xylazine). </li><li> 얼음처럼 차가운 1,000 μL 멸균 팁. </li><li> 얼음처럼 차가운 1 ML의 주사기와 27 G 바늘. </li></ol></li><li> 각 마우스 CM 조정 80 μl를 포함하는 1.5 에펜 도르프 튜브를 준비하고 얼음에 보관하십시오. </li><li> 각각의 튜브에 600 ㎕의 얼음처럼 차가운 성장 요인을 얼음에, 4 ° C에서 하룻밤 해동 된 감소 페놀없는 ECM-모방 젤을 추가합니다. ECM-모방 젤은 4 ° C에서 액체와 신체 온도에서 응고; 고화 ECM-모방 겔을 방지하기 위해, 빙냉 1000 μL 팁을 사용한다. 조심스럽게 거품을 형성하지 않고 튜브를 혼합하고 얼음에 보관하십시오. </li><li> 육주 된 B를 마취케타민 (100 ㎎ / ㎏)과 자일 라진 (12 ㎎ / ㎏)를 사용하여 ALB / c 마우스. 이전에 실험을 시작하기 제도적 동물 관리 및 사용위원회, 즉에 따라 적절한 마취를 확인합니다. 더 이상 회사 발가락 핀치에 응답하지 않을 때 동물은 마취 자신의 적절한면에 도달했습니다. </li><li> 쥐의 복부를 면도하고 수술 스크럽 / 알코올을 사용하여 소독. </li><li> 에펜 도르프 튜브 피하의 내용을 주입하는 추운 1 ML의 주사기와 27 G 바늘을 사용합니다. 기포 형성을 방지하기 위해 매우 천천히 주입을 수행한다. 모든 볼륨이 투여되면 응고가 발생할 때까지, 몇 분 동안 바늘을 배출하지 않습니다. </li></ol> 초음파를 사용하여 3. 평가 ECM-모방 젤 플러그 혈관 신생 주 : 프로토콜의이 부분은 초음파 촬상 시스템, 또는인가 기술자의 도움을 동작시키는 사전 지식을 필요로한다. <ol><li> 시작하기 전에, F를 가질용 재료 및기구 준비를 따르게 : <ol><li> 전기 면도기. </li><li> 탈모 크림. </li><li> 쥐를 마취하기 위해 케타민과 자일 라진 (xylazine). </li><li> 마이크로 버블 비 대상. </li><li> 정품 인증 장치. </li><li> 55 메가 헤르츠 (708) 프로브와 3D 취득 미세 조작기을 포함하여 미국 이미징 시스템. </li></ol></li><li> 플러그 접종 후 삼주 내 혈관을 측정한다 : 주 : U-87 MG 계 동물 모델에서 3 주에 대한 이상적인 촬상 시각을 나타내는 것으로 밝혀졌다. 다른 설정에서 플러그 접종 다음 몇 일부터 혈관 반응 속도를 보정. <ol><li> 케타민 (100 ㎎ / kg)과 자일 라진 (/ kg 12 mg)을 사용하여 마우스를 마취. 이전에 실험을 시작하기 제도적 동물 관리 및 사용위원회, 즉에 따라 적절한 마취를 확인합니다. 더 이상 회사 발가락 핀치에 응답하지 않을 때 동물은 마취 자신의 적절한면에 도달했습니다. </li><li> 면도쥐의 복부 및 제모 크림을 취급합니다. </li><li> 마이크로 매니퓰레이터의 무대에 드러 쥐를 수정합니다. </li><li> 1ml의 주사기 함유 식염수 30 G 바늘을 사용하여 꼬리 정맥 내부에 바늘을 배치 단단히 고정시키고 바늘을 주사기를 풀고. </li><li> 대비 3D 모드 이미지 수집 세션에 설정합니다 <ol><li> 눌러 &quot;3D&quot;는 3D 모터 스테이지를 초기화하고, 원하는 스캔 영역의 중간에 트랜스 듀서를 배치한다. </li><li> 보도는 &quot;3D&quot;를 입력 스캔 거리 단계 크기는 다음 &quot;검색&quot;을 누릅니다. </li><li> 전체 플러그가 표시되는 3D 이미지 데이터 검색되는 있는지 확인합니다. 그렇지 않으면 전체 플러그가 스캔 단계를 반복 3.5.2에서 볼 수 있도록, 트랜스 듀서를 조정합니다. </li><li> 보도는 &quot;대비&quot;및 시간 이득 보상을 밀어 (TGC) 이미지를 어둡게 왼쪽으로 제어합니다. </li></ol></li><li> DESI이다 바이알 혼합기를 사용하여 미세 기포를 활성화45 초 미세 기포의 활성화를 위해 gnated. </li><li> 1ml의 50 μL 식염수로 미세 기포 50 μl를 주사기에 섞는다. </li><li> 활성화 된 미세 기포가 들어있는 주사기와 염분 함유 느슨해 주사기를 교체합니다. 3D 취득 모터를 사용하여, 정상 상태에 도달 한 후, 플러그의 3D 조영 증강 시네 루프를 취득 방울이 몇 초 후에 마우스의 꼬리 정맥 내로 희석 미세 기포 주입한다 : <ol><li> 보도는 &quot;3D&quot;와 3D 조영 증강 이미지를 수집 한 다음 이미지 데이터를 저장하기 위해 &quot;시네 저장&quot;을 눌러 &quot;스캔&quot;을 선택합니다. </li><li> 보도는 &quot;3D&quot;를 클릭하여 미세 기포를 소멸하는 &quot;3D를 파괴&quot;. </li><li> 보도는 &quot;3D는&quot;다시하고, 이후 파괴 시네 루프를 취득 &quot;시네 스토어&quot;를 눌러 &quot;스캔&quot;을 선택합니다. </li></ol></li><li> 이미지 프레임이 프리 - 오버레이 및 미세 기포의 사후 파괴를 생성합니다 : <ol><li> 에서 &amp;# 8220; 참조 설정 &quot;참조 만들기&quot;화면의 왼쪽에 클릭 &quot;. </li><li> 보도는 &quot;연구 관리는&quot;인수 사전 파괴 시네 루프를 엽니 다. </li><li> 다음 &quot;3D에로드&quot;를 클릭, 녹색 대비 오버레이를 생성하는 &quot;프로세스 시네&quot;를 클릭합니다. </li></ol></li><li> 플러그 내의 혈액량에 대한 3D 이미지 생성을 정량화하기 위해 US 이미징 소프트웨어를 사용하여 <ol><li> 보도는 &quot;스캔 / 일시 정지&quot;다음 &quot;모드 설정&quot;을 누릅니다. </li><li> &quot;볼륨&quot;을 클릭하고 &quot;병렬&quot;를 선택합니다. </li><li> 윤곽의 시리즈를 분할하여 대상 조직의 3D 볼륨을 만듭니다. </li><li> 분할을 완료하기 위해 &quot;마침&quot;을 클릭합니다. 