Generation of Human Induced Pluripotent Stem Cells from Peripheral Blood Using the STEMCCA Lentiviral Vector

Through the ectopic expression of four transcription factors, Oct4, Klf4, Sox2 and cMyc, human somatic cells can be converted to a pluripotent state, ...

Boston University School of Medicine

&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x5B9E;&#x73B0;&#x540C;&#x65F6;&#x907F;&#x514D;&#x6C38;&#x4E45;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8868;&#x793A;&#x8D70;&#x5411;&#x4E34;&#x5E8A;&#x7528;&#x9014;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#x75BE;&#x75C5;&#x5EFA;&#x6A21;&#x6216;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7597;&#x6CD5;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x5BA1;&#x9605;) &#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x514D;&#x8D39;&#x7684;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x4EBA;&#x4F53;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5145;&#x5206;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4ECD;&#x7136;&#x9700;&#x8981;&#x5B9E;&#x73B0;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x75BE;&#x75C5;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x4ECE;&#x7EE7;&#x627F;&#x6216;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x666E;&#x904D;&#x63A8;&#x5BFC;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5355;&#x4E00;&quot;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5361;&#x5E26;&quot;&#x8F7D;&#x4F53;&#x6765;&#x5B8C;&#x6210;&#x6B63;&#x5E38;&#x6216;&#x75C5;&#x53D8;&#x7684;&#x76AE;&#x80A4;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE;&#x51E0;&#x4E4E;&#x4EFB;&#x4F55;&#x5E74;&#x9F84;&#x7684;&#x4EBA;&#x83B7;&#x5F97;&#x6709;&#x6548;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x4EBA;&#x6027;&#x5316;&#x7248;&#x672C;&#x3002;&#x4E09;&#x4E2A;&#x6216;&#x56DB;&#x4E2A;&#x7F16;&#x7A0B;&#x56E0;&#x7D20;&#x7EB3;&#x5165;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x76EE;&#x6807;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x5355;&#x77E2;&#x91CF;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x4F20;&#x8F93;&#x5141;&#x8BB8;&#x5305;&#x542B;&#x5355;&#x4E2A;&#x7684;&#x53EF;&#x62BD;&#x7A0E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x4E00;&#x4F53;&#x5316;&#xFF0C;&#x53BB;&#x9664;&#x751F;&#x6210;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x514D;&#x8D39;&#x7684;&#x7EFC;&#x5408;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x63A8;&#x5BFC;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BC1;&#x660E;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD0;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x7B56;&#x7565;&#x6765;&#x751F;&#x6210; &gt; 100 &#x80BA;&#x75BE;&#x75C5;&#x7279;&#x5B9A;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x884C;&#x4ECE;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x80BA;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x56CA;&#x6027;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5316;&#x3001; &alpha;-1 antitrypsin &#x7F3A;&#x4E4F;&#x6709;&#x5173;&#x80BA;&#x6C14;&#x80BF;&#x3001; &#x786C;&#x76AE;&#x75C5;&#x3001; &#x9570;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3001; &#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6216;&#x95F4;&#x8D28;&#x8F66;&#x53A2;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0E;&#x6B64;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6709;&#x80FD;&#x529B;&#x5F3A;&#x52B2;&#x5206;&#x5316;&#x6210;&#x5185;&#x80DA;&#x6700;&#x7EC8;&#x5C42;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x80BA;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53D1;&#x80B2;&#x524D;&#x4F53;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x5355;&#x4E2A;&#x53EF;&#x62BD;&#x7A0E;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5361;&#x5E26;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x65E0;&#x80BA;&#x75BE;&#x75C5;&#x7279;&#x5B9A;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x6210;&#x3002;

