이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단 (No.82074523,82104996)의 지원을 받았습니다.

모든 동물 실험은 베이징 중의학 대학 동물 윤리 위원회의 검토 및 승인을 받았습니다. BUCM-4-2022010101-1097)을 참조하십시오. 이 프로토콜에서는 6주 된 수컷 뉴질랜드 토끼 24마리를 20-25°C, 습도 50-60%, 12시간 밝음/12시간 어두운 일주기 주기와 같은 특정 조건에서 사육하고 규칙적인 차우 식단을 자유롭게 이용할 수 있도록 했습니다. 토끼는 마취를 하고 심부 마취와 공기 색전술을 병행하여 희생시켰다. 통증은 KOA의 전형적인 병리학적 특징 중 하나이며 KOA의 동물 모델 및 중재 방법을 평가하는 데 사용되는 주요 지표 중 하나이므로 모델 준비 중에는 진통제를 사용하지 않습니다.
1. KOA 토끼 모델
<ol><li>토끼의 귀 가장자리에 3% 펜토바르비탈 나트륨(30mg/kg)을 정맥 주사하여 마취합니다. 적절한 수준의 마취를 확인하려면 각막 반사가 현저히 약해지거나 없고 지혈 겸자로 피부를 고정했을 때 통증이 없는지 확인하십시오. 마취 중에는 토끼의 눈이 건조해지는 것을 방지하기 위해 15분마다 토끼의 눈에 윤활유 2-3방울을 떨어뜨립니다.</li>
	<li>마취 후 각 토끼를 앙와위 자세로 고정하고 왼쪽 뒷다리를 완전히 뻗은 자세로 당깁니다.</li>
	<li>각 토끼의 왼쪽 뒷다리를 뻗은 자세로 고정합니다.<ol><li>첫 번째 레이어로 의료용 테이프를 사용하여 사타구니에서 발목 관절까지 토끼의 피부를 덮습니다.</li>
		<li>두 번째 레이어로 의료용 테이프 위에 36mm 너비의 양면 폼 테이프를 감은 다음 사타구니에서 발목 관절까지 폴리머 붕대를 감습니다. 무릎 관절이 180° 직선이고 발목 관절이 60° 배굴곡되어 있는지 확인합니다.</li>
		<li>세 번째 층으로 무릎과 발목 관절의 앞뒤에 작은 부목으로 관절을 고정하고 가장 바깥 층을 강철 메쉬로 감싸 물림을 방지합니다. 토끼의 발가락을 노출시켜 혈액 순환이 정상인지 관찰합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>KOA 모델을 확립하기 위해 6주 동안 동물을 고정시킵니다(그림 1). 참고: 1) 모델 준비 중에는 이틀에 한 번씩 금형을 검사하십시오. 곰팡이가 느슨하거나 분리되면 토끼를 마취하고 왼쪽 뒷다리를 다시 뻗은 자세로 고정시킵니다. 2) 토끼의 팔다리가 끼어 다치는 것을 방지하기 위해 케이지 바닥에 보호 매트를 깔아주세요.</li>
</ol>2. Acupotomy 중재
알림: acupotomy 개입을 시작하기 전에 귀 가장자리 정맥 주사로 토끼를 3% 펜토바르비탈 나트륨(30mg/kg)으로 마취합니다.
<ol><li>치료 지점을 결정하십시오.<ol><li>토끼의 왼쪽 뒷다리 무릎 관절의 털을 깎습니다.</li>
		<li>토끼 무릎 관절 내측 대퇴 근육 힘줄 삽입, 대퇴 직근 힘줄 삽입, 이두근 대퇴 힘줄 삽입 및 거위 발 윤활낭을 촉진합니다. 멸균 피부 마커로 국소 근육의 병리학적 지속 시간을 표시하십시오. 무릎 관절을 의료용 요오드포와 75% 의료용 알코올을 번갈아 가며 세 번 소독합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>acupotomy의 수술<ol><li>acupotomy 블레이드를 힘줄과 사지의 세로축과 평행한 이동 방향과 평행하게 유지합니다.</li>
		<li>왼손 엄지손가락으로 마커 포인트로 들어가는 피부를 누르고 옆으로 움직여 엄지손가락의 복부 쪽에서 혈관과 신경이 분리되도록 합니다.</li>
		<li>오른손에 있는 acupotomy 핸들로 작은 힘으로 빠르게 눌러 acupotomy 블레이드가 즉시 피부를 통과하도록 합니다. acupotomy 블레이드를 국소 근육 지속 시간까지 천천히 전진시키고 세로로 자르고 옆으로 스윙합니다.</li>
		<li>acupotomy 수술이 완료되면 무릎 관절을 다시 소독하고 반창고를 붙입니다.</li>
	</ol></li>
	<li>4주 동안 일주일에 한 번씩 이 작업을 수행합니다(그림 2). 참고: 1) 내측광대, 외측광대, 대퇴직근, 대퇴이두근 또는 안세린 윤활낭의 힘줄 삽입 시 만진 내경 또는 탯줄과 같은 조직이 없는 경우 침구 절개술을 사용하여 힘줄 삽입을 직접 해제해야 합니다. 2) acupotomy 중재 중 acuretomy 그룹과 모델 그룹의 확장 위치에 토끼의 왼쪽 뒷다리를 고정하지 마십시오.</li>
</ol>3. 대퇴사두근의 탄성 계수
