fertilization-of-xenopus-oocytes-using-the-host-transfer-method

Fertilization of <em>Xenopus oocytes</em> using the Host Transfer Method

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to ...

University of Iowa

&#x80FD;&#x529B;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x751F;&#x6210;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230;&#x4E3B;&#x673A;&#x5973;&#x6027;&#x53D7;&#x5B55;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x5DF2;&#x8FC5;&#x901F;&#x5B9A;&#x6027;&#x4EA7;&#x5987;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x53D1;&#x80B2;&#x4E2D;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x4EA7;&#x5987;&#x5206;&#x6CCC;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x67AF;&#x7AED;&#x4F7F;&#x7528;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; H &#x6D3B;&#x6027;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x53CD;&#x4E49; deoxyoligonucleotides (&#x770B;)&#x3002;&#x81EA;&#x53CD;&#x4E49;&#x8BD5;&#x5242;&#x6216;&#x5206;&#x6CCC;&#x6CE8;&#x5C04;&#x9E21;&#x86CB;&#x65BD;&#x80A5;&#x5F80;&#x5F80;&#x672A;&#x80FD;&#x5F71;&#x54CD;&#x5230;&#x4EA7;&#x5987;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;mRNA &#x8017;&#x5C3D;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x540E;&#x7279;&#x522B;&#x9002;&#x5408;&#x7528;&#x6765;&#x8BC4;&#x4F30;&#x4EA7;&#x5987;&#x7684;&#x804C;&#x80FD;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x6B21;&#x5BA1;&#x67E5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x53CD;&#x4E49;&#x7684;&#x4F18;&#x52BF;&#x7A81;&#x51FA;&#x548C;&#x63CF;&#x8FF0;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x9009;&#x62E9;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x770B;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x603B;&#x7ED3;&#x65BD;&#x80A5;&#x4E3B;&#x673A;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x548C;&#x89E3;&#x91CA;&#x7684;&#x53CD;&#x4E49;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x6280;&#x672F;&#x4E0A;&#x8981;&#x6C42;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x5728;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x53CD;&#x4E49;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x89E3;&#x51B3;&#x751F;&#x7269;&#x662F;&#x5176;&#x4ED6;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x4E2D;&#x68D8;&#x624B;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;

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The ability to manipulate gene expression in Xenopus oocytes and then generate fertilized embryos by transfer into host females has made it possible to rapidly characterize maternal signaling pathways in vertebrate development. Maternal mRNAs in particular can be efficiently depleted using antisense deoxyoligonucleotides (oligos), mediated by endogenous RNase-H activity. Since the microinjection of antisense reagents or mRNAs into eggs after fertilization often fails to affect maternal signaling pathways, mRNA depletion in the Xenopus oocyte is uniquely suited to assessing maternal functions. In this review, we highlight the advantages of using antisense in Xenopus oocytes and describe basic methods for designing and choosing effective oligos. We also summarize the procedures for fertilizing cultured oocytes by host-transfer and interpreting the specificity of antisense effects. Although these methods can be technically demanding, the use of antisense in oocytes can be used to address biological questions that are intractable in other experimental settings.

The use of antisense oligonucleotides in Xenopus oocytes.

La capacit&#xE9; de manipuler l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes dans les ovocytes de Xenopus, puis g&#xE9;n&#xE9;rer des embryons f&#xE9;cond&#xE9;s par transfert dans des femelles d&#x26;#39;accueil a permis de caract&#xE9;riser rapidement maternels voies de signalisation dans le d&#xE9;veloppement des vert&#xE9;br&#xE9;s. ARNm maternels en particulier, peuvent &#xEA;tre efficacement appauvri en utilisant d&#xE9;soxyoligonucl&#xE9;otides antisens (oligos), sous la m&#xE9;diation endog&#xE8;ne RNase-H activit&#xE9;. Depuis la micro-injection de r&#xE9;actifs antisens ou ARNm dans des &#x153;ufs apr&#xE8;s la f&#xE9;condation &#xE9;choue souvent &#xE0; affecter maternels voies de signalisation, l&#x26;#39;appauvrissement de l&#x26;#39;ARNm dans l&#x26;#39;ovocyte de Xenopus est particuli&#xE8;rement bien adapt&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;valuation des fonctions maternelles. Dans cette revue, nous mettons en &#xE9;vidence les avantages de l&#x26;#39;utilisation antisens dans les ovocytes de Xenopus et d&#xE9;crire les m&#xE9;thodes de base pour la conception et le choix des oligos efficaces. Nous r&#xE9;sumons &#xE9;galement les proc&#xE9;dures de fertilisation des ovocytes en culture par l&#x26;#39;h&#xF4;te de transfert et l&#x26;#39;interpr&#xE9;tation de la sp&#xE9;cificit&#xE9; des effets antisens. Bien que ces m&#xE9;thodes peuvent &#xEA;tre techniquement difficile, l&#x26;#39;utilisation de antisens dans les ovocytes peut &#xEA;tre utilis&#xE9; pour r&#xE9;pondre &#xE0; des questions biologiques qui sont insolubles dans d&#x26;#39;autres contextes exp&#xE9;rimentaux.

L&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;oligonucl&#xE9;otides antisens dans les ovocytes de Xenopus

Genexpression in Xenopus Oocytes zu manipulieren und anschlie&szlig;end generieren befruchtete Embryonen durch &Uuml;bertragung in Host Frauen machte es m&ouml;glich, m&uuml;tterliche Signalwege in vertebrate Entwicklung rasch zu charakterisieren. M&uuml;tterliche mRNAs k&ouml;nnen besonders effizient mit antisense Deoxyoligonucleotides (Oligos), vermittelt durch endogene RNase H-Aktivit&auml;t ersch&ouml;pft sein. Seit dem Microinjection der antisense Reagenzien oder mRNAs in Eier nach Befruchtung oft nicht m&uuml;tterlichen Signalwege beeinflussen eignet mRNA Ersch&ouml;pfung in der Eizelle Xenopus eindeutig zur Bewertung der m&uuml;tterlicher Funktionen. In diesem Bericht wir markieren die Vorteile der Verwendung von &quot;Antisense&quot; in Xenopus Oocytes und beschreiben die grundlegende Methoden f&uuml;r die Gestaltung und effektive Oligos ausw&auml;hlen. Wir fassen auch die Verfahren zur D&uuml;ngung kultivierten Eizellen von Host-Transfer und Spezifit&auml;t der antisense-Effekte zu interpretieren. Obwohl diese Methoden technisch anspruchsvoll sein k&ouml;nnen, kann die Verwendung von &quot;Antisense&quot; in Eizellen, biologische Fragen behandeln, die auf dem anderen experimentellen therapieresistente sind verwendet werden.

Die Verwendung von antisense Oligonucleotides in Xenopus Oocytes.