The development of methods to achieve efficient reprogramming of human cells while avoiding the permanent presence of reprogramming transgenes represents a critical step toward the use of induced pluripotent stem cells (iPSC) for clinical purposes, such as disease modeling or reconstituting therapies. Although several methods exist for generating iPSC free of reprogramming transgenes from mouse cells or neonatal normal human tissues, a sufficiently efficient reprogramming system is still needed to achieve the widespread derivation of disease-specific iPSC from humans with inherited or degenerative diseases. Here, we report the use of a humanized version of a single lentiviral "stem cell cassette" vector to accomplish efficient reprogramming of normal or diseased skin fibroblasts obtained from humans of virtually any age. Simultaneous transfer of either three or four reprogramming factors into human target cells using this single vector allows derivation of human iPSC containing a single excisable viral integration that on removal generates human iPSC free of integrated transgenes. As a proof of principle, here we apply this strategy to generate >100 lung disease-specific iPSC lines from individuals with a variety of diseases affecting the epithelial, endothelial, or interstitial compartments of the lung, including cystic fibrosis, Î±-1 antitrypsin deficiency-related emphysema, scleroderma, and sickle-cell disease. Moreover, we demonstrate that human iPSC generated with this approach have the ability to robustly differentiate into definitive endoderm in vitro, the developmental precursor tissue of lung epithelia.

Generation of transgene-free lung disease-specific human induced pluripotent stem cells using a single excisable lentiviral stem cell cassette.

Le d&eacute;veloppement de m&eacute;thodes pour atteindre efficace de reprogrammation des cellules humaines tout en &eacute;vitant la pr&eacute;sence permanente de reprogrammation des transg&egrave;nes repr&eacute;sente une &eacute;tape cruciale vers l&#39;utilisation des cellules souches pluripotentes induites (iPSC) &agrave; des fins cliniques, telles que la maladie de mod&eacute;lisation ou de reconstituer des th&eacute;rapies. Bien que plusieurs m&eacute;thodes existent pour g&eacute;n&eacute;rer l&#39;iPSC libre de reprogrammation des transg&egrave;nes de cellules de souris ou de tissus humains normaux n&eacute;onatales, un syst&egrave;me suffisamment efficace de reprogrammation est encore n&eacute;cessaire pour atteindre la d&eacute;rivation g&eacute;n&eacute;ralis&eacute;e de l&#39;iPSC sp&eacute;cifiques &agrave; certaines maladies chez les humains atteints de maladies h&eacute;r&eacute;ditaires ou d&eacute;g&eacute;n&eacute;ratives. Nous rapportons ici, l&#39;utilisation d&#39;une version humanis&eacute;e d&#39;un unique vecteur lentiviral &laquo; cassette de cellules de la tige &raquo; pour accomplir une reprogrammation efficace des fibroblastes de peau normale ou malades provenant des humains de pratiquement n&#39;importe quel &acirc;ge. Transfert simultan&eacute; de trois ou quatre facteurs de reprogrammation en cellules de cible humaine &agrave; l&#39;aide de ce vecteur unique permet de d&eacute;rivation de l&#39;iPSC humain contenant une seule int&eacute;gration virale soumis &agrave; accises g&eacute;n&eacute;rant iPSC humain libre de transg&egrave;nes int&eacute;gr&eacute;s sur l&#39;enl&egrave;vement. Comme une preuve de principe, ici, nous appliquons cette strat&eacute;gie pour g&eacute;n&eacute;rer &gt; 100 lignes d&#39;iPSC sp&eacute;cifiques &agrave; une maladie pulmonaire d&#39;individus atteints de diverses maladies affectant les compartiments &eacute;pith&eacute;liales, endoth&eacute;liales ou interstitielles du poumon, y compris de la fibrose kystique, &alpha; 1 antitrypsine li&eacute;es &agrave; une carence en l&#39;emphys&egrave;me, la scl&eacute;rodermie et dr&eacute;panocytose. De plus, nous d&eacute;montrons qu&#39;iPSC humaine g&eacute;n&eacute;r&eacute;e avec cette approche ont la capacit&eacute; de diff&eacute;rencier robuste en d&eacute;finitive endoderme in vitro, le tissu pr&eacute;curseur du d&eacute;veloppement de l&#39;&eacute;pith&eacute;lium pulmonaire.

G&eacute;n&eacute;ration de poumon transg&egrave;ne libres des cellules souches sp&eacute;cifiques &agrave; certaines maladies humaines pluripotentes induites &agrave; l&#39;aide d&#39;une seule cellule de tige des g&egrave;nes soumis &agrave; accises cassette.