주 : 조영제의 부피가 화면의 하부 좌측에 표시 될 것이다. </li></ol></li><li> 절차의 끝에서, 거리에서 따뜻하고, 깨끗하고, 건조, 조용한 환경에서 마우스를 배치다른 동물. 설치류에서 12~14인치 거리에 위치 시판 수술 가열 패드 또는 백열 램프 (50~75w)를 사용하여 따뜻함을 제공합니다. 직립 자세를 유지하고 일반적으로 걷는 때까지 계속 마우스를 모니터링합니다. </li></ol></li></ol> 다발, 공 초점 Endomicroscopy를 사용하여 4. 평가 ECM-모방 젤 플러그 혈관 형태학 주 : 프로토콜의이 부분은 바로 다음 US 이미징을 수행하며 다발 촛점 endomicroscopy 촬상 시스템, 또는인가 기술자의 도움을 동작시키는 사전 지식을 필요로한다. <ol><li> 시작하기 전에 다음과 같은 물질 및 악기 준비가 : <ol><li> 집게, 가위 및 흡수 바느질 스레드 같은 수술 도구. </li><li> FITC 접합 된 덱스 트란 (70 KDa의). </li><li> 교정 용액 (세 각 튜브 함유 과산화수소, 물 또는 형광 용액). </li><li> 촬상 시스템 및제조 업체에 따라 혈관의 영상에 적합한 프로브. </li></ol></li><li> 케타민 (100 ㎎ / kg)과 자일 라진 (/ kg 12 mg)을 사용하여 마우스를 마취. </li><li> , 꼬리 정맥을 통해 10 ㎎ / ㎖의 FITC 표지 된 덱스 트란의 200 μl를 관리 IV. </li><li> 수술 스크럽 / 알코올을 사용하여 복부를 소독하고, 플러그에서 약 1cm을 작은 절개를 적용합니다. </li><li> 그대로 플러그를 유지하면서 부드럽게 플러그의 상단에있는 endomicroscopy 프로브를 놓습니다. </li><li> 취득 : <ol><li> 프로브가 플러그에 설정되면, Enter 키를 눌러 발 페달을 사용하여 &quot;레이저를 시작합니다&quot;. 형광 화면에 표시해야한다. </li><li> 화면에 &#39;기록&#39;을 누르거나 풋 페달을 사용하여 &#39;선택&#39;에 의해 (30 초까지) 짧은 동영상을 획득. </li><li> 영화 사이, 튜브 포함 된 물에 팁을 배치하여 프로브를 세척한다. </li><li> 완료되면, 프로브를 제거하고면 팁 팁을 청소합니다. </li></ol></li><li> 평균 VE를 분석하려면SSEL 직경 : <ol><li> 선박 탐지 모듈 창을 열려면 상단 패널에서 &quot;미세 혈관 감지&quot;아이콘을 클릭합니다. </li><li> &quot;환경 설정&quot;을 클릭하고 &quot;관심의 통계&quot;및 &quot;디스플레이 모드&quot;에서 &quot;디스플레이 히스토그램 바&quot;에서 &quot;혈관 직경을 의미&quot;표시합니다. </li><li> 클릭 선택한 측정을 표시 할 &quot;감지&quot;. </li></ol></li><li> 혈관에 인접한 영역에서 형광 신호 강도를 분석하기 : <ol><li> 왼쪽 패널에서 &quot;원 ROI 만들기&quot;를 클릭하고 관심의 영역에서 원을 만듭니다. </li><li> 이 지역에 관련된 값을 계산하기 위해 &quot;투자 수익 (ROI) 내에서 계산 히스토그램&quot;를 클릭합니다. </li></ol></li></ol> 마우스 5. 시술 후 치료 <ol><li> 각각의 이미지를 만드는 절차의 끝에서 멀리 다른 동물에서 따뜻하고, 깨끗하고, 건조, 조용한 환경에서 마우스를 놓습니다. 시중를 사용하여 따뜻함을 제공로만 제공 외과 가열 패드 또는 백열 램프 (50 ~ 75 W)는 설치류에서 멀리에서 12 ~ 14를 배치했다. 직립 자세를 유지하고 일반적으로 걷는 때까지 계속 마우스를 모니터링합니다. </li><li> 추가 시점에서 플러그 &#39;혈관의 추가 분석을 위해, 다음의 복구 조건을 적용 <ol><li> 흡수성 봉합사를 사용하여 작은 절개 봉합. </li><li> 피하 같은 부 프레 노르 핀 (1 ㎎ / ㎏)와 같은 마우스 진통제를주고, 개별 케이지로 돌아갑니다. </li><li> 더 진통제 치료가 필요하고 있는지 확인하기 위해 모든 동물을 준수 모니터링하고 고통에 대해 평가하기 위해 매일 다시 평가합니다. </li></ol></li><li> 실험 종료 시점에서 경추 탈구이어서 제 도포함으로써 마우스를 이소 플루 란, 안락사. </li><li> 추가 영상이 초기 이미징 단계 다음 주에 수행 될 경우, 모든 절차는 가능한 멸균 보관해야합니다. 수술 피부 스크럽을 수행해야 멸균 WA터와 소독면 팁 endomicroscopy 프로브를 청소하는 데 사용되어야하고, 프로브는 멸균 수를 사용하여 각 동물 소독한다. </li></ol>