참고: 1) 이 실험은 실시간 전단파 탄성 조영술(SWE) 초음파 진단 장비를 사용하여 각 토끼 그룹에서 생체 내 대퇴사두근의 탄성 계수를 측정했습니다. 2) 테스터는 초음파 검출에 경험이 풍부한 초음파 검사자여야 합니다. 측정할 때 초음파 프로브는 국소 근육 긴장을 피하기 위해 대퇴사두근의 피부 표면에 부드럽게 놓아야 합니다. 동물이 몸부림치거나 활동하지 않고 조용한 상태에 있을 때 측정해야 합니다. 동물이 활동적이라면 테스트를 수행하기 전에 진정될 때까지 기다리십시오.
<ol><li>털을 면도하여 왼쪽 뒷다리의 대퇴사두근 부위의 피부가 드러나도록 합니다.</li>
	<li>기존의 2차원 초음파를 사용하여 대퇴사두근-복부를 찾고 1-2cm 깊이로 설정된 관심 영역(ROI)을 결정합니다.</li>
	<li>검사를 위해 SWE 모드를 시작합니다.<ol><li>관심 영역을 직경 2mm의 원형 영역으로 균일하게 설정하고 관심 영역을 피부 표면에서 ~0.5-1cm 깊이로 설정합니다.</li>
		<li>초음파 진단 기기를 사용하여 음향 방사선 힘 임펄스를 생성하여 근육 조직을 자극하고 조직 엘라스토그래피를 얻습니다.</li>
		<li>이미지가 안정화될 때까지 2-3초 동안 기다린 다음 이미지를 고정합니다. 기기의 Q-BOX 기능을 활성화하여 대퇴사두근의 영률을 측정합니다.</li>
		<li>시스템이 영률(Young's modulus)의 최대값, 최소값, 평균값(단위: KPa)을 자동으로 계산할 때까지 기다립니다. 3개의 측정값에 대해 동일한 깊이에서 3개의 ROI를 선택하고 통계 분석을 위해 평균값을 취합니다. 알림: 테스터는 초음파 검출에 경험이 풍부한 초음파 검사자여야 합니다. 측정할 때 초음파 프로브는 국소 근육 긴장을 피하기 위해 대퇴사두근의 피부 표면에 부드럽게 놓아야 합니다. 동물이 몸부림치거나 활동하지 않고 조용한 상태에 있을 때 측정해야 합니다. 동물이 활동적이라면 테스트를 수행하기 전에 진정될 때까지 기다리십시오.</li>
	</ol></li>
</ol>4. 대퇴사두근의 수축력 측정
참고: 대퇴사두근의 수축력을 측정한 후, 토끼는 마취 하에 공기 색전증에 의해 안락사되었습니다.
<ol><li>토끼의 귀 가장자리에 3% 펜토바르비탈 나트륨(30mg/kg)을 정맥 주사하여 마취합니다. 적절한 수준의 마취에 도달했는지 확인하려면 각막 반사가 현저히 약화되거나 없고 지혈 겸자로 피부를 조였을 때 통증이 없는지 확인하십시오. 마취 중에는 토끼의 눈이 건조해지는 것을 방지하기 위해 15분마다 토끼의 눈에 윤활유 2-3방울을 떨어뜨립니다.</li>
	<li>대퇴사두근을 노출시키고 장력 변환기를 부착합니다.<ol><li>슬개골 아래 피부를 팔다리의 세로 축을 따라 허벅지 바닥까지 위쪽으로 자르고 피부를 위쪽으로 3-4cm 계속 자릅니다. 피부와 근막을 정중하게 벗겨 근육을 노출시킵니다. 슬개골 인대를 자르고 대퇴사두근을 장골 접합부에서 조심스럽게 분리하여 대퇴사두근을 장골과 연결되도록 합니다.</li>
		<li>슬개골과 대퇴사두근 사이의 힘줄 접합부에서 수술용 봉합사를 결찰합니다. 자연 상태에서 근육을 전체 길이로 늘린 다음 장력 변환기에 부착합니다. 근육의 결찰선을 힘 변환기의 결찰선과 일직선으로 유지합니다.</li>
		<li>장력 변환기를 브래킷에 고정합니다. 장력 변환기의 신호 수집 라인을 생체 신호 수집 시스템 프로세서에 연결합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>대퇴사두근의 수축 성능을 측정합니다.<ol><li>전극을 대퇴사두근 복부와 평행하게 삽입하고 전극 사이의 접촉을 피하십시오.</li>
		<li>오실로스코프 버튼을 누릅니다. 브래킷에서 힘 변환기의 위치를 조정하여 기준선을 0으로 유지합니다. 파동 폭 이 5ms 이고 지연 이 10ms인 자극기의 자극 매개변수를 선택합니다.</li>
		<li>먼저 단일 자극을 사용하고 자극 강도를 0에서 매번 0.1V씩 점진적으로 조정합니다. 대퇴사두근의 최대 단일 수축 진폭(Pt)이 결정될 때까지 근육 수축 곡선과 수축 진폭의 변화를 관찰합니다. 후속 통계를 위해 기록하십시오.</li>
		<li>클러스터 자극을 이용해, 최대 단일 수축 진폭을 유도하는 자극 진폭을 기준선으로 하여 근육을 지속적으로 자극하고 서서히 자극 주파수를 높인다. 대퇴사두근의 최대 수축 진폭(Pt)이 결정될 때까지 근육 수축 곡선의 변화를 관찰합니다. 후속 통계를 위해 기록하십시오. 참고: 1) 각 근육 수축 후 근육에 지속적으로 떨어지는 근육 완충 용액으로 근육을 이완하기 위해 30초를 주어야 합니다. 2) 수술 중 토끼의 눈꺼풀 반사, 호흡 리듬, 근육 이완 및 피부 꼬집기 반응을 모니터링하여 마취 상태를 판단합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>5. 대퇴사두근 힘줄의 기계적 성능