Die Entwicklung von Methoden zu erreichen, effiziente Reprogrammierung menschlicher Zellen ohne die st&auml;ndige Pr&auml;senz der Reprogrammierung transgene stellt einen entscheidenden Schritt in Richtung der Nutzung von induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSC) f&uuml;r klinische Zwecke, wie Krankheit, modellieren oder Rekonstituierung der Therapien. Zwar es mehrere Methoden zum Generieren von iPSC frei gibt von Neuprogrammierung transgenen Maus Zellen oder neonatale normalen menschlichen Geweben, ist ein ausreichend effizientes Neuprogrammierung System erforderlich, um die weit verbreitete Ableitung des krankheitsspezifischen iPSC von Menschen mit ererbten oder degenerativen Krankheiten zu erreichen. Hier teilen wir Ihnen die Verwendung einer humanisierten Version eines einzigen Lentivirale &quot;Vorbau Zelle Kassette&quot; Vector, effiziente Neuprogrammierung der normalen oder kranken Hautfibroblasten gewonnenen Menschen nahezu jeden Alters zu erreichen. Gleichzeitige &Uuml;bertragung entweder drei oder vier Neuprogrammierung Faktoren in human Target-Zellen, die unter Verwendung dieser einzigen Vektor erm&ouml;glicht die Ableitung der menschlichen iPSC, enth&auml;lt eine einzelne verbrauchsteuerpflichtige virale-Integration, die &uuml;ber die Entfernung frei von integrierten transgenen menschlichen iPSC generiert. Als Beweis des Prinzips, hier wenden wir diese Strategie generiert &gt; 100 Lunge krankheitsspezifische iPSC-Linien von Personen, die mit einer Vielzahl von Krankheiten, die das Epithel, Endothel oder interstitielle F&auml;cher der Lunge, einschlie&szlig;lich Mukoviszidose, &alpha;-1-antitrypsin-Mangel-bezogene-Emphysem, Sklerodermie und Sichelzellenan&auml;mie. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass menschliche iPSC generiert mit diesem Ansatz haben die F&auml;higkeit, robust in der endg&uuml;ltigen Endodermis in vitro der Entwicklungsbiologie Vorl&auml;ufer-Gewebe der Lunge Epithelien zu unterscheiden.

Generation von Transgen-freie Lunge krankheitsspezifische menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen, die mit eine einzigen verbrauchsteuerpflichtiger Lentivirale Stammzell-Kassette.

Lo sviluppo di metodi per realizzare efficienti riprogrammazione delle cellule umane, evitando la presenza permanente di riprogrammazione transgeni rappresenta un passo fondamentale verso l&#39;uso di cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC) per scopi clinici, quali la malattia di modellazione o ricostituire le terapie. Anche se esistono metodi diversi per la generazione di iPSC libero di riprogrammazione transgeni da mouse cellule o tessuti umani normali neonatali, un sistema di riprogrammazione sufficientemente efficiente &egrave; ancora necessario per raggiungere la derivazione diffusa delle malattie specifiche iPSC dagli esseri umani con malattie ereditarie o degenerative. Qui, segnaliamo l&#39;uso di una versione umanizzata di un singolo vettore lentivirale &quot;staminali cassetta cella&quot; per realizzare efficienti riprogrammazione dei fibroblasti della pelle normale o malati ottenuti dagli esseri umani di qualsiasi et&agrave;. Trasferimento simultaneo di tre o quattro fattori di riprogrammazione nelle cellule bersaglio umano utilizzando questo singolo vettore permette di derivazione umana iPSC contenente una singola integrazione virale soggetti ad accisa che su rimozione genera umano iPSC libero dei transgeni integrato. Come prova di principio, qui applichiamo questa strategia per generare &amp;gt; 100 linee di iPSC specifici per la malattia polmonare da individui con una variet&agrave; di malattie che colpiscono i compartimenti epiteliali, endoteliali o interstiziali del polmone, fibrosi cistica, &alpha;-1 antitripsina deficit correlati enfisema, sclerodermia e falciforme. Inoltre, abbiamo dimostrato che iPSC umani generati con questo approccio hanno la capacit&agrave; di differenziarsi robustamente in endoderma definitivo in vitro, tessuto precursore dello sviluppo degli epiteli polmonari.

