transnuclear-mice-with-pre-defined-t-cell-receptor-specificities

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against <em>Toxoplasma gondii</em> Obtained Via SCNT

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

Whitehead Institute for Biomedical Research

&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x4F34;&#x4FA3;&#x751F;&#x7406;&#x5B66; (CRT) &#x534F;&#x52A9;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x53CA;&#x8D28;&#x91CF;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x65B0;&#x5408;&#x6210;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; (ER)&#x3002;&#x5B83;&#x4E0E; ERp57&#xFF0C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x5728; CRT &#x53D7;&#x7EA6;&#x675F;&#x7684;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x5DEF;&#x57FA;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x7269;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x751F;&#x5316;&#x6280;&#x672F;&#x548C;&#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x7814;&#x7A76;&#x8C03;&#x67E5; CRT &#x548C; ERp57 &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; ERp57 &#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x6210;&#x6B8B;&#x7559; 189 288 &#x72EC;&#x7ACB;&#x6298;&#x53E0;&#x57DF; P &#x57DF;&#x3002;&#x7B49;&#x6E29;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x91CF;&#x70ED;&#x8868;&#x660E; CRT(189-288)/ERp57 &#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x89E3;&#x79BB;&#x5E38;&#x6570; &#xFF08;9.1 + /-3.0) x 10(-6) M &#x5728; 8 &#x5EA6; C.&#x6A2A;&#x5411;&#x5F1B;&#x8C6B;&#x4F18;&#x5316;&#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x5149;&#x8C31;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6570;&#x636E;&#x7684;&#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5173;&#x4E8E;&#x6B64; 66.5 kDa &#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7ED3;&#x679C;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E86; &#xFF08;18 + /-5) &#x7684;&#x503C;&#x5728; 20 &#x6444;&#x6C0F;&#x5EA6;&#x7684;&#x89E3;&#x79BB;&#x5E38;&#x6570;&#x548C;&#x4E0B;&#x9650;&#x4E3A;&#x7B2C;&#x4E00;&#x987A;&#x5E8F;&#x4EA4;&#x6362;&#x901F;&#x7387;&#x5E38;&#x6570;&#x7684; 20 &#x5EA6; C.&#x5316;&#x5B66;&#x79FB;&#x4F4D;&#x6620;&#x5C04;&#x663E;&#x793A;&#x4E0E; ERp57 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53D1;&#x751F;&#x5B8C;&#x5168;&#x901A;&#x8FC7;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x6BB5; 225 251 &#x7684; CRT(189-288) k(off) &gt; 1,000 s(-1) 10(-6) M x&#x5176;&#x4E2D;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x53D1;&#x5939;&#x7ED3;&#x6784;&#x6B64;&#x57DF;&#x7684;&#x63D0;&#x793A;&#x3002;&#x5728; CRT/ERp57 &#x4F34;&#x4FA3;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x673A;&#x5236;&#x5206;&#x6790;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;

TROSY &#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x663E;&#x793A; ERp57 &#x548C;&#x5C16;&#x7AEF;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x5B66; P &#x57DF;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The lectin chaperone calreticulin (CRT) assists the folding and quality control of newly synthesized glycoproteins in the endoplasmic reticulum (ER). It interacts with ERp57, a thiol-disulfide oxidoreductase that promotes the formation of disulfide bonds in glycoproteins bound by CRT. Here, we investigated the interaction between CRT and ERp57 by using biochemical techniques and NMR spectroscopy. We found that ERp57 binds to the P-domain of calreticulin, an independently folding domain comprising residues 189-288. Isothermal titration calorimetry showed that the dissociation constant of the CRT(189-288)/ERp57 complex is (9.1 +/- 3.0) x 10(-6) M at 8 degrees C. Transverse relaxation-optimized NMR spectroscopy provided data on the thermodynamics and kinetics of the complex formation and on the structure of this 66.5-kDa complex. The NMR measurements yielded a value of (18 +/- 5) x 10(-6) M at 20 degrees C for the dissociation constant and a lower limit for the first-order exchange rate constant of k(off) > 1,000 s(-1) at 20 degrees C. Chemical shift mapping showed that interactions with ERp57 occur exclusively through amino acid residues in the polypeptide segment 225-251 of CRT(189-288), which forms the tip of the hairpin structure of this domain. These results are analyzed with regard to the functional mechanism of the CRT/ERp57 chaperone system.

TROSY-NMR reveals interaction between ERp57 and the tip of the calreticulin P-domain.

La lectine chaperon calr&eacute;ticuline (CRT) aide le pliage et le contr&ocirc;le de la qualit&eacute; des glycoprot&eacute;ines nouvellement synth&eacute;tis&eacute;s dans le r&eacute;ticulum endoplasmique (re). Il interagit avec ERp57, une oxydor&eacute;ductase de thiol-bisulfure qui favorise la formation de ponts disulfures dans les glycoprot&eacute;ines li&eacute;es par la CRT. Ici, nous avons &eacute;tudi&eacute; l&#39;interaction entre le CRT et ERp57 en utilisant des techniques biochimiques et spectroscopie RMN. Nous avons trouv&eacute; que ERp57 se lie &agrave; la P-de la calr&eacute;ticuline, un domaine ind&eacute;pendamment rabattable comprenant les r&eacute;sidus 189-288. Calorim&eacute;trie isotherme titration a montr&eacute; que la constante de dissociation du complexe CRT(189-288)/ERp57 est (9.1 +/-3.0) x 10(-6) M &agrave; 8 degr&eacute;s C. Transverse optimis&eacute; de relaxation NMR donn&eacute;es de spectroscopie fournie sur la thermodynamique et cin&eacute;tique de la formation du complexe et sur la structure de ce complexe de 66,5 kDa. La RMN a donn&eacute; une valeur de (18 +/-5) x 10(-6) M &agrave; 20 degr&eacute;s C, la constante de dissociation et une limite inf&eacute;rieure pour la constante de taux de change de premier ordre de k(off) &amp;gt; 1 000 s(-1) &agrave; 20 degr&eacute;s C. chimique Maj cartographie a montr&eacute; que les interactions avec ERp57 se produisent exclusivement par le biais de r&eacute;sidus d&#39;acides amin&eacute;s dans le segment de polypeptide 225-251 du CRT(189-288), qui constitue l&#39;extr&eacute;mit&eacute; de la structure en &eacute;pingle &agrave; cheveux de ce domaine. Ces r&eacute;sultats sont analys&eacute;s en ce qui concerne le m&eacute;canisme fonctionnel du syst&egrave;me CRT/ERp57 chaperon.

TROSY-NMR r&eacute;v&egrave;le interaction entre ERp57 et la pointe de la calr&eacute;ticuline P-domaine.

TROSY-NMR ergibt Wechselwirkung zwischen ERp57 und der Spitze des Calreticulin P-Dom&#xE4;ne.

La lectina chaperone calreticulin (CRT) assiste il pieghevole e controllo della qualit&agrave; delle glicoproteine recentemente sintetizzate nel reticolo endoplasmatico (ER). Interagisce con ERp57, un&#39;ossidoreduttasi tiolo-disolfuro che favorisce la formazione di ponti disolfuro in glicoproteine vincolate da CRT. Qui, abbiamo studiato l&#39;interazione tra CRT ed ERp57 mediante tecniche biochimiche e la spettroscopia NMR. Abbiamo trovato che ERp57 si lega al P-dominio di calreticulin, un dominio indipendentemente pieghevole composto da residui 189-288. Calorimetria isotermica di titolazione ha dimostrato che la costante di dissociazione del complesso CRT(189-288)/ERp57 &egrave; (9.1 + 3.0) x 10(-6) M a 8 gradi C. trasversale ottimizzata rilassamento NMR spettroscopia fornito dati sulla termodinamica e la cinetica della formazione del complessa sulla struttura di questo complesso 66,5-kDa. Le misurazioni NMR ha dato un valore di (18 + 5) x 10(-6) M a 20 gradi C, per la costante di dissociazione e un limite inferiore per la costante di tasso di cambio di primo ordine della k(off) &amp;gt; 1.000 s(-1) a 20 gradi mappatura di C. Chemical shift ha dimostrato che le interazioni con ERp57 avvengono esclusivamente attraverso i residui dell&#39;amminoacido nel segmento del polipeptide 225-251 del CRT(189-288), che forma la punta della struttura tornante di questo dominio. Questi risultati sono analizzati per quanto riguarda il meccanismo funzionale del sistema CRT/ERp57 chaperone.

TROSY-NMR rivela interazione tra ERp57 e la punta del calreticulin P-dominio.

&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; &#x30AB;&#x30EB;&#x30EC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3; (CRT) &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x54C1;&#x8CEA;&#x7BA1;&#x7406;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53; &#xFF08;ER&#xFF09; &#x3092;&#x652F;&#x63F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C; ERp57&#x3001;CRT &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB; &#x30FB; &#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x624B;&#x6CD5;&#x3068; NMR &#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B; CRT &#x3068; ERp57 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; ERp57 &#x30AB;&#x30EB;&#x30EC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;, 189-288 &#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B;&#x3001;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; P &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7B49;&#x6E29;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x578B;&#x71B1;&#x91CF;&#x8A08;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F; CRT(189-288)/ERp57 &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x5B9A;&#x6570;&#x3067;&#x3059; (3.0 &plusmn; 9.1) x 10(-6) M 8 &#x5EA6; C. &#x6A2A;&#x884C; NMR &#x7DE9;&#x548C;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5206;&#x5149;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x71B1;&#x529B;&#x5B66;&#x3068;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x30AB;&#x30A4;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x3053;&#x306E; 66.5 kDa &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x3002;NMR &#x6E2C;&#x5B9A; (+ 5/18&#xFF09; &#x306E;&#x5024;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F; 20 &#x5EA6; c &#x3067;&#x89E3;&#x96E2;&#x5B9A;&#x6570;&#x304A;&#x3088;&#x3073; k(off) &#x76EE; 1,000 s(-1) 20 C. &#x5316;&#x5B66;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; 225-251 CRT(189-288) &#x306E;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x6392;&#x4ED6;&#x7684;&#x306B; ERp57 &#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x5EA6;&#x3067;&#x306E;&#x4E00;&#x6B21;&#x70BA;&#x66FF;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x5B9A;&#x6570;&#x306E;&#x4E0B;&#x9650;&#x306E;&#x5024;&#x306F;&#x3001;10(-6) M x&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5148;&#x7AEF;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;CRT/ERp57 &#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x5206;&#x6790;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

TROSY NMR &#x3067;&#x306F; ERp57 &#x3068;&#x5148;&#x7AEF;&#x30AB;&#x30EB;&#x30EC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3; P &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Lectin &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; calreticulin (CRT) endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;) &#xD3F4;&#xB529; &#xBC0F; &#xC0C8;&#xB85C; &#xD569;&#xC131; &#xB41C; glycoproteins&#xC758; &#xD488;&#xC9C8; &#xAD00;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. ERp57, glycoproteins CRT&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xC18D;&#xC5D0; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xD615;&#xC131; &#xCD09;&#xC9C4; thiol &#xC774;&#xD669;&#xD654; oxidoreductase&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; NMR &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; &#xBC0F; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; CRT&#xC640; ERp57 &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, ERp57 calreticulin, &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 189-288 &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC811;&#xB294; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; P &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB4F1;&#xC628; &#xC801;&#xC815; &#xC5F4; &#xB7C9; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; CRT(189-288)/ERp57 &#xBCF5;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC0C1;&#xC218;&#xB294; (3.0 &plusmn; 9.1) 10(-6) M 8&#xB3C4; C. &#xAC00;&#xB85C; &#xD734;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; NMR &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; &#xC81C;&#xACF5; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xAC00; 66.5 kDa &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xC5F4;&#xC5ED;&#xD559; &#xBC0F; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; x. NMR &#xCE21;&#xC815; (18 5 +)&#xC758; &#xAC12;&#xC774; &#xB098;&#xC654;&#xACE0; 10(-6) M k(off) &amp;gt; 1000 s(-1) C. &#xD654;&#xD559; &#xBCC0;&#xD654; &#xB9E4;&#xD551;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC0C1;&#xD638; ERp57 225-251, CRT(189-288)&#xC758; polypeptide &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574;&#xC11C;&#xB9CC; &#xBC1C;&#xC0DD; 20&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; 1 &#xCC28; &#xD658;&#xC728; &#xC0C1;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB0AE;&#xC740; &#xD55C;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC0C1;&#xC218; 20&#xB3C4; C x&#xB294;&#xC774; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xBA38;&#xB9AC; &#xD540; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xB05D;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; CRT/ERp57 &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD574;&#xC11C;&#xB294; &#xBD84;&#xC11D; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

TROSY NMR Erp57&#xC640; calreticulin P &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB05D; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

La lectina chaperone calreticulina (CRT) asiste el plegamiento y control de calidad de glicoprote&iacute;nas reci&eacute;n sintetizadas en el ret&iacute;culo endopl&aacute;smico (ER). Interact&uacute;a con ERp57, una oxidorreductasa tiol-disulfuro que promueve la formaci&oacute;n de enlaces disulfuro en glicoprote&iacute;nas acatar CRT. Aqu&iacute;, hemos investigado la interacci&oacute;n entre la CRT y ERp57 mediante t&eacute;cnicas bioqu&iacute;micas y Espectroscopia NMR. Encontramos que el ERp57 se une al P-dominio de calreticulina, un dominio independiente plegable formado por residuos 189-288. Calorimetr&iacute;a isoterma de titulaci&oacute;n demostr&oacute; que la constante de disociaci&oacute;n del complejo CRT(189-288)/ERp57 (9.1 +/-3.0) x 10(-6) M en 8 grados C. transversal optimizado para relajaci&oacute;n NMR datos de espectroscopia proporcionado en la termodin&aacute;mica y la cin&eacute;tica de la formaci&oacute;n de complejos y en la estructura de este complejo de 66,5-kDa. Las mediciones NMR rindieron un valor de (18 + /-5) x 10(-6) M a 20 grados C para la constante de disociaci&oacute;n y un l&iacute;mite inferior para la constante de la tasa de cambio de primer orden de k(off) &gt; 1.000 s(-1) a 20 grados de asignaci&oacute;n de cambio qu&iacute;mico C. demostr&oacute; que las interacciones con ERp57 ocurren exclusivamente a trav&eacute;s de residuos de amino&aacute;cidos en el segmento de polip&eacute;ptido 225-251 del CRT(189-288), que forma la punta de la estructura de horquilla de este dominio. Estos resultados se analizan en cuanto al mecanismo funcional del sistema chaperone CRT/ERp57.

TROSY-NMR revela la interacci&oacute;n entre ERp57 y la punta de la calreticulina P-dominio.

&#x5728;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; (ER) &#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x5408;&#x6210;&#x548C;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x548C;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#x62E5;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E13;&#x7528;&#x7684;&#x6210;&#x719F;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x534F;&#x52A9;&#x6298;&#x53E0;&#x5E76;&#x786E;&#x4FDD; ER &#x53D1;&#x5E03;&#x524D;&#x7684;&#x6700;&#x7EC8;&#x4EA7;&#x54C1;&#x7684;&#x8D28;&#x91CF;&#x3002;&#x8BE5;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x5305;&#x62EC;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x4F34;&#x4FA3; calnexin (CNX) &#x548C;&#x751F;&#x7406;&#x5B66; (CRT) &#x548C;&#x5176;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684; co-chaperone ERp57&#xFF0C;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x5DEF;&#x57FA;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x7269;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5236;&#x5EA6;&#x7684;&#x610F;&#x4E49;&#x88AB;&#x5F3A;&#x8C03; CNX &#x548C; CRT &#x4EA4;&#x4E92;&#x8C03;&#x67E5;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;&#x51E0;&#x4E4E;&#x6240;&#x6709;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x63ED;&#x793A;&#x4E2D;&#x6709;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4E4B;&#x5904;&#x6216;&#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x865A;&#x5F31;&#x578B;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5176;&#x4ED6;&#x91CD;&#x8981;&#x4F34;&#x4FA3;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5982; Hsp70s&#x3001; Hsp90s &#x548C;&#x683C;&#x52D2;&#x5C14;/GroES&#xFF0C;&#x5373;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x539F;&#x7406;&#x5728;&#x5206;&#x5B50;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E86;&#x89E3;&#x5F97;&#x5F88;&#x5C11;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x751F;&#x5316;&#x6570;&#x636E;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#xFF0C;&#x5230;&#x6B64;&#x966A;&#x4F34;&#x5236;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x51FA;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7684;&#x673A;&#x7406;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x575A;&#x5B9E;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;

Calnexin&#xFF0C;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#xFF0C;&#x548C; ERp57&#xFF1A; &#x5728;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x961F;&#x53CB;&#x3002;

In eukaryotic cells, the endoplasmic reticulum (ER) plays an essential role in the synthesis and maturation of a variety of important secretory and membrane proteins. For glycoproteins, the ER possesses a dedicated maturation system, which assists folding and ensures the quality of final products before ER release. Essential components of this system include the lectin chaperones calnexin (CNX) and calreticulin (CRT) and their associated co-chaperone ERp57, a glycoprotein specific thiol-disulfide oxidoreductase. The significance of this system is underscored by the fact that CNX and CRT interact with practically all glycoproteins investigated to date, and by the debilitating phenotypes revealed in knockout mice deficient in either gene. Compared to other important chaperone systems, such as the Hsp70s, Hsp90s and GroEL/GroES, the principles whereby this system works at the molecular level are relatively poorly understood. However, recent structural and biochemical data have provided important new insights into this chaperone system and present a solid basis for further mechanistic studies.

