이미 알려진 돌연변이 식물 모델을 사용하여 엽록소 형광 해석을 이용한 잎 반사도의 동시 측정은 새로운 반사파라미터의 확립을 용이하게 한다. 우리의 방법에 의해 새로운 잎 반사 매개 변수의 건설은 자연 환경 조건하에서 변화하는 식물 행동의 실시간 모니터링을 할 수 있습니다. 실험을 시작하기 전에 이 회로도에 표시된 측정 시스템을 설정합니다.
샘플 스테이지, 광원, PAM 불소계 및 스펙트럼 방사포를 통해. 다음으로 10cm 제곱 강판을 1cm 직경의 구멍으로 맞춤 시료 단계에 부착합니다. 그리고 두 개의 얇은 섬유 프로브를 단단히 맞춥시게 합니다.
프로브를 플라스틱 테이프로 감쌉니다. 그런 다음 홀더를 사용하여 녹화된 프로브를 샘플 스테이지에 잘라냅니다. 프로브를 샘플 단계로 수직으로 배치합니다.
그리고 할로겐 광원에 유리 섬유로 만든 비포크 라이트 가이드를 부착합니다. 그런 다음 양방향에서 약 45도 각도로 샘플 스테이지를 조사합니다. 라이트 소스를 조정하여 그림자를 투사하지 않고 빛이 균일하게 샘플 스테이지를 비춥춥습니다.
좌측 반사및 엽록소 플로레스Cence 분석의 동시 측정을 위해 녹색 셀로판 광이 있는 어두운 방에서 시료 스테이지의 리프 홀더에 시험공장을 배치하고 스테이지의 강판 구멍에 대한 리프를 만집니다. PAM 불소계의 약한 녹색 빛을 끄고 측정 빛으로 잎 샘플을 조사합니다. 플로레시엔스 강도가 약 100을 측정하고 프로브와 잎 사이의 거리를 측정할 수 있도록 조절기를 이동합니다.
어저스터를 제자리에 고정하고 어저스터의 거리 값을 기록합니다. 그런 다음 측정 광을 끄고 테스트 플랜트를 제거합니다. 작동 광 강도 측정의 경우 샘플 잎이 배치되는 위치에 광 정량계를 배치합니다.
그리고 광원 강도를 측정하기 위해 할로겐 광원으로부터 빛을 조사한다. 광원 다이얼의 어느 위치가 초당 제곱미터당 30, 60, 120, 240 및 480 마이크로몰라 양성자를 생성하는지 결정합니다. 잎 샘플의 위치에 백색 판을 반사제로 놓습니다.
그리고 스펙트럼 방사선 계를 켭니다. 스펙트럼 반사도를 350~850나노미터 사이로 조정합니다. 조사 광선이 없기 때문에 현재 스펙트럼 데이터가 없습니다.
할로겐 램프를 켜서 초당 제곱미터당 480 마이크로몰라 광자를 조사합니다. 이 테스트에서 가장 높은 돌이킬 수 있는 강도와 채도를 피하기 위해 방사계의 검출 강도를 조정합니다. 그런 다음 초당 제곱미터당 30, 60, 120, 240 및 480 마이크로 모라 광자를 조명하에 스펙트럼 반사도를 기록합니다.
잎 반사및 엽록소 플로레시전 의 동시 측정을 위해 식물을 같은 온도와 습도로 성장 챔버에서 암실로 옮김합니다. 1 시간 후 잎 샘플 위치에 아라비도시스 식물을 배치합니다. 그리고 리프 표면이 검출 프로브에 수직되도록 샘플 잎을 잎에 고정합니다.
PAM 불소계를 켜고 커브 레코딩을 시작합니다. 이 값을 0이라고 합니다. 측정 광을 켜고 곡선이 응답할 때까지 약 30초 정도 기다립니다.
이 값을 F 0이라고 합니다. PAM에서 0.8초 동안 초당 4, 000 마이크로몰라 광자의 포화 펄스를 전달하고 형광 강도가 증가하여 곡선에서 스파이크의 가장 높은 값을 얻습니다. 이 값을 Fm.Then라고 하며, 수식을 사용하여 어두운 색의 사진 시스템 2의 최대 양자 수율을 계산합니다.
정상 상태에서 광합성 거동을 측정하기 위해, Fm을 기록한 후 초당 제곱미터당 30 마이크로몰라 광자를 사용하여 잎 샘플을 조사한다. 스펙트럼 방사능을 켜면서 잎 반사도를 모니터링합니다. 광합성 반응이 정상 상태에 도달할 때까지 적어도 20분 간 기다립니다.
이 반응 기간 동안, 포화 펄스는 1 분 간격으로 공급될 것이다. 안정된 상태의 플로레시엔스 강도는 Fs.펄스 라이트 20분 후에 달성된 최대 꽃집 값인 Fm 프라임이라고 합니다. 이 시점에서 스펙트럼 반사도를 기록합니다.
정상 상태에서 광합성 활성을 계산하기 위해 액티비티 라이트 하에서 포화 펄스를 조사하여 추정할 수 있는 사진 시스템 2의 양자 수율을 계산한다. 사진 시스템 2 반응 센터에서 선형 전자 플럭스를 추정한다. 그런 다음 비광화학 담금절을 계산하고 531 및 570 나노미터에서 광화학 반사도 지수를 계산합니다.
FS와 리프 반사를 획득한 후 액티니믹 라이트를 끄고 어두운 이완 중에 1분 간격으로 포화 펄스를 제공합니다. 어둠 아래 포화 펄스에 의해 유도 된 최대 꽃 값은 Fm 더블 프라임이라고합니다. 그리고 Actinic 빛을 끄고 2 분 과 10 분에 Fm 더블 프라임 데이터를 저장합니다.
이완 커넥터로부터 비광화학 담금질의 파라미터를 계산하려면, 2분 어두운 적응 Fm 이중 프라임 데이터로 qE를 추정한다. 잔톡시룸 의존적 담금질, qZ를 계산하여 10분 다크 적응 Fm 더블 프라임 데이터를 계산합니다. 그런 다음 사진 억제 상태를 계산합니다.
다음 측정으로 미터당 60 마이크로 몰라 광자에서 작동 광을 켜고 동일한 측정을 반복합니다. 이 대표적인 실험에서는 야생형 및 돌연변이 아라비도시스 식물을 비교하였다. 잎 반사도에서 계산된 광화학 반사도 지수PRI의 변화는 PAM 불소계에 의해 추정된 사진 시스템 2의 빛 의존선형 전자 흐름에 대하여 플롯되었다.
본 실험에서 PRI의 변화는 야생형 식물의 선형 전자 흐름과 부정적으로 상관관계가 있었지만 돌연변이 식물에서는 그렇지 않았다. xanthophyll 주기를 나타내는 qZ는 비 광화학 담금질의 어두운 이완 연결체로부터 분획되었고 PRI의 변화에 대해서도 플롯되었다. 이 분석에서 qZ는 또한 PRI가 xanthophyll 주기를 반사한다는 것을 암시하는 두 식물 균주에 대한 PRI의 변화와 강하게 상관관계가 있었다.
동일한 광원 또는 강도를 사용하여 동일한 리프 영역을 동시에 측정하기 위해 고정 장치에서 동일한 검출 섬유를 사용하여 잎을 수직으로 배치합니다. 반사분광법은 야생형 및 돌연변이 식물에서 다양한 표현형을 분석하여 식물 분자 메커니즘을 해명할 가능성이 있다.