<ol><li>전처리: 시험 당일, 버니어 캘리퍼스로 대퇴사두근 힘줄의 길이, 너비, 두께를 측정하고 피로 시험기에 특수 미끄럼 방지 클램프를 설치합니다. 전처리를 위해 로딩 및 언로딩을 15회 반복합니다.</li>
	<li>응력 완화 테스트: 0N에서 100N 범위의 센서를 사용하여 필요한 길이에 도달할 때까지 5mm/min의 속도로 늘린 다음 데이터 수집을 시작합니다. 컴퓨터 데이터 수집 시간을 t(0)에서 설정하여 0.1초마다 데이터를 수집하고 1,800초 동안 지속합니다. 설정된 시간에 도달한 후 데이터와 곡선을 기록합니다.</li>
	<li>인장 시험: 0 N에서 100 N 범위의 센서를 사용하여 시편이 분리될 때까지 최대 하중까지 5 mm/min의 속도로 늘립니다. 시험 후 시편의 최대 변위, 극한 하중 및 강성을 계산합니다.</li>
</ol>6. 연골의 단위 면적당 관절 접촉면 압력 및 압력
<ol><li>대퇴골과 경골 시편을 양쪽에 고정하고 고정 장치의 직선 위치에 고정하고 예압 테스트를 수행합니다. 무릎 관절의 대략적인 범위를 측정하고 감압 용지를 같은 모양으로 자르고 비닐 랩으로 밀봉합니다.</li>
	<li>밀봉된 감압지를 경골과 대퇴골 관절 사이에 놓고 무릎 관절에 압력 5mm/min, 최대 압력 50N으로 압력 테스트를 수행합니다. 압력에 민감한 용지가 안정적으로 착색될 때 50N에 도달할 때까지 2분 동안 압력을 유지합니다.</li>
	<li>2분 후 압력 감지 용지를 제거하고 A4 크기의 용지에 컬러 표면을 고정한 다음 배율을 따로 두고 이미지를 획득합니다.</li>
	<li>이미지를 컴퓨터에 업로드합니다. 참조된 소프트웨어를 사용하여 면적을 측정하고 불규칙한 수치를 측정하기 위해 다중 세그먼트 측정을 수행합니다. 대퇴골과 경골 관절의 내부와 외부에 가해지는 압력을 측정하고 결과를 기록합니다.</li>
</ol>7. 무릎 관절 연골의 Safranin O/Fast Green 염색
<ol><li>acupotomy 개입이 끝난 후 연골-연골하 뼈 복합 조직을 채취하여 파라핀에 삽입합니다. 준비된 티슈 왁스 블록을 자르고 슬라이드를 준비합니다. 준비된 조직 슬라이드를 환경 탈랍 용액(I)과 환경 탈랍 용액(II)으로 각각 15분 동안 탈파라핀화합니다. 그런 다음 크실렌과 무수 에탄올(1:1), 무수 에탄올(I), 95% 에탄올, 85% 에탄올 및 75% 에탄올에 연속적으로 담그고 각 단계에서 2-5분 동안 담그십시오. 마지막으로 증류수에 15분 동안 담가둡니다.</li>
	<li>염색을 수행합니다.<ol><li>Fast Green 용액으로 슬라이드를 1분 동안 염색합니다. 이 과정에서 용액에서 슬라이드를 꺼내 조직이 짙은 녹색으로 염색될 때까지 현미경으로 관찰합니다.</li>
		<li>색상 분리: 여분의 Fast Green 용액을 초순수로 헹굽니다. 슬라이드를 1% 아세트산 용액에 5 - 10초 동안 빠르게 담그십시오.  다시 초순수로 슬라이드를 헹굽니다.</li>
		<li>연골이 붉게 물들 때까지 10-15분 동안 사프라닌 O 용액에 슬라이드를 염색합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>조직을 탈수하고 정화하고 유리 슬라이드를 밀봉하고 현미경으로 관찰합니다.<ol><li>슬라이드를 75% 에탄올, 85% 에탄올, 95% 에탄올, 100% 에탄올에 3-5초 연속으로 담그십시오.</li>
		<li>슬라이드를 환경 탈랍 용액(I)과 환경 탈왁스 용액(II)에 연속적으로 10분 동안 담그십시오. 슬라이드를 꺼내고 조직을 피하면서 슬라이드 전면에 중성 수지 매체를 떨어뜨립니다. 커버글라스의 가장자리를 슬라이드에 놓고 천천히 내려 중성 발삼을 덮습니다. 공기를 제거하고 기포를 피하십시오. 여분의 자일렌과 중성 발삼을 닦아내고 실온에서 하룻밤 동안 그대로 두십시오.</li>
		<li>현미경으로 슬라이드를 관찰하고 이미지를 획득합니다. 각 그룹에 대해 토끼 무릎 연골 샘플 6개를 선택하고 평가를 위해 각 샘플에 대해 4개의 서로 다른 보기 필드를 무작위로 선택합니다. Mankin 방법에 따라 각 그룹의 연골 조직학을 채점합니다(표 1).</li>
	</ol></li>
</ol>8. 통계 분석
<ol><li>데이터를 평균 ± 표준편차(<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65584/65584eq01.jpg" style="margin: auto;"> ± s)로 표현합니다.</li>
	<li>일원분산분석(ANOVA) 및 LSD 검정을 수행하여 다중 그룹 비교의 통계적 유의성을 확인합니다.</li>
	<li>P가 0.05일 때 통계적으로 유의< 차이를 고려하십시오.</li>
</ol>