<ol>
	<li>Kibbey, M. C., Grant, D. S., Kleinman, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+SIKVAV+site+of+laminin+in+promotion+of+angiogenesis+and+tumor+growth:+an+in+vivo+Matrigel+model.">Role of the SIKVAV site of laminin in promotion of angiogenesis and tumor growth: an in vivo Matrigel model.</a> J Natl Cancer Inst. 84, 1633-1638 (1992).</li><li>Passaniti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple,+quantitative+method+for+assessing+angiogenesis+and+antiangiogenic+agents+using+reconstituted+basement+membrane,+heparin,+and+fibroblast+growth+factor.">A simple, quantitative method for assessing angiogenesis and antiangiogenic agents using reconstituted basement membrane, heparin, and fibroblast growth factor.</a> Lab Invest. 67, 519-528 (1992).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+models+of+angiogenesis.">In vivo models of angiogenesis.</a> J Cell Mol Med. 10, 588-612 (2006).</li><li>Auerbach, R., Lewis, R., Shinners, B., Kubai, L., Akhtar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+assays:+a+critical+overview.">Angiogenesis assays: a critical overview.</a> Clin Chem. 49, 32-40 (2003).</li><li>Johns, A., Freay, A. 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The authors have nothing to disclose.

상보 촬상 방법을 결합하여 다른 혈관 형성 구성 요소의 미세 혈관의 밀도 및 형태의 기능에 관한 정보의 취득을 허용한다. ECM-모방 겔 플러그에로드 CM은 플러그로 모집 extravasate되어 내피 세포, 같은 다른 세포 집단에서 분리 된 종양 미세 환경을 생성합니다. 병렬로 수행함으로써, 조영 증강 US 이미징 및 다발 촛점 endomicroscopy 이미징 마이크로 버블, 우리는 암세포 자체없이...