Generazione del polmone privo di transgene specifici per la malattia umana indotta staminali pluripotenti usando una cassetta singola ad accisa lentivirali stem cell.

Transgenes &#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6052;&#x4E45;&#x7684;&#x306A;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x56DE;&#x907F;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x3072;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3084;&#x30BB;&#x30E9;&#x30D4;&#x30FC;&#x306E;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x75BE;&#x60A3;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; (iPSC) &#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x5411;&#x3051;&#x305F;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;IPSC transgenes &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x30D2;&#x30C8;&#x7D44;&#x7E54;&#x304B;&#x3089;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x81EA;&#x7531;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3057;&#x76F4;&#x3059;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x75BE;&#x60A3;&#x7279;&#x7570; iPSC &#x4EBA;&#x9593;&#x7D99;&#x627F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5909;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x3042;&#x3089;&#x3086;&#x308B;&#x5E74;&#x9F62;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x6B63;&#x5E38;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x60A3;&#x90E8;&#x306E;&#x76AE;&#x819A;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x66F8;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x300C;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x300D;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x5316;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30BB;&#x30EB;&#x306B; 3 &#x3064;&#x307E;&#x305F;&#x306F; 4 &#x3064;&#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x8981;&#x56E0;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x8EE2;&#x9001;&#x306F;&#x9664;&#x53BB;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593; iPSC &#x7D71;&#x5408; transgenes &#x306E;&#x7121;&#x6599;&#x751F;&#x6210;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x304C;&#x7269;&#x54C1;&#x7A0E;&#x8AB2;&#x7A0E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; iPSC &#x306E;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x539F;&#x5247;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x76EE;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3084;&#x9593;&#x8CEA;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &alpha; 1 antitrypsin &#x6B20;&#x4E4F;&#x95A2;&#x9023;&#x80BA;&#x6C17;&#x816B;&#x3001;&#x5F37;&#x76AE;&#x75C7;&#x3001;&#x56A2;&#x80DE;&#x6027;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x75C7;&#x3001;&#x938C;&#x72B6;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x75C5;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x80BA;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x500B;&#x4EBA;&#x304B;&#x3089;&#x306E; 100 &#x306E;&#x80BA;&#x75BE;&#x60A3;&#x7279;&#x7570; iPSC &#x884C;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x3053;&#x308C;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x305D;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593; iPSC &#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x9811;&#x5065;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x80DA;&#x8449;&#x306B; in vitro &#x80BA;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x7269;&#x54C1;&#x7A0E;&#x8AB2;&#x7A0E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x306E;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x7121;&#x6599;&#x306E; transgene &#x80BA;&#x75BE;&#x60A3;&#x7279;&#x7570;&#x3072;&#x3068;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E16;&#x4EE3;&#x3002;

Transgenes &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC758; &#xC601;&#xC6D0;&#xD55C; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xD53C;&#xD558; &#xBA74; &#xC11C; &#xC778;&#xAC04; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xB610;&#xB294; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB4F1;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xC6A9;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (iPSC)&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xD5A5;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. IPSC &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC140; &#xB610;&#xB294; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; transgenes &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC758; &#xC790;&#xC720;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC774; &#xC788;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC18D; &#xB418;&#xAC70;&#xB098; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC778;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xAD00;&#xB828; Ipsc&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCDA9;&#xBD84;&#xD788; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC70;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB098;&#xC774;&#xC758; &#xC778;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; &#xC815;&#xC0C1; &#xB610;&#xB294; &#xBCD1;&#xC5D0; &#xAC78;&#xB9B0; &#xD53C;&#xBD80; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB2E8;&#xC77C; lentiviral &quot;&#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8;&quot; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; humanized &#xBC84;&#xC804;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0;. &#xC774; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1; &#xC140;&#xC5D0; 3 &#xAC1C; &#xB610;&#xB294; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC804;&#xC1A1; &#xC81C;&#xAC70;&#xC5D0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; iPSC &#xBB34;&#xB8CC; &#xD1B5;&#xD569;&#xB41C; transgenes&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; excisable &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xD1B5;&#xD569;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Ipsc&#xC758; &#xD30C;&#xC0DD; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6D0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70;&#xB85C; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xC804;&#xB7B5; &#xC801;&#xC6A9; &amp;gt; &#xB0AD; &#xC131; &#xC12C;&#xC720; &#xC99D;, &alpha;-1 antitrypsin &#xACB0;&#xD54D; &#xAD00;&#xB828; &#xAE30;&#xC885;, scleroderma, &#xB0AB; &#xC138;&#xD3EC; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xB4F1; &#xD3D0;&#xC758; &#xC0C1;&#xD53C;, &#xB0B4; &#xD53C;, &#xB610;&#xB294; &#xAC04; &#xC9C8; &#xC131; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAC1C;&#xC778; &#xC73C;&#xB85C;&#xBD80;&#xD130; 100 &#xD3D0; &#xC9C8;&#xD658; &#xAD00;&#xB828; iPSC &#xB77C;&#xC778;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Ipsc&#xC774; &#xC0DD;&#xC131; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC811;&#xADFC; &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; &#xCD5C;&#xC885; endoderm &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3D0; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC758; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC804;&#xC870; &#xC870;&#xC9C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;.