Modified Videman Method를 이용한 토끼의 KOA 모델 확립

<ol>
	<li>Roseti, L., Desando, G., Cavallo, C., Petretta, M., Grigolo, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Articular+cartilage+regeneration+in+osteoarthritis.">Articular cartilage regeneration in osteoarthritis.</a> Cells. 8 (11), 1305 (2019).</li><li>Cui, A. 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저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.

적절한 동물 모델은 실험 목표를 달성하고 특정 과학적 질문을 명확히 하기 위한 핵심 요소 중 하나입니다. 본 연구는 정진의 뼈 조절 및 관절 윤활 이론과 "기계적 불균형" 이론을 바탕으로 한 것으로, 절구술 치료에서 "뼈 질환을 치료하기 위해 근육과 힘줄을 조절"함으로써 KOA 치료의 과학적 의미를 설명하는 것을 목표로 합니다. 즉, 무릎 주위 연조직의 기계적 특성을 조절하여 연골의 비정상적...

무릎 골관절염(KOA)은 가장 흔한 형태의 골관절염으로, 관절 연골 퇴행을 특징으로 하는 전체 관절 질환으로 인식되는 경우가 많으며, 임상적으로 통증, 부종 및 해당 관절의 움직임 제한으로 나타납니다1. 최근 역학 통계에 따르면 KOA는 2020년까지 전 세계적으로 40세 이상 6억 5,410만 명에게 영향을 미친 것으로 보고되었습니다. KOA의 유병률과 발병률은 나이가 들수록 증가하며, 중년과 노년층에서 가장 높으며, 남성보다 여성에게 더 많이 발생한다2. KOA의 유병률은 전 세계적으로 인구 고령화와 비만 전염병으로 인해 증가할 가능성이 높으며, 이는 전 세계 공중 보건에 대한 위협이 커지고 있습니다. 나이, 성별, 비만, 외상 및 KOA와 관련된 기타 복잡한 위험 요인은 모두 무릎 불안정성에 직접적인 영향을 미치며, 무릎 관절의 생체역학적 불균형은 KOA의 주요 원인 중 하나입니다3.
정상적인 생리적 조건에서 무릎 관절은 기계적 균형 상태에 있어 관절의 기계적 부하가 연골에 고르게 분산되도록 합니다. 무릎 관절의 기계적 불균형은 연골에 비정상적인 스트레스를 유발하여 연골 퇴화와 KOA4의 발병을 초래할 수 있습니다. 근육-힘줄 시스템은 무릎 관절의 기계적 균형을 유지하는 주요 동적 시스템입니다. 신전근과 굴곡근-힘줄 시스템의 조화로운 움직임은 연골 표면의 움직임에 의해 생성된 하중을 고르게 분산시켜 연골 손실을 초래하는 생리적 하중을 넘어서는 국소 연골 스트레스의 대사 불균형을 피할 수 있다5. 근력 감소는 근육 내 운동 장애 및 연골 손상의 주요 원인이며, 증상이 나타나기 전에 발생할 수 있습니다. 
KOA는 또한 관절성 근육 억제(AMI)를 유도하여 무릎 주위의 근육 약화와 근력 감소로 나타날 수 있다6. 이 근육 중 대퇴사두근 그룹은 무릎 관절의 안정성을 유지하는 데 중요한 구조인 유일한 무릎 신전근으로 기능합니다. 연구에 따르면 대퇴사두근 단면적과 근력의 감소는 KOA 진행과 유의하고 긍정적인 상관관계가 있는 것으로 나타났다7. 대퇴사두근 근력의 감소는 보행 패턴, 무릎 안정성, 움직임 패턴 및 기타 여러 기능에 영향을 미칩니다. 또한, 근력의 감소는 힘줄 기능을 손상시키며, 이는 힘줄 경직도, 탄성률 및 기타 생체역학적 특성의 감소로 나타난다8. 장기간의 긴장 회복 시 무릎 관절의 근육과 힘줄에 유착, 구축 등의 변화가 일어나 기계적 성질이 손상되고 관절 불안정을 유발하여 궁극적으로 KOA의 병리학적 변화의 악순환이 발생할 수 있습니다. 따라서 KOA 치료는 근육-힘줄 시스템의 기계적 특성을 개선하고 관절의 기계적 균형을 회복하는 데 매우 중요합니다.
KOA의 원인 중 생체역학적 불균형은 무릎 통증, 기능 장애, 염증성 병변 및 연골 퇴행의 주요 유발 요인이다9. 따라서 KOA 치료의 핵심은 무릎 관절의 생체역학적 균형을 회복하는 것입니다. Acupotomology는 KOA의 병인과 발병 기전이 "기계적 불균형"이라고 믿습니다. 무릎 주위 연조직의 기계적 특성이 비정상적으로 변하면 무릎 관절은 기계적 균형을 잃고 관절의 비정상적인 기계적 스트레스 환경은 퇴화를 가속화하여 염증 자극을 일으켜 연조직의 유착, 구축을 더욱 악화시키고 관절 안정성을 더욱 떨어뜨립니다. 이 악순환은 결국 KOA로 발전합니다. "뼈 질환을 치료하기 위한 근육 및 힘줄 조절" 이론과 함께 연조직 유착 및 구축을 완화하고 근육과 힘줄의 스트레스 집중을 감소시킴으로써 관절의 기계적 스트레스 균형을 맞추는 "근육과 힘줄 조절"과 함께 연조직 역학을 개선하고 "근육과 힘줄을 조절"하여 연골 퇴화를 효과적으로 완화하고 "뼈 질환을 치료"합니다.10. 동물모델 선정 측면에서는 본 연구의 목적에 따라 좌측 뒷다리 신전 고정화의 변형된 Videman 방법으로 KOA 모델을 준비하였다.
본 논문은 좌측 뒷다리 확장 고정술의 수정된 Videman 방법을 이용한 KOA 모델의 확립과 acupotomy의 수술 방법 및 주의사항에 대해 자세히 설명합니다. 대퇴사두근, 대퇴골 및 힘줄의 기계적 특성을 테스트하고 관절 연골 스트레스 및 형태의 변화를 감지하여 아큐포토술의 효과를 입증합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acupotomy</td>