마트 리겔 플러그 어 세이는 혈관 신생 제 Kibbey 등에 의해 설명되었다.이 펩타이드 SIKVAV (SER-일드리스 Val으로부터의 Ala-val) 인 (1)에 의해 혈관 신생 자극을 평가하는 데 사용 된 1992 년. 다른 생체 내 혈관 신생 어 세이는 대조적으로, 마우스 각막 신생 병아리 또는 융모 막 세이 원한다면, 상기 분석을 수행이 비교적 용이하다. 주입 ECM-모방 겔 세포 친 혈관 또는 항 혈관 신생 화합물 및 / 또는 요소를 포함 할 수있다. 항 - 혈관 신생 화합물의 활성을 평가할 때, 플러그가 정상적으로 혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 및 섬유 아세포 성장 인자 (FGF)의 혼합물을 포함하고, 항 - 혈관 신생 물질 직접 플러그 또는 전신적으로 (3)에 투여 될 수있다, 4. 이 분 이내에 굳은 곳 ECM-모방 젤 피하 주입된다. 그 결과 플러그의 혈관 모집의 평가 typicall입니다Y 형광 염료의 주입 (FITC) 다음 형광 신호의 측정에 의해, 플러그 내에서 헤모글로빈 농도를 측정함으로써 수행이 내피 특이 마커 조직학 섹션의 면역 염색에 의해 또는 정렬 ​​형광 - 활성화 된 세포 (FACS) 2,5-하여, 덱스 트란 - 표지 6. 그러나,이 평가는 단지 종점 분석이 가능하고 혈관의 기능 및 형태에 대한 정보가 부족하다. 혈액 콘텐츠 혈관의 크기와 혈액의 정체 풀의 정도에 의해 영향을 받기 때문에 또한 혈장 부피의 측정 중 헤모글로빈 수치 또는 지표로서 덱스 트란-FITC를 사용함으로써, 잘못 될 수있다. 모집 혈관 투과성을 향상 및 보존 (EPR) 효과 (7)을 특징으로하는 경우에 특히 중요하다. 우리는 본원에서 두 개의 상보적인 이미징을 조합하여 채용 혈관의 시각화를위한 새롭고보다 정확한 방법을 제안한다. HIG혈관 밀도에 대한뿐만 아니라, 자신의 형태와 기능에뿐만 아니라 정보를 제공 할 수있는 생체 내에 섬유질의-공 초점 endomicroscopy과 함께 시간 해상도 미세 기포 조영 증강 초음파 (US). 또한,이 분석함으로써 혈관 형성의 동력학 모니터링을 가능하게 여러 시간 지점에서 수행 될 수있다. US는 혈관 구획 8-11에서만 남아 미세 기포 정맥 내 (IV) 주입 다음 혈관 조영 높은 공간 분해능을 가지고 폭넓게 사용되는 영상 기법이다. 마이크로 버블은 미국 펄스 흥분 때문에 좋은 조영제 역할을 할 때 강한 에코 신호를 생성 가스 충전 마이크로 버블 수 있습니다. 플러그의 3D 영상은 마이크로 버블 파괴 다음 US 이미징 시스템 소프트웨어를 사용하여 획득된다. 결과 이미지는 마이크로 버블의 사전 및 사후 파괴의 이미지 프레임에서 구성 및 색상의 비디오 강도의 차이를 반영합니다. 이러한 오버레이이미지는 소프트웨어에 의해 자동으로 표시됩니다. 따라서, 플러그 내에서 혈관의 기능적 %가 정량화 될 수있다. 공 초점 endomicroscopy 다발, 고해상도 혈관의 형태에보고함으로써 상호 보완적인 영상 기법의 역할을한다. 이 최소 침습적 방법, 이미지는 FITC 접합 된 덱스 트란 (12)의 정맥 투여 후 취득. 중합체 형광 염료 및 혈류에 따라서 혈관의 형태 및 혈류 &#39;조영제&#39;로서 기능한다. 주입 된 중합체의 70 KDa의 크기이기 때문에, 종양 혈관 검색된 더욱이, 그것은 단지 새는 혈관을 통과 할 수있다. 이것은 혈관 외부 FITC 표지 된 덱스 트란의 높은 배경 초래할 것이다. 따라서, 다발, 촛점 endomicroscopy은 평활 말단으로, 종양 내 neovasculature- 확대 누설 고도로 얽힌 혈관 EPR 효과의 전형적인 특성을 시각화 할 수있다. 이 시스템 모델은 descri했다U-87 MG 인간 아교 모세포종과 휴면 클론 (13)의 혈관 전위의 비교 침대. 플러그 내에서 혈관 신생은 3 주 ECM-모방 젤 접종을 게시 평가 하였다. 그것은 보였다 그에서 CM을 포함하는 플러그 내의 혈관 U-87 MG 휴면 종양 생성 세포에서 CM을 포함하는 플러그 내에서 혈관과 비교했을 때 종양 생성 세포가 크게 수, 밀도 및 기능면에서 증가 하였다 빠르게 성장. 따라서 저자는 CM이 분리한다는 결론을 내릴 수 있었다 U-87 MG 빠르게 성장하는 종양 세포 생성하는 휴면 종양 생성 세포에서 CM에 비해 프로 혈관 신생 인자의 높은 수준을 포함​​하고 있습니다. 이러한 요소 (최종적 내피 세포의 관 구조의 형성, 즉, 증식, 발아, 영동) 양 혈관 신생 캐스케이드의 모든 단계에 영향을 미치는 작용하여 혈관 형성을 자극한다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="864">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td dir="LTR" height="40" style="height:40px;width:255px;">Name of the Material/Equipment</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">Company</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">Catalog number</td>
			<td dir="LTR" style="width:251px;">Comments/Description&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td dir="LTR" height="40" style="height:40px;width:255px;">Rotary Vacuum Evaporator</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">-</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">-</td>
			<td style="width:251px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td dir="LTR" height="40" style="height:40px;width:255px;">Growth-factors reduced phenol-free Matrigel</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">BD Bioscience</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">FAL356231</td>
			<td style="width:251px;">Thaw overnight, at 40C on ice&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td dir="LTR" height="40" style="height:40px;width:255px;">Depilatory cream&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">-</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">-</td>
			<td dir="LTR" style="width:251px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td dir="LTR" height="40" style="height:40px;width:255px;">Vevo2100 US imaging system</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">VisualSonics Inc.&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">-</td>
			<td dir="LTR" style="width:251px;">Requires previous knowledge in operating or the assistance of an authorized technician</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td dir="LTR" height="40" style="height:40px;width:255px;">55 MHz 708 probe</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">VisualSonics Inc.</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">-</td>
			<td dir="LTR" style="width:251px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td dir="LTR" height="40" style="height:40px;width:255px;">Vevo2100 imaging software</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">VisualSonics Inc.</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">-</td>
			<td dir="LTR" style="width:251px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td dir="LTR" height="40" style="height:40px;width:255px;">VialMix&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">DEFINITY Imaging</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">VMIX</td>
			<td dir="LTR" style="width:251px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td dir="LTR" height="40" style="height:40px;width:255px;">DEFINITY microbubbles</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">DEFINITY Imaging</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">DE4</td>
			<td dir="LTR" style="width:251px;">Activate for 45 seconds using Vialmix before use</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:255px;">CellVizio (Fibered confocal endomicroscope)</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">Mauna Kea Technologies</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">-</td>
			<td dir="LTR" style="width:251px;">Requires previous knowledge in operating or the assistance of an authorized technician</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td dir="LTR" height="40" style="height:40px;width:255px;">ProFlex MiniO/30 probe</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">Mauna Kea Technologies</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">-</td>
			<td dir="LTR" style="width:251px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td dir="LTR" height="40" style="height:40px;width:255px;">70 kD FITC-labeled Dextran</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">46945</td>
			<td dir="LTR" style="width:251px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td dir="LTR" height="40" style="height:40px;width:255px;">ImageCell software</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">Mauna Kea Technologies</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">-</td>
			<td dir="LTR" style="width:251px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td dir="LTR" height="40" style="height:40px;width:255px;">Calibration Kit</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">Mauna Kea Technologies</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">-</td>
			<td dir="LTR" style="width:251px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td align="left" height="40" style="height:40px;">Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td align="left">Gibco Life Tecchnologies</td>
			<td dir="LTR" style="width:179px;">41965-039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td align="left" height="37" style="height:37px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td align="left">Biological Industries&#160;</td>
			<td align="left">04-007-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td align="left" height="39" style="height:39px;">Penicillin-Streptomycin-Nystatin Solution</td>
			<td align="left">Biological Industries&#160;</td>
			<td align="left">03-032-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring functionality and morphology of vasculature recruited by factors secreted by fast-growing tumor-generating cells