Calnexin, calreticulin, and ERp57: teammates in glycoprotein folding.

Dans les cellules eucaryotes, le r&eacute;ticulum endoplasmique (re) joue un r&ocirc;le essentiel dans la synth&egrave;se et la maturation d&#39;une vari&eacute;t&eacute; de prot&eacute;ines s&eacute;cr&eacute;toires et membrane. Pour les glycoprot&eacute;ines, le ER poss&egrave;de un syst&egrave;me d&eacute;di&eacute; de maturation, qui assiste le pliage et garantit la qualit&eacute; des produits finis avant la sortie de l&#39;ER. Composantes essentielles de ce syst&egrave;me comprennent la lectine chaperons calnexine (CNX) et la calr&eacute;ticuline (CRT) et leurs associ&eacute;s co-chaperone ERp57, une oxydor&eacute;ductase de thiol-bisulfure sp&eacute;cifique de glycoprot&eacute;ine. L&#39;importance de ce syst&egrave;me est mise en &eacute;vidence par le fait que CNX et CRT interagissent avec pratiquement toutes les glycoprot&eacute;ines &eacute;tudi&eacute;s &agrave; ce jour et par les ph&eacute;notypes d&eacute;bilitantes a r&eacute;v&eacute;l&eacute; chez les souris knockout d&eacute;ficientes dans chaque g&egrave;ne. Les principes selon lequel ce syst&egrave;me fonctionne au niveau mol&eacute;culaire par rapport &agrave; d&#39;autres syst&egrave;mes de chaperon importants, tels que le Hsp70s, Hsp90s et GroEL et GroES, sont relativement mal comprises. Cependant, les donn&eacute;es structurales et biochimiques r&eacute;centes ont fourni importants nouveaux aper&ccedil;us de ce syst&egrave;me de chaperon et pr&eacute;sentent une base solide pour poursuivre ses &eacute;tudes m&eacute;canistes.

La calnexine, la calr&eacute;ticuline et ERp57 : co&eacute;quipiers dans le repliement de la glycoprot&eacute;ine.

Calnexin, Calreticulin und ERp57: Teamkollegen im Glykoprotein Faltung.

Nelle cellule eucariotiche, il reticolo endoplasmatico (ER) svolge un ruolo essenziale nella sintesi e maturazione di una variet&agrave; di importanti proteine secretorie e di membrana. Per glicoproteine, ER possiede un sistema dedicato di maturazione, che assiste pieghevole e garantisce la qualit&agrave; dei prodotti finali prima del rilascio di ER. Componenti essenziali di questo sistema includono il lectin chaperoni calnexin (CNX) e calreticulin (CRT) e loro ERp57 Aha1 associata, un&#39;ossidoreduttasi tiolo-disolfuro specifici glicoproteina. L&#39;importanza di questo sistema &egrave; sottolineato dal fatto che CNX e CRT interagire con praticamente tutte le glicoproteine studiate fino ad oggi e dai fenotipi debilitanti rivelati in topi knockout carenti o gene. Rispetto ad altri sistemi di chaperone importanti, quali i Hsp70s, Hsp90s e GroEL/GroES, i principi per cui questo sistema funziona a livello molecolare sono relativamente poco conosciuti. Tuttavia, i recenti dati strutturali e biochimici hanno fornito importanti nuove intuizioni questo sistema chaperone e presentano una solida base per ulteriori studi meccanicistici.

Calnexin, calreticulin ed ERp57: compagni di squadra nella glicoproteina pieghevole.

&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53; (ER) &#x5408;&#x6210;&#x3068;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5206;&#x6CCC;&#x3001;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x30A2;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;ER &#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x524D;&#x306B;&#x3001;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x54C1;&#x8CEA;&#x3092;&#x4FDD;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x5C02;&#x7528;&#x6210;&#x719F;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x6240;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3081;&#x308B;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; &#x30AB;&#x30EB;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; &#xFF08;CNX&#xFF09; &#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30EC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3; (CRT) &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30B3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; ERp57&#x3001;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x7279;&#x5B9A;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB; &#x30FB; &#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x610F;&#x7FA9;&#x306F;&#x3001;CNX &#x3068; CRT &#x65E5;&#x4ED8;&#x306B;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x305F;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x7CD6;&#x3068;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6B20;&#x640D;&#x3067;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x8870;&#x5F31;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;GroEL/GroES&#x3001;Hsp90s&#x3001;Hsp70s &#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066; whereby &#x5206;&#x5B50;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x52D5;&#x4F5C;&#x539F;&#x7406;&#x306F;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x69CB;&#x9020;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x6A5F;&#x69CB;&#x89E3;&#x660E;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F37;&#x56FA;&#x306A;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AB;&#x30EB;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30EC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068; ERp57: &#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x306E;&#x30C1;&#x30FC;&#x30E0;&#x30E1;&#x30A4;&#x30C8;&#x3002;

&#xC9C4; &#xD575; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;) &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBD84; &#xD558; &#xACE0; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC131;&#xC219;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. Glycoproteins&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xC811;&#xB294; &#xBC0F; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC804;&#xC5D0; &#xCD5C;&#xC885; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xD488;&#xC9C8;&#xC744; &#xBCF4;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xC6A9;&#xB41C; &#xC131;&#xC219; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xD3EC;&#xD568; lectin &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; calnexin (CNX) &#xBC0F; calreticulin (CRT) &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; co-chaperone ERp57 glycoprotein &#xD2B9;&#xC815; thiol &#xC774;&#xD669;&#xD654; oxidoreductase. CNX &#xBC0F; CRT &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBAA8;&#xB4E0; glycoproteins &#xB0A0;&#xC9DC;, &#xC870;&#xC0AC;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC0AC;&#xC2E4;&#xC740; &#xACE0; &#xC1E0; &#xC57D; &#xACE0;&#xAE30; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xC950; &#xC5B4;&#xB290; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xACB0;&#xD54D;&#xC5D0; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC740; &#xAC15;&#xC870; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Hsp70s, Hsp90s &#xBC0F; GroEL/&#xC219;&#xC18C; &#xB4F1;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xADF8;&#xAC83;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; &#xBD84;&#xC790; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC791;&#xB3D9; &#xC6D0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC800;&#xC870;&#xD55C; &#xC774;&#xD574;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xCD5C;&#xADFC; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xAC00; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xCD94;&#xAC00; &#xAE30;&#xACC4; &#xB860; &#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACAC;&#xACE0;&#xD55C; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xC2DC;.

Calnexin, calreticulin, &#xBC0F; ERp57: &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC811;&#xB294;&#xC758; &#xB3D9;&#xB8CC;.

En las c&eacute;lulas eucariotas, el ret&iacute;culo endopl&aacute;smico (ER) juega un papel esencial en la s&iacute;ntesis y maduraci&oacute;n de una variedad de importantes prote&iacute;nas de secreci&oacute;n y de membrana. Para glicoprote&iacute;nas, ER posee un sistema dedicado de maduraci&oacute;n, que ayuda a doblar y asegura la calidad de los productos finales antes del lanzamiento de ER. Componentes esenciales de este sistema incluyen la lectina acompa&ntilde;antes calnexin (CNX) y calreticulina (CRT) y sus asociados co-chaperone ERp57, una oxidorreductasa de glicoprote&iacute;na espec&iacute;fica tiol-disulfuro. La importancia de este sistema es subrayada por el hecho de que CNX y CRT interactuar&aacute;n con glicoprote&iacute;nas pr&aacute;cticamente todos investigados hasta la fecha y por los fenotipos debilitantes revelados en ratones knockout deficientes en cualquiera de los dos genes. En comparaci&oacute;n con otros sistemas importantes de acompa&ntilde;ante, como Hsp70s, Hsp90s y GroEL/GroES, los principios que este sistema funciona a nivel molecular son relativamente poco conocidos. Sin embargo, recientes datos estructurales y bioqu&iacute;micos han aportado nuevas e importantes perspectivas en este sistema de acompa&ntilde;ante y presentan una s&oacute;lida base para estudios posteriores mecanicistas.

Calnexin, calreticulina y ERp57: compa&ntilde;eros de equipo en la glicoprote&iacute;na plegable.

ERp57 &#x786B;&#x9187;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x662F;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x6700;&#x63A5;&#x8FD1;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x5F02;&#x6784;&#x9176;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E0E;&#x4E24;&#x79CD;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x4F34;&#x4FA3; calnexin &#x548C;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x548C;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4ECE;&#x800C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x65B0;&#x5408;&#x6210;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x6298;&#x53E0;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x6709;&#x7279;&#x70B9; ERp57 &#x4F53;&#x5916;&#x57DF;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3001; &#x5F62;&#x72B6;&#x3001; &#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x7535;&#x52BF;&#x548C;&#x50AC;&#x5316;&#x4E0D;&#x540C;&#x5DEF;&#x57FA;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x4EA4;&#x6362;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x7B49;&#x51E0;&#x4E2A;&#x57FA;&#x672C;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x5F02;&#x6784;&#x9176;&#xFF0C;&#x50CF;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x5230; ERp57&#xFF0C;&#x5C06;&#x7531;&#x56DB;&#x4E2A;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x6709; + /-0.1 3.4 &#x7EC6;&#x957F;&#x7684;&#x5F62;&#x72B6;&#x5728;&#x76F4;&#x5F84;&#x548C; 16.8 + /-0.5 nm nm &#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x3002;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C; &#39; &#x57DF;&#x51B3;&#x5FC3;&#x5206;&#x522B;&#x6709;-0.167 &#x548C;-0.156 V&#xFF0C;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x7535;&#x4F4D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6240;&#x793A; ERp57 &#x9AD8;&#x6548;&#x50AC;&#x5316;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x51CF;&#x5C11;&#x3001; &#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x5F02;&#x6784;&#x548C;&#x57FA;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5DEF;&#x6C27;&#x5316;&#x3002;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x4F53;&#x5185;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

ERp57 &#x662F;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5DEF;&#x57FA;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x7269;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x3002;

The thiol-disulfide oxidoreductase ERp57 is a soluble protein of the endoplasmic reticulum and the closest known homologue of protein disulfide isomerase. The protein interacts with the two lectin chaperones calnexin and calreticulin and thereby promotes the oxidative folding of newly synthesized glycoproteins. Here we have characterized several fundamental structural and functional properties of ERp57 in vitro, such as the domain organization, shape, redox potential, and the ability to catalyze different thiol-disulfide exchange reactions. Like protein disulfide isomerase, we find ERp57 to be comprised of four structural domains. The protein has an elongated shape of 3.4 +/- 0.1 nm in diameter and 16.8 +/- 0.5 nm in length. The two redox-active a and a' domains were determined to have redox potentials of -0.167 and -0.156 V, respectively. Furthermore, ERp57 was shown to efficiently catalyze disulfide reduction, disulfide isomerization, and dithiol oxidation in substrate proteins. The implications of these findings for the function of the protein in vivo are discussed.

ERp57 is a multifunctional thiol-disulfide oxidoreductase.

L&#39;oxydor&eacute;ductase de thiol-bisulfure ERp57 est une prot&eacute;ine soluble du r&eacute;ticulum endoplasmique et l&#39;homologue le plus proche connu d&#39;isom&eacute;rase de prot&eacute;ine disulfure. La prot&eacute;ine interagit avec les deux lectines chaperonnes calnexine et la calr&eacute;ticuline et favorise ainsi le repliement oxydatif des glycoprot&eacute;ines nouvellement synth&eacute;tis&eacute;es. Ici, nous avons caract&eacute;ris&eacute; plusieurs propri&eacute;t&eacute;s structurales et fonctionnelles fondamentales, de ERp57 in vitro, tels que l&#39;organisation du domaine, la forme, potentiel redox et la capacit&eacute; de catalyser les r&eacute;actions d&#39;&eacute;change thiol-bisulfure diff&eacute;rents. Comme la prot&eacute;ine disulfure isom&eacute;rase, nous trouvons ERp57 se compose de quatre domaines structuraux. La prot&eacute;ine a une forme allong&eacute;e de 3.4 +/-0,1 nm de diam&egrave;tre et 16,8 +/-0,5 nm de long. Les deux actifs en oxydor&eacute;duction a et a&#39; domaines ont &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;s &agrave; avoir des potentiels r&eacute;dox de 0,167 et-0.156 V, respectivement. En outre, ERp57 s&#39;est av&eacute;r&eacute;e efficacement catalyser la r&eacute;duction disulfure, isom&eacute;risation disulfure et oxydation dithiol dans les substrats prot&eacute;iques. Les auteurs discutent les implications de ces r&eacute;sultats pour la fonction des prot&eacute;ines in vivo.

ERp57 est une oxydor&eacute;ductase multifonctionnelle thiol-bisulfure.

ERp57 ist ein multifunktionelles Thiol-Disulfid-Oxidoreduktase.

L&#39;ossidoriduttasi tiolo-disolfuro ERp57 sono una proteina solubile del reticolo endoplasmatico e l&#39;omologo conosciuto pi&ugrave; vicino dell&#39;isomerasi del bisolfuro della proteina. La proteina interagisce con i due lectina chaperoni calnexin e calreticulin e quindi promuove il folding ossidativo delle glicoproteine recentemente sintetizzate. Qui noi abbiamo caratterizzato diverse propriet&agrave; strutturali e funzionali fondamentali di ERp57 in vitro, come ad esempio l&#39;organizzazione del dominio, forma, potenziale redox e la capacit&agrave; di catalizzare reazioni di scambio differenti tiolo-disolfuro. Come proteina disolfuro isomerasi, troviamo ERp57 a essere composta da quattro domini strutturali. La proteina ha una forma allungata di 3.4 + /-0.1 nm in diametro e 16,8 + /-0,5 nm di lunghezza. I due redox-attiva un e un &#39; domini erano determinati ad avere potenziali ossidoriduttivi di-0.167 e-0.156 V, rispettivamente. Inoltre, &egrave; stato mostrato ERp57 per catalizzare efficientemente riduzione disolfuro, isomerizzazione disolfuro e ditiolo ossidazione di proteine substrato. Vengono discusse le implicazioni di queste scoperte per la funzione della proteina in vivo.

ERp57 &egrave; un&#39;ossidoreduttasi multifunzionale tiolo-disolfuro.

&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB; &#x30FB; &#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20; ERp57 &#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x3068;&#x6700;&#x3082;&#x8FD1;&#x3044;&#x65E2;&#x77E5;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0; &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; &#x30AB;&#x30EB;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30EC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3; ERp57 &#x4F53;&#x5916;&#x3001;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x7D44;&#x7E54;&#x3001;&#x5F62;&#x72B6;&#x3001;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB; &#x30FB; &#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x4EA4;&#x63DB;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x304C;&#x3042;&#x308B;.&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A; 4 &#x3064;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B; ERp57 &#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x7D30;&#x9577;&#x3044;&#x5F62;&#x72B6;&#x306E; 3.4 &plusmn; 0.1 nm &#x306E;&#x76F4;&#x5F84;&#x3068; 16.8 &plusmn; 0.5 nm &#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x3002;2 &#x3064;&#x306E;&#x30EC;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068; a&#39; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;-0.167 &#x3068;-0.156 V &#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;ERp57 &#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x9084;&#x5143;&#x3001;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7570;&#x6027;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B8;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x57FA;&#x8CEA;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6240;&#x898B;&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x542B;&#x610F;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

ERp57 &#x306F;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB; &#x30FB; &#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

Thiol &#xC774;&#xD669;&#xD654; oxidoreductase ERp57 endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xD669;&#xD654; isomerase&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; homologue &#xC774;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xB450; lectin &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; calnexin &#xBC0F; calreticulin&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xC0C8;&#xB85C; &#xD569;&#xC131; &#xB41C; glycoproteins&#xC758; &#xC0B0;&#xD654; &#xC811;&#xB294; &#xCD94;&#xC9C4; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; ERp57 &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC870;&#xC9C1;, &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;, redox &#xBAA8;&#xC591;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; thiol &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xAD50;&#xD658; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB4F1;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC18D;&#xC131; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xD669;&#xD654; isomerase &#xCC98;&#xB7FC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; Erp57&#xC744; &#xCC3E;&#xC73C;&#xC2ED;&#xC2DC;&#xC624;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; 0.1 &plusmn; 3.4&#xC758; &#xAE38;&#xCB49;&#xD55C; &#xBAA8;&#xC591;&#xC744; nm &#xC9C1;&#xACBD; &#xBC0F; 16.8 &plusmn; 0.5 nm &#xAE38;&#xC774;. &#xB450; redox active&#xB97C; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB294; &#39; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAC01;&#xAC01;-0.167 &#xBC0F;-0.156 V, &#xC0B0;&#xD654; &#xD658; &#xC6D0; &#xC804;&#xC704;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Erp57&#xB294; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xAC10;&#xC18C;, &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xC218; &#xBC0F; &#xAE30;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; dithiol &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xC758;&#xBBF8;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

ERp57 &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; thiol &#xC774;&#xD669;&#xD654; oxidoreductase&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La oxidorreductasa tiol-disulfuro ERp57 es una prote&iacute;na soluble del ret&iacute;culo endopl&aacute;smico y el hom&oacute;logo conocido m&aacute;s cercano de la isomerasa del disulfuro de prote&iacute;na. La prote&iacute;na interact&uacute;a con los dos calnexin de acompa&ntilde;antes de lectinas y calreticulina y lo promueve el plegamiento oxidativo de glicoprote&iacute;nas reci&eacute;n sintetizadas. Aqu&iacute; hemos caracterizado varias propiedades estructurales y funcionales fundamentales de ERp57 in vitro, como la organizaci&oacute;n de dominio, forma, potencial redox y la capacidad de catalizar reacciones de intercambio tiol-disulfuro diferentes. Como prote&iacute;na disulfuro isomerasa, encontramos ERp57 a ser compuesta por cuatro dominios estructurales. La prote&iacute;na tiene una forma alargada de 3.4 +/-0.1 nm de di&aacute;metro y 16,8 +/-0,5 nm de longitud. Los dos redox activos a y &#39; Dominios determinaron que los potenciales redox de-0.167 y-0.156 V, respectivamente. Adem&aacute;s, ERp57 se mostr&oacute; eficiente catalizan la reducci&oacute;n de disulfuro, isomerizaci&oacute;n de disulfuro y oxidaci&oacute;n de ciclarla en prote&iacute;nas sustrato. Se discuten las implicaciones de estos hallazgos para la funci&oacute;n de la prote&iacute;na en vivo.