			<td>Beijing Zhuoyue Huayou Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>0.4 x 40 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connect Cast Orthopedic Casting Tape</td>
			<td>Suzhou Connect Medical Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>KCP06</td>
			<td>15.0 cm x 360 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double-sided Foam Tape</td>
			<td>Deli Group Co.,Ltd.</td>
			<td>NO.30416</td>
			<td>36 mm x 5 yard x 2.5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Environmental Dewaxing Solution</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>G1128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Beijing Hengkangda Medicine Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green solution</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>G1031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast grenn FCF</td>
			<td>Sigma,America</td>
			<td>2353-45-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fatigue testing machine</td>
			<td>BOSE, America</td>
			<td></td>
			<td>Bose Electro Force 3300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four-channel physiological recorder</td>
			<td>Chengdu Instrumeny Frctory</td>
			<td></td>
			<td>RM-6420</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FPD-305E</td>
			<td>Fuji, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FPD-306E</td>
			<td>Fuji, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin solution</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>G1005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical iodophor disinfectant</td>
			<td>Shan Dong Lircon Medical Technology Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Tape</td>
			<td>Shandong Rongjian Sanitary Products Co., Ltd.</td>
			<td>200402</td>
			<td>1.5 x 500 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Muscle tension transducer&#160;</td>
			<td>Chengdu Instrumeny Frctory</td>
			<td></td>
			<td>JH-2204005, 50 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prescale</td>
			<td>Fuji, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Real-time SWE ultrasound diagnostic instrument</td>
			<td>SuperSonic Imagine SA,France</td>
			<td></td>
			<td>SuperSonic Imagine AixPlorer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhamsan gum</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>WG10004160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safranine O</td>
			<td>Sigma,America</td>
			<td>477-73-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safranine O solution</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>G1015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Statistical Package for the Social Sciences (SPSS)</td>
			<td>IBM, America</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