La capacit&agrave; di manipolare l&#39;espressione genica in ovociti di Xenopus e quindi generare embrioni fecondati dal trasferimento in femmine host ha reso possibile caratterizzare rapidamente materne segnalazione percorsi nello sviluppo vertebrato. Materna mRNAs in particolare pu&ograve; essere efficientemente impoverito utilizzando deoxyoligonucleotides antisenso (oligos), mediato da attivit&agrave; endogena di RNAsi H. Poich&eacute; la microiniezione di reagenti antisenso o mRNAs in uova dopo fecondazione spesso non riesce a incidere materna signaling pathways, deplezione di mRNA in ovocita Xenopus &egrave; univocamente adatta a valutare le funzioni materne. In questa recensione, abbiamo evidenziare i vantaggi dell&#39;utilizzo di antisenso in ovociti di Xenopus e descrivere i metodi di base per la progettazione e scegliendo i oligos efficaci. Abbiamo anche riassumere le procedure per fecondare gli ovociti colti da host-trasferimento e interpretare la specificit&agrave; degli effetti antisenso. Sebbene questi metodi possono essere tecnicamente impegnative, l&#39;uso di antisenso di ovociti pu&ograve; essere utilizzato per affrontare questioni biologiche che sono intrattabile in altre impostazioni sperimentali.

L&#39;uso di oligonucleotidi antisenso in ovociti di Xenopus.

&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x96CC;&#x3078;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x53D7;&#x7CBE;&#x80DA;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x3067;&#x6BCD;&#x65B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x6BCD;&#x6027;mRNA&#x304C;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;RNase H&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C7;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#xFF08;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x67AF;&#x6E07;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x53D7;&#x7CBE;&#x5F8C;&#x306E;&#x5375;&#x306B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x8A66;&#x85AC;&#x3084;mRNA&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x6BCD;&#x89AA;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x3066;&#x4EE5;&#x6765;&#x3001;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E2D;&#x306E;mRNA&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x304C;&#x4E00;&#x610F;&#x306B;&#x6BCD;&#x4F53;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x306E;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x200B;&#x200B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x8EE2;&#x9001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x57F9;&#x990A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5375;&#x5B50;&#x3092;&#x53D7;&#x7CBE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x89E3;&#x91C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x6280;&#x8853;&#x7684;&#x306B;&#x53B3;&#x3057;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3067;&#x306F;&#x96E3;&#x6CBB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x306A;&#x554F;&#x984C;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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Xenopus oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC870;&#xC791; &#xD558; &#xACE0; &#xC804;&#xC1A1; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC5EC;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xC815; &#xB41C; &#xBC30;&#xC544;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xBAA8;&#xC131; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xCC99;&#xCD94; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558; &#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xC131; mRNAs &#xD2B9;&#xD788; &#xC218; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACE0;&#xAC08; &#xB420; &#xC13C;&#xC2A4; deoxyoligonucleotides (oligos) &#xC0DD; RNase H &#xD65C;&#xB3D9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xACC4;&#xB780;&#xC5D0; &#xC13C;&#xC2A4; &#xC2DC; &#xC57D; &#xB610;&#xB294; Mrnas&#xC758; microinjection &#xC774;&#xD6C4; &#xBAA8;&#xC131; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC885;&#xC885; &#xC218;&#xC815; &#xC2E4;&#xD328; &#xD55C; &#xD6C4; Xenopus oocyte&#xC5D0;&#xC11C; mRNA &#xACE0;&#xAC08; &#xACE0;&#xC720; &#xD558; &#xAC8C; &#xBAA8;&#xC131; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD3C9;&#xAC00;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC80;&#xD1A0; &#xC6B0;&#xB9AC; Xenopus oocytes&#xC5D0;&#xC11C; antisense&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC758; &#xC7A5;&#xC810; &#xAC15;&#xC870; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC124;&#xACC4; &#xBC0F; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; oligos&#xB97C; &#xC120;&#xD0DD; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC804;&#xC1A1; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; oocytes&#xB97C; &#xBE44; &#xC625; &#xD558; &#xACE0; &#xC13C;&#xC2A4; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xD574;&#xC11D; &#xC808;&#xCC28; &#xC694;&#xC57D;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAE30;&#xC220;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC694;&#xAD6C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC124;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xACF5; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC9C8;&#xBB38; antisense oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Xenopus oocytes &#xC13C;&#xC2A4; oligonucleotides &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La capacidad de manipular la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica en ovocitos de Xenopus y luego generar embriones fecundados mediante la transferencia de las hembras de acogida ha permitido caracterizar con rapidez materna v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en el desarrollo de los vertebrados. MRNAs maternos, en particular, pueden ser eficientemente agotado con desoxioligonucle&#xF3;tidos antisentido (oligos), mediadas por el sistema end&#xF3;geno de RNasa H actividad. Dado que la microinyecci&#xF3;n de ARNm antisentido o reactivos en los huevos despu&#xE9;s de la fecundaci&#xF3;n no suele afectar a la madre las v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n, el agotamiento de ARNm en el ovocito de Xenopus es especialmente adecuado para la evaluaci&#xF3;n de las funciones maternas. En esta revisi&#xF3;n, se destacan las ventajas de utilizar antisentido en ovocitos de Xenopus y describir los m&#xE9;todos b&#xE1;sicos para el dise&#xF1;o y la elecci&#xF3;n de oligos eficaces. Tambi&#xE9;n se resumen los procedimientos de fertilizaci&#xF3;n de ovocitos cultivados por el anfitri&#xF3;n de transferencia y la interpretaci&#xF3;n de la especificidad de los efectos antisentido. Aunque estos m&#xE9;todos pueden ser t&#xE9;cnicamente exigentes, el uso de antisentido en oocitos se puede utilizar para tratar cuestiones biol&#xF3;gicas que son insolubles en otros par&#xE1;metros experimentales.

El uso de oligonucle&#xF3;tidos antisentido en oocitos de Xenopus

&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E2D;&#x5DE6;-&#x53F3; (LR) &#x8F74;&#x7684;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x4ECE;&#x80CC;&#x5148;&#x9A71;&#x7EC6;&#x80DE; (DFC) &#x548C;&#x5E93;&#x666E;&#x5F17;&#x7684;&#x56CA;&#x6CE1; (KV) &#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;Wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7F51;&#x7EDC;&#x5F71;&#x54CD;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x76EE;&#x524D;&#x5C1A;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x5176; LR &#x9635;&#x5217;&#x4E2D;&#x7684;&#x786E;&#x5207;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;Wnt &#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5206;&#x652F;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4; &beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x7D20;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x5316;&#x548C;&#x4E0B;&#x6E38;&#x9776;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x5176;&#x4ED6; Wnt &#x914D;&#x4F53;&#x51FA;&#x73B0; &beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x7D20;&#x8C03;&#x8282;&#x9499;&#x91CA;&#x653E;&#x548C;&#x5F71;&#x54CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6781;&#x6027;&#x72EC;&#x81EA;&#x884C;&#x52A8;&#x3002;&Beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x7D20;&#x7684;&#x7BA1;&#x5236;&#x548C;&#x6536;&#x655B;&#x6269;&#x5C55; (CE) &#x8FD0;&#x52A8;&#x534F;&#x8C03;&#x7684;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x770B;&#x8F7B; (Dvl)&#x3002;&#x88F8;&#x89D2;&#x8D28;&#x5C42; (Nkd) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x591A;&#x666E;&#x52D2;&#x8BA1;&#x7A0B;&#x4EEA;&#x548C;&#x8C03;&#x8282; &beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x7D20;-&#x4F9D;&#x8D56;&#x548C;&#x72EC;&#x7ACB; Wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E09;&#x4E2A;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C; Nkd &#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x8868;&#x73B0;&#x65B9;&#x5F0F;&#x548C;&#x8F6C;&#x8D37;&#x548C; KV nkd1 &#x67E5;&#x627E;&#x4E30;&#x5BCC;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x591A;&#x666E;&#x52D2;&#x8BA1;&#x7A0B;&#x4EEA;&#x5DF2;&#x964D;&#x7EA7;&#x540E; Nkd1 &#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x4E2D;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x7684; DFC Nkd1 &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684; &beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x7D20;&#x6838;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x53CA;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x6539;&#x5EFA; DFC &#x8FC1;&#x79FB;&#x3001; KV &#x5F62;&#x6210;&#x3001; ciliogenesis &#x548C; LR &#x9635;&#x5217;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x8282;&#x70B9;&#x7684;&#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x8868;&#x8FBE;&#x56F4;&#x7ED5; KV &#x548C; Nkd1 &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x58EC;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x663E;&#x793A;&#x5361;&#x620E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A; Nkd1 &#x4F5C;&#x4E3A;&#x5FC5;&#x8981;&#x7528;&#x4E8E; LR &#x9635;&#x5217;&#x8F6C;&#x8D37; &beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x7D20;&#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x3002;

&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C; Nkd1 &#x4FC3;&#x8FDB;&#x5FB3;&#x94ED;&#x9000;&#x5316;&#x5E76;&#x9700;&#x7528;&#x4E8E;&#x5DE6;-&#x53F3;&#x9635;&#x5217;&#x3002;

The establishment of the left-right (LR) axis in zebrafish embryos relies on signals from the dorsal forerunner cells (DFC) and the Kupffer's vesicle (KV). While the Wnt signaling network influences many aspects of embryonic development, its precise role in LR patterning is still unclear. One branch of the Wnt network leads to stabilization of Î²-catenin and activation of downstream target genes. Other Wnt ligands appear to act independently of Î²-catenin to modulate calcium release and influence cell polarity. Central to regulation of Î²-catenin and coordination of convergent extension (CE) movements is Dishevelled (Dvl). Naked Cuticle (Nkd) binds Dvl and modulates Î²-catenin-dependent and independent Wnt signaling. Here, we analyze the expression patterns of three zebrafish Nkd homologs and find enriched expression of nkd1 in DFCs and KV. Dvl is degraded upon Nkd1 overexpression in zebrafish. Knockdown of Nkd1 specifically in the DFC results in Î²-catenin nuclear localization and transcriptional activation as well as alterations to DFC migration, KV formation, ciliogenesis and LR patterning. Furthermore, we identify asymmetric expression of the Nodal antagonist charon around the KV and show that Nkd1 knockdown impacts asymmetric charon expression. Our findings show that Nkd1 acts as a Î²-catenin antagonist in the DFCs necessary for LR patterning.

Zebrafish Nkd1 promotes Dvl degradation and is required for left-right patterning.

La mise en place de l&#39;axe gauche-droite (LR) des embryons de poisson-z&egrave;bre s&#39;appuie sur les signaux provenant des cellules de pr&eacute;curseur dorsale (DFC) et de la v&eacute;sicule de Kupffer (KV). Alors que le r&eacute;seau de signalisation Wnt influe sur de nombreux aspects du d&eacute;veloppement embryonnaire, son r&ocirc;le pr&eacute;cis dans la structuration de la LR est encore incertain. Une branche du r&eacute;seau Wnt m&egrave;ne &agrave; la stabilisation de la &beta;-cat&eacute;nine et l&#39;activation de g&egrave;nes cibles en aval. Autres ligands Wnt semblent agir ind&eacute;pendamment de &beta;-cat&eacute;nine modulent la lib&eacute;ration de calcium et d&#39;influencer la polarit&eacute; cellulaire. Au c&oelig;ur de la r&eacute;glementation de la &beta;-cat&eacute;nine et la coordination des mouvements d&#39;extension convergente (CE) est d&eacute;braill&eacute; (Dvl). Cuticule nu (Nkd) lie Dvl et module la &beta;-cat&eacute;nine-d&eacute;pendants et ind&eacute;pendants de signalisation Wnt. Ici, nous analysons les patrons d&#39;expression de trois dards-perches Nkd homologues et expression de la recherche enrichie de nkd1 DFCs et KV. DVL est d&eacute;grad&eacute; &agrave; la surexpression de la Nkd1 chez le poisson z&egrave;bre. Pr&eacute;cipitation de Nkd1 plus pr&eacute;cis&eacute;ment dans la DFC entra&icirc;ne localisation nucl&eacute;aire de &beta;-cat&eacute;nine et activation de la transcription ainsi que les modifications &agrave; la migration du DFC, formation KV, ciliogenesis et structuration de LR. En outre, nous identifions une expression asym&eacute;trique de l&#39;antagoniste Nodal charon autour le KV et de montrer que Nkd1 knockdown impacts asym&eacute;triques expression de charon. Nos r&eacute;sultats montrent que Nkd1 agit comme un antagoniste de la &beta;-cat&eacute;nine dans les DFCs n&eacute;cessaires &agrave; la structuration de LR.

Zebrafish Nkd1 favorise la d&eacute;gradation Dvl et est requis pour la structuration de la gauche-droite.

Die Einrichtung der Links-Rechts (LR) Achse in den Zebrafish Embryos st&uuml;tzt sich auf Signale von der dorsalen Vorl&auml;ufer-Zellen (DFC) und die Kupffer Telson (KV). W&auml;hrend das Wnt Signalling Netzwerk viele Aspekte der embryonalen Entwicklung beeinflusst, ist seine genaue Rolle in LR Musterung noch unklar. Ein Zweig des Wnt-Netzes f&uuml;hrt zur Stabilisierung der &beta;-Catenin und Aktivierung der nachgeschalteten Zielgene. Andere Wnt-Liganden erscheinen agieren unabh&auml;ngig von &beta;-Catenin zu modulieren Freisetzung von Kalzium und Zellpolarit&auml;t zu beeinflussen. Von zentraler Bedeutung f&uuml;r die Regulierung von &beta;-Catenin und Koordination der Bewegungen der konvergenten Erweiterung (CE) ist Dishevelled (Dvl). Nackt Kutikula (Nkd) bindet Dvl und moduliert, &beta;-Catenin-abh&auml;ngigen und unabh&auml;ngigen Wnt signalisieren. Hier analysieren wir der Ausdruck der drei Zebrafisch Nkd UCP1 und bereichert Suchausdruck der nkd1 DFCs und KV. Dvl wird auf Nkd1 eine &Uuml;berexpression in Zebrafisch beeintr&auml;chtigt werden. Niederschlag von Nkd1 speziell im DFC f&uuml;hrt &beta;-Catenin nukleare Lokalisierung und transkriptionelle Aktivierung sowie &Auml;nderungen und DFC-Migration, KV Bildung, Ciliogenesis und LR-Musterung. Dar&uuml;ber hinaus identifizieren wir asymmetrische Ausdruck des Nodal Antagonisten Charon rund um die KV und zeigen, dass Nkd1 Niederschlag asymmetrischen Charon Ausdruck auswirkt. Unsere Ergebnisse zeigen, dass Nkd1 als ein &beta;-Catenin-Antagonist in den DFCs f&uuml;r LR Musterung fungiert.

Zebrafish Nkd1 f&ouml;rdert die Dvl Abbau- und f&uuml;r Links-rechts-Musterung ist erforderlich.

L&#39;istituzione dell&#39;asse sinistra-destra (LR) in embrioni di zebrafish si basa sui segnali dalle cellule del precursore dorsale (DFC) e vescicola di Kupffer (KV). Mentre la rete di segnalazione Wnt influenza molti aspetti dello sviluppo embrionale, il suo ruolo preciso nella serie LR &egrave; ancora chiaro. Un ramo della rete Wnt conduce alla stabilizzazione della &beta;-catenina e attivazione dei geni bersaglio a valle. Altri leganti Wnt sembrano agire indipendentemente da &beta;-catenina di modulare il rilascio di calcio e l&#39;influenza di polarit&agrave; delle cellule. Centrale di regolazione della &beta;-catenina e il coordinamento dei movimenti di estensione convergente (CE) &egrave; Dishevelled (Dvl). Cuticola nudo (Nkd) associa Dvl e modula la &beta;-catenina-dipendente e indipendente segnalazione Wnt. Qui, analizziamo i pattern di espressione di tre zebrafish Nkd omologhi e arricchito di trovare espressione di nkd1 in profondit&agrave; e KV. DVL &egrave; degradata su Nkd1 sovraespressione in zebrafish. Atterramento di Nkd1 in particolare il DFC risultati in &beta;-catenina nucleare di localizzazione e attivazione trascrizionale, nonch&eacute; alterazioni alla migrazione DFC, KV formazione, ciliogenesis e patterning LR. Inoltre, ci identifichiamo espressione asimmetrica dell&#39;antagonista nodale Caronte intorno il KV e visualizza che Nkd1 atterramento impatti asimmetrici espressione di Caronte. I nostri risultati mostrano che Nkd1 agisce come un antagonista di &beta;-catenina nella profondit&agrave; necessaria per creare una serie LR.

Zebrafish Nkd1 promuove la degradazione Dvl ed &egrave; richiesto per sinistra-destra patterning.

&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5DE6;&#x53F3; &#xFF08;LR&#xFF09; &#x8EF8;&#x306E;&#x6210;&#x7ACB; (DFC) &#x306E;&#x80CC;&#x5074;&#x306E;&#x524D;&#x8EAB;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30AF;&#x30C3;&#x30D1;&#x30FC;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE; (KV) &#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x80DA;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E; LR &#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30D6;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x3068;&#x4E0B;&#x6D41;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B; &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6; Wnt &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x6975;&#x6027;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3059; &beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x3068;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x53CE;&#x675F;&#x306E;&#x62E1;&#x5F35; (CE) &#x904B;&#x52D5;&#x306E;&#x5354;&#x8ABF;&#x3068; &beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x4E2D;&#x592E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304F;&#x3057;&#x3083;&#x304F;&#x3057;&#x3083; &#xFF08;Dvl&#xFF09;&#x3002;&#x88F8;&#x30AD;&#x30E5;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30EB; (Nkd) Dvl &#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3068;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F; wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x5909;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;3 &#x3064;&#x306E;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5; Nkd &#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Dfc &#x3068; KV nkd1 &#x306E;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x691C;&#x7D22;&#x306E;&#x6B63;&#x898F;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Dvl &#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5; Nkd1 &#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x6642;&#x306B;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;DFC &#x3067;&#x306F;&#x7279;&#x306B; Nkd1 &#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x6838;&#x5C40;&#x5728;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x5909;&#x5316; KV &#x5F62;&#x6210;&#x3001;&#x7E4A;&#x6BDB; LR &#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;DFC &#x79FB;&#x884C;&#x7D50;&#x679C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x306E;&#x62EE;&#x6297;&#x85AC;&#x306E;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x5F0F;&#x3092;&#x8B58;&#x5225; charon KV &#x3068; Nkd1 &#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0; charon &#x5F0F;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;&#x306E;&#x5468;&#x308A;&#x3002;Nkd1 LR &#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A; Dfc &#x3067;&#x306F; &beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x62EE;&#x6297;&#x85AC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5; Nkd1 Dvl &#x52A3;&#x5316;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x3066;&#x5DE6;&#x53F3;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

Zebrafish &#xD0DC;&#xC544;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC67C;&#xCABD;-&#xC624;&#xB978;&#xCABD; (LR) &#xCD95; &#xC124;&#xB9BD; &#xB4F1; &#xC804;&#xAD6C; &#xC138;&#xD3EC; (DFC)&#xC640; Kupffer&#xC758; &#xC18C;&#xD3EC; (KV)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Wnt &#xC2E0;&#xD638; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xBC30;&#xC544; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE69;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xB3D9;&#xC548; LR &#xD328;&#xD134;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xC544;&#xC9C1; &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85;. Wnt &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xD55C; &#xC9C0;&#xC810; &beta;-catenin&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xAC00; &#xB048;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; Wnt ligands &#xCE7C;&#xC298; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xC870;&#xC640; &#xC140; &#xADF9;&#xC131; &#xC601;&#xD5A5;&#xB825; &beta;-catenin &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xB4EF;&#xD558;&#xB2E4;. &Beta;-catenin&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58; &#xD655;&#xC7A5; (CE)&#xC758; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC744; &#xC870;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC559; &#xD588;&#xB2E4; (Dvl). &#xBC8C; &#xAC70; &#xBC97;&#xC740; &#xD45C; &#xD53C; (&#xD0C8;&#xBD81;&#xC790;) Dvl &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &beta;-catenin &#xC885;&#xC18D; &#xBC0F; &#xB3C5;&#xB9BD; Wnt &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xBCC0;&#xC870; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC138; zebrafish &#xD0C8;&#xBD81;&#xC790; homologs&#xC758; &#xC2DD; &#xD328;&#xD134; &#xBC0F; Dfcs&#xC640; KV nkd1&#xC758; &#xB18D;&#xCD95; &#xCC3E;&#xAE30; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D;. Dvl zebrafish&#xC758; Nkd1 overexpression&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC800;&#xD558; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xC800;&#xB294; DFC&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788; nkd1&#xC758; &#xBCC0;&#xACBD; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &beta;-catenin &#xD575; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654; LR &#xD328;&#xD134;&#xD654;, ciliogenesis, KV &#xD615;&#xC131;, DFC &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAFB8;&#xBC85;&#xAFB8;&#xBC85; &#xC878; &#xAE30; &#xAE38; &#xD56D; &#xADFC;&#xC758; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xC2DD; &#xC2DD;&#xBCC4; KV&#xC640; Nkd1 &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xCE74; &#xB860; &#xC2DD; &#xC1FC; &#xCE74; &#xB860;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; Nkd1 &#xC5ED;&#xD560; DFCs LR &#xD328;&#xD134;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xC5D0;&#xC11C; &beta;-catenin &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Zebrafish Nkd1 Dvl &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558; &#xACE0; &#xC88C;&#xC6B0; &#xD328;&#xD134;&#xD654; &#xD560; &#xD544;&#xC694;.

El establecimiento del eje izquierda-derecha (LR) en embriones de pez cebra se basa en las se&ntilde;ales de las c&eacute;lulas del precursor dorsal (DFC) y ves&iacute;cula de Kupffer (KV). Mientras que la red de se&ntilde;alizaci&oacute;n de Wnt influye en muchos aspectos del desarrollo embrionario, su papel exacto en patrones de LR es todav&iacute;a confusa. Una rama de la red de Wnt lleva a estabilizaci&oacute;n de &beta;-catenina y activaci&oacute;n de los genes diana. Otros ligandos Wnt parecen actuar independientemente de &beta;-catenina para modular la liberaci&oacute;n de calcio e influir la polaridad celular. Central a la regulaci&oacute;n de &beta;-catenina y coordinaci&oacute;n de los movimientos de extensi&oacute;n convergente (CE) es despeinada (Dvl). Cut&iacute;cula desnuda (Nkd) ATA Dvl y modula la &beta;-catenina-dependiente y la independiente de la se&ntilde;alizaci&oacute;n de Wnt. Aqu&iacute;, se analizan los patrones de expresi&oacute;n de tres peces cebra Nkd hom&oacute;logos y encontrar enriquecida expresi&oacute;n de nkd1 en DFCs y KV. DVL se degrada a la sobreexpresi&oacute;n de Nkd1 en pez cebra. Ca&iacute;da de Nkd1 espec&iacute;ficamente en el DFC resulta en la localizaci&oacute;n nuclear de &beta;-catenina y activaci&oacute;n transcripcional, as&iacute; como alteraciones a migraci&oacute;n de DFC, formaci&oacute;n de KV, ciliogenesis y patrones de LR. Adem&aacute;s, identificamos la expresi&oacute;n asim&eacute;trica de Nodal antagonista charon alrededor del KV y mostrar que Nkd1 ca&iacute;da afecta la expresi&oacute;n asim&eacute;trica de Caronte. Nuestros resultados muestran que el Nkd1 act&uacute;a como un antagonista de &beta;-catenina en los DFCs necesarios para modelar LR.

Zebrafish Nkd1 promueve la degradaci&oacute;n de Dvl y es necesaria para modelar de izquierda a derecha.

&#x53CD;&#x4E49;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5E38;&#x7528;&#x6765;&#x7814;&#x7A76;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;Phosphorodiamidate &#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; morpholino (morpholinos) &#x88AB;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7528;&#x4E8E;&#x963B;&#x6B62;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x6216;&#x62FC;&#x63A5;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x54C1;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x8FD8;&#x6CA1;&#x6709;&#x8C03;&#x67E5;&#x5176;&#x4ED6;&#x4FEE;&#x6539;&#x5728;&#x8C03;&#x89E3;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; H &#x72EC;&#x7ACB;&#x6D3B;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E2D;&#x7684;&#x7528;&#x5904;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5B8C;&#x5168;&#x4FEE;&#x6539; 2&#39;-O-&#x7532;&#x57FA;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; (2&#39;-&#x9752;&#x6885;&#x770B;&#xFF09; &#x53EF;&#x4EE5;&#x5145;&#x5F53;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x6291;&#x5236;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x3001; &#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x8BD5;&#x5242;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x770B;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE; &beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x7D20;&#x3001; wnt11 &#x548C; bmp4&#xFF0C;&#x53CD;&#x5BF9;&#x548C;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C; chordin (chd) &#x53EF;&#x4EE5;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x548C;&#x4E13;&#x95E8;&#x751F;&#x6210;&#x80DA;&#x80CE;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x8868;&#x578B;&#x5AB2;&#x7F8E; morpholino &#x6CE8;&#x5C04;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x5B8C;&#x5168;&#x4FEE;&#x6539; 2&#39;-&#x9752;&#x6885;&#x770B;&#x53EF;&#x5145;&#x5F53;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; H &#x72EC;&#x7ACB;&#x53CD;&#x4E49;&#x8BD5;&#x5242;&#x5728;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5E76;&#x56E0;&#x6B64;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x4E3A; morpholinos &#x5728;&#x67D0;&#x4E9B;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x66FF;&#x4EE3;&#x6027;&#x4FEE;&#x6539;&#x3002;&copy; 2010&#x5E74;&#x5A01;&#x5229;&#x65AF;&#x516C;&#x53F8;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x5B8C;&#x5168;&#x4FEE;&#x6539; 2&#39;-O-&#x7532;&#x57FA;&#x53CD;&#x4E49;&#x770B;&#xFF0C;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E22;&#x5931;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

Antisense oligonucleotides are commonly employed to study the roles of genes in development. Although morpholino phosphorodiamidate oligonucleotides (morpholinos) are widely used to block translation or splicing of target gene products, the usefulness of other modifications in mediating RNase-H independent inhibition of gene activity in embryos has not been investigated. In this study, we investigated the extent that fully modified 2'-O-methyl oligonucleotides (2'-OMe oligos) can function as translation inhibiting reagents in vivo, using Xenopus and zebrafish embryos. We find that oligos against Xenopus Î²-catenin, wnt11 and bmp4, and against zebrafish chordin (chd) can efficiently and specifically generate embryonic loss-of-function phenotypes comparable to morpholino injection and other methods. These results show that fully modified 2'-OMe oligos can function as RNase-H independent antisense reagents in vertebrate embryos and can thus serve as an alternative modification to morpholinos in some cases. Â© 2010 Wiley-Liss, Inc.

Use of fully modified 2'-O-methyl antisense oligos for loss-of-function studies in vertebrate embryos.

Les oligonucl&#xE9;otides antisens sont couramment utilis&#xE9;s pour &#xE9;tudier les r&#xF4;les des g&#xE8;nes dans le d&#xE9;veloppement. Bien que morpholino oligonucl&#xE9;otides phosphorodiamidate (morpholinos) sont largement utilis&#xE9;s pour bloquer la traduction ou l&#x26;#39;&#xE9;pissage de produits de g&#xE8;nes cibles, l&#x26;#39;utilit&#xE9; d&#x26;#39;autres modifications dans la m&#xE9;diation de RNase-H inhibition ind&#xE9;pendante de l&#x26;#39;activit&#xE9; des g&#xE8;nes dans les embryons n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;es. Dans cette &#xE9;tude, nous avons &#xE9;tudi&#xE9; dans la mesure o&#xF9; pleinement modifi&#xE9;s 2&#x26;#39;-O-m&#xE9;thyle oligonucl&#xE9;otides (2&#x26;#39;-OMe oligos) peut fonctionner en tant que r&#xE9;actifs inhibition de la traduction in vivo, en utilisant le X&#xE9;nope et embryons de poisson z&#xE8;bre. Nous constatons que les oligos contre Xenopus &#x3B2;-cat&#xE9;nine, wnt11 et bmp4, et contre le poisson-z&#xE8;bre chordine (chd) peut efficacement et sp&#xE9;cifiquement g&#xE9;n&#xE9;rer embryonnaires perte de fonction des ph&#xE9;notypes comparables &#xE0; l&#x26;#39;injection de morpholino et d&#x26;#39;autres m&#xE9;thodes. Ces r&#xE9;sultats montrent que bien modifi&#xE9;s 2&#x26;#39;-OMe oligos peut fonctionner comme RNase-H r&#xE9;actifs antisens ind&#xE9;pendants dans les embryons de vert&#xE9;br&#xE9;s et peut ainsi servir d&#x26;#39;alternative &#xE0; la modification morpholinos dans certains cas. &#xA9; 2010 Wiley-Liss,

Utilisez de Fully oligos modifi&#xE9;s antisens 2&#x26;#39;-O-m&#xE9;thyle pour la perte de de fonction &#xE9;tudes dans les embryons de vert&#xE9;br&#xE9;s

Antisense Oligonukleotide werden h&auml;ufig eingesetzt, um die Rolle der Gene bei der Entwicklung zu studieren. Obwohl Morpholino Phosphorodiamidate Oligonukleotide (Morpholinos) weit verbreitet sind, &Uuml;bersetzung oder Splei&szlig;en von Genprodukten Ziel zu blockieren, ist die N&uuml;tzlichkeit der andere &Auml;nderungen bei der Vermittlung von RNase-H unabh&auml;ngige Hemmung der Genaktivit&auml;t in Embryonen nicht untersucht worden. In dieser Studie untersuchten wir das Ausma&szlig;, die 2&#39;-O-Methyl vollst&auml;ndig ge&auml;ndert Oligonukleotide (2&#39;-OMe Oligos) k&ouml;nnen als &Uuml;bersetzung Hemmung Reagenzien in vivo mit Xenopus und Zebrafish Embryos funktionieren. Wir finden, dass Oligos gegen Xenopus &beta;-Catenin, wnt11 und bmp4 und gegen Zebrafisch chordin (KHK) effizient und gezielt embryonale Verlustfunktion der Ph&auml;notypen Morpholino-Injektion und anderen Methoden vergleichbar generieren k&ouml;nnen. Diese Ergebnisse zeigen, dass voll modifizierte 2&#39;-OMe Oligos kann als RNase-H unabh&auml;ngige antisense Reagenzien in den vertebrate Embryos und kann somit als eine alternative Ver&auml;nderung an Morpholinos in einigen F&auml;llen dienen. &copy; 2010 Wiley-Liss, Inc.

Benutzung des voll modifizierte Oligos der 2&#39;-O-Methyl-antisense Verlustfunktion von Studien in den vertebrate Embryos.

Oligonucleotidi antisenso sono comunemente impiegati per studiare il ruolo dei geni nello sviluppo. Sebbene oligonucleotides phosphorodiamidate oligonucleotidi (morpholinos) sono ampiamente usati per bloccare la traduzione o la giunzione dei prodotti del gene bersaglio, l&#39;utilit&agrave; di altre modifiche nel mediare l&#39;inibizione indipendente RNasi H di attivit&agrave; del gene in embrioni non &egrave; stato studiato. In questo studio, abbiamo studiato nella misura in cui completamente modificato i oligonucleotides 2&#39;--O metil (2&#39;-OMe oligos) pu&ograve; funzionare come traduzione inibendo i reagenti in vivo, utilizzando embrioni di Xenopus, zebrafish. Troviamo che i oligos contro Xenopus &beta;-catenina, wnt11 e bmp4 e contro chordin zebrafish (chd) pu&ograve; efficientemente e in modo specifico generare embrionali perdita di funzione fenotipi paragonabili a iniezione oligonucleotides e altri metodi. Questi risultati mostrano che completamente modificato 2&#39;-OMe oligos pu&ograve; funzionare come indipendenti reagenti antisenso RNasi H in embrioni di vertebrati e quindi pu&ograve; servire come una modifica alternativa a morpholinos in alcuni casi. &copy; 2010 Wiley-Liss, Inc.

Uso di completamente modificato 2&#39;--O metil oligos antisenso per studi di perdita di funzione in embrioni di vertebrati.

&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E2;&#x30EB;&#x30DB;&#x30EA;&#x30CE;phosphorodiamidate&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#xFF08;morpholinos&#xFF09;&#x304C;&#x5E83;&#x304F;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3084;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x963B;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;RNase-H&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x4ED6;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x304C;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;2&#x26;#39;-O-&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#xFF08;2&#x26;#39;-OMe&#x3067;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#xFF09;&#x306F;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x3068;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x80DA;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x8A66;&#x85AC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x3B2;&#x200B;&#x200B;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x3001;wnt11&#x3068;BMP4&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x3066;&#x3001;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;chordin&#xFF08;CHD&#xFF09;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x30E2;&#x30EB;&#x30DB;&#x30EA;&#x30CE;&#x6CE8;&#x5165;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B;&#x80DA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x55AA;&#x5931;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;2&#x26;#39;-OMe&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x306F;&#x3001;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x80DA;&#x3067;&#x306E;RNase H&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x8A66;&#x85AC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;morpholinos&#x306E;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; &#xA9;2010&#x30EF;&#x30A4;&#x30EA;&#x30FC;&#x30EA;&#x30B9;&#x682A;&#x5F0F;&#x4F1A;&#x793E;

&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x55AA;&#x5931;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;2&#x26;#39;-O-&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;

&#xC13C;&#xC2A4; oligonucleotides &#xC5F0;&#xAD6C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Morpholino phosphorodiamidate oligonucleotides (morpholinos)&#xB294; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xBCC0;&#xD658; &#xB610;&#xB294; &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xC811;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC218;&#xC815; RNase H &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC720;&#xC6A9;&#xC131; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB294; &#xAC83;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xBA54; 2&#39;-O-&#xD2F8; &#xC218;&#xC815; &#xC815;&#xB3C4; &#xC870;&#xC0AC; oligonucleotides (2&#39;-&#xC624;&#xBA54; oligos) &#xBC88;&#xC5ED; &#xC2DC; &#xC57D; in vivo, Xenopus &#xBC0F; zebrafish &#xD0DC;&#xC544;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8;&#xB7F0; oligos zebrafish chordin (chd)&#xC640; Xenopus &beta;-catenin, wnt11, bmp4&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC30;&#xC544; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC190;&#xC2E4; &#xACE0;&#xAE30; morpholino &#xC8FC;&#xC0AC;&#xC640; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xCC3E;&#xC73C;&#xC2ED;&#xC2DC;&#xC624;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; 2&#39;-&#xC624;&#xBA54; oligos &#xCC99;&#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; RNase H &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC13C;&#xC2A4; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; morpholinos &#xB300;&#xCCB4; &#xC218;&#xC815; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &copy; 2010&#xC640; &#xC77C;&#xB9AC; Liss, inc.

&#xCC99;&#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC190;&#xC2E4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xBA54; 2&#39;-O-&#xD2F8; &#xC13C;&#xC2A4; oligos&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;.

Los oligonucle&#xF3;tidos antisentido son com&#xFA;nmente empleadas para estudiar las funciones de los genes en el desarrollo. Aunque morpholino oligonucle&#xF3;tidos (fosforodiamidos morfolinos) son ampliamente utilizados para bloquear la traducci&#xF3;n o empalme de los productos del gen diana, la utilidad de otras modificaciones en la mediaci&#xF3;n de RNasa H inhibici&#xF3;n independiente de la actividad del gen en los embriones no se ha investigado. En este estudio, se determin&#xF3; la medida en que totalmente modificados 2&#x26;#39;-O-metil oligonucle&#xF3;tidos (2&#x26;#39;-OMe oligos) pueden funcionar como reactivos de inhibir la traducci&#xF3;n en vivo, utilizando Xenopus y embriones de pez cebra. Encontramos que los oligos contra Xenopus &#x3B2;-catenina, wnt11 y BMP4, y en contra de pez cebra Chordin (CHD) de manera eficiente y, espec&#xED;ficamente, generar embriones de p&#xE9;rdida de funci&#xF3;n de fenotipos similares a la inyecci&#xF3;n de morfolino y otros m&#xE9;todos. Estos resultados muestran que completamente modificados 2&#x26;#39;-OMe oligos puede funcionar como RNasa H reactivos antisentido independientes en embriones de vertebrados y por lo tanto puede servir como una modificaci&#xF3;n alternativa a morfolinos en algunos casos. &#xA9; 2010 Wiley-Liss, Inc.

El uso de oligonucle&#xF3;tidos antisentido completamente modificados 2&#x26;#39;-O-metiltransferasa de Estudios de la p&#xE9;rdida de funci&#xF3;n en embriones de los vertebrados

&#x53CD;&#x4E49;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5E38;&#x7528;&#x6765;&#x7814;&#x7A76;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1; morpholino phosphorodiamidate &#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; (morpholinos) &#x5E7F;&#x6CDB;&#x7528;&#x4E8E;&#x963B;&#x6B62;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x6216;&#x62FC;&#x63A5;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x54C1;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x4FEE;&#x6539;&#x5728;&#x8C03;&#x89E3;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; H &#x72EC;&#x7ACB;&#x6D3B;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E2D;&#x7684;&#x7528;&#x5904;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D7;&#x5230;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x5B8C;&#x5168;&#x4FEE;&#x6539; 2&#39;-O-&#x7532;&#x57FA;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; (2&#39;-&#x9752;&#x6885;&#x770B;)&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x6291;&#x5236;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x8BD5;&#x5242;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x81F4;&#x4F7F;&#x7528;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x3001; &#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x770B;&#x53CD;&#x5BF9;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE; &beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x7D20;&#x3001; wnt11 &#x548C; bmp4 &#x548C;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C; chordin (&#x51A0;&#x5FC3;&#x75C5;)&#xFF0C;&#x5B83;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x5730;&#x548C;&#x4E13;&#x95E8;&#x751F;&#x6210; morpholino &#x6CE8;&#x5C04;&#x6DB2;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x65B9;&#x6CD5;&#x76F8;&#x6BD4;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E22;&#x5931;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x5B8C;&#x5168;&#x4FEE;&#x6539; 2&#39;-&#x9752;&#x6885;&#x770B;&#x53EF;&#x5145;&#x5F53;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; H &#x72EC;&#x7ACB;&#x53CD;&#x4E49;&#x8BD5;&#x5242;&#x5728;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5E76;&#x56E0;&#x6B64;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x4E3A; morpholinos &#x5728;&#x67D0;&#x4E9B;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x66FF;&#x4EE3;&#x6027;&#x4FEE;&#x6539;&#x3002;

Antisense oligonucleotides are commonly employed to study the roles of genes in development. Although morpholino phosphorodiamidate oligonucleotides (morpholinos) are widely used to block translation or splicing of target gene products' the usefulness of other modifications in mediating RNase-H independent inhibition of gene activity in embryos has not been investigated. In this study, we investigated the extent that fully modified 2'-O-methyl oligonucleotides (2'-OMe oligos) that can function as translation inhibiting reagents in vivo, using Xenopus and zebrafish embryos. We find that oligos against Xenopus Î²-catenin, wnt11, and bmp4 and against zebrafish chordin (chd), which can efficiently and specifically generate embryonic loss-of-function phenotypes comparable with morpholino injection and other methods. These results show that fully modified 2'-OMe oligos can function as RNase-H independent antisense reagents in vertebrate embryos and can thus serve as an alternative modification to morpholinos in some cases.

Les oligonucl&#xE9;otides antisens sont couramment utilis&#xE9;s pour &#xE9;tudier les r&#xF4;les des g&#xE8;nes dans le d&#xE9;veloppement. Bien que morpholino oligonucl&#xE9;otides phosphorodiamidate (morpholinos) sont largement utilis&#xE9;s pour bloquer la traduction ou l&#x26;#39;&#xE9;pissage de produits de g&#xE8;nes cibles &#xAB;l&#x26;#39;utilit&#xE9; d&#x26;#39;autres modifications dans la m&#xE9;diation de RNase-H inhibition ind&#xE9;pendante de l&#x26;#39;activit&#xE9; des g&#xE8;nes dans les embryons n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;es. Dans cette &#xE9;tude, nous avons &#xE9;tudi&#xE9; dans la mesure o&#xF9; pleinement modifi&#xE9;s 2&#x26;#39;-O-m&#xE9;thyle oligonucl&#xE9;otides (2&#x26;#39;-OMe oligos) qui peuvent fonctionner en tant que r&#xE9;actifs inhibition de la traduction in vivo, en utilisant le X&#xE9;nope et embryons de poisson z&#xE8;bre. Nous constatons que les oligos contre Xenopus &#x3B2;-cat&#xE9;nine, wnt11, et bmp4 et contre le poisson-z&#xE8;bre chordine (chd), qui peut efficacement et sp&#xE9;cifiquement g&#xE9;n&#xE9;rer embryonnaires perte de fonction des ph&#xE9;notypes comparables avec injection morpholino et d&#x26;#39;autres m&#xE9;thodes. Ces r&#xE9;sultats montrent que bien modifi&#xE9;s 2&#x26;#39;-OMe oligos peut fonctionner comme RNase-H r&#xE9;actifs antisens ind&#xE9;pendants dans les embryons de vert&#xE9;br&#xE9;s et peut ainsi servir d&#x26;#39;alternative &#xE0; la modification morpholinos dans certains cas.

Antisense Oligonukleotide werden h&auml;ufig eingesetzt, um die Rolle der Gene bei der Entwicklung zu studieren. Obwohl Morpholino Phosphorodiamidate Oligonukleotide (Morpholinos) weit verbreitet sind, &Uuml;bersetzung oder Splei&szlig;en von Genprodukten Ziel zu blockieren ist die N&uuml;tzlichkeit der andere &Auml;nderungen bei der Vermittlung von RNase-H unabh&auml;ngige Hemmung der Genaktivit&auml;t in Embryonen nicht untersucht worden. In dieser Studie untersuchten wir insoweit die voll 2&#39;-O-Methyl-Oligonukleotide (2&#39;-OMe Oligos) ge&auml;ndert, die als Reagenzien in vivo Hemmung &Uuml;bersetzung funktionieren kann mit Xenopus und Zebrafish Embryos. Wir finden, dass Oligos gegen Xenopus &beta;-Catenin, wnt11 und bmp4 und Zebrafisch chordin (KHK), die effizient und speziell generieren embryonale Verlustfunktion der Ph&auml;notypen mit Morpholino Injektion und anderen Methoden vergleichbar. Diese Ergebnisse zeigen, dass voll modifizierte 2&#39;-OMe Oligos kann als RNase-H unabh&auml;ngige antisense Reagenzien in den vertebrate Embryos und kann somit als eine alternative Ver&auml;nderung an Morpholinos in einigen F&auml;llen dienen.

Oligonucleotidi antisenso sono comunemente impiegati per studiare il ruolo dei geni nello sviluppo. Sebbene oligonucleotides phosphorodiamidate oligonucleotidi (morpholinos) sono ampiamente utilizzati per bloccare la traduzione o la giunzione dei prodotti del gene bersaglio non &egrave; stata studiata l&#39;utilit&agrave; di altre modifiche nel mediare l&#39;inibizione indipendente RNasi H di attivit&agrave; del gene in embrioni. In questo studio, abbiamo studiato nella misura in cui completamente modificato i oligonucleotides 2&#39;--O metil (2&#39;-OMe oligos) che pu&ograve; funzionare come traduzione inibendo i reagenti in vivo, utilizzando embrioni di Xenopus, zebrafish. Troviamo che i oligos contro Xenopus &beta;-catenina, wnt11 e bmp4 e zebrafish chordin (chd), che pu&ograve; efficacemente e generare specificamente embrionali perdita di funzione fenotipi paragonabili con iniezione oligonucleotides e altri metodi. Questi risultati mostrano che completamente modificato 2&#39;-OMe oligos pu&ograve; funzionare come indipendenti reagenti antisenso RNasi H in embrioni di vertebrati e quindi pu&ograve; servire come una modifica alternativa a morpholinos in alcuni casi.

&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E2;&#x30EB;&#x30DB;&#x30EA;&#x30CE;phosphorodiamidate&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#xFF08;morpholinos&#xFF09;&#x304C;&#x5E83;&#x304F;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3084;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x963B;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C; &#x26;quot;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;RNase-H&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x4ED6;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x304C;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x3084;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x80DA;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x8A66;&#x85AC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;2&#x26;#39;-O-&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#xFF08;2&#x26;#39;-OMe&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#xFF09;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x305F;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x3B2;&#x200B;&#x200B;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x3001;wnt11&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;BMP4&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x30E2;&#x30EB;&#x30DB;&#x30EA;&#x30CE;&#x6CE8;&#x5165;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3068;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x80DA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x55AA;&#x5931;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;chordin&#xFF08;CHD&#xFF09;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;2&#x26;#39;-OMe&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x306F;&#x3001;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x80DA;&#x3067;&#x306E;RNase H&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x8A66;&#x85AC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;morpholinos&#x306E;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#xC13C;&#xC2A4; oligonucleotides &#xC5F0;&#xAD6C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Morpholino (morpholinos) phosphorodiamidate oligonucleotides &#xCC28;&#xB2E8; &#xBCC0;&#xD658; &#xB610;&#xB294; &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xC811;&#xD569;&#xC5D0; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC218;&#xC815; RNase H &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC720;&#xC6A9;&#xC131; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB294; &#xAC83;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; Xenopus &#xBC0F; zebrafish &#xD0DC;&#xC544;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xC218;&#xC815; &#xBA54; 2&#39;-O-&#xD2F8; oligonucleotides (2&#39;-&#xC624;&#xBA54; oligos) &#xBC88;&#xC5ED; &#xC2DC; &#xC57D; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC815;&#xB3C4; &#xC870;&#xC0AC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC218; &#xD558; &#xACE0; &#xD2B9;&#xD788; &#xBC30;&#xC544; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC190;&#xC2E4; &#xACE0;&#xAE30; morpholino &#xC0AC;&#xCD9C; &#xBC0F; &#xAE30;&#xD0C0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xBE44;&#xAD50;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; zebrafish chordin (chd)&#xC640; Xenopus &beta;-catenin, wnt11, &#xBC0F; bmp4&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xADF8; oligos&#xB97C; &#xCC3E;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; 2&#39;-&#xC624;&#xBA54; oligos &#xCC99;&#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; RNase H &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC13C;&#xC2A4; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; morpholinos &#xB300;&#xCCB4; &#xC218;&#xC815; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Los oligonucle&#xF3;tidos antisentido son com&#xFA;nmente empleadas para estudiar las funciones de los genes en el desarrollo. Aunque morfolino oligonucle&#xF3;tidos fosforodiamidos (morfolinos) son ampliamente utilizados para bloquear la traducci&#xF3;n o empalme de los productos de genes diana &#x26;#39;la utilidad de otras modificaciones en la mediaci&#xF3;n de RNasa H inhibici&#xF3;n independiente de la actividad g&#xE9;nica en embriones no ha sido investigado. En este estudio, se determin&#xF3; la medida en que totalmente modificados 2&#x26;#39;-O-metil oligonucle&#xF3;tidos (2&#x26;#39;-OMe oligos) que pueden funcionar como reactivos de inhibir la traducci&#xF3;n en vivo, utilizando Xenopus y embriones de pez cebra. Encontramos que los oligos contra Xenopus &#x3B2;-catenina, wnt11, y BMP4 y en contra de pez cebra Chordin (CHD), que puede generar de manera eficiente y, espec&#xED;ficamente, la p&#xE9;rdida de embriones de la funci&#xF3;n de los fenotipos similares con la inyecci&#xF3;n de morfolino y otros m&#xE9;todos. Estos resultados muestran que completamente modificados 2&#x26;#39;-OMe oligos puede funcionar como RNasa H reactivos antisentido independientes en embriones de vertebrados y por lo tanto puede servir como una modificaci&#xF3;n alternativa a morfolinos en algunos casos.

Patricia N. Schneider

Department of Biology

University of Iowa

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Patricia N. Schneider

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Biology

University of Iowa

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Department of Biology