ERp57 es una oxidorreductasa multifuncional tiol-disulfuro.

&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684;&#x672C;&#x673A;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x5F62;&#x6210;&#x662F;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x5F02;&#x6784;&#x9176; (PDI) &#x548C;&#x5176;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x542B;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x786B;&#x6C27;&#x8FD8;&#x86CB;&#x767D;&#x57DF;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;PDI &#x5177;&#x4F53;&#x8D21;&#x732E;&#x7684;&#x65B0;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x7269;&#x4E0E;&#x51CF;&#x5C11;/&#x91CD;&#x6392;&#x975E;&#x672C;&#x673A;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x7269;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x662F;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x4E2A;&#x522B; PDI &#x57DF;&#x4E2D;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x5F62;&#x6210;&#x7531;&#x5176;&#x81EA;&#x7136;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x5242;&#xFF0C;Ero1p &#x9A71;&#x52A8;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; Ero1p &#x6C27;&#x5316;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684; PDI &#x50AC;&#x5316;&#x786B;&#x6C27;&#x8FD8;&#x86CB;&#x767D;&#x57DF;&#xFF0C;A &#x548C; A&#39; &#x540C;&#x6837;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5168;&#x957F; PDI &#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;&#x6709;&#x4E00;&#x79CD;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x901F;&#x7387;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x6027;&#x662F;&#x53CC;&#x91CD;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF1A; &#x7B2C;&#x4E8C;&#x50AC;&#x5316;&#x6C27;&#x5316;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x901F;&#x7387; (A&#39;) &#x57DF;&#x548C;&#x5E95;&#x7269;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x6291;&#x5236;&#x6C27;&#x5316;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x50AC;&#x5316; (A) &#x57DF;&#x3002;&#x786B;&#x6C27;&#x8FD8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E2D; PDI &#x57DF;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x987A;&#x5E8F;&#x5F88;&#x91CD;&#x8981;&#x5728;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x4F7F;&#x6C27;&#x5316;&#x901F;&#x7387; A &#x548C; A&#39;&#xFF0C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x670D;&#x52A1;&#x5206;&#x522B;&#x53CD;&#x5BF9;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x5F02;&#x6784;&#x9176;&#x548C;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x89D2;&#x8272;&#x7684;&#x786B;&#x6C27;&#x8FD8;&#x86CB;&#x767D;&#x57DF;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x5982;&#x4F55;&#x672C;&#x673A;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x6298;&#x53E0;&#x5B8C;&#x6210;&#xFF0C;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x548C;&#x4E3A;&#x7406;&#x89E3;&#x4E0E;&#x786B;&#x6C27;&#x8FD8;&#x86CB;&#x767D;&#x57DF;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x5B89;&#x6392; PDI &#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x6269;&#x6563;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x3002;

&#x57DF;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x5F02;&#x6784;&#x9176;&#x7684;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x4FBF;&#x4E8E;&#x5176;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x548C;&#x5F02;&#x6784;&#x9176;&#x5728; Ero1p &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x5F62;&#x6210;&#x4E2D;&#x7684;&#x53CC;&#x91CD;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Native disulfide bond formation in eukaryotes is dependent on protein-disulfide isomerase (PDI) and its homologs, which contain varying combinations of catalytically active and inactive thioredoxin domains. However, the specific contribution of PDI to the formation of new disulfides versus reduction/rearrangement of non-native disulfides is poorly understood. We analyzed the role of individual PDI domains in disulfide bond formation in a reaction driven by their natural oxidant, Ero1p. We found that Ero1p oxidizes the isolated PDI catalytic thioredoxin domains, A and A' at the same rate. In contrast, we found that in the context of full-length PDI, there is an asymmetry in the rate of oxidation of the two active sites. This asymmetry is the result of a dual effect: an enhanced rate of oxidation of the second catalytic (A') domain and the substrate-mediated inhibition of oxidation of the first catalytic (A) domain. The specific order of thioredoxin domains in PDI is important in establishing the asymmetry in the rate of oxidation of the two active sites thus allowing A and A', two thioredoxin domains that are similar in sequence and structure, to serve opposing functional roles as a disulfide isomerase and disulfide oxidase, respectively. These findings reveal how native disulfide folding is accomplished in the endoplasmic reticulum and provide a context for understanding the proliferation of PDI homologs with combinatorial arrangements of thioredoxin domains.

Domain architecture of protein-disulfide isomerase facilitates its dual role as an oxidase and an isomerase in Ero1p-mediated disulfide formation.

Formation de la liaison disulfure natif chez les eucaryotes est tributaire de l&#39;isom&eacute;rase (PDI) de la prot&eacute;ine disulfure et ses homologues, qui contiennent des combinaisons vari&eacute;es de domaines thior&eacute;doxine catalytiquement actives et inactives. Cependant, la contribution sp&eacute;cifique du PDI &agrave; la formation de nouveaux disulfures versus r&eacute;duction/r&eacute;arrangement des allochtones disulfures est mal comprise. Nous avons analys&eacute; le r&ocirc;le des domaines individuels de PDI dans la formation de la liaison disulfure dans une r&eacute;action conduite par leur oxydant naturel, Ero1p. Nous avons trouv&eacute; que la Ero1p s&#39;oxyde les domaines isol&eacute;s de thioredoxin catalytique en PDI, A et A&#39; au m&ecirc;me rythme. En revanche, nous avons constat&eacute; que dans le cadre du PDI pleine longueur, il y a une asym&eacute;trie dans la vitesse d&#39;oxydation de deux sites actifs. Cette asym&eacute;trie est le r&eacute;sultat d&#39;un double effet : un taux major&eacute; de l&#39;oxydation de la deuxi&egrave;me catalytique (A&#39;) domaine et l&#39;inhibition induite par le substrat de l&#39;oxydation du premier catalytique (A) du domaine. L&#39;ordre sp&eacute;cifique des domaines thior&eacute;doxine dans PDI est important dans l&#39;&eacute;tablissement de l&#39;asym&eacute;trie dans le taux d&#39;oxydation des deux sites actifs permettant ainsi A et A&#39;, deux domaines thior&eacute;doxine qui sont semblables dans la s&eacute;quence et de la structure, pour servir de s&#39;opposer &agrave; des r&ocirc;les fonctionnels comme une isom&eacute;rase du bisulfure et oxydase disulfure, respectivement. Ces r&eacute;sultats r&eacute;v&egrave;lent comment native disulfure pliage s&#39;effectue dans le r&eacute;ticulum endoplasmique et de fournir un contexte pour comprendre la prolif&eacute;ration des homologues chez les PDI avec des arrangements combinatoires de domaines de thioredoxin.

L&#39;architecture du domaine d&#39;isom&eacute;rase de prot&eacute;ine disulfure facilite son double r&ocirc;le comme une oxydase et une isom&eacute;rase dans la formation de liaisons disulfure induite par le Ero1p.

Native Disulfid-Bond-Formation in Eukaryoten ist abh&auml;ngig von Protein-Disulfid-Isomerase (PDI) und seine UCP1, die verschiedene Kombinationen von katalytisch aktiven und inaktiven Thioredoxin-Dom&auml;nen enthalten. Allerdings ist der spezifische Beitrag der PDI zur Bildung des neuen Disulfiden gegen Reduktion/Umlagerung von Drittprogrammen Disulfiden schlecht verstanden. Wir analysierten die Rolle der einzelnen PDI-Dom&auml;nen in Disulfid-Bond-Formation in einer Reaktion, die angetrieben durch ihre nat&uuml;rliche Oxidationsmittel, Ero1p. Wir fanden, dass Ero1p die isolierten PDI katalytische Thioredoxin Dom&auml;nen, A und A oxidiert &#39; mit der gleichen Geschwindigkeit. Im Gegensatz dazu fanden wir, dass im Rahmen der in PDI, gibt es eine Asymmetrie in der Oxidation von den beiden Standorten aktiv. Diese Asymmetrie ist das Ergebnis eine doppelte Wirkung: eine erh&ouml;hte Rate von der zweiten katalytischen Oxidation (A&#39;) Dom&auml;ne und die Substrat-vermittelte Hemmung der Oxidation von der ersten katalytischen (A) Dom&auml;ne. Die spezifische Reihenfolge der Thioredoxin Domains in PDI ist wichtig bei der Festlegung der Asymmetrie in der Rate der Oxidation von den zwei aktiven Websites, so dass A und A&#39;, zwei Thioredoxin-Dom&auml;nen, die in Reihenfolge und Struktur, dienen der gegnerischen Funktionsrollen als Disulfid-Isomerase und Disulfid-Oxydase, bzw. &auml;hneln. Diese Ergebnisse zeigen, wie systemeigene Disulfid-Faltung erfolgt in dem Endoplasmatischen Retikulum und bieten einen Kontext f&uuml;r das Verst&auml;ndnis der Verbreitung von PDI UCP1 mit kombinatorischer Arrangements von Thioredoxin-Domains.

Dom&auml;nenarchitektur des Protein-Disulfid-Isomerase erleichtert seine Doppelrolle als eine Oxydase und eine Isomerase in Ero1p-vermittelte Disulfid-Formation.

Formazione di legami disolfuro nativo negli eucarioti &egrave; dipendente isomerasi (PDI) di proteina-disolfuro e suoi omologhi, che contengono diverse combinazioni di domini tioredossina cataliticamente attivi e inattivi. Tuttavia, il contributo specifico di PDI per la formazione di nuovi disulfides versus riduzione/riarrangiamento di non-nativi disulfides &egrave; capito male. Abbiamo analizzato il ruolo dei singoli domini PDI nella formazione di legami disolfuro in una reazione guidata da loro ossidante naturale, Ero1p. Abbiamo trovato che Ero1p si ossida isolati domini catalitici tioredossina PDI, A e A&#39; allo stesso tasso. Al contrario, abbiamo trovato che nel contesto di PDI full-length, c&#39;&egrave; un&#39;asimmetria del tasso di ossidazione dei due siti attivi. Questa asimmetria &egrave; il risultato di un duplice effetto: un tasso maggiore di ossidazione del secondo catalitica (A&#39;) dominio e l&#39;inibizione mediata dal substrato di ossidazione catalitica primo (A) dominio. L&#39;ordine specifico della tioredossina domini in PDI &egrave; importante stabilire l&#39;asimmetria del tasso di ossidazione dei due siti attivi permettendo cos&igrave; A e A&#39;, due domini tioredossina che sono simili in sequenza e struttura, per servire opposti ruoli funzionali come un&#39;isomerasi disolfuro e disolfuro ossidasi, rispettivamente. Questi risultati rivelano come nativo disolfuro pieghevole &egrave; compiuta nel reticolo endoplasmatico e fornire un contesto per la comprensione della proliferazione di omologhi PDI con arrangiamenti combinatoriale di tioredossina domini.

Architettura di dominio dell&#39;isomerasi del bisolfuro della proteina facilita il suo duplice ruolo di un&#39;ossidasi e un&#39;isomerasi nella formazione di disolfuro di Ero1p-mediata.

&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; (PDI) &#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3068;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x30C1;&#x30AA;&#x30EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x304C;&#x6C7A;&#x307E;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;PDI &#x306E;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x8CA2;&#x732E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x9084;&#x5143;/&#x8EE2;&#x4F4D;&#x975E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x306E;&#x5BFE;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x500B;&#x3005; &#x306E; PDI &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x81EA;&#x7136;&#x306A;&#x9178;&#x5316;&#x5264;&#x3001;Ero1p &#x99C6;&#x52D5;&#x578B;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x5F62;&#x6210;&#x3067;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; Ero1p &#x306F;&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F; PDI &#x89E6;&#x5A92;&#x30C1;&#x30AA;&#x30EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;A &#x3068; A &#x3092;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F; &#39; &#x540C;&#x3058;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9; PDI &#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x3053;&#x304C;&#x3001;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x6027; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x901F;&#x5EA6;&#x306B;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x6027;&#x4E8C;&#x91CD;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;: &#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x89E6;&#x5A92;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x901F;&#x5EA6; (A&#39;) &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x3001;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92; (A) &#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x963B;&#x5BB3;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3002;PDI &#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30C1;&#x30AA;&#x30EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x9806;&#x5E8F;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x6027;&#x306E;&#x78BA;&#x7ACB;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059; A &#x3068; A&#39;&#x3001;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x53CD;&#x5BFE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &#x30FB; &#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30C1;&#x30AA;&#x30EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3002;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3057;&#x3001;PDI &#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3067;&#x306F;&#x7D44;&#x5408;&#x305B;&#x7684;&#x624B;&#x914D;&#x30C1;&#x30AA;&#x30EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x306F;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x3001;&#x7570;&#x6027;&#x5316;&#x9175;&#x7D20; Ero1p &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4E8C;&#x91CD;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xACB0;&#xD569; &#xD615;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xD669;&#xD654; isomerase (PDI) catalytically &#xD65C;&#xC131; &#xBC0F; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; thioredoxin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; homologs&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xAE30;&#xBCF8;&#xC774; &#xC544;&#xB2CC; disulfides&#xC758; &#xAC10;&#xCD95;/&#xC7AC;&#xBC30;&#xCE58;&#xC640; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; disulfides&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; PDI&#xC758; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xC5EC; &#xC11C; &#xD22C;&#xB974; &#xAC8C; &#xC774;&#xD574;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC790;&#xC5F0;&#xC801;&#xC778; &#xC81C;, ero1p&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xACB0;&#xD569; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xAC1C;&#xBCC4; PDI &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. Ero1p &#xC0B0;&#xD654; &#xC808;&#xC5F0;&#xB41C; PDI &#xCD09;&#xB9E4; thioredoxin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;, A&#xC640; A&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#39; &#xAC19;&#xC740; &#xC18D;&#xB3C4;&#xB85C;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; PDI&#xC758; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xB450; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC0B0;&#xD654; &#xC18D;&#xB3C4; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xC774;&#xC911; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC774;&#xB2E4;: &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xCD09;&#xB9E4;&#xC758; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC18D;&#xB3C4; (A&#39;) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC0F; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xCD09;&#xB9E4; (A) &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xAE30;&#xD310; &#xC911;&#xC7AC; &#xC800;&#xD574; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;. PDI&#xC5D0; thioredoxin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC21C;&#xC11C;&#xB294; &#xC0B0;&#xD654; &#xB418;&#xBBC0;&#xB85C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xC218;&#xB9BD;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; A&#xC640; A&#39;, &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC21C;&#xC11C;&#xC640; &#xAD6C;&#xC870;, &#xC774;&#xD669;&#xD654; isomerase&#xC640; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC01;&#xAC01; &#xBC18;&#xB300; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; thioredoxin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xACF5;&#xAC1C; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xC811;&#xB294; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xD589; &#xD558; &#xACE0; thioredoxin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC870;&#xD569; &#xC900;&#xBE44; PDI homologs&#xC758; &#xD655;&#xC0B0;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xD669;&#xD654; isomerase&#xC758; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98;&#xB294; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC640; Ero1p &#xC911;&#xC7AC; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; isomerase&#xC758; &#xC774;&#xC911; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Formaci&oacute;n de enlace de disulfuro nativa en eucariotas depende de isomerasa prote&iacute;na-disulfuro (PDI) y sus hom&oacute;logos, que contienen diferentes combinaciones de dominios tiorredoxina catal&iacute;tico activo e inactivo. Sin embargo, la contribuci&oacute;n espec&iacute;fica de PDI a la formaci&oacute;n de nuevos disulfuros versus reducci&oacute;n/cambio de disulfuros no nativos es mal entendida. Hemos analizado el papel de dominios individuales del PDI en la formaci&oacute;n del enlace de disulfuro en una reacci&oacute;n impulsada por su oxidante natural, Ero1p. Encontramos que Ero1p oxida los dominios aislados de catal&iacute;tico tiorredoxina PDI, A y A&#39; en la misma proporci&oacute;n. Por el contrario, encontramos que en el contexto de la PDI de cuerpo entero, hay una asimetr&iacute;a en la velocidad de oxidaci&oacute;n de los dos sitios activos. Esta asimetr&iacute;a es el resultado de un doble efecto: una mayor velocidad de oxidaci&oacute;n de la segunda catal&iacute;tica (A&#39;) dominio y la inhibici&oacute;n mediada por sustrato de oxidaci&oacute;n de la primera (A) catal&iacute;tico dominio. La orden espec&iacute;fica de tiorredoxina dominios en PDI es importante en el establecimiento de la asimetr&iacute;a en la velocidad de oxidaci&oacute;n de los dos sitios activos permitiendo A y A&#39;, dos dominios tiorredoxina que son similares en secuencia y estructura, para oponerse a roles funcionales como isomerasa disulfuro y oxidasa de disulfuro, respectivamente. Estos resultados revelan c&oacute;mo nativa disulfuro plegable se logra en el ret&iacute;culo endopl&aacute;smico y proporcionan un contexto para entender la proliferaci&oacute;n de hom&oacute;logos PDI con arreglos combinatorias de tiorredoxina dominios.