application of acupotomy in a knee osteoarthritis model in rabbit

무릎 골관절염(KOA)은 정형외과에서 가장 자주 발생하는 질병 중 하나로, KOA 환자의 삶의 질을 심각하게 떨어뜨립니다. 여러 병원성 요인 중 무릎 관절의 생체역학적 불균형은 KOA의 주요 원인 중 하나입니다. Acupotomology는 무릎 관절의 기계적 균형을 회복하는 것이 KOA 치료의 핵심이라고 믿습니다. 임상 연구에 따르면 아큐포토술은 무릎 관절 주변 근육과 힘줄의 유착, 연조직의 구축, 응력 집중점을 줄여 통증을 효과적으로 줄이고 무릎 이동성을 개선할 수 있습니다. 
이 프로토콜에서는 수정된 Videman 방법을 사용하여 왼쪽 뒷다리를 직선 위치에 고정하여 KOA 모델을 구축했습니다. 대퇴사두근, 대퇴골 및 힘줄의 기계적 특성, 연골 역학 및 형태학의 검출을 통해 "뼈 질환 치료를 위한 근육 및 힘줄 조절" 이론과 연계하여 acupotomy의 효능을 평가했습니다. 그 결과 무릎 관절 주변 연조직의 기계적 성질을 조절하고 연골 스트레스 환경을 개선하며 연골 퇴화를 지연시켜 연골을 보호하는 효과가 있음을 알 수 있습니다.

Knee osteoarthritis (KOA) is the most frequent form of osteoarthritis, often recognized as a whole-joint disease characterized by articular cartilage degeneration, which manifests clinically as pain, swelling, and limited movement of the affected joints1. According to recent epidemiological statistics, KOA is reported to have affected 654.1 million individuals globally who were 40 years of age or older by 2020. The prevalence and incidence of KOA rise with age, are the highest in middle-aged and older adults, and affect more women than men2. The prevalence of KOA is likely to increase due to the aging population and obesity epidemic worldwide, posing a growing threat to global public health. Age, sex, obesity, trauma, and other complicated risk factors associated with KOA all directly impact knee instability, making a biomechanical imbalance in knee joints one of the primary causes of KOA3.
Under normal physiological conditions, the knee joint is in a state of mechanical balance, ensuring that the mechanical loads in the joint are evenly distributed on the cartilage. Any mechanical imbalance in the knee joint can lead to abnormal stress in cartilage, resulting in cartilage degeneration and the onset of KOA4. The muscle-tendon system is the main dynamic system that maintains the mechanical balance of the knee joint. The coordinated movement of the extensor and flexor muscle-tendon system can evenly distribute the load generated by the movement on the cartilage surface, avoiding the metabolic imbalance of local cartilage stresses beyond its physiological load that results in cartilage loss5. Decreased muscle strength is the main cause of intramuscular movement disorder and cartilage damage, which may occur before symptomatic KOA. 
KOA can also induce arthrogenous muscle inhibition (AMI), manifesting as muscle weakness and decreased muscle strength around the knee6. Among these muscles, the quadriceps femoris group functions as the only knee extensor, an important structure in maintaining knee joint stability. Studies have shown that a decrease in quadriceps cross-sectional area and muscle strength is significantly and positively correlated with KOA progression7. The decline in quadriceps strength affects the gait pattern, knee stability, movement patterns, and many other functions. Moreover, the decline in muscle strength impairs tendon function, manifested as a decrease in tendon stiffness, elastic modulus, and other biomechanical properties8. In long-term strain repair, changes such as adhesion and contracture may occur in the muscles and tendons of the knee joint, damaging their mechanical properties, causing joint instability, and ultimately forming a vicious cycle of pathological changes of KOA. It is, therefore, crucial for KOA treatment to improve the mechanical properties of the muscle-tendon system and restore the joint mechanical balance.
Among the causes of KOA, biomechanical imbalance is the main inducing factor for knee pain, dysfunction, inflammatory lesions, and cartilage degeneration9. Therefore, the key to treating KOA is to restore the biomechanical balance of the knee joint. Acupotomology believes that the etiology and pathogenesis of KOA are "mechanical imbalance." When the mechanical characteristics of the soft tissues around the knee change abnormally, the knee joint loses its mechanical balance, and the abnormal mechanical stress environment of the joint accelerates degeneration, causing inflammatory stimulation to further aggravate the soft tissue adhesions, contractures, and further decline in joint stability. This vicious cycle eventually develops into KOA. By loosening soft tissue adhesions and contractures, as well as reducing stress concentration in the muscles and tendons, acupotomy in conjunction with the theory of "Modulating Muscles and Tendons to Treat Bone Disorders" improves the soft tissue mechanics and "modulates muscles and tendons," which balances the mechanical stress of the joint, effectively alleviating cartilage degeneration and "treating bone disorders"10. In terms of animal model selection, based on the purpose of this study, we prepared the KOA model by the modified Videman method of left hindlimb extension immobilization.
This paper details the establishment of the KOA model using the modified Videman method of left hind limb extension immobilization and the method of operation and precautions of acupotomy. We demonstrate the effectiveness of acupotomy by testing the mechanical properties of quadriceps femoris and tendon and detecting changes in articular cartilage stress and morphology.