마우스의 피하 마트 리겔 플러그 어 세이는 프로 및 항 - 혈관 신생 인자의 생체 내 평가를위한 선택 방법이다. 이 방법에서는, 원하는 인자, 피하 주사 후 암 환경을 흉내 낸 환경을 형성하도록 응고 초기 액체 ECM-모방 겔에 도입된다. 이 행렬은 내피 세포 및 혈관의 따라서 형성과 같은 숙주 세포의 침투를 허용한다. 여기서 우리는 특정 인자 (예를 들면, VEGF 및 bFGF에) 또는 에이전트는 대조적으로, 암 세포에 의해 분비 인자 풀의 혈관 신생 가능성을 설명하기 위해 이용 될 수있는 새로운 변형 마트 리겔 플러그 어 세이를 제안한다. ECM-모방 젤을 포함하는 플러그 - 빠르게 성장하는 종양 발생 아교 모세포종 세포의 CM에 분비 요인의 풀과 호스트 (즉, 마우스)를 소개하기 위해 사용된다. 우리는 이전의 혈관 전위의 광범위한 비교를 설명했다U-87 MG 부모의 세포에서 유도 된 혈관 신생을 보여주는 U-87 MG 인간 아교 모세포종이 시스템 모델에서의 휴면 유래 복제,,. CM은 48 시간 배양 한 다음 세포주 어느 합쳐진 조직 배양 플레이트로부터 수집 된 매체를 필터링함으로써 제조된다. 그러므로, 세포 자체가없는 세포에 의해 분비되는 유일한 요소가 포함되어 있습니다. 두 영상 방식의 조합이 여기에 설명 된, 플러그 내에서 새로 형성된 혈관의 정확한 실시간 범위, 형태의 특성과 기능을, 조영 증강 초음파 영상 및 생체 내에 다발 - 공 초점 endomicroscopy을 미세 기포.

빠르게 성장하는 혈관 신생 종양 발생 세포주 U-87 MG, 광범위한 혈관 신생의 결과에서 CM으로 ECM-모방 젤 플러그를 주입하는. 이 맥관 광범위 개의 상보 촬상 방법을 사용하여 탐색 될 수있다. 마이크로 버블의 조영 증강 US 이미징 U-87 MG CM로드 플러그, 휴면 종양 발생 세포에서 CM 함유 플러그 내에 탐지 혈류 달리 (도 1) 내에서 광범위한 혈액 흐름을 도시하여 플러?...

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Monitoring Functionality and Morphology of Vasculature Recruited by Factors Secreted by Fast-growing Tumor-generating Cells

We describe a matrigel plug assay to illustrate angiogenic potential of a pool of factors secreted by cancer cells using two complementary imaging modalities, ultrasound and endomicroscopy. The matrigel, an extracellular matrix (ECM)-mimic gel, is utilized to introduce the host (mouse) with angiogenic factors secreted to the conditioned media (C.M.).&#160;

고속 성장하는 종양 생성 세포에 의해 분비 요인에 의해 보충 모니터링 기능 및 혈관의 형태학

The subcutaneous matrigel plug assay in mice is a method of choice for the in vivo evaluation of pro- and anti-angiogenic factors. In this method, desired ...

monitoring-functionality-morphology-vasculature-recruited-factors

Research

JoVE Journal

Biology

9.7K 조회수.  Tel Aviv University. We describe a matrigel plug assay to illustrate angiogenic potential of a pool of factors secreted by cancer cells using two complementary imaging modalities, ultrasound and endomicroscopy. The matrigel, an extracellular matrix (ECM)-mimic gel, is utilized to introduce the host (mouse) with angiogenic factors secreted to the conditioned media (C.M.). 

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Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both medical applications and as a research 
tool for addressing fundamental questions in development and disease. Here, we provide a 
concise, step-by-step protocol for the derivation of human embryonic stem cells from embryos 
by immunosurgical isolation of the inner cell mass. 


The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both medical applications and as a research 
tool for addressing fundamental questions in development and disease. Here, we provide a 
concise, step-by-step protocol for the derivation of human embryonic stem cells from embryos 
by immunosurgical isolation of the inner cell mass.

Immunosurgery에 의해 인간 배아 줄기 세포의 유도

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

연구

생물학

Monitoring Acupuncture Effects on Human Brain by fMRI

Functional MRI is used to study the effects of acupuncture on the BOLD response and the functional connectivity of the human brain.  Results demonstrate that acupuncture mobilizes a limbic-paralimbic-neocortical network and its anti-correlated sensorimotor/paralimbic network at multiple levels of the brain and that the hemodynamic response is influenced by the psychophysical response.  Physiological monitoring may be performed to explore the peripheral response of the autonomic nerve function. This video describes the studies performed at LI4 (hegu), ST36 (zusanli) and LV3 (taichong), classical acupoints that are commonly used for modulatory and pain-reducing actions. Some issues that require attention in the applications of fMRI to acupuncture investigation are noted.