Arquitectura de dominio de isomerasa prote&iacute;na-disulfuro facilita su doble papel como una oxidasa y una isomerasa en formaci&oacute;n del disulfuro de Ero1p-mediada.

IgG &#x6297;&#x4F53;&#x5728;&#x62B5;&#x5FA1;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x541E;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6444;&#x5165;&#x4E0E;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x6740;&#x706D;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x8981;&#x95EE;&#x662F;&#x5426;&#x7C92;&#x5B50;&#x7684; IgG opsonization &#x63D0;&#x9AD8;&#x5230; phagosomes &#x7684;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x80DE;&#x5185;&#x9488;&#x5BF9;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D88;&#x9664;&#x5BF9;&#x63A5;&#x6536;&#x8FC7;&#x7A0B; IgG &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x5230;&#x4E73;&#x80F6;&#x73E0;&#x5728; 15-20 &#x6444;&#x6C0F;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x88AB;&#x706B;&#x7130;&#x541E;&#x6CA1;&#x7684; IgG &#x6D82;&#x5C42;&#x548C;&#x4E0D;&#x5E26;&#x6D82;&#x5C42;&#x7684;&#x73E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53EF;&#x9632;&#x6B62; phagosomes &#x4E0E;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x540E;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230; 37 &#x6444;&#x6C0F;&#x5EA6;&#x7684;&#x6E29;&#x5EA6;&#xFF0C;phagosomes &#x5305;&#x542B; IgG &#x73E0;&#x6210;&#x719F;&#x5927;&#x5927;&#x5FEB;&#x5230;&#x541E;&#x566C;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x6839;&#x636E;&#x5171;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x4E0E;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x6807;&#x5FD7;&#x6765;&#x5224;&#x65AD;&#x3002;IgG &#x6548;&#x679C;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x5176;&#x4ED6;&#x7C92;&#x5B50;&#x76F8;&#x5173;&#x6297;&#x539F;&#x6216;&#x8840;&#x6E05;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;/phagosome &#x9644;&#x4EF6;&#x4E5F;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x4F9D;&#x8D56;&#x95EA;&#x70C1;&#x63A5;&#x8FD1;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x751F;&#x5316;&#x91CF;&#x5316;&#x3002;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5927;&#x5927;&#x52A0;&#x5F3A;&#x4E86;&#x53CD;&#x5E94;&#x5305;&#x542B;&#x4ECE;&#x5DF2;&#x516C;&#x5F00;&#x5230; IgG &#x6D82;&#x5C42;&#x7684;&#x73E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; IgG &#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282;&#x80DE;&#x6D46;&#x9488;&#x5BF9;&#x673A;&#x68B0;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x3002;&#x4E0E;&#x4ECE;&#x4E3B;&#x7684;&#x4EBA;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x5F97;&#x5230;&#x4E86;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C; U 937 &#x7EC4;&#x7EC7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6027;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4ECE;&#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5375;&#x5DE2; (CHO) &#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x67D3;&#x4EBA; IgG &#xFF08;Fcgamma&#xFF09; &#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x5F71;&#x54CD;&#x76EE;&#x6807;&#x786E;&#x5B9A;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E2D;&#x7EE7;&#x5BF9;&#x63A5;&#x9636;&#x6BB5;&#x5E76;&#x7740;&#x624B;&#x901A;&#x8FC7;&#x9014;&#x5F84;&#x6D89;&#x53CA;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C.&#x663E;&#x793A; igG &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6D3B;&#x5316;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x96BE;&#x5F97;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x4FE1;&#x53F7;&#x63A7;&#x5236;&#x819C;&#x9488;&#x5BF9;&#x4E2D;&#x7EE7;&#x548C;&#x505C;&#x9760;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x8FD9;&#x6761;&#x6B65;&#x9053;&#x8D21;&#x732E;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x6297;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; G &#x4FE1;&#x53F7;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;/phagosome &#x5BF9;&#x63A5;&#x3002;

An important role of IgG antibodies in the defense against microbial infections is to promote the ingestion and killing of microbes by phagocytes. Here, we developed in vivo and in vitro approaches to ask whether opsonization of particles with IgG enhances intracellular targeting of lysosomes to phagosomes. To eliminate the effect of IgG on the ingestion process, cells were exposed to latex beads at 15-20 degrees C, which allows engulfment of both IgG-coated and uncoated beads but prevents the fusion of lysosomes with phagosomes. Upon shifting the temperature to 37 degrees C, phagosomes containing IgG beads matured significantly faster into phagolysosomes as judged by colocalization with lysosomal markers. The IgG effect was independent of other particle-associated antigens or serum factors. Lysosome/phagosome attachment was also quantified biochemically with a cytosol-dependent scintillation proximity assay. Interactions were enhanced significantly in reactions containing cytosol from mouse macrophages that had been exposed to IgG-coated beads, indicating that IgG signaling modulates the cytosolic-targeting machinery. Similar results were obtained with cytosol from primary human monocytes, human U-937 histiocytic lymphoma cells and from Chinese hamster ovary (CHO) cells transfected with a human IgG (Fcgamma) receptor. IgG-induced activation is shown to affect the actin-dependent tethering/docking stage of the targeting process and to proceed through a pathway involving protein kinase C. These results provide a rare example of an extracellular signal controlling membrane targeting on the level of tethering and docking. We propose that this pathway contributes to the role of antibodies in the protection against microbial infections.

Immunoglobulin G signaling activates lysosome/phagosome docking.

Un r&#xF4;le important des anticorps IgG dans la d&#xE9;fense contre les infections microbiennes est de promouvoir l&#x26;#39;ingestion et destruction des microbes par les phagocytes. Ici, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; in vivo et in vitro se rapproche de se demander si l&#x26;#39;opsonisation des particules avec IgG am&#xE9;liore le ciblage intracellulaire des lysosomes &#xE0; phagosomes. &#xC0; &#xE9;liminer l&#x26;#39;effet de l&#x26;#39;IgG sur le processus d&#x26;#39;ingestion, les cellules ont &#xE9;t&#xE9; expos&#xE9;s &#xE0; des billes de latex &#xE0; 15-20 &#xB0; C, ce qui permet d&#x26;#39;immersion deux billes IgG-rev&#xEA;tues et non rev&#xEA;tues, mais emp&#xEA;che la fusion de lysosomes avec phagosomes. Lors du d&#xE9;placement de la temp&#xE9;rature &#xE0; 37 &#xB0; C, phagosomes contenant des billes d&#x26;#39;IgG m&#xFB;ri nettement plus rapide en phagolysosomes &#xE0; en juger par colocalisation avec des marqueurs lysosomales. L&#x26;#39;effet IgG &#xE9;tait ind&#xE9;pendant des autres particules associ&#xE9;es &#xE0; des antig&#xE8;nes ou des facteurs s&#xE9;riques. Lysosome / phagosome attachement a &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; quantifi&#xE9;e biochimique avec un dosage de cytosol-d&#xE9;pendante scintillation de proximit&#xE9;. Les interactions ont &#xE9;t&#xE9; am&#xE9;lior&#xE9;es de mani&#xE8;re significative dans les r&#xE9;actions contenant cytosol des macrophages de souris qui avaient &#xE9;t&#xE9; expos&#xE9;s &#xE0; des IgG de billes rev&#xEA;tues, indiquant que les IgG de signalisation module la machinerie cytosolique de ciblage. Des r&#xE9;sultats similaires ont &#xE9;t&#xE9; obtenus avec le cytosol &#xE0; partir des monocytes primaires humains, des cellules U-937 lymphomes histiocytaires et de ovariennes de hamster chinois (cellules CHO) transfect&#xE9;es avec une IgG humaine (Fcgamma) du r&#xE9;cepteur. IgG-activation induite est d&#xE9;montr&#xE9; qu&#x26;#39;elle affecte la fonction modem actine-d&#xE9;pendante / &#xE9;tape d&#x26;#39;accostage du processus de ciblage et de proc&#xE9;der par une voie impliquant la prot&#xE9;ine kinase C. Ces r&#xE9;sultats fournissent un rare exemple d&#x26;#39;une membrane par un signal extracellulaire contr&#xF4;ler le ciblage sur le niveau de partage de la connexion et amarrage. Nous proposons que cette voie contribue &#xE0; le r&#xF4;le des anticorps dans la protection contre les infections microbiennes.

Immunoglobuline G Signalisation Active Lysosome / phagosome d&#x26;#39;accueil

Eine wichtige Rolle von IgG-Antik&ouml;rpern bei der Verteidigung gegen mikrobielle Infektionen ist die Einnahme und T&ouml;tung von Mikroben durch Fresszellen zu f&ouml;rdern. Hier haben wir in-vivo und in vitro Ans&auml;tze um zu Fragen, ob Opsonization Teilchen mit IgG erh&ouml;ht die intrazellul&auml;re Ausrichtung der Lysosomen zu Phagosomen entwickelt. Um die Wirkung der IgG auf der Aufnahme-Prozess zu beseitigen, wurden Zellen Latex Perlen bei 15-20 Grad C, ausgesetzt, die erm&ouml;glicht Engulfment IgG-beschichtete und unbeschichtete Perlen aber verhindert, dass die Fusion von Lysosomen mit Phagosomen. Nach Umstellung der Temperatur auf 37 Grad C, Phagosomen mit IgG-Beads deutlich schneller zu gereift Phagolysosomes wie von Kolokalisation mit lysosomalen Markern beurteilt. Der IgG-Effekt war unabh&auml;ngig von anderen Teilchen-assoziierte Antigene oder Serum Faktoren. Lysosom/Phagosom Anlage war auch biochemisch mit einem Zytosol abh&auml;ngigen Szintillation-N&auml;he-Assay quantifiziert. Interaktionen wurden erheblich verbessert, in Reaktionen mit Zytosol von Maus-Makrophagen, die ausgesetzt waren, zu IgG-beschichtete Perlen, darauf hinweist, dass IgG signalisieren die Zytosolische Zielversionen Maschinerie moduliert. &Auml;hnliche Ergebnisse wurden erzielt mit Zytosol von prim&auml;ren menschlichen Monozyten, menschliche U-937-Histiozyt&auml;re-Lymphom-Zellen und aus chinesischer Hamster Eierstock transfected Zellen (CHO) mit einem menschlichen IgG (Fcgamma)-Rezeptor. IgG-induzierte Aktivierung ist die Aktin-abh&auml;ngige Anbindehaltung/Andocken Phase gezielt zu beeinflussen und durch einen Weg mit Proteinkinase C. Vorgehen dargestellt. Diese Ergebnisse liefern ein seltenes Beispiel f&uuml;r eine extrazellul&auml;re Signal Steuern Membran Zielgruppenadressierung auf der Ebene der Anbindehaltung und Andocken. Wir schlagen vor, dass dieser Weg f&uuml;r die Rolle der Antik&ouml;rper in den Schutz vor mikrobiellen Infektionen beitr&auml;gt.

Immunglobulin G Signalisierung aktiviert Lysosom/Phagosom andocken.

Un ruolo importante degli anticorpi IgG nella difesa contro le infezioni microbiche &egrave; quello di promuovere l&#39;ingestione e l&#39;uccisione di microbi dai fagociti. Qui, abbiamo sviluppato approcci in vivo e in vitro per chiedere se opsonizzazione delle particelle con IgG migliora intracellulare di targeting dei lisosomi a phagosomes. Per eliminare l&#39;effetto delle IgG sul processo di ingestione, le cellule sono stati esposti a granuli di lattice a 15-20 gradi C, che permette di engulfment di perline rivestite di IgG e non patinate, ma impedisce la fusione dei lisosomi con phagosomes. Su spostando la temperatura a 37 gradi C, phagosomes contenente perline IgG maturata significativamente pi&ugrave; veloce in phagolysosomes come giudicato dalla presenza con marcatori lisosomiale. L&#39;effetto di IgG era indipendente da altri antigeni associati a particelle o i fattori del siero. Attaccamento lisosoma/Fagosoma &egrave; stato quantificato anche biochimicamente con un dosaggio di prossimit&agrave; di scintillazione citosol-dipendente. Le interazioni sono state rafforzate significativamente nelle reazioni contenenti cytosol da macrofagi di topo che erano stati esposti a perline rivestite di IgG, che indica che IgG segnalazione modula il macchinario citosolico di targeting. Risultati simili sono stati ottenuti con citosol da monociti umani primari, le cellule umane di linfoma istiocitario U-937 e dall&#39;ovaio di criceto cinese cellule (CHO) transfected con un recettore umano IgG (Fcgamma). Attivazione indotta da igG &egrave; mostrato di influenzare l&#39;actina-dipendente tethering/docking fase del processo di targeting e di procedere attraverso un percorso che coinvolge la proteina chinasi C. Questi risultati forniscono un esempio raro di un segnale extracellulare controllando membrana targeting sul livello di tethering e docking. Proponiamo che questo percorso contribuisce al ruolo di anticorpi nella protezione contro le infezioni microbiche.

Immunoglobulina G segnalazione attiva lisosoma/Fagosoma docking.

&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x611F;&#x67D3;&#x9632;&#x5FA1;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;IgG&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x98DF;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x6442;&#x53D6;&#x3068;&#x6BBA;&#x5BB3;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;IgG&#x3068;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x30AA;&#x30D7;&#x30BD;&#x30CB;&#x30F3;&#x5316;&#x304C;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3078;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x5897;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x805E;&#x3044;&#x3066;in vivo&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vitro&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6442;&#x53D6;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;IgG&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;IgG-&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x3001;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x8CAA;&#x98DF;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;15&#x304B;&#x3089;20&#x5EA6;C&#x3067;&#x306E;&#x30E9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x306E;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5224;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x308B;IgG&#x306E;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;37&#x2103;&#x306B;&#x6E29;&#x5EA6;&#x3092;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x901F;&#x304F;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002; IgG&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x7C92;&#x5B50;&#x95A2;&#x9023;&#x6297;&#x539F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8840;&#x6E05;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;/&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8FD1;&#x63A5;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3068;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x5B9A;&#x91CF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;IgG&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x68B0;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;IgG&#x6297;&#x4F53;&#x88AB;&#x8986;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x200B;&#x200B;&#x53CD;&#x5FDC;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304C;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30D2;&#x30C8;&#x5358;&#x7403;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;U-937&#x7D44;&#x7E54;&#x7403;&#x6027;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x30D2;&#x30C8;IgG&#xFF08;Fcgamma&#xFF09;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x30C1;&#x30E3;&#x30A4;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5375;&#x5DE3;&#xFF08;CHO&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30BE;&#x30EB;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002; IgG&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x76EE;&#x6A19;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x30C6;&#x30B6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;/&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30C6;&#x30B6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x819C;&#x306E;&#x7A00;&#x306A;&#x4F8B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x7D9A;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x9632;&#x5FA1;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;G&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;/&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;