저자 스포트라이트: 무릎 골관절염 치료에서 Acupotomy의 작용 메커니즘 조사

토끼의 무릎 골관절염 모델에서 Acupotomy의 적용

Our research scope is the study of the mechanism of action of acupotomy in the treatment of new osteoarthritis. The question we want to answer, the how acupotomy regulates the mechanical properties of the soft tissues around the knee to protect the cartilage. At present, micro CT, nuclear magnetic resonance, phenetole elemental analysis, and bio mechanical detection techniques can be used to promote research in this field.We found that acupotomy improved the mechanical properties of soft tissue by removing the excisions and pathological contractors around the knee, thereby playing a role in protecting cartilage. To a certain extent, this protocol explains the mechanism and reveals the scientific connotation of acupotomy in the treatment of KOA and fills the gap in the basic research of acupotomy tendon and bone treatment method. In the future, our laboratory will focus on the specific mechanism or action of the acupotomy tendon and bone control method on cartilage protection.

대퇴사두근과 힘줄의 기계적 성질 실험결과 KOA를 가진 토끼의 대퇴사두근의 기계적 특성에 대한 acupotomology의 효과를 평가하기 위해 실시간 전단파 탄성 초음파 영상과 근육 긴장 변환기를 각각 사용했습니다. 대조군과 비교했을 때, KOA 그룹에서 대퇴사두근의 영률(Young's modulus)은 감소하였다(P < 0.05). KOA 그룹과 비교하여, acupotomy 그룹의 Young's modulus는 증가하였다(P < 0.0...

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이 프로토콜에서는 수정된 Videman 방법을 사용하여 무릎 골관절염 모델을 준비했으며 acupotomy의 수술 절차 및 주의 사항을 자세히 설명합니다. acupotomy의 효과는 대퇴사두근, 대퇴골 및 힘줄의 기계적 특성과 연골의 기계적 및 형태학적 특성을 테스트하여 입증되었습니다.

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most frequently encountered diseases in the orthopedic department, which seriously reduces the quality of life of ...

우리의 연구 범위는 새로운 골관절염 치료에서 acupotomy의 작용 메커니즘에 대한 연구입니다. 우리가 대답하고 싶은 질문은 무릎 주위의 연조직의 기계적 특성을 조절하여 연골을 보호하는 방법입니다. 현재 마이크로 CT, 핵 자기 공명, 페네톨 원소 분석 및 생체 역학 검출 기술을 사용하여 이 분야의 연구를 촉진할 수 있습니다.우리는 acupotomy가 무릎 주위의 절제물과 병리학적 계약자를 제거함으로써 연조직의 기계적 특성을 개선하여 연골을 보호하는 역할을 한다는 것을 발견했습니다. 이 프로토콜은 어느 정도 메커니즘을 설명하고 KOA 치료에서 acupotomy의 과학적 의미를 밝히고 acupotomy 힘줄 및 뼈 치료 방법의 기초 연구의 공백을 메웁니다. 앞으로 우리 연구실에서는 연골 보호에 대한 애큐포토 힘줄과 뼈 조절 방법의 구체적인 기전 또는 작용에 초점을 맞출 것입니다.

application-of-acupotomy-in-a-knee-osteoarthritis-model-in-rabbit

Research

JoVE Journal

Medicine

Application of Acupotomy in a Knee Osteoarthritis Model in Rabbit

678 조회수.  Beijing University of Chinese Medicine. 우리의 연구 범위는 새로운 골관절염 치료에서 acupotomy의 작용 메커니즘에 대한 연구입니다. 우리가 대답하고 싶은 질문은 무릎 주위의 연조직의 기계적 특성을 조절하여 연골을 보호하는 방법입니다. 현재 마이크로 CT, 핵 자기 공명, 페네톨 원소 분석 및 생체 역학 검출 기술을 사용하여 이 분야의 연구를 촉진할 수 있습니다.우리는 acupotomy가 무릎 주위의 절제물과 병?...

비디오: 저자 스포트라이트: 무릎 골관절염 치료에서 Acupotomy의 작용 메커니즘 조사

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most frequently encountered diseases in the orthopedic department, which seriously reduces the quality of life of people with KOA. Among several pathogenic factors, the biomechanical imbalance of the knee joint is one of the main causes of KOA. Acupotomology believes that restoring the mechanical balance of the knee joint is the key to treating KOA. Clinical studies have shown that acupotomy can effectively reduce pain and improve knee mobility by reducing adhesion, contracture of soft tissues, and stress concentration points in muscles and tendons around the knee joint. 
In this protocol, we used the modified Videman method to establish a KOA model by immobilizing the left hindlimb in a straight position. We have outlined the method of operation and the precautions related to acupotomy in detail and evaluated the efficacy of acupotomy in conjunction with the theory of "Modulating Muscles and Tendons to Treat Bone Disorders" through the detection of the mechanical properties of quadriceps femoris and tendon, as well as cartilage mechanics and morphology. The results show that acupotomy has a protective effect on cartilage by adjusting the mechanical properties of the soft tissues around the knee joint, improving the cartilage stress environment, and delaying cartilage degeneration.

In this protocol, a knee osteoarthritis model was prepared using the modified Videman method, and the operation procedures and precautions of acupotomy are detailed. The effectiveness of acupotomy has been demonstrated by testing the mechanical properties of quadriceps femoris and tendon and the mechanical and morphological properties of cartilage.