Transgene &#xBB34;&#xB8CC; &#xD3D0; &#xC9C8;&#xD658; &#xAD00;&#xB828; &#xC778;&#xAC04; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xC77C; excisable lentiviral &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El desarrollo de m&eacute;todos para lograr eficiente reprogramaci&oacute;n de c&eacute;lulas humanas, evitando la presencia permanente de reprogramaci&oacute;n transgenes representa un paso crucial hacia el uso de c&eacute;lulas pluripotentes inducidas (iPSC) fines cl&iacute;nicos, tales como enfermedad de modelado o terapias de reconstituci&oacute;n. Aunque existen varios m&eacute;todos para la generaci&oacute;n de iPSC de reprogramaci&oacute;n de los transgenes de las c&eacute;lulas de rat&oacute;n o tejidos humanos normales neonatales, todav&iacute;a es necesario un sistema de reprogramaci&oacute;n suficientemente eficiente para lograr la derivaci&oacute;n generalizada de iPSC enfermedad-espec&iacute;fica de los seres humanos con enfermedades hereditarias o degenerativas. Aqu&iacute;, Divulgamos el uso de una versi&oacute;n humanizada de un vector lentivirales &quot;cassette de la c&eacute;lula de v&aacute;stago&quot; solo para lograr la reprogramaci&oacute;n eficiente de fibroblastos de la piel normal o enfermo de los seres humanos de cualquier edad. Transferencia simult&aacute;nea de tres o cuatro factores reprogramaci&oacute;n en c&eacute;lulas de human target utilizando este vector solo permite derivaci&oacute;n de iPSC humano que contiene una &uacute;nica integraci&oacute;n viral los que en el retiro genera iPSC humana libre de transgenes integrados. Como una prueba del principio, aqu&iacute; aplicamos esta estrategia para generar &gt; 100 l&iacute;neas de iPSC espec&iacute;ficos de la enfermedad pulmonar de individuos con una variedad de enfermedades que afectan a los compartimientos epiteliales, endoteliales o intersticiales del pulm&oacute;n, como la fibrosis qu&iacute;stica, enfisema de relacionados con la deficiencia de &alpha;-1-antitripsina, esclerodermia y enfermedad de c&eacute;lulas falciformes. Por otra parte, demostramos que iPSC humano generado con este enfoque tienen la capacidad de distinguir s&oacute;lidamente en definitiva endodermo in vitro, el tejido del precursor del desarrollo del epitelio pulmonar.

Generaci&oacute;n de c&eacute;lulas pluripotentes inducidas humanas de la enfermedad-espec&iacute;fica pulm&oacute;n libre de transgenes usando un cassette de c&eacute;lula madre lentivirales los.

Brenden W. Smith

Center for Regenerative Medicine (CReM)

Boston University School of Medicine

Generation of Human Induced Pluripotent Stem Cells from Peripheral Blood Using the STEMCCA Lentiviral Vector

Brenden W. Smith

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Center for Regenerative Medicine (CReM)

Boston University School of Medicine

Generation of Human Induced Pluripotent Stem Cells from Peripheral Blood Using the STEMCCA Lentiviral Vector

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