&#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC29;&#xC5B4;&#xC5D0; IgG &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC12D;&#xCDE8;&#xC640; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xC0B4;&#xD574;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; in vivo &#xCCB4; &#xC678; &#xC811;&#xADFC; &#xC5EC;&#xBD80; opsonization Igg&#xC640; &#xC785;&#xC790;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; phagosomes &#xD558;&#xB294; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD45C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xAC8C; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC12D;&#xCDE8; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; Igg&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC140; phagosomes&#xC640; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC758; &#xC735;&#xD569;&#xC774; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; engulfment IgG &#xCF54;&#xD305; &#xBC0F; &#xBE44; &#xCF54;&#xD305; &#xAD6C;&#xC2AC;&#xC758; &#xC218;&#xB294; 15-20&#xB3C4; C&#xC5D0;&#xC11C; &#xB77C;&#xD14D;&#xC2A4; &#xAD6C;&#xC2AC;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB410;&#xB2E4;. 37 &#xC12D;&#xC528; &#xC628;&#xB3C4; &#xC628;&#xB3C4; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; IgG &#xAD6C;&#xC2AC;&#xC774; &#xB4E4;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; phagosomes &#xC131;&#xC219; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBE68;&#xB9AC; phagolysosomes&#xB85C; lysosomal &#xD45C;&#xC2DD;&#xC774; &#xC788;&#xB294; colocalization&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD310;&#xB2E8;&#xC73C;&#xB85C;. IgG &#xD6A8;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC785;&#xC790;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xB610;&#xB294; &#xD608; &#xCCAD; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;/phagosome &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C; &#xB610;&#xD55C; cytosol &#xC885;&#xC18D; &#xC12C;&#xAD11; &#xADFC;&#xC811; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC640; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xC815;&#xB7C9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; cytosol IgG &#xCF54;&#xD305; &#xAD6C;&#xC2AC;, &#xADF8; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; cytosolic &#xAE30;&#xACC4; &#xBCC0;&#xC870; IgG &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB358; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xD588;&#xB2E4;. Cytosol &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; monocytes&#xC5D0;&#xC11C;&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; U 937 histiocytic &#xB9BC;&#xD504; &#xC885; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xB09C;&#xC18C;&#xC5D0;&#xC11C; (&#xC870;) &#xC140; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; IgG (Fcgamma) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; &#xD398;. IgG &#xC720;&#xB3C4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC885;&#xC18D; tethering/&#xB3C4;&#xD0B9; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB300;&#xC0C1; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; c.&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD1B5;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC9C4;&#xD589; &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9C9; tethering &#xBC0F; &#xB3C4;&#xD0B9;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xB4DC;&#xBB38; &#xC608;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xD638; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0; G &#xC2E0;&#xD638; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;/phagosome &#xB3C4;&#xD0B9; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Un papel importante de anticuerpos IgG en la defensa contra las infecciones microbianas es promover la ingesti&#xF3;n y la muerte de los microbios por los fagocitos. Aqu&#xED;, hemos desarrollado in vivo e in vitro se aproxima a preguntar si opsonizaci&#xF3;n de part&#xED;culas con IgG aumenta orientaci&#xF3;n intracelular de los lisosomas a fagosomas. Para eliminar el efecto de IgG en el proceso de la ingesti&#xF3;n, las c&#xE9;lulas fueron expuestas a perlas de l&#xE1;tex a 15-20 grados C, que permite inmersi&#xF3;n de ambas perlas de IgG-revestidos y no revestidos, pero impide la fusi&#xF3;n de lisosomas con fagosomas. A cambio de la temperatura a 37 &#xBA; C, fagosomas que contienen perlas de IgG madurado significativamente m&#xE1;s r&#xE1;pido en fagolisosomas a juzgar por la colocalizaci&#xF3;n con marcadores lisosomales. El efecto de IgG fue independiente de otras part&#xED;culas ant&#xED;genos asociados o factores del suero. Lisosoma / fagosoma apego Tambi&#xE9;n se cuantific&#xF3; bioqu&#xED;micamente con un ensayo de centelleo citosol dependiente de la proximidad. Las interacciones se han mejorado de manera significativa en las reacciones que contienen citoplasma de los macr&#xF3;fagos de ratones que hab&#xED;an sido expuestos a la IgG revestida de piedras, lo que indica que la IgG se&#xF1;alizaci&#xF3;n modula la maquinaria citos&#xF3;lica de metas. Se obtuvieron resultados similares con citosol de monocitos humanos primarios, humanos c&#xE9;lulas U-937 y linfoma histioc&#xED;tico de ovario de h&#xE1;mster chino (CHO) transfectadas con un IgG humana (Fcgamma) del receptor. IgG inducida por la activaci&#xF3;n est&#xE1; demostrado que afectan a la inmovilizaci&#xF3;n de actina dependiente / etapa de acoplamiento del proceso de selecci&#xF3;n y proceder a trav&#xE9;s de una v&#xED;a que implica la prote&#xED;na cinasa C. Estos resultados proporcionan un raro ejemplo de una membrana de se&#xF1;ales extracelulares controlar la orientaci&#xF3;n en el nivel de anclaje y acoplamiento. Se propone que esta v&#xED;a contribuye a la funci&#xF3;n de los anticuerpos en la protecci&#xF3;n contra las infecciones microbianas.

Inmunoglobulina G de se&#xF1;alizaci&#xF3;n activa lisosoma / fagosoma de acoplamiento

&#x7531;&#x6CDB;&#x7D20;&#x6216;&#x5982; Nedd8 &#x6CDB;&#x7D20;&#x6837;&#x591A;&#x80BD;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x4FEE;&#x9970;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x5305;&#x62EC;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x548C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E86;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x6807;&#x7B7E;&#x6CDB;&#x7D20;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x6D3B;&#x52A8;&#x57FA;&#x7840;&#x5316;&#x5B66;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x8BC6;&#x522B;&#x4ECE;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x7684;&#x56DB;&#x4E2A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x3002;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; UCHL3 &#x88AB;&#x514B;&#x9686;&#x4ECE;&#x5F13;&#x5F62;&#x548C;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x9176;&#x62E5;&#x6709; deubiquitinating &#x4EE5;&#x53CA; deNeddylating &#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;UCHL3 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x4ECE;&#x51E0;&#x79CD;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x6CDB;&#x7D20;&#x548C; Nedd8 &#x53CC;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x5728;&#x573A;&#x4E2D;&#x7956;&#x5148;&#x771F;&#x6838; UCHL3 &#x5DF2;&#x88AB;&#x6574;&#x4E2A;&#x8FDB;&#x5316;&#x4FDD;&#x5B88;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;UCHL3 &#x4ECE;&#x5F13;&#x5F62;&#x7ED3;&#x6784;&#x8868;&#x5F81;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x53EF;&#x80FD;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x4EA4;&#x4E92;&#x6F14;&#x793A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x63D2;&#x5165;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B; apicomplexan &#x7684;&#x8868;&#x5F81; UCHL3s &#x5C06;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5230;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6CDB;&#x7D20;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B; Nedd8 &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;

Apicomplexan UCHL3 &#x4FDD;&#x7559;&#x6574;&#x4E2A;&#x8FDB;&#x5316;&#x7684;&#x6CDB;&#x7D20;&#x548C; Nedd8 &#x7684;&#x53CC;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;

Post-translational modification of proteins by ubiquitin or ubiquitin-like polypeptides such as Nedd8 controls cellular functions including protein degradation, the cell cycle and transcription. Here we have used an activity-based chemical probe that covalently labels ubiquitin hydrolases. We identify four such enzymes from Toxoplasma gondii by mass spectrometry. The homologue of mammalian UCHL3 was cloned from both T. gondii and Plasmodium falciparum and we show that both enzymes possess deubiquitinating as well as deNeddylating activity. A phylogenetic analysis of the UCHL3 amino acid sequences from several eukaryotes suggests that dual specificity for ubiquitin and Nedd8 was present in the ancestral eukaryotic UCHL3 and has been conserved throughout evolution. Finally, the structural characterization of UCHL3 from T. gondii shows a unique insertion at the surface of this enzyme, which may be involved in novel interactions with other proteins. The characterization of these apicomplexan UCHL3s adds to our understanding of the ubiquitin and Nedd8 pathways in these parasites.

Apicomplexan UCHL3 retains dual specificity for ubiquitin and Nedd8 throughout evolution.

Modification post-traductionnelle des prot&#xE9;ines par l&#x26;#39;ubiquitine polypeptides ou analogue &#xE0; l&#x26;#39;ubiquitine comme NEDD8 contr&#xF4;les fonctions cellulaires, y compris la d&#xE9;gradation des prot&#xE9;ines, le cycle cellulaire et la transcription. Ici nous avons utilis&#xE9; une sonde chimique bas&#xE9;e sur les activit&#xE9;s que les &#xE9;tiquettes de fa&#xE7;on covalente hydrolases ubiquitine. Nous identifions quatre de ces enzymes de Toxoplasma gondii par spectrom&#xE9;trie de masse. L&#x26;#39;homologue de UCHL3 mammif&#xE8;re a &#xE9;t&#xE9; clon&#xE9; &#xE0; la fois de T. gondii et Plasmodium falciparum, et nous montrons que les deux enzymes poss&#xE8;dent d&#xE9;subiquitination ainsi que deNeddylating activit&#xE9;. Une analyse phylog&#xE9;n&#xE9;tique des s&#xE9;quences d&#x26;#39;acides amin&#xE9;s UCHL3 de plusieurs eucaryotes sugg&#xE8;re que la sp&#xE9;cificit&#xE9; double pour l&#x26;#39;ubiquitine et Nedd8 &#xE9;tait pr&#xE9;sent dans la UCHL3 ancestrale eucaryote et a &#xE9;t&#xE9; conserv&#xE9; &#xE0; travers l&#x26;#39;&#xE9;volution. Enfin, la caract&#xE9;risation structurale des UCHL3 de T. gondii montre une insertion unique &#xE0; la surface de cette enzyme, qui peuvent &#xEA;tre impliqu&#xE9;s dans de nouvelles interactions avec d&#x26;#39;autres prot&#xE9;ines. La caract&#xE9;risation de ces UCHL3s apicomplexe ajoute &#xE0; notre compr&#xE9;hension des voies ubiquitine et Nedd8 dans ces parasites.

Apicomplexe UCHL3 Conserve double sp&#xE9;cificit&#xE9; pour l&#x26;#39;ubiquitine et Nedd8 Tout au long de l&#x26;#39;&#xE9;volution

Post-translationale Modifikation der Proteine durch Ubiquitin oder Polypeptide der Ubiquitin-wie z. B. Nedd8 steuert Zellfunktionen einschlie&szlig;lich Proteinabbau, Zellzyklus und Transkription. Hier haben wir eine t&auml;tigkeitsbezogene chemische Sonde verwendet, die kovalent Ubiquitin-HYDROLASEN Etiketten. Wir identifizieren vier Enzyme von Toxoplasma Gondii durch Massenspektrometrie. Homolog von S&auml;ugetier-UCHL3 wurde von T. Gondii und Plasmodium Falciparum geklont und wir zeigen, dass beide Enzyme, Deubiquitinating sowie DeNeddylating besitzen Aktivit&auml;t. Eine phylogenetische Analyse der UCHL3 Aminos&auml;ure-Sequenzen von mehreren Eukaryoten vermuten duale Spezifit&auml;t f&uuml;r Ubiquitin und Nedd8 war in den angestammten eukaryotischen UCHL3 vorhanden und hat in der gesamten Evolution konserviert worden. Schlie&szlig;lich zeigt die strukturelle Charakterisierung der UCHL3 von T. Gondii eine einzigartige eingef&uuml;gt, an der Oberfl&auml;che dieses Enzyms, die m&ouml;glicherweise in neuartige Interaktionen mit anderen Proteinen beteiligt sind. Die Charakterisierung der diese Apicomplexan f&uuml;gt UCHL3s f&uuml;r unser Verst&auml;ndnis der Ubiquitin und Nedd8 Wege in diese Parasiten.

Apicomplexan UCHL3 beh&auml;lt duale Spezifit&auml;t f&uuml;r Ubiquitin und Nedd8 w&auml;hrend Entwicklung.

Modifica alberino-di traduzione delle proteine ubiquitina o polipeptidi ubiquitina-come ad esempio Nedd8 controlla funzioni cellulari tra cui la degradazione delle proteine, il ciclo cellulare e la trascrizione. Qui abbiamo usato una sonda chimica basata su attivit&agrave; che covalentemente le etichette idrolasi di ubiquitin. Identificare quattro tali enzimi da Toxoplasma gondii tramite spettrometria totale. L&#39;omologo di mammiferi UCHL3 &egrave; stato clonato da T. gondii e da Plasmodium falciparum e ci mostrano che entrambi gli enzimi possiedono deubiquitinating cos&igrave; come deNeddylating attivit&agrave;. Un&#39;analisi filogenetica delle sequenze dell&#39;amminoacido UCHL3 da diversi eucarioti suggerisce che doppia specificit&agrave; per ubiquitina e Nedd8 era presente nella UCHL3 eucariotica ancestrale e conservato durante l&#39;evoluzione. Infine, la caratterizzazione strutturale di UCHL3 da T. gondii Mostra un unico inserimento sulla superficie di questo enzima, che possa essere coinvolti nel romanzo interazioni con altre proteine. La caratterizzazione di questi Apicomplexa UCHL3s aggiunge alla nostra comprensione dell&#39;ubiquitina e Nedd8 percorsi in questi parassiti.

Apicomplexan UCHL3 mantiene la doppia specificit&agrave; per ubiquitina e Nedd8 nel corso dell&#39;evoluzione.

&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x542B;&#x3080;NEDD8&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x4FEE;&#x98FE;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x3001;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x539F;&#x866B;&#x306E;4&#x3064;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x9175;&#x7D20;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;UCHL3&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x3068;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#xFF08;Plasmodium falciparum&#xFF09;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304B;&#x3089;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x304C;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;deNeddylating&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x8131;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x304B;&#x3089;UCHL3&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;NEDD8&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x5148;&#x7956;&#x4EE3;&#x3005;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;UCHL3&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x9032;&#x5316;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x304B;&#x3089;UCHL3&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x72EC;&#x7279;&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30D4;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B5;UCHL3s&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;NEDD8&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306B;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30D4;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B5;UCHL3&#x306F;&#x3001;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x904E;&#x7A0B;&#x3067;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;NEDD8&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;

&#xD3EC;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC88;&#xC5ED; &#xC0C1; &#xC218;&#xC815; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xB610;&#xB294; Nedd8 &#xAC19;&#xC740; polypeptides &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC800;&#xD558;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xBC0F; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#x70AD; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; hydrolases &#xB808;&#xC774;&#xBE14; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB454; &#xD654;&#xD559; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Toxoplasma gondii&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; UCHL3 homologue T. gondii Plasmodium falciparum &#xBAA8;&#xB450;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC81C;&#xB294; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB450; &#xD6A8;&#xC18C; deNeddylating &#xBC0F; deubiquitinating&#xB85C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; UCHL3 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; phylogenetic &#xBD84;&#xC11D; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;&#xACFC; nedd8&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC911; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xC870;&#xC0C1; &#xC9C4; &#xD575; uchl3&#xC5D0;&#xB294; &#xC9C4;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xBCF4;&#xC874; &#xB41C; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, T. gondii&#xC5D0;&#xC11C; uchl3&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC18C;&#xC124; &#xC0C1;&#xD638; &#xAD00;&#xB828; &#xC218;&#xB3C4;&#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC0BD;&#xC785;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; apicomplexan &#xD2B9;&#xC131; UCHL3s &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;&#xACFC; Nedd8 &#xACBD;&#xB85C;&#xC774; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Apicomplexan UCHL3 &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;&#xACFC; nedd8&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C4;&#xD654;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xC774;&#xC911; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Modificaci&#xF3;n post-traduccional de las prote&#xED;nas por ubiquitina polip&#xE9;ptidos o ubiquitina-al igual que como NEDD8 controla las funciones celulares, como la degradaci&#xF3;n de la prote&#xED;na, el ciclo celular y la transcripci&#xF3;n. Aqu&#xED; hemos utilizado una sonda qu&#xED;mica basada en las actividades que las etiquetas covalentemente hidrolasas ubiquitina. Identificamos cuatro de estas enzimas de Toxoplasma gondii mediante espectrometr&#xED;a de masas. El hom&#xF3;logo de mam&#xED;feros UCHL3 fue clonado a partir tanto de T. gondii y Plasmodium falciparum y nos muestran que ambas enzimas poseen deubiquitinating, as&#xED; como deNeddylating actividad. Un an&#xE1;lisis filogen&#xE9;tico de las secuencias de amino&#xE1;cidos UCHL3 de eucariotas varios sugiere que la especificidad dual para la ubiquitina y NEDD8 estaba presente en los eucariotas UCHL3 ancestral y se ha conservado durante la evoluci&#xF3;n. Finalmente, la caracterizaci&#xF3;n estructural de UCHL3 de T. gondii muestra una inserci&#xF3;n &#xFA;nica en la superficie de esta enzima, que pueden estar implicados en las interacciones con otras prote&#xED;nas nuevas. La caracterizaci&#xF3;n de estos UCHL3s apicomplejo se suma a nuestra comprensi&#xF3;n de las v&#xED;as de ubiquitina y NEDD8 en estos par&#xE1;sitos.

Apicomplexan UCHL3 Retiene doble especificidad de ubiquitina y NEDD8 A lo largo de la evoluci&#xF3;n

BALB/c &#x5C0F;&#x9F20;&#x63A7;&#x5236;&#x9884;&#x7559;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x548C;&#x5F00;&#x53D1;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x6162;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#xFF0C;&#x5728;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x514D;&#x75AB;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E00;&#x6837;&#x3002;&#x4EA7;&#x751F;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x7684; CD8 + T &#x7EC6;&#x80DE;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#xFF0C;&#x514D;&#x53D7; T.&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x627F;&#x8BA4;&#x8FC4;&#x4ECA;&#x4E3A;&#x6B62;&#x4ECD;&#x7136;&#x96BE;&#x4EE5;&#x6349;&#x6478;&#x3002;

&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x6D3E;&#x751F; CD8 + T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5B9A;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x8BC6;&#x522B;&#x3002;

BALB/c mice control infection with the obligate intracellular parasite Toxoplasma gondii and develop a latent chronic infection in the brain, as do immunocompetent humans. Interferon-gamma-producing CD8+ T cells provide essential protection against T. gondii infection, but the epitopes recognized have so far remained elusive.

Parasite stage-specific recognition of endogenous Toxoplasma gondii-derived CD8+ T cell epitopes.

Souris BALB / c lutter contre l&#x26;#39;infection avec le parasite intracellulaire obligatoire gondii Toxoplasma et de d&#xE9;velopper une infection chronique latente dans le cerveau, comme le font les humains immunocomp&#xE9;tents. L&#x26;#39;interf&#xE9;ron-gamma-production de cellules CD8 + T offrent une protection essentielle contre l&#x26;#39;infection par T. gondii, mais les &#xE9;pitopes reconnus ont jusqu&#x26;#39;ici rest&#xE9; inaccessible.

Parasite &#xE9;tape sp&#xE9;cifique de la reconnaissance endog&#xE8;nes Toxoplasma gondii d&#xE9;riv&#xE9;s CD8 + &#xE9;pitopes de lymphocytes T

BALB/c M&auml;use steuern die obligat intrazellul&auml;re Parasiten Toxoplasma Gondii-Infektion und eine latente chronische Infektion im Gehirn zu entwickeln, wie immunkompetenten Menschen tun. Interferon-Gamma-produzieren von CD8 + T-Zellen bieten wesentlichen Schutz gegen T. Gondii-Infektion, aber die Epitope erkannt haben bisher schwer fassbaren geblieben.

Parasit B&uuml;hne-spezifische Anerkennung der endogenen Toxoplasma Gondii abgeleitete CD8 + T Zelle Epitopes.

