우리의 프로토콜을 통해 흐르는 장간막 림프에서 식후 대사를 직접 측정할 수 있습니다. 이것은 소장에서 림프로의 영양소 이동을 정량적으로 결정할 수 있기 때문에 강력합니다. 그리고 우리는 사이토카인, 식이 지질, 기타 식이 성분 및 림프구를 측정할 수 있습니다.
이 기술은 림프로 이동하는 식이 지질의 역학, 유미미크론의 합성 및 분비를 분석하는 데 도움이 될 수 있습니다. 여기에 제시된 1일 모델에는 몇 가지 장점이 있습니다. 첫째, 실험 시간을 단축합니다.
둘째, 동물의 스트레스를 줄여줍니다. 그것은 동물의 생존을 증가시킵니다. 그리고 전반적으로, 실험 횟수를 감소시킨다.
오늘 우리의 기술을 시연하는 것은 선임 실험실 외과 의사 인 Mr.Nick Dedousis가 될 것입니다. 그리고 우리의 연구 과학자, Dr.Lihong Teng. 수술을 위해 마우스를 준비한 후 핀셋으로 피부를 잡고 작은 가위로 정중선 복부 절개를합니다.
그런 다음 흉골을 향해 사타구니 지방까지 자릅니다. 견인기를 사용하여 림프관이 보일 때까지 복막 내장을 치우십시오. 식염수에 적신 Q-tip을 사용하여 간을 몸의 오른쪽 상단으로, 내장과 위를 동물의 왼쪽으로 옮깁니다.
그런 다음 십이지장을 왼쪽으로 가로로 늘려 상부 장간막 동맥과 장 림프관을 노출시킵니다. 뭉툭한 바늘을 삽입하여 30-40cm 길이의 캐뉼라 튜브를 준비합니다. 그런 다음 1 밀리리터 주사기를 사용하여 튜브를 통해 소량의 헤파린을 씻어 내고 가위를 사용하여 캐뉼라 튜브 끝 부분의 경사를 자릅니다.
그런 다음 원고에 설명 된대로 홍채 가위를 사용하여 얕은 절개와 림프관을 만듭니다. 한 쌍의 가는 집게로 캐뉼라 튜브를 잡고 팁 베벨을 덕트에 부드럽게 삽입합니다. 림프관이 깨지기 쉽기 때문에 카테터를 봉합사로 묶는 대신 시아노아크릴레이트 한 방울을 사용하여 림프 캐뉼라를 장간막 림프에 붙입니다.
이제 18 게이지 바늘을 사용하여 유문 괄약근 뒤쪽의 위 유문 부위에 구멍을 뚫고 유문 괄약근을 넘어 십이지장으로 1-2 밀리미터 떨어진 위에 십이지장 주입 튜브를 삽입합니다. 그런 다음 실크 5/0 봉합사를 사용하여 지갑 끈 합자로 튜브를 위에 고정하고 누출을 방지하기 위해 시아노아크릴레이트 접착제 한 방울로 밀봉합니다. 5 % 포도당과 0.9 % 식염수의 십이지장 내 주입을 시작하십시오.
체강의 장기를 교체하고 정중선 절개를 봉합하십시오. 마우스를 꼭 껴안는 구속 장치에 부드럽게 놓습니다. 생쥐에게 식염수와 포도당을 십이지장 내 연속 주입하여 1 시간 동안 제공하십시오.
캐뉼라에 림프 흐름이 있는지 확인하고 림프 캐뉼라를 착유하여 림프 흐름을 유지합니다. 십이지장내 주입 튜브를 통해 0.3밀리리터 지질 에멀젼 볼루스의 고전적인 지질 주입을 수행합니다. 그런 다음 실험이 끝날 때까지 계속해서 시간당 5밀리리터의 0.9% 포도당과 0.3% 식염수로 주입을 다시 전환합니다.
림프 샘플을 수집하고 60분 동안 마이크로 원심분리기 튜브의 무게를 미리 측정하고 림프를 얼음 위에 유지합니다. 60분마다 분비되는 림프의 무게를 확인하기 위해 튜브의 무게를 두 번째로 측정합니다. 위, 맹장 및 결장을 수집하고 각 장기를 15 밀리리터 유리관에 넣습니다.
소장을 3 개 또는 4 개의 세그먼트로 나눕니다. 세로로 자르고 2-3 밀리리터의 차가운 PBS로 조직을 헹구어 내강 내용물을 수집합니다. 상피 세포 및 관련 고유판을 포함하는 장 점막을 곡선형 핀셋으로 2 내지 3 밀리리터의 차가운 PBS로 각 부분을 긁어냄으로써 근육층으로부터 제거한다.
모든 조직, 내강 및 점막 분리물, 근육층을 유리관에 넣습니다. 림프의 트리글리세리드 농도는 SMOFlipid의 300 마이크로 리터의 십이지장 내 볼루스에 반응하여 증가했습니다. 최고봉 트리글리세리드 농도는 큰알약 후에 2 내지 3 시간에 도달하고 6 시간 동안 꾸준히 감소합니다.
림프 유속은 시간 제로 볼루스 주입부터 실험이 끝날 때까지 증가합니다. 이 프로토콜의 주요 목표는 동물의 스트레스를 줄이고 생존율을 높이며 마취 시간을 줄이는 것이었습니다. 이를 달성하기 위해 Bollman 구속 케이지를 껴안는 것으로 바꾸고 습도, 따뜻함 및 수분 보충을 추가했습니다.
우리의 하루 절뚝 누공 프로토콜을 통해 생체 내에서 실시간으로 지질 흡수 역학을 측정 할 수 있습니다. 또한 장 장기 누화, 신진대사, 식이 영양소 흡수 및 면역 표현형을 연구할 수 있습니다.