FMRI and physiological monitoring is used to study the effects of Acupuncture on the central and peripheral nervous systems. Acupuncture mobilizes a limbic-paralimbic-neocortical network, with great overlap with the default mode network, to modulate neurological activity, possibly related to its autonomic effect in the peripheral nervous system.

fMRI로 인간 두뇌에 대한 모니터링 한의원 효과

Functional MRI is used to study the effects of acupuncture on the BOLD response and the functional connectivity of the human brain.  Results demonstrate ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three embryonic germ layers (1). Directed differentiation of hESCs into specific cell types has generated much interest in the field of regenerative medicine (e.g., (2-5)), and methods for determining the in vivo fate of selected or manipulated hESCs are essential to this endeavor. We have adapted a highly efficient teratoma formation assay for this purpose. A small number of specifically selected hESCs is mixed with undifferentiated wild type hESCs and Phaseolus vulgaris lectin to form a cell pellet. This is grafted beneath the kidney capsule in an immunodeficient mouse. As few as 2.5 x 105 hESCs are needed to form a 16 cm3 teratoma within 8-12 weeks. The fate of the originally selected hESCs can then be determined by immunohistochemistry. This method provides a valuable tool for characterizing tissue-specific reagents for cell-based therapy.

Directed differentiation of hESCs into specific cells has generated much interest in regenerative medicine. We provide a concise, step-by-step protocol for determining the in vivo fate of selected hESCs that provides a valuable tool for characterizing tissue-specific reagents for cell-based therapy.

기형 종의 형성에 의해 인간 배아 줄기 세포의 운명 매핑

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...

In vivo Liver Endocytosis Followed by Purification of Liver Cells by Liver Perfusion

The liver is the metabolic center of the mammalian body and serves as a filter for the blood. The basic architecture of the liver is illustrated in figure 1 in which more than 85% of the liver mass is composed of hepatocytes and the remaining 15% of the cellular mass is composed of Kupffer cells (KCs), stellate cells (HSCs), and sinusoidal endothelial cells (SECs). SECs form the blood vessel walls within the liver and contain specialized morphology called fenestrae within in the cytoplasm. Fenestration of the cytoplasm is the appearance of holes (&tilde;100 &mu;m) within the cells so that the SECs act as a sieve in which most chylomicrons, chylomicron remnants and macromolecules, but not cells, pass through to the hepatocytes and HSCs 1 (Fig. 1). Due to the lack of a basement membrane, the gap between the SECs and hepatocytes form the Space of Disse. HSCs occupy this space and play a prominent role in regulation and response to injury, storage of retinoic acid and immunoregulation of the liver 2.
SECs are among the most endocytically active cells of the body displaying an array of scavenger receptors on their cell surface 3. These include SR-A, Stabilin-1 and Stabilin-2. Generally, small colloidal particles less than 230 nm and macromolecules in buffer phase are taken up by SECs, whereas, large particles and cellular debris is endocytosed (phagocytosed) by KCs 4. Thus, the bulk clearance of extracellular material such as the glycosaminoglycans from blood is largely dependent on the health and endocytic functions of SECs 5,6. For example, an increase in blood hyaluronan levels is indicative of liver disease ranging from mild to more severe forms 7.
With the exception of one report 8, there are no immortalized SEC cell lines in existence. Even this immortalized cell line is de-differentiated in that it does not express scavenger receptors that are present on primary SECs (our data, not shown). All cell biological studies must be performed on primary cells obtained freshly from the animal. Unfortunately, SECs dedifferentiate under standard culture conditions and must be used within 1 or 2 days upon isolation from the animal. Differentiation of SECs is marked by the expression of Stabilin-2 or HARE receptor 9 , CD31, and the presence of cytoplasmic fenestration 1. Differentiation of SECs can be extended by the addition of VEGF in culture media or by culturing cells in hepatocyte conditioned medium 10,11.
In this report, we will demonstrate the endocytic activity of SECs in the intact organ using radio-labeled heparin for hyaluronan for the SEC-specific Stabilin-2 receptor. We will then purify hepatocytes and SECs from the perfused liver to measure endocytosis.

In vivo Liver Endocytosis Followed by Purification of Liver Cells by Liver Perfusion

The study of liver sinusoidal endothelial cells (SECs) must be performed with primary cells obtained from the animal as no cell lines exist. This method relies on liver digestion and differential centrifugation for SEC purification for subsequent culturing and experimentation.

간 재관류에 의한 간 세포의 정화를 얹는 생체내 간 Endocytosis에서

The liver is the metabolic center of the mammalian body and serves as a filter for the blood.  The basic architecture of the liver is illustrated in ...

Monitoring Equilibrium Changes in RNA Structure by 'Peroxidative' and 'Oxidative' Hydroxyl Radical Footprinting

RNA molecules play an essential role in biology. In addition to transmitting genetic information, RNA can fold into unique tertiary structures fulfilling a specific biologic role as regulator, binder or catalyst. Information about tertiary contact formation is essential to understand the function of RNA molecules. Hydroxyl radicals (&bull;OH) are unique probes of the structure of nucleic acids due to their high reactivity and small size.1 When used as a footprinting probe, hydroxyl radicals map the solvent accessible surface of the phosphodiester backbone of DNA1 and RNA2 with as fine as single nucleotide resolution. Hydroxyl radical footprinting can be used to identify the nucleotides within an intermolecular contact surface, e.g. in DNA-protein1 and RNA-protein complexes. Equilibrium3 and kinetic4 transitions can be determined by conducting hydroxyl radical footprinting as a function of a solution variable or time, respectively. A key feature of footprinting is that limited exposure to the probe (e.g., 'single-hit kinetics') results in the uniform sampling of each nucleotide of the polymer.5
In this video article, we use the P4-P6 domain of the Tetrahymena ribozyme to illustrate RNA sample preparation and the determination of a Mg(II)-mediated folding isotherms. We describe the use of the well known hydroxyl radical footprinting protocol that requires H2O2 (we call this the 'peroxidative' protocol) and a valuable, but not widely known, alternative that uses naturally dissolved O2 (we call this the 'oxidative' protocol). An overview of the data reduction, transformation and analysis procedures is presented.