Topi BALB/c controllano infezione con il Toxoplasma gondii parassiti intracellulari obbligati e sviluppano un&#39;infezione cronica latente nel cervello, come fanno gli esseri umani esprimono. Cellule T CD8 + produzione di interferone-gamma forniscono protezione essenziale contro l&#39;infezione da T. gondii, ma gli epitopi riconosciuti sono rimasti finora elusivi.

Riconoscimento di specifiche della fase parassita di endogeni Toxoplasma gondii-derivato CD8 + T cell epitopi.

&#x504F;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x3068;BALB / c&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x4EBA;&#x9593;&#x304C;&#x305D;&#x3046;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x8133;&#x5185;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x6162;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; CD8&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;-&#x3B3;&#x7523;&#x751F;+ T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x539F;&#x866B;&#x7531;&#x6765;&#x306E;CD8 + T&#x7D30;&#x80DE;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;

BALB/c &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC758;&#xBB34; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; Toxoplasma gondii&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558; &#xACE0; &#xAC19;&#xC774; immunocompetent &#xC778;&#xAC04; &#xB450;&#xB1CC;&#xC5D0; &#xC7A0;&#xC7AC; &#xB41C; &#xB9CC;&#xC131; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;. CD8 + T &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; &#xAC10;&#xB9C8; &#xC0DD;&#xC131; T. gondii &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xBCF4;&#xD638; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC778;&#xC2DD; epitopes &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC560;&#xB9E4; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;.

&#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &#xC0DD; Toxoplasma gondii &#xD30C;&#xC0DD; CD8 + T &#xC138;&#xD3EC; epitopes &#xBB34;&#xB300; &#xAD00;&#xB828; &#xC778;&#xC2DD;.

Ratones Balb / c de infecci&#xF3;n de control con el protozoo par&#xE1;sito intracelular obligado Toxoplasma y desarrollar una infecci&#xF3;n cr&#xF3;nica latente en el cerebro, al igual que los seres humanos inmunocompetentes. El interfer&#xF3;n-gamma-la producci&#xF3;n de linfocitos T CD8 + proporcionan una protecci&#xF3;n esencial contra la infecci&#xF3;n por T. gondii, pero reconoce los ep&#xED;topos hasta ahora hab&#xED;a sido dif&#xED;cil de alcanzar.

Par&#xE1;sito etapa espec&#xED;fica de reconocimiento de sus propias Toxoplasma gondii derivados CD8 + ep&#xED;topos de c&#xE9;lulas T

&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50; IL-12 &#x5929;&#x751F;&#x541E;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x5728;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x671F;&#x95F4;&#x751F;&#x4EA7;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x6548;&#x5E94; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x75C5;&#x671F;&#x95F4;&#x5185;&#x5B58; CD8 + T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-12 &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x5185;&#x5B58; CTL &#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x65B0;&#x578B; H-2 K (b)-CTL &#x9650;&#x5236;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x6297;&#x539F; tgd057 &#x7684;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3002;Tgd057 &#x7279;&#x5B9A; Ctl &#x8BF1;&#x5BFC;&#x514D;&#x75AB;&#x63A5;&#x79CD;&#x548C;&#x53E3;&#x670D;&#x7684;&#x81EA;&#x7136;&#x611F;&#x67D3;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x591A;&#x514B;&#x9686;&#x7684; CTL &#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x4EE3;&#x8868;&#x4E86;&#x3002;Tgd057 &#x7279;&#x5B9A;&#x4E3B;&#x6548;&#x5E94;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684; KLRG1 + &#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x4E9A;&#x7FA4;&#x53CA;&#x54CD;&#x5E94;&#x81F3; restimulation &#x4E0E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F; restimulation &#x540C;&#x6E90;&#x80BD;&#x4E0E;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x751F;&#x4EA7;&#x6240;&#x9700;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-12&#x3002;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-12 &#x7F3A;&#x4E4F;&#x5728;&#x4E3B;&#x54CD;&#x5E94;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x662F;&#x6DF1;&#x523B;&#x5370;&#x8FF9;&#x5185;&#x5B58; Ctl&#xFF0C;&#x7EE7;&#x7EED;&#x663E;&#x793A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7F16;&#x53F7;&#x3001; KLRG1 + &#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x5185;&#x5B58;&#x4E9A;&#x7FA4;&#x5206;&#x5316;&#x548C;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x53EC;&#x56DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728;&#x751F;&#x6210;&#x751F;&#x4EA7;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x8F85;&#x52A9; tgd057 &#x7279;&#x5B9A;&#x6548;&#x5E94;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x52A0;&#x5F3A;&#x4E86;&#x79BB;&#x7684; CD62L(hi) KLRG1-CD8 + T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-12 &#x6CA1;&#x6709;&#x533A;&#x5206;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#xFF0C;&#x8BC1;&#x660E;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-12 &#x4FE1;&#x53F7;&#x8D28;&#x91CF;&#x7684;&#x4E2D;&#x592E;&#x5185;&#x5B58; CTL &#x8F66;&#x53A2;&#x7684;&#x8D1F;&#x9762;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5728;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x6548;&#x5E94;&#x5206;&#x5316;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-12 &#x7684;&#x6709;&#x76CA;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-12 &#x5728; CTL &#x542F;&#x52A8;&#x671F;&#x95F4;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x66B4;&#x9732;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x9650;&#x5236;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E2D;&#x592E;&#x5185;&#x5B58; CTL &#x53CD;&#x5E94;&#x51CF;&#x5C11;&#x5065;&#x8EAB;&#x957F;&#x671F;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-12 &#x63ED;&#x793A;&#x7684;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E; Tgd057 &#x7684; CD8 + T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6548;&#x5E94;&#x548C;&#x4E2D;&#x592E;&#x5185;&#x5B58;&#x54CD;&#x5E94;&#x5FAE;&#x5206;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

Production of the pro-inflammatory cytokine IL-12 by innate phagocytes drives the differentiation of IFN-gamma-producing effector T cells during Toxoplasma gondii infection. However, the role of IL-12 in the regulation of memory CD8+ T cell differentiation and function during murine toxoplasmosis is unclear. To track memory CTL development, we identified a novel H-2K(b)-restricted CTL population specific for the Toxoplasma antigen tgd057. Tgd057-specific CTLs were induced by both vaccination and natural peroral infection, and were representative of the polyclonal CTL population. Tgd057-specific primary effector cells required IL-12 for the differentiation of KLRG1+ effector subpopulations and IFN-gamma production in response to restimulation with parasite-infected cells, but not to restimulation with cognate peptide. The effect of IL-12 deficiency during the primary response was profoundly imprinted on memory CTLs, which continued to show defects in cell numbers, KLRG1+ effector memory subpopulation differentiation, and IFN-gamma recall responses. Importantly, isolated CD62L(hi) KLRG1- CD8+ T cells differentiated in the absence of IL-12 were enhanced in their ability to generate IFN-gamma-producing secondary tgd057-specific effector cells. Our data, for the first time, demonstrate the negative impact of IL-12 signaling on the quality of the central memory CTL compartment. Thus, despite the beneficial role of IL-12 in promoting effector differentiation, excessive exposure to IL-12 during CTL priming may limit the development of long-term protective immunity through the decreased fitness of central memory CTL responses.

Differential regulation of effector- and central-memory responses to Toxoplasma gondii Infection by IL-12 revealed by tracking of Tgd057-specific CD8+ T cells.

La production de la cytokine pro-inflammatoire IL-12 par les phagocytes inn&#xE9;es entra&#xEE;ne la diff&#xE9;renciation de l&#x26;#39;IFN-gamma-production lymphocytes T effecteurs au cours de l&#x26;#39;infection &#xE0; Toxoplasma gondii. Cependant, le r&#xF4;le de l&#x26;#39;IL-12 dans la r&#xE9;gulation de la diff&#xE9;renciation + CD8 m&#xE9;moire des lymphocytes T et la fonction au cours de la toxoplasmose murine n&#x26;#39;est pas claire. Pour suivre le d&#xE9;veloppement de m&#xE9;moire CTL, nous avons identifi&#xE9; un roman H-2K (b)-restreinte de la population de CTL sp&#xE9;cifique de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne Toxoplasma tgd057. Tgd057 CTL sp&#xE9;cifiques ont &#xE9;t&#xE9; induites par la vaccination et l&#x26;#39;infection naturelle par voie orale, et sont repr&#xE9;sentatifs de la population de CTL polyclonaux. Tgd057-primaires sp&#xE9;cifiques des cellules effectrices n&#xE9;cessaire IL-12 pour la diff&#xE9;renciation de sous-populations KLRG1 + effectrices et l&#x26;#39;IFN-gamma en r&#xE9;ponse &#xE0; la production restimulation avec les cellules infect&#xE9;es par des parasites, mais pas &#xE0; restimulation avec le peptide apparent&#xE9;. L&#x26;#39;effet de l&#x26;#39;IL-12 lors de la r&#xE9;ponse d&#xE9;ficit primaire a &#xE9;t&#xE9; profond&#xE9;ment inscrit sur CTL m&#xE9;moire, qui ont continu&#xE9; &#xE0; pr&#xE9;senter des d&#xE9;fauts dans le nombre de cellules, les KLRG1 + de diff&#xE9;renciation effecteur sous-population de la m&#xE9;moire, et les r&#xE9;ponses de rappel IFN-gamma. Il est important, isol&#xE9;s CD62L (salut) KLRG1-lymphocytes T CD8 + diff&#xE9;renci&#xE9;s en l&#x26;#39;absence d&#x26;#39;IL-12 ont &#xE9;t&#xE9; renforc&#xE9;es dans leur capacit&#xE9; &#xE0; g&#xE9;n&#xE9;rer de l&#x26;#39;IFN-gamma-production secondaires tgd057 sp&#xE9;cifiques des cellules effectrices. Nos donn&#xE9;es, pour la premi&#xE8;re fois, de d&#xE9;montrer l&#x26;#39;impact n&#xE9;gatif de l&#x26;#39;IL-12 de signalisation sur la qualit&#xE9; du compartiment CTL m&#xE9;moire centrale. Ainsi, malgr&#xE9; le r&#xF4;le b&#xE9;n&#xE9;fique de l&#x26;#39;IL-12 dans la promotion de la diff&#xE9;renciation effecteur, une exposition excessive &#xE0; l&#x26;#39;IL-12 lors de l&#x26;#39;amor&#xE7;age CTL peut limiter le d&#xE9;veloppement &#xE0; long terme une immunit&#xE9; protectrice &#xE0; travers la remise en forme a diminu&#xE9; de r&#xE9;ponses de la m&#xE9;moire centrale de CTL.

R&#xE9;gulation diff&#xE9;rentielle de r&#xE9;ponses effectrices et centrale-m&#xE9;moire &#xE0; Toxoplasma gondii par l&#x26;#39;IL-12 a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; par Le suivi des Tgd057-CD8 sp&#xE9;cifiques des cellules T +

Produktion von der Pro-inflammatorische Zytokine IL-12 von angeborenen Fresszellen treibt die Differenzierung der IFN-Gamma-Herstellung von T-Effektorzellen w&auml;hrend Toxoplasma Gondii-Infektion. Die Rolle der IL-12 in der Verordnung der Speicher CD8 + T-Zelldifferenzierung und Funktion w&auml;hrend der murinen Toxoplasmose ist jedoch unklar. Um Speicher CTL-Entwicklung zu verfolgen, haben wir eine neuartige H - 2 K (b) identifiziert-eingeschr&auml;nkte CTL-Bev&ouml;lkerung, die spezifisch f&uuml;r die Toxoplasma-Antigen-tgd057. Tgd057-spezifischen CTLs wurden durch Impfung und nat&uuml;rliche peroraler Infektion induziert und waren Vertreter der polyklonalen CTL-Bev&ouml;lkerung. Tgd057-spezifischen prim&auml;ren Effektorzellen erforderlich IL-12 f&uuml;r die Differenzierung der KLRG1 + Effektor Subpopulationen und IFN-Gamma Produktion als Reaktion auf Restimulation mit Parasit-infizierten Zellen, nicht jedoch auf Restimulation mit verwandten Peptid. Die Wirkung von IL-12-Mangel w&auml;hrend der prim&auml;re Antwort war tief eingepr&auml;gten Speicher CTLs, die weiterhin M&auml;ngel in Zelle Zahlen, KLRG1 + Effektor Speicher Teilgesamtheit Differenzierung und IFN-Gamma R&uuml;ckruf Antworten zu zeigen. Wichtig ist, wurden isolierte CD62L(hi) KLRG1 - CD8 + T-Zellen differenziert in Ermangelung von IL-12 in ihrer F&auml;higkeit zum Generieren von IFN-Gamma-produzieren sekund&auml;re tgd057-spezifischen Effektorzellen erweitert. Unsere Daten zeigen zum ersten Mal, die negative Auswirkungen auf die Lebensqualit&auml;t der zentralen CTL-Speicherkartenfach IL-12 zu signalisieren. So kann trotz der positiven Rolle von IL-12 bei der F&ouml;rderung der Effektor-Differenzierung, &uuml;berm&auml;&szlig;igen Exposition zu IL-12 w&auml;hrend der CTL-Grundierung die Entwicklung der langfristigen sch&uuml;tzende Immunit&auml;t durch die verminderte Fitness der zentrale Speicher CTL-Antworten beschr&auml;nken.

Differentielle Regulation der Effektor - und zentral-Speicher Antworten zu Toxoplasma Gondii Infektion von IL-12 offenbart durch die Verfolgung der Tgd057-spezifische CD8 + T-Zellen.

Produzione delle citochine pro-infiammatorie IL-12 da fagociti innate unit&agrave; la differenziazione di IFN-gamma-produzione di cellule T effettrici durante l&#39;infezione da Toxoplasma gondii. Tuttavia, il ruolo del-12 nella regolazione della differenziazione di cellule T CD8 + memoria e funzione durante la toxoplasmosi murino &egrave; chiaro. Per tenere traccia di memoria sviluppo di CTL, abbiamo identificato un romanzo K H-2 (b)-ristretta popolazione di CTL specifici per il Toxoplasma antigene tgd057. Tgd057-specifici CTL sono stati indotti da vaccinazione e di infezione somministrazione orale naturale e fossero rappresentative della popolazione policlonale CTL. Cellule effettrici primarie Tgd057 specifico richiesto IL 12 per la differenziazione dei KLRG1 + effettrici sottopopolazioni e produzione di IFN-gamma in risposta a restimulation con le cellule infettate dal parassita, ma non per restimulation con cognato del peptide. L&#39;effetto di IL-12 deficit durante la risposta primaria &egrave; stata profondamente impresso nella memoria CTL, che ha continuato a mostrare difetti in numeri di cellulare, KLRG1 + effettrici memoria sottopopolazione differenziazione e IFN-gamma risposte di richiamo. Importante, isolate CD62L(hi) KLRG1 - CD8 + T cellule differenziate in assenza di IL-12 sono state rafforzate nella loro capacit&agrave; di generare IFN-gamma-produrre le cellule effettrici specifiche tgd057 secondaria. I nostri dati, per la prima volta, dimostrano l&#39;impatto negativo del-12 segnalazione sulla qualit&agrave; del vano CTL memoria centrale. Cos&igrave;, nonostante il ruolo benefico del-12 nel promuovere la differenziazione effector, eccessiva esposizione a IL-12 durante l&#39;innesco della CTL possa limitare lo sviluppo di immunit&agrave; protettiva a lungo termine attraverso il fitness diminuzione delle risposte CTL memoria centrale.

Regolazione differenziale delle risposte memoria effettrici e centrale a Toxoplasma gondii infezione da IL-12, rivelato dal rilevamento di cellule T CD8 + Tgd057-specifiche.

