우리는 쥐의 폰에 경색을 설정하는 프로토콜을 제공합니다. 이 퐁틴 경색 쥐 모델은 쉽게 수행되고, 쉽게 재현하고, 매우 성공적인 모델이었다. 전기 자극은 시상 같이 그밖 두뇌 지역에 있는 경색을 만들기 위하여 이용될 수 있었습니다.
이 모델을 수행하려는 사람들은 실험 전에 pontine 자율성을 배워야합니다. 수술 전에, 쥐를 무게와 동반 텍스트에 설명 된 대로 행동 테스트에 따라 그들의 신경 성능을 평가. 가열 패드를 마취 직전에 섭씨 37도로 예열하고 두개골 드릴을 스테레오테틱 프레임의 홀더에 부착합니다.
첫 번째 마취 쥐에서 페달 반사에 대한 반응의 부족을 확인하고 가열 패드에 경향이 위치에 스테레오 탁스 프레임에 쥐를 장착. 이어바위에 이어바를 배치하여 머리를 고정하고, 두개골이 주사의 왜곡을 피하기 위해 수평으로 유지되는 것을 주의하십시오. 동물의 눈에 연고를 바르고 마이크로 면도기를 사용하여 두개골에서 머리카락을 제거하십시오.
마커를 사용하여 양측 측면 캔투스의 선에서 두개골의 중간선을 따라 3센티미터 선을 후방 폰타넬 뒤에 0.5cm로 그리고 메스를 사용하여 표시된 선을 따라 중간선 절개를 합니다. 면 봉면을 사용하여 혈액을 제거하고 피부 플랩의 양쪽에 수술 용 테이프조각을 배치하여 두개골을 노출시합니다. 0.9%의 염화나트륨에 담근 새로운 면봉을 사용하여 두개골에서 결합 조직을 부드럽게 제거하고 bregma를 찾습니다.
미세 팁 마커 펜을 사용하여 bregma의 중심 점을 원점으로 나타내고 드릴을 6밀리미터 전방 후방, 2밀리미터 측측측에 배치합니다. 드릴을 사용하여 직경 1mm의 두개골 절제술을 신중하게 수행합니다. 다음으로 드릴을 22 게이지 프로브로 교체하여 단열된 칼집으로, 팁은 칼집의 근접 끝 위에 2밀리미터 를 배치했습니다.
시트를 뇌에 7밀리미터 삽입하고 프로브 의 상단이 뇌 표면 아래 9밀리미터가 될 때까지 칼집을 따라 프로브를 진행합니다. 전극을 전기 자극기에 연결하고 양극을 프로브에 연결합니다. 그런 다음 음극에 연결하여 쥐의 귀에 연결합니다.
다음으로, 전기 자극기를 켜고 단일 펄스 폭을 4, 050밀리초로 설정하고 전압을 50볼트로 설정하고 전류를 4밀리암페어로 설정합니다. 뇌에서 장치를 제거하기 전에 자극 후 5 분 동안 프로브를 배치하십시오. 뼈 시멘트로 두개골 절제술을 덮고 4.0 폴리아미드 봉합사 필라멘트를 사용하여 상처를 닫기 전에 시멘트가 건조하도록 하십시오.
3~4개의 바늘을 한 후 2-1-1 표준 수술 매듭을 묶습니다. 그런 다음 페니실린 250 마이크로리터로 쥐를 주입하고 동물을 케이지로 되돌리기 전에 완전히 깨어날 때까지 15 분마다 쥐를 모니터링합니다. 이 분석에서는 6마리의 동물이 입증된 대로 수술을 받았으며 6마리의 동물이 대조군으로 치료되었다.
이 심상에 있는 두뇌 조각은 그룹 당 1개의 쥐에서 파생되었습니다. MRI 스캐닝은 경색이 인간 환자의 전방 경색을 모방한 폰의 기초에 위치했다는 것을 밝혔습니다. 절연 된 칼집이 사용되었기 때문에 피질, 소뇌 또는 중뇌에서 경색이 관찰되지 않았습니다.
확산 가중 이미지는 또한 급성 pontine 경색을 밝혔다. TTC 염색은 수술 후 24시간 경색을 확인하기 위해 사용되었다. 예상대로, 경색 부피는 대조군에 비해 수술군에서 상당히 높았다.
행동 점수는 수술 전후에 측정되었습니다. 대조군에 비해, 퐁틴 경색을 가진 쥐가 왼쪽으로 동그라미를 쳤다. 롱가, 버더슨, 사지 배치, 빔 밸런스 및 접착제 제거 소마토 감각 시험 점수에서 폰틴 경색 및 대조군 쥐를 가진 호언장담 에서 유의한 차이가 관찰되었다.
어떤 특정 두뇌 영역은 전기 자극에 의해 파괴 될 것입니다.