Monitoring Equilibrium Changes in RNA Structure by &#039;Peroxidative&#039; and &#039;Oxidative&#039; Hydroxyl Radical Footprinting

This protocol describes how to quantify the Mg(II)-dependent formation of RNA tertiary structure by two methods of hydroxyl radical footprinting.

&#39;Peroxidative&#39;와 &#39;산화&#39;히드록실 급진적 Footprinting에 의해 RNA 구조의 모니터링 평형 변경

RNA molecules play an essential role in biology. In addition to transmitting genetic information, RNA can fold into unique tertiary structures fulfilling ...

Monitoring Kinase and Phosphatase Activities Through the Cell Cycle by Ratiometric FRET

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET)-based reporters1 allow the assessment of endogenous kinase and phosphatase activities in living cells. Such probes typically consist of variants of CFP and YFP, intervened by a phosphorylatable sequence and a phospho-binding domain. Upon phosphorylation, the probe changes conformation, which results in a change of the distance or orientation between CFP and YFP, leading to a change in FRET efficiency (Fig 1). Several probes have been published during the last decade, monitoring the activity balance of multiple kinases and phosphatases, including reporters of PKA2, PKB3, PKC4, PKD5, ERK6, JNK7, Cdk18, Aurora B9 and Plk19. Given the modular design, additional probes are likely to emerge in the near future10. 
Progression through the cell cycle is affected by stress signaling pathways 11. Notably, the cell cycle is regulated differently during unperturbed growth compared to when cells are recovering from stress12.Time-lapse imaging of cells through the cell cycle therefore requires particular caution. This becomes a problem particularly when employing ratiometric imaging, since two images with a high signal to noise ratio are required to correctly interpret the results. Ratiometric FRET imaging of cell cycle dependent changes in kinase and phosphatase activities has predominately been restricted to sub-sections of the cell cycle8,9,13,14.
Here, we discuss a method to monitor FRET-based probes using ratiometric imaging throughout the human cell cycle. The method relies on equipment that is available to many researchers in life sciences and does not require expert knowledge of microscopy or image processing.

FRET-based reporters are increasingly used to monitor kinase and phosphatase activities in live cells. Here we describe a method on how to use FRET-based reporters to assess cell cycle-dependent changes in target phosphorylation.

안달 Ratiometric하여 세포주기를 통해 키나제와 인산 가수 분해 효소 활동을 모니터링

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET)-based reporters1 allow the assessment of endogenous kinase and phosphatase activities in living cells. Such ...

Monitoring Plasmid Replication in Live Mammalian Cells over Multiple Generations by Fluorescence Microscopy

Few naturally-occurring plasmids are maintained in mammalian cells. Among these are genomes of gamma-herpesviruses, including Epstein-Barr virus (EBV) and Kaposi's Sarcoma-associated herpesvirus (KSHV), which cause multiple human malignancies 1-3. These two genomes are replicated in a licensed manner, each using a single viral protein and cellular replication machinery, and are passed to daughter cells during cell division despite their lacking traditional centromeres 4-8.
Much work has been done to characterize the replications of these plasmid genomes using methods such as Southern blotting and fluorescence in situ hybridization (FISH). These methods are limited, though. Quantitative PCR and Southern blots provide information about the average number of plasmids per cell in a population of cells. FISH is a single-cell assay that reveals both the average number and the distribution of plasmids per cell in the population of cells but is static, allowing no information about the parent or progeny of the examined cell.
Here, we describe a method for visualizing plasmids in live cells. This method is based on the binding of a fluorescently tagged lactose repressor protein to multiple sites in the plasmid of interest 9. The DNA of interest is engineered to include approximately 250 tandem repeats of the lactose operator (LacO) sequence. LacO is specifically bound by the lactose repressor protein (LacI), which can be fused to a fluorescent protein. The fusion protein can either be expressed from the engineered plasmid or introduced by a retroviral vector. In this way, the DNA molecules are fluorescently tagged and therefore become visible via fluorescence microscopy. The fusion protein is blocked from binding the plasmid DNA by culturing cells in the presence of IPTG until the plasmids are ready to be viewed.
This system allows the plasmids to be monitored in living cells through several generations, revealing properties of their synthesis and partitioning to daughter cells. Ideal cells are adherent, easily transfected, and have large nuclei. This technique has been used to determine that 84% of EBV-derived plasmids are synthesized each generation and 88% of the newly synthesized plasmids partition faithfully to daughter cells in HeLa cells. Pairs of these EBV plasmids were seen to be tethered to or associated with sister chromatids after their synthesis in S-phase until they were seen to separate as the sister chromatids separated in Anaphase10. The method is currently being used to study replication of KSHV genomes in HeLa cells and SLK cells. HeLa cells are immortalized human epithelial cells, and SLK cells are immortalized human endothelial cells. Though SLK cells were originally derived from a KSHV lesion, neither the HeLa nor SLK cell line naturally harbors KSHV genomes11. In addition to studying viral replication, this visualization technique can be used to investigate the effects of the addition, removal, or mutation of various DNA sequence elements on synthesis, localization, and partitioning of other recombinant plasmid DNAs.