연구

의학

Establishing the Knee Osteoarthritis Rabbit Model and Applying Acupotomy for Modulating Muscles and Tendons

To begin, fix the anesthetized rabbit in a supine position. Then, pull and fix the left hind limb in the fully extended position. Using medical tape as the first layer, cover the skin from the groin to the ankle joint.For the second layer, wrap 36 millimeter-wide double-sided foam tape over the medical tape. Then, wrap a polymer bandage from the groin to the ankle joint. Ensure the knee joint is 180 degrees straight, and the ankle joint is dorsiflexed by 60 degrees.For the third layer, immobilize the joints with small splints at the front and back of the knee and ankle joints. Then, wrap steel mesh around the outermost layer to protect against bites. Ensure to keep toes exposed, to observe blood circulation.To determine points of acupotomy treatment, palpate and mark pathological indurations of knee joints with a sterile skin marker. Then, disinfect the knee joint three times with alternating rounds of iodophor and 75%ethanol. Now align an acuoptomy blade parallel to the travel direction of the tendon and the longitudinal axis of the limb.Using the left thumb, press down on the skin at the marker point, then shift laterally to facilitate the separation of blood vessels and nerves on the thumb's ventral side. With the acupotomy handle in the right hand, apply a quick gentle pressure, causing the acupotomy blade to penetrate the skin. Slowly advance the blade to muscle induration, making longitudinal cuts and swinging laterally.After acupotomy, disinfect the knee joint using iodophor and apply a bandaid.

무릎 골관절염 토끼 모델 확립 및 근육 및 힘줄 조절을 위한 지압술 적용

Measuring Mechanical Properties of Quadriceps Femoris Contraction Force in Rabbits

To begin, cut the skin of an anesthetized rabbit below the patella, following the length of the limb upwards to the thigh base, then continue upwards for three to four centimeters. Carefully peel off the skin and fascia, exposing the quadriceps muscle. Cut the patellar ligament and carefully separate the quadriceps from the iliac junction, while maintaining the quadriceps in connection with the ilicium.Now ligate the surgical sutures at the tendon junction between the patella and quadriceps muscle. Stretch the muscle to its full length in its natural state and attach it to the tension transducer, aligning the ligation line on the muscle with that on the transducer. Secure the tension transducer to the bracket.Connect the signal acquisition line on the transducer to the bio signal acquisition system processor. Insert the electrodes parallel to the quadriceps abdomen, avoiding contact between the electrodes. Next, press the oscilloscope button.Adjust the position of the force transducer on the bracket to maintain the baseline at zero. At this stage, set the stimulator stimulation parameters with a single stimulus, a wave width of five milliseconds and a delay of 10 milliseconds. Set the initial value of the stimulus amplitude to zero volt and set the automatic amplitude to increase by 0.1 volt each time, to gradually increase the stimulus intensity.Then start the stimulation while observing the changes in the muscle contractions curve and contraction amplitude, until the maximum signal twitch amplitude of the quadriceps is determined. Next, use a cluster stimulus and set the stimulus amplitude, causing a maximum single twitch as the baseline to continuously stimulate the muscle. Set the initial value of the stimulation frequency to 10 hertz, and set the automatic frequency to increase by one hertz each time to gradually increase the stimulus frequency.Finally, start the stimulation while observing the changes in the muscle contraction curve until the maximum tetanic contraction amplitude of the quadriceps is determined. Young's modulus, single contraction amplitude, and tetanic contraction amplitude of the quadriceps femoris were significantly reduced in knee osteoarthritis group compared to the control and Acupotomy group.

토끼에서 대퇴사두근 수축력의 기계적 특성 측정

Safranin O/Fast Green Staining of Knee Joint Cartilage in Rabbits

After acupotomy intervention, embed the cartilage subchondral bone complex tissues in paraffin. Then, slice the tissue wax blocks and place them on the slides. Deparaffinize the slides with successive environmental dewaxing solutions for 15 minutes each.Then, dip the slides successively in xylene and anhydrous ethanol for two to five minutes each, followed by dehydration in decreasing ethanol concentrations. Stain the slide with fast green solution for one minute. After rinsing the excess fast green solution with ultrapure water, rinse slide quickly with 1%acetic acid solution several times for color separation.Again, rinse the slide with water as demonstrated before staining with safranin O solution for 10 to 15 minutes. Soak the slide in increasing ethanol concentrations for three to five seconds each, then, place the slide in successive xylene solution for 10 minutes each. Add a neutral resonance medium on the front of the slide, avoiding the tissue.Place the edge of the cover glass on the slide and slowly lower it to cover the neutral balsam. Wipe off the extra xylene and neutral balsam. After overnight drying, observe the slide under the microscope for cartilage histology scoring.In the control group, the cartilage surface was smooth and exhibited organized chondrocyte arrangement in all layers. In contrast, the cartilage surface was rough in the KOA group and the chondrocyte arrangement was disordered. Acupotomy improved the smoothness of the cartilage surface and preserved normal chondrocyte structure.The cartilage integrity score was significantly increased in the KOA group compared to the control and acupotomy group.