&#x751F;&#x5F97;&#x7684;&#x306A;&#x98DF;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;IL-12&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x539F;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x6642;&#x306E;IFN-&#x3B3;&#x7523;&#x751F;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x99C6;&#x52D5;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x30FC;CD8&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;IL-12&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x75C7;&#x306E;&#x9593;&#x306B;+ T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x30FC;CTL&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;H-2K&#xFF08;b&#xFF09;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x6297;&#x539F;tgd057&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;CTL&#x96C6;&#x56E3;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Tgd057&#x7279;&#x7570;&#x7684;CTL&#x306F;&#x3001;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x63A5;&#x7A2E;&#x3068;&#x81EA;&#x7136;&#x7D4C;&#x53E3;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;CTL&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x4EE3;&#x8868;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; Tgd057&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x518D;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x540C;&#x65CF;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x518D;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;KLRG1 +&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x96C6;&#x56E3;&#x3068;IFN-&#x3B3;&#x7523;&#x751F;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;IL-12&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x6B21;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6642;&#x306E;IL-12&#x6B20;&#x640D;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306F;&#x6DF1;&#x304F;&#x7D30;&#x80DE;&#x6570;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x3001;KLRG1 +&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x30FC;&#x96C6;&#x56E3;&#x5206;&#x5316;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;IFN-&#x3B3;&#x306E;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x7D9A;&#x3051;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x30FC;CTL&#x306F;&#x3001;&#x4E0A;&#x306B;&#x523B;&#x5370;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x9694;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;CD62L&#xFF08;HI&#xFF09;KLRG1-CD8 + T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x6B21;tgd057&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;IFN-&#x3B3;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x304C;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;IL-12&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x3001;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30EB;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x30FC;CTL&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x8CEA;&#x306B;IL-12&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x8CA0;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;IL-12&#x306E;&#x6709;&#x76CA;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;CTL&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x4E2D;&#x306B;IL-12&#x3078;&#x306E;&#x904E;&#x5EA6;&#x306E;&#x9732;&#x51FA;&#x304C;&#x4E2D;&#x592E;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;CTL&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30B9;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x305F;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x9632;&#x5FA1;&#x514D;&#x75AB;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Tgd057&#x7279;&#x7570;&#x7684;CD8 + T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;IL-12&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30EB;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x30FC;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x5DEE;&#x52D5;&#x898F;&#x5236;

&#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; IL-12 &#xD504;&#xB85C;-&#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; cytokine &#xC0DD;&#xC0B0; Toxoplasma gondii &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC; IFN-&#xAC10;&#xB9C8; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC774;&#xD399;&#xD130; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, murine toxoplasmosis &#xB3D9;&#xC548; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; CD8 + T &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC640; &#xAE30;&#xB2A5; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; IL-12&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xBD84;&#xBA85; &#xD558;&#xC9C0;. &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; CTL &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xCD94;&#xC801; &#xD558;&#xB294; &#xC18C;&#xC124; H K (b)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DD;&#xBCC4;-&#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; CTL &#xC778;&#xAD6C; Toxoplasma &#xD56D; &#xC6D0; tgd057&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC815;. Tgd057 &#xD2B9;&#xC815; Ctl &#xBAA8;&#xB450; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885;&#xACFC; &#xC790;&#xC5F0; peroral &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xBC1C; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC0F; polyclonal CTL &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xB300;&#xD45C; &#xD588;&#xB2E4;. Tgd057 &#xD2B9;&#xC815; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC140; KLRG1 + &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC9D1;&#xB2E8;&#xAC04;&#xC758; &#xB3D9;&#xC871; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC640; restimulation &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; restimulation&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; IFN-&#xAC10;&#xB9C8; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; IL-12 &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xBCF8; &#xC751;&#xB2F5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; IL-12 &#xACB0;&#xD54D;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC2EC;&#xD788; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; &#xC140; &#xBC88;&#xD638;, KLRG1 + &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; subpopulation &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; IFN-&#xAC10;&#xB9C8; &#xB9AC;&#xCF5C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xACB0;&#xD568;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xACC4;&#xC18D; Ctl&#xC5D0; &#xC778;&#xC1C4; &#xB41C;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, IL-12&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; CD62L(hi) KLRG1-CD8 + T &#xC138;&#xD3EC; IFN-&#xAC10;&#xB9C8; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xBCF4;&#xC870; tgd057 &#xC804;&#xC6A9; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; IL-12 &#xC2E0;&#xD638; &#xC911;&#xC559; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; CTL &#xAD6C;&#xD68D;&#xC758; &#xD488;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD64D;&#xBCF4;&#xC5D0; IL-12 &#xC720;&#xC775;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; CTL &#xBABB;&#xC4F0;&#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; IL-12&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACFC;&#xB3C4; &#xD55C; &#xB178;&#xCD9C;&#xC744; &#xC911;&#xC559; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; CTL &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C; &#xD53C;&#xD2B8; &#xB2C8;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC7A5;&#xAE30; &#xBCF4;&#xD638; &#xBA74;&#xCC45; &#xD2B9;&#xAD8C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC640; &#xC911;&#xC559; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; &#xC751;&#xB2F5; Toxoplasma gondii IL-12 Tgd057 &#xD2B9;&#xC815; CD8 + T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCD94;&#xC801;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCC28;&#xB4F1; &#xADDC;&#xC81C;.

La producci&#xF3;n de la citoquina pro-inflamatoria IL-12 por los fagocitos innatas impulsa la diferenciaci&#xF3;n de IFN-gamma que producen las c&#xE9;lulas T efectoras durante la infecci&#xF3;n por Toxoplasma gondii. Sin embargo, el papel de la IL-12 en la regulaci&#xF3;n de la memoria CD8 + diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T y la funci&#xF3;n durante la toxoplasmosis murino no est&#xE1; claro. Para realizar un seguimiento de desarrollo de la memoria de CTL, hemos identificado un nuevo H-2K (b)-restringido de la poblaci&#xF3;n de CTL espec&#xED;fico para el ant&#xED;geno de Toxoplasma tgd057. Tgd057 CTLs espec&#xED;ficos fueron inducidos por la vacunaci&#xF3;n y la infecci&#xF3;n por v&#xED;a oral natural, y son representativas de la poblaci&#xF3;n policlonal de CTL. Tgd057 espec&#xED;ficos de las c&#xE9;lulas efectoras primarias requiere la IL-12 para la diferenciaci&#xF3;n de KLRG1 + subpoblaciones efectoras e IFN-gamma producci&#xF3;n en respuesta a reestimulaci&#xF3;n con par&#xE1;sito de las c&#xE9;lulas infectadas, pero no a reestimulaci&#xF3;n con el p&#xE9;ptido af&#xED;n. El efecto de la IL-12 durante la deficiencia de la respuesta primaria se imprimi&#xF3; profundamente en la memoria CTL, que siguieron muestran defectos en el n&#xFA;mero de c&#xE9;lulas, las KLRG1 + diferenciaci&#xF3;n efector de memoria subpoblaci&#xF3;n, y de IFN-gamma recordar las respuestas. Es importante destacar que, aislados CD62L (hi) KLRG1-linfocitos T CD8 + diferenciarse en ausencia de IL-12 se han mejorado en su capacidad para generar IFN-gamma-produciendo secundarias tgd057 espec&#xED;ficos de las c&#xE9;lulas efectoras. Nuestros datos, por primera vez, demostrar el efecto negativo de la IL-12 de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en la calidad del compartimiento de memoria CTL central. Por lo tanto, a pesar del papel beneficioso de la IL-12 en la promoci&#xF3;n de la diferenciaci&#xF3;n de efectos, la exposici&#xF3;n excesiva a la IL-12 durante el cebado de CTL puede limitar el desarrollo de la inmunidad a largo plazo de protecci&#xF3;n a trav&#xE9;s de la disminuci&#xF3;n de la aptitud de las respuestas de memoria CTL centrales.

Diferencial de regulaci&#xF3;n de las respuestas efectoras y de memoria central a infecci&#xF3;n por Toxoplasma gondii por la IL-12 reveladas por El seguimiento de Tgd057 espec&#xED;ficos de linfocitos T CD8 +

&#x662F;&#x91CD;&#x65B0;&#x6392;&#x5217; &#xFF08;&#x901A;&#x4EA7;&#x6DA6;&#x76DB;) &#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x662F;&#x7814;&#x7A76; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x80B2;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x901A;&#x4EA7;&#x6DA6;&#x76DB;&#x88AB;&#x901A;&#x5E38;&#x9694;&#x79BB;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x76F8;&#x5173;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x957F;&#x671F;&#x57F9;&#x517B;&#x540E;&#x5F80;&#x5F80;&#x540E;&#x91CD;&#x590D;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x523A;&#x6FC0;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x65E0;&#x53EF;&#x907F;&#x514D;&#x5730;&#x503E;&#x659C; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4EBA;&#x53E3;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x968F;&#x673A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6574;&#x5408; TCR &#x963F;&#x5C14;&#x6CD5;&#x548C;&#x8D1D;&#x5854;&#x94FE;&#x548C;&#x4ECE; nonendogenous &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x8868;&#x793A;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x7F3A;&#x70B9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x8868;&#x89C2;&#x9057;&#x4F20;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x8F6C;&#x79FB;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x4E0E;&#x9884;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x60C5;&#x51B5;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x751F;&#x6210;&#x8868;&#x8FBE; TCR &#x4ECE;&#x5176;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x7684;&#x8F68;&#x8FF9;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5F15;&#x5165;&#x57FA;&#x56E0;&#x6539;&#x9020;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x76F8;&#x5BF9;&#x7684;&#x6613;&#x7528;&#x6027;&#x548C;&#x901F;&#x5EA6;&#x4E0E;&#x54EA;&#x79CD; transnuclear &#x6A21;&#x578B;&#x53EF;&#x4EE5;&#x83B7;&#x5F97;&#x5176;&#x4ED6;&#x75BE;&#x75C5;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x6784;&#x5EFA;&#x4E3A;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x3002;

Transnuclear &#x5C0F;&#x9F20;&#x4E0E;&#x9884;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x7279;&#x70B9;&#x5BF9;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x901A;&#x8FC7; SCNT &#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x3002;

Mice that are transgenic for rearranged antigen-specific T cell receptors (TCRs) are essential tools to study T cell development and function. Such TCRs are usually isolated from the relevant T cells after long-term culture, often after repeated antigen stimulation, which unavoidably skews the T cell population used. Random genomic integration of the TCR alpha and beta chain and expression from nonendogenous promoters represent additional drawbacks of transgenics. Using epigenetic reprogramming via somatic cell nuclear transfer, we demonstrated that T cells with predefined specificities against Toxoplasma gondii can be used to generate mouse models that express the TCR from their endogenous loci, without experimentally introduced genetic modification. The relative ease and speed with which such transnuclear models can be obtained holds promise for the construction of other disease models.

Transnuclear mice with predefined T cell receptor specificities against Toxoplasma gondii obtained via SCNT.

Les souris qui sont transg&#xE9;niques pour r&#xE9;arrang&#xE9;s sp&#xE9;cifiques de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne r&#xE9;cepteurs des cellules T (TCR) sont des outils essentiels pour &#xE9;tudier le d&#xE9;veloppement des cellules T et la fonction. TCR Ces sont g&#xE9;n&#xE9;ralement isol&#xE9;s &#xE0; partir des cellules T pertinentes apr&#xE8;s culture &#xE0; long terme, souvent apr&#xE8;s une stimulation antig&#xE9;nique r&#xE9;p&#xE9;t&#xE9;e, ce qui fausse in&#xE9;vitablement la population de cellules T utilis&#xE9;. Al&#xE9;atoire int&#xE9;gration g&#xE9;nomique de l&#x26;#39;alpha du TCR et de la cha&#xEE;ne b&#xEA;ta et d&#x26;#39;expression des promoteurs nonendogenous repr&#xE9;sentent des inconv&#xE9;nients suppl&#xE9;mentaires de produits transg&#xE9;niques. Utilisation de la reprogrammation &#xE9;pig&#xE9;n&#xE9;tique par transfert nucl&#xE9;aire de cellule somatique, nous avons d&#xE9;montr&#xE9; que les cellules T avec des sp&#xE9;cificit&#xE9;s pr&#xE9;d&#xE9;finies contre Toxoplasma gondii peut &#xEA;tre utilis&#xE9; pour g&#xE9;n&#xE9;rer des mod&#xE8;les de souris qui expriment le TCR de leurs loci endog&#xE8;nes, sans modification g&#xE9;n&#xE9;tique introduite exp&#xE9;rimentalement. La relative facilit&#xE9; et la rapidit&#xE9; avec laquelle ces mod&#xE8;les peuvent &#xEA;tre obtenus Transnuclear est prometteur pour la construction de mod&#xE8;les &#xE0; d&#x26;#39;autres maladies.

Souris Transnuclear avec des sp&#xE9;cificit&#xE9;s T pr&#xE9;d&#xE9;finis r&#xE9;cepteurs cellulaires contre Toxoplasma gondii obtenu par TNCS

M&auml;use, die transgenen f&uuml;r Antigen-spezifische T-Zell-Rezeptoren (TCRs) neu angeordnet werden sind wichtige Instrumente, T-Zell-Entwicklung und Funktion zu studieren. Solche TCRs sind in der Regel isoliert aus den relevanten T-Zellen nach Langzeitkultur, oft nach wiederholten Antigen Stimulation, die unweigerlich der T-Zellpopulation verwendet neigt. Zuf&auml;llige genomischen Integration der TCR-Alpha und Beta-Kette und Ausdruck von nonendogenous Veranstalter stellen zus&auml;tzliche Nachteile von gentechnisch ver&auml;nderten Pflanzen. Mit epigenetischen Reprogrammierung &uuml;ber somatischen, zeigten wir, dass T-Zellen mit vordefinierten Besonderheiten gegen Toxoplasma Gondii Mausmodelle generieren, die die TCR aus ihrer endogenen Loci, ohne versuchsweise eingef&uuml;hrte genetische Ver&auml;nderungen Ausdr&uuml;cken verwendet werden k&ouml;nnen. Die relative Leichtigkeit und Geschwindigkeit, mit welcher solche Transnuclear Modelle bezogen werden k&ouml;nnen, vielversprechend f&uuml;r den Bau von anderen Krankheitsmodelle.

Transnuclear M&auml;use mit vordefinierten T-Zell-Rezeptor Besonderheiten gegen Toxoplasma Gondii &uuml;ber SCNT gewonnen.

Topi transgenici per la ridisposizione delle cellule T antigene-specifici recettori (TCRs) che sono strumenti indispensabili per studiare la funzione e lo sviluppo delle cellule T. Tali TCRs sono solitamente isolate dalle cellule T rilevanti dopo coltura a lungo termine, spesso dopo stimolazione ripetuta dell&#39;antigene, che inevitabilmente inclina la popolazione di cellule T utilizzata. Integrazione genomic casuale della catena alfa e beta TCR ed espressione da nonendogenous promotori rappresentano ulteriori svantaggi di transgenica. Utilizzo di riprogrammazione epigenetica tramite trasferimento nucleare di cellule somatiche, abbiamo dimostrato che le cellule T con specificit&agrave; predefinite contro Toxoplasma gondii possono essere utilizzate per generare modelli di mouse che esprimono TCR da loro loci endogeni, senza modificazione genetica introdotta sperimentalmente. La relativa facilit&agrave; e la velocit&agrave; con cui tale transnuclear possono essere ottenuti modelli mantiene la promessa per la costruzione di altri modelli di malattia.

Transnuclear topi con specificit&agrave; del recettore predefiniti delle cellule T contro Toxoplasma gondii ottenuto tramite SCNT.

&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684;T&#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;TCR&#xFF09;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6B20;&#x304B;&#x305B;&#x306A;&#x3044;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;TCR&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306F;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x907F;&#x7684;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x3092;&#x6B6A;&#x3081;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x6297;&#x539F;&#x523A;&#x6FC0;&#x5F8C;&#x3001;&#x9577;&#x671F;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; nonendogenous&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;TCR&#x306E;&#x3B1;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3B2;&#x9396;&#x3068;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x6B20;&#x70B9;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x539F;&#x866B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x4E8B;&#x524D;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6539;&#x5909;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x304B;&#x3089;&#x306E;TCR&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3068;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x5BB9;&#x6613;&#x3055;&#x3068;&#x901F;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x79D8;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

SCNT&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x539F;&#x866B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x4E8B;&#x524D;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;

&#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (TCRs)&#xB97C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC815;&#xB82C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xB294; T &#xC804;&#xC9C0; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD544;&#xC218; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; Tcrs&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xAD00;&#xB828; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7A5;&#xAE30; &#xBB38;&#xD654; &#xD6C4; &#xC790;&#xC8FC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD53C;&#xD560; &#xAE30;&#xC6B8;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC18;&#xBCF5; &#xB41C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC790;&#xADF9; &#xD6C4;. TCR &#xC54C;&#xD30C;&#xC640; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xCCB4;&#xC778; &#xBC0F; nonendogenous &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC784;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xD1B5;&#xD569; &#xC81C; &#xB2C9;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xB2E8;&#xC810;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; &#xD1B5;&#xD574; epigenetic &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Toxoplasma gondii&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBBF8;&#xB9AC; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; T &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3C4;&#xC785;&#xB41C; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791; &#xC5C6;&#xC774; &#xC0DD; loci&#xC758; TCR &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xB300;&#xC801; &#xC6A9;&#xC774;&#xC131;&#xACFC; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; transnuclear &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB2E4;&#xB978; &#xC9C8;&#xD658; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xAC74;&#xC124;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xBCF4;&#xC720; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;.

Transnuclear &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; Toxoplasma gondii SCNT &#xD1B5;&#xD574; &#xC5BB;&#xC744; &#xB300; &#xD55C; &#xBBF8;&#xB9AC; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;.

Los ratones transg&#xE9;nicos que son de reordenamiento de ant&#xED;genos espec&#xED;ficos de receptores de c&#xE9;lulas T (TCR) es una herramienta esencial para estudiar el desarrollo de c&#xE9;lulas T y la funci&#xF3;n. Tales TCRs suelen aislarse de las c&#xE9;lulas T pertinentes despu&#xE9;s de cultivo prolongado, a menudo despu&#xE9;s de la estimulaci&#xF3;n repetida ant&#xED;geno, que inevitablemente sesga la poblaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T utilizado. Integraci&#xF3;n al azar gen&#xF3;mico de la alfa del TCR y la cadena beta y la expresi&#xF3;n de los promotores nonendogenous representan inconvenientes adicionales de los transg&#xE9;nicos. Usando reprogramaci&#xF3;n epigen&#xE9;tica mediante transferencia nuclear de c&#xE9;lulas som&#xE1;ticas, hemos demostrado que las c&#xE9;lulas T con especificidades predefinidos contra Toxoplasma gondii puede ser utilizado para generar modelos de rat&#xF3;n que expresan el TCR de sus loci end&#xF3;genos, sin modificaci&#xF3;n gen&#xE9;tica introducida experimentalmente. La relativa facilidad y rapidez con que estos modelos transnuclear se puede obtener es una promesa para la construcci&#xF3;n de modelos de otras enfermedades.