A method of observing individual DNA molecules in live cells is described. The technique is based on the binding of a fluorescently tagged lac repressor protein to binding sites engineered into the DNA of interest. This method can be adapted to follow many recombinant DNAs in live cells over time.

형광 현미경으로 여러 세대 이상 라이브 포유류의 세포에 플라스미드 복제 모니터링

Few naturally-occurring plasmids are maintained in mammalian cells.  Among these are genomes of gamma-herpesviruses, including Epstein-Barr virus  (EBV) ...

In vivo Reprogramming of Adult Somatic Cells to Pluripotency by Overexpression of Yamanaka Factors

Induced pluripotent stem (iPS) cells that result from the reprogramming of somatic cells to a pluripotent state by forced expression of defined factors are offering new opportunities for regenerative medicine. Such clinical applications of iPS cells have been limited so far, mainly due to the poor efficiency of the existing reprogramming methodologies and the risk of the generated iPS cells to form tumors upon implantation.
We hypothesized that the reprogramming of somatic cells towards pluripotency could be achieved in vivo by gene transfer of reprogramming factors. In order to efficiently reprogram cells in vivo, high levels of the Yamanaka (OKSM) transcription factors need to be expressed at the target tissue. This can be achieved by using different viral or nonviral gene vectors depending on the target tissue. In this particular study, hydrodynamic tail-vein (HTV) injection of plasmid DNA was used to deliver the OKSM factors to mouse hepatocytes. This provided proof-of-evidence of in vivo reprogramming of adult, somatic cells towards a pluripotent state with high efficiency and fast kinetics. Furthermore no tumor or teratoma formation was observed in situ.
It can be concluded that reprogramming somatic cells in vivo may offer a potential approach to induce enhanced pluripotency rapidly, efficiently, and safely compared to in vitro performed protocols and can be applied to different tissue types in the future.

In vivo Reprogramming of Adult Somatic Cells to Pluripotency by Overexpression of Yamanaka Factors

This study demonstrates the reprogramming of somatic cells towards pluripotency in vivo without the generation of teratomas. We used hydrodynamic tail vein injection of plasmid DNA encoding the Yamanka factors to induce the in vivo reprogramming of adult hepatocytes into cells of enhanced pluripotency.

야마나카 인자의 과발현에 의해 능성에 성인 체세포 세포의 생체 내 재 프로그램

Induced pluripotent stem (iPS) cells that result from the reprogramming of somatic cells to a pluripotent state by forced expression of defined factors ...

Monitoring Intraspecies Competition in a Bacterial Cell Population by Cocultivation of Fluorescently Labelled Strains

Many microorganisms such as bacteria proliferate extremely fast and the populations may reach high cell densities. Small fractions of cells in a population always have accumulated mutations that are either detrimental or beneficial for the cell. If the fitness effect of a mutation provides the subpopulation with a strong selective growth advantage, the individuals of this subpopulation may rapidly outcompete and even completely eliminate their immediate fellows. Thus, small genetic changes and selection-driven accumulation of cells that have acquired beneficial mutations may lead to a complete shift of the genotype of a cell population. Here we present a procedure to monitor the rapid clonal expansion and elimination of beneficial and detrimental mutations, respectively, in a bacterial cell population over time by cocultivation of fluorescently labeled individuals of the Gram-positive model bacterium Bacillus subtilis. The method is easy to perform and very illustrative to display intraspecies competition among the individuals in a bacterial cell population.

Bacteria may accumulate either detrimental or beneficial mutations during their lifetime. In a population of cells individuals that have accumulated beneficial mutations may rapidly outcompete their fellows. Here we present a simple procedure to visualize intraspecies competition in a bacterial cell population over time using fluorescently labeled individuals.&#160;

형광표균의 세균세포 인구에 대한 종 내 경쟁 모니터링

Many microorganisms such as bacteria proliferate extremely fast and the populations may reach high cell densities. Small fractions of cells in a ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) maintain the turnover of all mature blood cell lineages. The coordination of the complex signals leading to specific HSC fates relies upon the interaction between HSCs and the intricate bone marrow microenvironment, which is still poorly understood[1-2].
We describe how by combining a newly developed specimen holder for stable animal positioning with multi-step confocal and two-photon in vivo imaging techniques, it is possible to obtain high-resolution 3D stacks containing HSPCs and their surrounding niches and to monitor them over time through multi-point time-lapse imaging. High definition imaging allows detecting ex vivo labeled hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) residing within the bone marrow. Moreover, multi-point time-lapse 3D imaging, obtained with faster acquisition settings, provides accurate information about HSPC movement and the reciprocal interactions between HSPCs and stroma cells.
Tracking of HSPCs in relation to GFP positive osteoblastic cells is shown as an exemplary application of this method. This technique can be utilized to track any appropriately labeled hematopoietic or stromal cell of interest within the mouse calvarium bone marrow space.

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

The nature of the interactions between hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) and bone marrow niches is poorly understood. Custom hardware modifications and a multi-step acquisition protocol allow the use of two-photon and confocal microscopy to image ex vivo labeled HSPCs homed within bone marrow areas, tracking interactions and movement.

성인 마우스 두개골 골수에서 조혈 줄기 및 전구 세포의 생체 내 4 차원 추적에서

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...