Los ratones con las caracter&#xED;sticas predefinidas Transnuclear c&#xE9;lulas T del receptor contra el Toxoplasma gondii obtenido a trav&#xE9;s de la SCNT

&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x7684;&#x62B5;&#x6297;&#x3002;P65 &#x9E1F;&#x82F7;&#x9178;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (GBPs) &#x5F3A;&#x70C8;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x5C0F;&#x9F20; GBP1 &#x7684;&#x884C;&#x4E3A; (mGBP1) &#x540E;&#x611F;&#x67D3;&#x5F13;&#x5F62;&#x4F53;&#x5916;&#x5E76;&#x7ECF;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x8BE5;&#x4F9D;&#x8D56; &gamma;-&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x7684; re-localization &#x7684; mGBP1 &#x5230; parasitophorous &#x6CE1; (PV) &#x6709;&#x5173;&#x8054;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684;&#x81F4;&#x75C5;&#x7C7B;&#x578B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x51FA;&#x4E09;&#x4E2A;&#x5BC4;&#x751F;&#x56E0;&#x7D20;&#x3001; ROP16&#x3001; ROP18 &#x548C;&#x786E;&#x5B9A;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x5E94;&#x53D8;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684; pv mGBP1 &#x7684; GRA15&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x662F;&#x8D1F;&#x8D23;&#x7684;&#x6BD2;&#x529B;&#x7684;&#x6BD2;&#x682A;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5F88;&#x5927;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; T.&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x6BD2;&#x529B;&#x53EF;&#x80FD;&#x90E8;&#x5206;&#x4F9D;&#x9760; GBPs &#x7684;&#x627F;&#x8BA4;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;phagosomes &#x6216;&#x6DB2;&#x6CE1;&#x542B;&#x6709;&#x79CD;&#x7814;&#x7A76;&#x4E0D;&#x62DB;&#x8058; mGBP1&#x3002;Co &#x6C89;&#x6DC0;&#x4E3A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#xFF0C;mGBP1 &#x53D1;&#x73B0; mGBP2&#x3001; mGBP4&#x3001; mGBP5&#x3002;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x4E0A;&#xFF0C;mGBP2 &#x548C; mGBP5 co-localize &#x4E0E; mGBP1 T.&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5F13;&#x5F62;&#x4ECE;&#x800C;&#x8BF1;&#x53D1;&#x5C0F;&#x9F20; GBPs &#x6D89;&#x53CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x81EA;&#x4E3B;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x4E09;&#x4E2A;&#x5BC4;&#x751F;&#x6BD2;&#x529B;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;-&gamma;-&#x4F9D;&#x8D56;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7684;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#x8C03;&#x8282;&#x8FD9;&#x4E00;&#x590D;&#x6742;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x83CC;&#x682A;&#x7684;&#x6BD2;&#x529B;&#xFF0C;&#x5E26;&#x6765;&#x65E0;&#x6570; GBPs &#x5230;&#x5927;&#xFF0C;multimeric &#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5149;&#x4F0F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x6837;&#x6253;&#x51FB;&#x5F13;&#x5F62;&#x3002;

&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x6DB2;&#x6CE1;&#x548C;&#x63A7;&#x5236;&#x5B83;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x56E0;&#x7D20;&#x82F1;&#x9551;&#x62DB;&#x8058;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;

IFN-Î³ is a major cytokine that mediates resistance against the intracellular parasite Toxoplasma gondii. The p65 guanylate-binding proteins (GBPs) are strongly induced by IFN-Î³. We studied the behavior of murine GBP1 (mGBP1) upon infection with T. gondii in vitro and confirmed that IFN-Î³-dependent re-localization of mGBP1 to the parasitophorous vacuole (PV) correlates with the virulence type of the parasite. We identified three parasitic factors, ROP16, ROP18, and GRA15 that determine strain-specific accumulation of mGBP1 on the PV. These highly polymorphic proteins are held responsible for a large part of the strain-specific differences in virulence. Therefore, our data suggest that virulence of T. gondii in animals may rely in part on recognition by GBPs. However, phagosomes or vacuoles containing Trypanosoma cruzi did not recruit mGBP1. Co-immunoprecipitation revealed mGBP2, mGBP4, and mGBP5 as binding partners of mGBP1. Indeed, mGBP2 and mGBP5 co-localize with mGBP1 in T. gondii-infected cells. T. gondii thus elicits a cell-autonomous immune response in mice with GBPs involved. Three parasitic virulence factors and unknown IFN-Î³-dependent host factors regulate this complex process. Depending on the virulence of the strains involved, numerous GBPs are brought to the PV as part of a large, multimeric structure to combat T. gondii.

Determinants of GBP recruitment to Toxoplasma gondii vacuoles and the parasitic factors that control it.

IFN-&#x3B3; est une cytokine majeure que la r&#xE9;sistance contre le m&#xE9;diateur intracellulaire du parasite Toxoplasma gondii. Les p65 guanylate-prot&#xE9;ines de liaison (Gbps) sont fortement induites par l&#x26;#39;IFN-&#x3B3;. Nous avons &#xE9;tudi&#xE9; le comportement de GBP1 murin (mGBP1) lors de l&#x26;#39;infection par T. gondii in vitro et a confirm&#xE9; que l&#x26;#39;IFN-&#x3B3;-d&#xE9;pendante re-localisation des mGBP1 vers la vacuole parasitophore (PV) est en corr&#xE9;lation avec le type de virulence du parasite. Nous avons identifi&#xE9; trois facteurs parasites, ROP16, les ROP18 et GRA15 qui d&#xE9;terminent sp&#xE9;cifique de la souche accumulation de mGBP1 sur le PV. Ces prot&#xE9;ines extr&#xEA;mement polymorphes sont tenus responsables pour une grande partie des diff&#xE9;rences sp&#xE9;cifiques de souches de virulence. Par cons&#xE9;quent, nos donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que la virulence de T. gondii dans les animaux peuvent s&#x26;#39;appuyer en partie sur la reconnaissance par Gbps. Toutefois, phagosomes ou des vacuoles contenant Trypanosoma cruzi n&#x26;#39;a pas recruter mGBP1. Co-immunopr&#xE9;cipitation r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; mGBP2, mGBP4, et mGBP5 en tant que partenaires de liaison de mGBP1. En effet, mGBP2 et mGBP5 co-localiser avec mGBP1 T. gondii dans les cellules infect&#xE9;es. T. gondii provoque donc une r&#xE9;ponse de la cellule-autonome immunitaire chez la souris avec GBps impliqu&#xE9;s. Trois facteurs de virulence et parasitaires inconnus facteurs de l&#x26;#39;h&#xF4;te de l&#x26;#39;IFN-&#x3B3;-d&#xE9;pendants r&#xE9;glementer ce processus complexe. Selon la virulence des souches impliqu&#xE9;es, de nombreux Gbps sont port&#xE9;es &#xE0; la PV dans le cadre d&#x26;#39;une grande structure multim&#xE9;rique pour lutter contre T. gondii.

D&#xE9;terminants de la GBP de recrutement &#xE0; Toxoplasma gondii et les vacuoles des facteurs parasites qui le contr&#xF4;lent

IFN-&gamma; ist eine gro&szlig;e Cytokine, die Widerstand gegen die intrazellul&auml;re Parasiten Toxoplasma Gondii vermittelt. Die p65 Guanylate-bindende Proteine (Gbit/s) sind stark durch IFN-&gamma; induziert. Wir studierten das Verhalten des murinen GBP1 (mGBP1) nach Infektion mit T. Gondii in vitro und best&auml;tigten, dass IFN-&gamma;-abh&auml;ngigen Verortungen der mGBP1 zu den Parasitophorous Vakuole (PV) korreliert mit der Virulenz des Parasiten. Wir identifizierten drei parasit&auml;re Faktoren, ROP16, ROP18 und GRA15, die stammspezifische Anh&auml;ufung von mGBP1 auf dem PV zu bestimmen. Diese hochgradig polymorphe Proteine sind f&uuml;r einen Gro&szlig;teil der stammspezifische Unterschiede in Virulenz verantwortlich. Unsere Daten zufolge daher die Virulenz von T. Gondii in Tiere teilweise auf Anerkennung von Gbit/s berufen kann. Phagosomen oder Vakuolen mit Trypanosoma Cruzi jedoch nicht mGBP1 rekrutieren. Co-Immunopr&auml;zipitation ergab mGBP2, mGBP4 und mGBP5 als verbindliche Partner des mGBP1. In der Tat co-localize mGBP2 und mGBP5 mit mGBP1 in T. Gondii-infizierten Zellen. T. Gondii, l&ouml;st damit eine Zelle-autonome Immunantwort bei M&auml;usen mit Gbit/s beteiligt. Drei parasit&auml;re Virulenzfaktoren und unbekannte IFN-&gamma;-abh&auml;ngigen Host Faktoren Regeln dieser komplexen Prozess. Abh&auml;ngig von der Virulenz der St&auml;mme beteiligt werden zahlreiche Gbit/s in die PV als Teil einer gro&szlig;en, werden Struktur gebracht, zur Bek&auml;mpfung von T. Gondii.

Determinanten der GBP Anwerbung f&uuml;r Toxoplasma Gondii Vakuolen und parasit&auml;ren Faktoren, die es zu kontrollieren.

IFN-&gamma; &egrave; una citochina principale che media resistenza contro il parassita intracellulare Toxoplasma gondii. La p65 guanilato-binding proteins (GBPs) sono fortemente indotta da IFN-&gamma;. Abbiamo studiato il comportamento di GBP1 murino (mGBP1) dopo l&#39;infezione da T. gondii in vitro e confermato che re-localization di IFN-&gamma;-dipendente di mGBP1 per il vacuolo parasitophorous (PV) correla con il tipo di virulenza del parassita. Abbiamo identificato tre fattori parassitari, ROP16, ROP18 e GRA15 che determinano accumulo di ceppo specifico di mGBP1 sul PV. Queste proteine altamente polimorfiche sono responsabile di gran parte delle differenze nella virulenza ceppo-specifici. Pertanto, i nostri dati suggeriscono che la virulenza di T. gondii in animali pu&ograve; far valere in parte sul riconoscimento da GBPs. Tuttavia, phagosomes o vacuoli contenenti Trypanosoma cruzi non reclutare mGBP1. Co-immunoprecipitazione ha rivelato mGBP2, mGBP4 e mGBP5 come partner di associazione di mGBP1. Infatti, mGBP2 e mGBP5 co-localize con mGBP1 in T. gondii-cellule infette. T. gondii suscita cos&igrave; una risposta immunitaria cellula autonoma nei topi con GBPs coinvolti. Tre fattori di virulenza parassitarie e fattori sconosciuti di host IFN-&gamma;-dipendente regolano questo complesso processo. A seconda della virulenza dei ceppi coinvolti, numerosi GBPs sono portati per il PV come parte di una grande struttura multimerica per combattere T. gondii.

Determinanti di reclutamento GBP a vacuoli di Toxoplasma gondii e parassitari fattori che controllano.

IFN-&#x3B3;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x539F;&#x866B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x62B5;&#x6297;&#x3067;&#x3059;&#x3002; p65&#x306E;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;Gbps&#xFF09;&#x306F;&#x5F37;&#x304F;IFN-&#x3B3;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x611F;&#x67D3;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;GBP1&#xFF08;mGBP1&#xFF09;&#x306E;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3092;&#x5B66;&#x3073;&#x3001;parasitophorous&#x6DB2;&#x80DE;&#xFF08;PV&#xFF09;&#x306B;mGBP1&#x306E;IFN-&#x3B3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x306E;&#x518D;&#x5C40;&#x5728;&#x5316;&#x306F;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x578B;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;PV&#x3067;mGBP1&#x306E;&#x682A;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;3&#x3064;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x8981;&#x56E0;ROP16&#x3001;ROP18&#x3001;&#x3068;GRA15&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x591A;&#x578B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306E;&#x83CC;&#x682A;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x5DEE;&#x7570;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306B;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x958B;&#x50AC;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x52D5;&#x7269;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306F;&#x3001;Gbps&#x306E;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8A8D;&#x8B58;&#x306B;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30AF;&#x30EB;&#x30FC;&#x30BA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D1;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30DE;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7A7A;&#x80DE;&#x306F;mGBP1&#x3092;&#x52DF;&#x96C6;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5171;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x306F;&#x3001;mGBP1&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;mGBP2&#x3001;mGBP4&#x3001;&#x3068;mGBP5&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x78BA;&#x304B;&#x306B;&#x3001;mGBP2&#x3068;mGBP5&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;mGBP1&#x3068;&#x5171;&#x540C;&#x3067;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;Gbps&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x81EA;&#x5F8B;&#x7684;&#x306A;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x4E09;&#x5BC4;&#x751F;&#x75C5;&#x539F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x672A;&#x77E5;&#x306E;IFN-&#x3B3;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x56E0;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3059;&#x308B;&#x83CC;&#x682A;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x591A;&#x6570;&#x306E;Gbps&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x591A;&#x91CF;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;PV&#x306B;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x6765;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x306E;&#x6DB2;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;GBP&#x63A1;&#x7528;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x5BC4;&#x751F;&#x56E0;&#x5B50;

IFN-&gamma;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; Toxoplasma gondii&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xC8FC;&#xC694; &#xC0AC;&#xC774;&#xD1A0;&#xCE74;&#xC778;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. P65 guanylate &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (g b p s)&#xB294; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; IFN-&gamma;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; murine gbp1&#xC758; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4; (mGBP1) &#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xD655;&#xC778; T. gondii&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC; parasitophorous &#xACF5;&#xD3EC; (&#xD0DC;&#xC591;&#xAD11; &#xBC1C;&#xC804;)&#xC5D0; Mgbp1&#xC758; IFN-&gamma;-&#xC885;&#xC18D; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xD604;&#xC9C0;&#xD654;&#xB294; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &#xB3C5;&#xC131; &#xC885;&#xB958;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xAC00; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 3 &#xAE30;&#xC0DD; &#xC694;&#xC18C;, ROP16, ROP18, &#xBC0F; GRA15 mGBP1 PV&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; &#xD2B9;&#xC815; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xB2E4;&#xD615; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB3C5;&#xC131; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; &#xBCC4; &#xCC28;&#xC774;&#xC758; &#xD070; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784; &#xAC1C;&#xCD5C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xB3C5;&#xC131; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; T. gondii&#xC758; g b p S&#xB85C; &#xC778;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC758;&#xC874; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, phagosomes &#xB610;&#xB294; Trypanosoma cruzi &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; vacuoles Mgbp1&#xC744; &#xCC44;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xACF5;&#xB3D9;-immunoprecipitation mGBP2, mGBP4, &#xBC0F; mGBP5 Mgbp1&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xB85C; &#xACF5;&#xAC1C;. &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C;, mGBP2 &#xBC0F; mGBP5 T. gondii&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; Mgbp1&#xC640; co-localize. T. gondii &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; g b p S&#xC640; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; &#xC790;&#xC728; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; elicits. 3 &#xAE30;&#xC0DD; &#xB3C5;&#xC131; &#xBC0F; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; IFN-&gamma;-&#xC885;&#xC18D; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC694;&#xC778;&#xC774; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC885;&#xC790; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB3C5;&#xC131;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; GBPs T. gondii&#xC5D0; &#xB300;&#xCC98; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574;, multimeric &#xAD6C;&#xC870;&#xCCB4;&#xC758; &#xC77C;&#xD658;&#xC73C;&#xB85C; &#xD0DC;&#xC591;&#xAD11; &#xBC1C;&#xC804;&#xC744; &#xAC00;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

GBP &#xBAA8;&#xC9D1; Toxoplasma gondii vacuoles&#xC640; &#xADF8;&#xAC83;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xC0DD; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778;.

IFN-&#x3B3; es una citoquina importante que la resistencia media contra el intracelular par&#xE1;sito Toxoplasma gondii. Las p65 guanilato-prote&#xED;nas de uni&#xF3;n (Gbps) est&#xE1;n fuertemente inducidas por el IFN-&#x3B3;. Se estudi&#xF3; el comportamiento de murino GBP1 (mGBP1) tras la infecci&#xF3;n con T. gondii in vitro y se confirm&#xF3; que el IFN-&#x3B3; dependiente de la re-localizaci&#xF3;n de mGBP1 a la vacuola (PV) se correlaciona con el tipo de virulencia del par&#xE1;sito. Se identificaron tres factores, los par&#xE1;sitos, ROP16 ROP18 y GRA15 que determinan la cepa espec&#xED;fica de la acumulaci&#xF3;n de mGBP1 en el PV. Estas prote&#xED;nas altamente polim&#xF3;rficos son responsables de gran parte de las diferencias espec&#xED;ficas de la cepa de virulencia. Por lo tanto, nuestros datos sugieren que la virulencia de T. gondii en animales pueden basarse en parte en el reconocimiento por parte GBps. Sin embargo, fagosomas o vacuolas que contienen el Trypanosoma cruzi no reclutar mGBP1. Co-inmunoprecipitaci&#xF3;n revel&#xF3; mGBP2, mGBP4 y mGBP5 como pareja de mGBP1. De hecho, mGBP2 y mGBP5 co-localizar con mGBP1 de T. gondii de las c&#xE9;lulas infectadas. T. gondii por lo tanto provoca una respuesta inmune celular aut&#xF3;noma en ratones con GBps involucrados. Tres factores de virulencia parasitaria y de IFN-&#x3B3; desconocidos que dependen de factores del hu&#xE9;sped regular este proceso complejo. Dependiendo de la virulencia de las cepas implicadas, numerosos GBps se llevan a la fotovoltaica como parte de una gran estructura, multim&#xE9;rico para combatir el T. gondii.

Eva-Maria Frickel

Whitehead Institute for Biomedical Research

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT