Identification of Growth Inhibition Phenotypes Induced by Expression of Bacterial Type III Effectors in Yeast

Many Gram-negative pathogenic bacteria use a type III secretion system to translocate a suite of effector proteins into the cytosol of host cells. Within ...

Tel Aviv University

&#x756A;&#x8304; (&#x767D;&#x6BDB; lycopersicum) &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x53D6;&#x529B;&#x5668;&#x8D4B;&#x4E88;&#x91CE;&#x706B;&#x6297;&#x6027;&#x5149;&#x4F0F;&#x3002;&#x756A;&#x8304;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8868;&#x8FBE;&#x6548;&#x5E94;&#x86CB;&#x767D; AvrPto &#x548C; AvrPtoB&#x3002;&#x53D6;&#x529B;&#x5668;&#x5177;&#x4F53;&#x89E6;&#x53D1;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x514D;&#x75AB;&#x5E94;&#x7B54;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x7269;&#x7406;&#x4EA4;&#x4E92;&#x786E;&#x8BA4;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x5316;&#x5B66;&#x9057;&#x4F20;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x53D6;&#x529B;&#x5668;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x5230; PP1&#xFF0C;ATP &#x7ADE;&#x4E89;&#x6027;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528; PP1 &#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x81F4;&#x654F;&#x53D6;&#x529B;&#x5668;&#x7ED3;&#x5408; &#xFF08;Pto(as))&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x53D6;&#x529B;&#x5668;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x6548;&#x5E94;&#x8BC6;&#x522B;&#x548C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136; PP1 &#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x6291;&#x5236;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x7684; Pto(as)&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x589E;&#x5F3A; Pto(as) &#x4E0E; AvrPto &#x548C; AvrPtoB &#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;PP1 &#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#xFF0C;Pto(as) &#x7ED5;&#x8FC7;&#x7A81;&#x53D8;&#x5728;&#x53D6;&#x529B;&#x5668; AvrPto &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x6216;&#x50AC;&#x5316;&#x57FA;&#x672C;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x53CA;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x4EA4;&#x6D41;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5F53;&#x7740; PP1 &#x6A21;&#x62DF; 3 MB-PP1&#xFF0C;Pto(as) &#x6FC0;&#x9176;&#x7F3A;&#x9677;&#x5F62;&#x5F0F;&#x89E6;&#x53D1; AvrPto &#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x690D;&#x7269;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x8FC7;&#x654F;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x672C;&#x8EAB;&#xFF0C;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x53EF;&#x80FD;&#x5F15;&#x53D1;&#x7684;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5728;&#x53D6;&#x529B;&#x5668;&#x548C;&#x6A21;&#x4EFF;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x4E2D; Pto(as) &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x662F;&#x8BC6;&#x522B;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x7684;&#x524D;&#x63D0;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x4E4B;&#x540E;&#x627F;&#x8BA4;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x662F;&#x53EF;&#x6709;&#x53EF;&#x65E0;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x8F93;&#x51FA;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x8DB3;&#x5E95;&#x3002;&#x6B64;&#x5904;&#x7528;&#x4E8E;&#x5236;&#x5B9A;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x53D6;&#x529B;&#x5668;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x57FA;&#x56E0;&#x7B56;&#x7565;&#x8868;&#x793A;&#x4F53;&#x5185;&#x5176;&#x4ED6;&#x690D;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x5B9D;&#x8D35;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x7ED5;&#x8FC7;&#x756A;&#x8304;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x914D;&#x4F53;&#x53D6;&#x529B;&#x5668;&#x8010;&#x836F;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

The tomato (Solanum lycopersicum) protein kinase Pto confers resistance to Pseudomonas syringae pv. tomato bacteria expressing the AvrPto and AvrPtoB effector proteins. Pto specifically recognizes both effectors by direct physical interactions triggering activation of immune responses. Here, we used a chemical-genetic approach to sensitize Pto to analogs of PP1, an ATP-competitive small molecule inhibitor. By using PP1 analogs in combination with the sensitized Pto (Pto(as)), we examined the role of Pto kinase activity in effector recognition and signal transduction. Strikingly, while PP1 analogs efficiently inhibited kinase activity of Pto(as) in vitro, they enhanced interactions of Pto(as) with AvrPto and AvrPtoB in a yeast two-hybrid system. In addition, in the presence of PP1 analogs, Pto(as) bypassed mutations either at an autophosphorylation site critical for the Pto-AvrPto interaction or at catalytically essential residues and interacted with both effectors. Moreover, in the presence of the PP1 analog 3MB-PP1, a kinase-deficient form of Pto(as) triggered an AvrPto-dependent hypersensitive response in planta. These findings suggest that, rather than phosphorylation per se, a conformational change likely triggered by autophosphorylation in Pto and mimicked by ligand binding in Pto(as) is a prerequisite for recognition of bacterial effectors. Following recognition, kinase activity appears to be dispensable for Pto signaling in planta. The chemical-genetic strategy applied here to develop specific small molecule inhibitors of Pto represents an invaluable tool for the study of biological functions of other plant protein kinases in vivo.

Bypassing kinase activity of the tomato Pto resistance protein with small molecule ligands.

La tomate (Solanum lycopersicum) la prot&#xE9;ine kinase Pto conf&#xE8;re une r&#xE9;sistance &#xE0; Pseudomonas syringae pv. bact&#xE9;ries exprimant l&#x26;#39;tomate AvrPto et prot&#xE9;ines AvrPtoB effectrices. Pto reconna&#xEE;t sp&#xE9;cifiquement les deux effecteurs par des interactions physiques directes de d&#xE9;clenchement d&#x26;#39;activation des r&#xE9;ponses immunitaires. Ici, nous avons utilis&#xE9; une approche chimique et g&#xE9;n&#xE9;tique afin de sensibiliser &#xE0; la prise de force analogues de PP1, un inhibiteur de l&#x26;#39;ATP-concurrentiel des petites mol&#xE9;cules. En utilisant PP1 analogues en combinaison avec le sensibilis&#xE9;s Pto (Pto (comme)), nous avons examin&#xE9; le r&#xF4;le de l&#x26;#39;activit&#xE9; kinase Pto en reconnaissance effecteur et la transduction du signal. Il est frappant, tout en PP1 analogues efficacement inhib&#xE9; l&#x26;#39;activit&#xE9; kinase de la prise de force (comme) in vitro, ils am&#xE9;lior&#xE9; les interactions de prise de force (comme) avec AvrPto et AvrPtoB dans une levure syst&#xE8;me double-hybride. En outre, en pr&#xE9;sence d&#x26;#39;analogues PP1, prise de force (comme) des mutations contourn&#xE9;es, soit &#xE0; un site autophosphorylation critique pour l&#x26;#39;interaction Pto-AvrPto ou au niveau des r&#xE9;sidus catalytiquement essentiels et ont interagi avec les deux effecteurs. En outre, en pr&#xE9;sence de l&#x26;#39;analogue PP1 3MB-PP1, une forme de d&#xE9;ficience de kinase de prise de force (as) d&#xE9;clench&#xE9; une r&#xE9;ponse hypersensible AvrPto-d&#xE9;pendante in planta. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que, plut&#xF4;t que la phosphorylation de soi, un changement de conformation probablement d&#xE9;clench&#xE9; par autophosphorylation &#xE0; Pto et imit&#xE9; par la liaison du ligand &#xE0; Pto (psl) est un pr&#xE9;alable &#xE0; la reconnaissance des effecteurs bact&#xE9;riens. Suite &#xE0; la reconnaissance, l&#x26;#39;activit&#xE9; kinase semble &#xEA;tre indispensable pour Pto signalisation in planta. La strat&#xE9;gie de produits chimiques g&#xE9;n&#xE9;tique appliqu&#xE9;e ici de d&#xE9;velopper des inhibiteurs sp&#xE9;cifiques de petites mol&#xE9;cules de Pto repr&#xE9;sente un outil pr&#xE9;cieux pour l&#x26;#39;&#xE9;tude des fonctions biologiques d&#x26;#39;autres prot&#xE9;ines kinases v&#xE9;g&#xE9;tales in vivo.

Contourner l&#x26;#39;activit&#xE9; kinase de la prot&#xE9;ine de r&#xE9;sistance aux tomates Pto avec les ligands &#xE0; petites mol&#xE9;cules

Die Tomate (Solanum Lycopersicum)-Proteinkinase Pto verleiht Resistenz gegen Pseudomonas Syringae pv. Tomaten-Bakterien der Effektor-Proteine AvrPto und AvrPtoB zum Ausdruck zu bringen. Pto erkennt beide Effektoren insbesondere durch direkten physischen Interaktionen, die Aktivierung der Immunantwort ausl&ouml;sen. Hier haben wir einen Chemikalien-genetischen Ansatz verwendet, Pto zu Entsprechungen PP1, ein ATP-kompetitiver niedermolekularer Inhibitor zu sensibilisieren. Mithilfe von PP1-Analoga in Kombination mit der sensibilisierten Zapfwelle (Pto(as)), wir untersucht die Rolle der Pto-Kinase-Aktivit&auml;t in Effektor-Anerkennung und Signal-Transduktion. Auff&auml;llig ist, w&auml;hrend PP1-Analoga effizient Pto(as) in-vitro-Aktivit&auml;t gehemmt, verbessert sie Wechselwirkungen von Pto(as) mit AvrPto und AvrPtoB in einem Hefe-zwei-Hybrid-System. Dar&uuml;ber hinaus in Anwesenheit PP1-Analoga, Pto(as) Mutationen eine Autophosphorylierung Site kritisch f&uuml;r die Pto-AvrPto-Interaktion oder auf katalytisch wesentliche R&uuml;ckst&auml;nde umgangen und interagierte mit beiden Effektoren. Dar&uuml;ber hinaus ausgel&ouml;st eine Kinase-Mangel-Form des Pto(as) in Anwesenheit der PP1 analog 3 MB-PP1, eine AvrPto-abh&auml;ngige &uuml;berempfindlichen Reaktion in Planta. Diese Forschungsergebnisse legen nahe, dass, anstatt Phosphorylierung per Se eine Konformations&auml;nderungen &Auml;nderung wahrscheinlich ausgel&ouml;st durch Autophosphorylierung in Pto und nachgeahmt von Ligand-Bindung in Pto(as) ist eine Voraussetzung f&uuml;r die Anerkennung der bakteriellen Effektoren. Nach Anerkennung scheint Kinaseaktivit&auml;t f&uuml;r Pto signalisieren in Planta entbehrlich. Die Chemikalie-genetische Strategie, die hier angewandt werden, um spezifische niedermolekularer Hemmer der Zapfwelle zu entwickeln stellt ein wertvolles Instrument f&uuml;r die Erforschung der biologischen Funktionen von anderen Pflanzen Proteinkinasen in-vivo.

Umgehen die Tomate Pto-Resistenz-Protein mit niedermolekularen Liganden-Aktivit&auml;t.

La chinasi di proteina di pomodoro (Solanum lycopersicum) Pto conferisce resistenza a Pseudomonas syringae pv. batteri di pomodoro che esprimono le proteine effettrici AvrPto e AvrPtoB. Pto riconosce specificamente entrambi effettori dalle interazioni fisiche dirette innescando l&#39;attivazione della risposta immunitaria. Qui, abbiamo utilizzato un approccio genetico-chimico per sensibilizzare Pto per analoghi del PP1, un inibitore di piccola molecola ATP-competitivo. Utilizzando PP1 analoghi in combinazione con la Pto sensibilizzate (Pto(as)), abbiamo esaminato il ruolo dell&#39;attivit&agrave; della chinasi Pto nella trasduzione del segnale e riconoscimento effettrici. Sorprendentemente, mentre analoghi PP1 efficientemente inibiscono l&#39;attivit&agrave; della chinasi di Pto(as) in vitro, hanno migliorato interazioni di Pto(as) con AvrPto e AvrPtoB in un sistema del due-ibrido del lievito. Inoltre, in presenza di analoghi PP1, Pto(as) bypassato mutazioni in un sito di autophosphorylation critico per l&#39;interazione di Pto-AvrPto o di residui cataliticamente essenziali e interagito con entrambi effettori. Inoltre, in presenza del PP1 analogico 3 MB-PP1, una forma di chinasi-carenti di Pto(as) ha attivato una risposta ipersensibile AvrPto-dipendente in planta. Questi risultati suggeriscono che, piuttosto che la fosforilazione per s&eacute;, un cambiamento conformazionale probabilmente innescato dal autophosphorylation in Pto e imitato dal legame ligando in Pto(as) &egrave; un prerequisito per il riconoscimento di effettori batteriche. A seguito di riconoscimento, l&#39;attivit&agrave; della chinasi appare superfluo per Pto segnalazione in planta. La strategia Chimica-Genetica applicata qui per sviluppare inibitori specifici piccola molecola di Pto rappresenta uno strumento prezioso per lo studio delle funzioni biologiche di altre chinasi di proteina vegetale in vivo.

Bypassando l&#39;attivit&agrave; della chinasi del pomodoro proteina resistenza Pto con ligandi piccola molecola.

&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#xFF08;Solanum lycopersicum&#xFF09;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;PTO&#x306F;&#x3001;Pseudomonas syringae&#x306E;PV&#x3078;&#x306E;&#x8010;&#x6027;&#x3092;&#x4ED8;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#x7D30;&#x83CC;&#x306F;AvrPto&#x3068;AvrPtoB&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3002; PTO&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;PP1&#x3001;ATP&#x7AF6;&#x5408;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x4F53;&#x306B;PTO&#x3092;&#x654F;&#x611F;&#x306B;&#x5316;&#x5B66;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x611F;PTO&#xFF08;PTO&#xFF08;&#xFF09;&#x306A;&#x3069;&#xFF09;&#x3068;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;PP1&#x985E;&#x4F3C;&#x4F53;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3068;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;PTO&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3089;&#x304F;PP1&#x985E;&#x7E01;&#x4F53;&#x3092;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x9175;&#x6BCD;two-hybrid&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;AvrPto&#x3068;AvrPtoB&#x3068;PTO&#x306E;&#x5F7C;&#x3089;&#x304C;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF08;&#x306A;&#x3069;&#xFF09;&#x3092;&#x3001;in vitro&#x3067;PTO&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#xFF08;&#x306A;&#x3069;&#xFF09;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;PP1&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x3001;PTO&#xFF08;&#x306A;&#x3069;&#xFF09;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30D1;&#x30B9;&#x3059;&#x308B;&#x5909;&#x7570;&#x306F;PTO-AvrPto&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x89E6;&#x5A92;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3067;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;PP1 3&#x30E1;&#x30AC;&#x30D0;&#x30A4;&#x30C8;-PP1&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;PTO&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6B20;&#x640D;&#x578B;&#xFF08;AS&#xFF09;&#x306F;&#x8DB3;&#x5E95;&#x3067;AvrPto&#x4F9D;&#x5B58;&#x904E;&#x654F;&#x611F;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;PTO&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;PTO&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#xFF08;&#x306A;&#x3069;&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6A21;&#x5023;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x81EA;&#x4F53;&#x304C;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x3001;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x524D;&#x63D0;&#x6761;&#x4EF6;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x8A8D;&#x8B58;&#x5F8C;&#x3001;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x4F53;&#x306E;PTO&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x7528;&#x306B;&#x4E0D;&#x8981;&#x3068;&#x601D;&#x308F;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x5316;&#x5B66;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x6226;&#x7565;&#x306F;&#x3001;PTO&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x690D;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#x306E;PTO&#x8010;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30D1;&#x30B9;

&#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; (&#xAE4C; lycopersicum) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; Pto &#xC218; &#xC5EC; &#xB179; syringae&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC800;&#xD56D; pv. &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; AvrPto &#xBC0F; AvrPtoB effector &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD45C;&#xD604;. Pto&#xB294; &#xD2B9;&#xD788; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xB9C1; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB450; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xB97C; &#xC778;&#xC2DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, Pto PP1, ATP &#xACBD;&#xC7C1; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C;&#xC758; &#xC720;&#xC0AC; &#xCCB4;&#xB97C; &#xAC10;&#xAD11; &#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD654;&#xD559; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBBFC;&#xAC10;&#xD558;&#xAC8C; Pto&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; PP1 &#xC720;&#xC0AC; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; (Pto(as)), &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC80;&#xC0AC; Pto &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC778;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;. &#xAE30; &#xB9C9;&#xD788;&#xAC8C;, PP1 &#xC720;&#xC0AC; &#xCCB4;&#xB294; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; Pto(as) &#xCCB4; &#xC678;&#xC758; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; AvrPto &#xBC0F; Avrptob&#xC640; pto(as)&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;. &#xB610;&#xD55C;, PP1 &#xC720;&#xC0AC; &#xCCB4;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; Pto(as) &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Pto-AvrPto &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; autophosphorylation &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB610;&#xB294; catalytically &#xD544;&#xC218; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBB34;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xB450; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;. &#xB610;&#xD55C;, PP1-PP1 &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; 3MB, &#xC874;&#xC7AC; Pto(as) &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; planta&#xC5D0; AvrPto &#xC885;&#xC18D; &#xACFC;&#xBBFC; &#xBC18;&#xC751; &#xC720;&#xBC1C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC;, &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xB2F9;, &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; Pto&#xC5D0; autophosphorylation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2E4;&#xD589; &#xD558; &#xACE0; pto(as)&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xC0AC; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC138;&#xADE0; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xC778;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xC81C; &#xC870;&#xAC74;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; Pto planta&#xC5D0; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBD88;&#xAC00;&#xACB0; &#xAC83; &#xC778; &#xB4EF;&#xD558;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; Pto&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD654;&#xD559; &#xC720;&#xC804; &#xC804;&#xB7B5; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases vivo&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; ligands&#xC640; Pto &#xC800;&#xD56D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBB34;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El tomate (Solanum lycopersicum) la prote&#xED;na quinasa Pto. confiere resistencia a Pseudomonas syringae pv. bacterias tomate expresar la AvrPto y prote&#xED;nas AvrPtoB efectoras. Pto. reconoce espec&#xED;ficamente los dos efectores directos de las interacciones f&#xED;sicas que desencadenan la activaci&#xF3;n de la respuesta inmune. En este caso, se utiliz&#xF3; un m&#xE9;todo qu&#xED;mico-gen&#xE9;tico para sensibilizar a Pto. de an&#xE1;logos de PP1, un inhibidor de la ATP a la competencia de peque&#xF1;as mol&#xE9;culas. Mediante el uso de an&#xE1;logos de PP1 en combinaci&#xF3;n con la sensible Pto (PTO (as)), se analiz&#xF3; el papel de la actividad quinasa Pto. en reconocimiento de efectos y la transducci&#xF3;n de se&#xF1;ales. Sorprendentemente, mientras que los an&#xE1;logos de PP1 eficiente inhibe la actividad quinasa de Pto. (as) in vitro, que mejora la interacci&#xF3;n de toma de fuerza (como) con AvrPto y AvrPtoB en una levadura sistema h&#xED;brido de dos. Adem&#xE1;s, en la presencia de an&#xE1;logos de PP1, PTO (as) mutaciones anuladas ya sea en un sitio autofosforilaci&#xF3;n cr&#xED;tico para la interacci&#xF3;n Pto.-AvrPto o en los residuos catal&#xED;ticamente esenciales y interactuado con ambos efectores. Adem&#xE1;s, en la presencia del an&#xE1;logo de PP1 3MB-PP1, una forma quinasa deficiente de toma de fuerza (como) provoc&#xF3; una respuesta de hipersensibilidad AvrPto-dependiente de la planta. Estos hallazgos sugieren que, en lugar de la fosforilaci&#xF3;n de por s&#xED;, es probable un cambio conformacional provocado por la autofosforilaci&#xF3;n en Pto. e imitados por la uni&#xF3;n del ligando en la toma de fuerza (como) es un requisito previo para el reconocimiento de los efectores bacterianos. Tras el reconocimiento, la actividad quinasa parece ser prescindible para el Pto. de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en la planta. La estrategia qu&#xED;mica-gen&#xE9;tica aplicada aqu&#xED; para desarrollar inhibidores espec&#xED;ficos de mol&#xE9;culas peque&#xF1;as de Pto. representa una valiosa herramienta para el estudio de las funciones biol&#xF3;gicas de otras quinasas de prote&#xED;nas vegetales en vivo.

Omisi&#xF3;n de la actividad quinasa de la prote&#xED;na de tomate con resistencia Pto. ligandos de mol&#xE9;culas peque&#xF1;as

&#x690D;&#x7269;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x6570;&#x767E;&#x540D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53EA;&#x4E3A;&#x4E00;&#x5C0F;&#x90E8;&#x5206;&#x4EBA;&#x7684;&#x786E;&#x5207;&#x804C;&#x80FD;&#x548C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5E94;&#x7528;&#x5316;&#x5B66;&#x9057;&#x4F20;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x63D0;&#x9AD8;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x756A;&#x8304;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x53D6;&#x529B;&#x5668;&#x5230;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269; PP1&#xFF0C;ATP &#x7ADE;&#x4E89;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6E17;&#x900F;&#x6027;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x53D6;&#x529B;&#x5668;&#x6FC0;&#x9176;&#x901A;&#x8FC7;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x514D;&#x75AB;&#x5E94;&#x7B54;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x8BC6;&#x522B;&#x540E;&#x8D4B;&#x4E88; Pst &#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x6297;&#x836F;&#x6027;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x6A21;&#x62DF;&#x654F;&#x611F;&#x53D6;&#x529B;&#x5668;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F7F;&#x7528; PP1 &#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x65B0;&#x63ED;&#x793A;&#x53D6;&#x529B;&#x5668;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x6548;&#x5E94;&#x8BC6;&#x522B;&#x548C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x6269;&#x5927;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5411;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E0E;&#x56FD;&#x9632;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x690D;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#xFF0C;MAP &#x6FC0;&#x9176; LeMPK3 &#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x9057;&#x4F20;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x6A21;&#x62DF;&#x654F;&#x611F;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6FC0;&#x9176;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x4F7F;&#x7528;&#x975E;&#x81EA;&#x7136; N (6)-&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x7684;&#x6FC0;&#x9176;&#x76F4;&#x63A5;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x76EE;&#x6807;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684; phosphodonors &#x4F5C;&#x4E3A;&#x4FEE;&#x6539;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x7684;&#x6FC0;&#x9176;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684; PP1 &#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x5BF9;&#x5BA3;&#x4F20;&#x548C; ATP &#x53EF;&#x4EE5;&#x662F;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x53D1;&#x73B0;&#x548C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5E95;&#x7269;&#x690D;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x3002;

&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x690D;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x9057;&#x4F20;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

Plant genomes encode hundreds of protein kinases, yet only for a small fraction of them precise functions and phosphorylation targets have been identified. Recently, we applied a chemical-genetic approach to sensitize the tomato serine/threonine kinase Pto to analogs of PP1, an ATP-competitive and cell-permeable small-molecule inhibitor. The Pto kinase confers resistance to Pst bacteria by activating immune responses upon specific recognition of bacterial effectors. By using PP1 analogs in combination with the analog-sensitive Pto, we shed new light on the role of Pto kinase activity in effector recognition and signal transduction. Here we broaden the use of this chemical-genetic approach to another defense-related plant protein kinase, the MAP kinase LeMPK3. In addition, we show that analog-sensitive but not wild-type kinases are able to use unnatural N(6)-modified ATP analogs as phosphodonors that can be exploited for tagging direct phosphorylation targets of the kinase of interest. Thus, sensitization of kinases to analogs of the small-molecule inhibitor PP1 and ATP can be an effective tool for the discovery of cellular functions and phosphorylation substrates of plant protein kinases.

A chemical-genetic approach for functional analysis of plant protein kinases.

Les g&#xE9;nomes v&#xE9;g&#xE9;taux coder des centaines de prot&#xE9;ines kinases, mais seulement pour une petite fraction d&#x26;#39;entre eux des fonctions et des objectifs pr&#xE9;cis de phosphorylation ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s. R&#xE9;cemment, nous avons appliqu&#xE9; une approche chimique et g&#xE9;n&#xE9;tique afin de sensibiliser la s&#xE9;rine tomate / thr&#xE9;onine kinase Pto aux analogues de PP1, un comp&#xE9;tition avec l&#x26;#39;ATP et de la cellule-perm&#xE9;able petite mol&#xE9;cule inhibitrice. La kinase Pto conf&#xE8;re une r&#xE9;sistance &#xE0; des bact&#xE9;ries Pst en activant les r&#xE9;ponses immunitaires &#xE0; la reconnaissance sp&#xE9;cifique des effecteurs bact&#xE9;riens. En utilisant PP1 analogues en combinaison avec la prise de force analogique sensible, nous apportent un &#xE9;clairage nouveau sur le r&#xF4;le de l&#x26;#39;activit&#xE9; kinase Pto en reconnaissance effecteur et la transduction du signal. Ici, nous &#xE9;largir l&#x26;#39;utilisation de cette approche chimique et g&#xE9;n&#xE9;tique &#xE0; l&#x26;#39;autre kinase li&#xE9;e &#xE0; la d&#xE9;fense prot&#xE9;ines v&#xE9;g&#xE9;tales, les LeMPK3 MAP kinase. En outre, nous montrons que analogique sensible, mais pas de type sauvage kinases sont capables d&#x26;#39;utiliser N artificielles (6) modifi&#xE9; par analogues de l&#x26;#39;ATP comme phosphodonors qui peuvent &#xEA;tre exploit&#xE9;es pour des cibles de phosphorylation de marquage directs de la kinase d&#x26;#39;int&#xE9;r&#xEA;t. Ainsi, la sensibilisation des kinases &#xE0; des analogues de l&#x26;#39;inhibiteur de petite mol&#xE9;cule PP1 et de l&#x26;#39;ATP peut &#xEA;tre un outil efficace pour la d&#xE9;couverte des fonctions cellulaires et de substrats de phosphorylation des prot&#xE9;ines kinases v&#xE9;g&#xE9;tales.

Une approche chimique et g&#xE9;n&#xE9;tique pour l&#x26;#39;analyse fonctionnelle des prot&#xE9;ines kinases v&#xE9;g&#xE9;tales

Pflanze Genome codieren Hunderte von Proteinkinasen, aber nur f&uuml;r einen Bruchteil von ihnen pr&auml;zise Funktionen und Phosphorylierung Ziele identifiziert wurden. Vor kurzem angewendet wir einen chemischen-genetischen Ansatz um das Tomate Serin/Threonin Kinase Pto zu Entsprechungen PP1, ein ATP-wettbewerbsf&auml;hig und Zelle-durchl&auml;ssigen klein-Molek&uuml;l-Hemmer zu sensibilisieren. Das Pto-Kinase verleiht Resistenz gegen Pst Bakterien durch die Aktivierung von Immunantworten auf spezifische Anerkennung der bakteriellen Effektoren. Mit PP1-Analoga in Kombination mit der Analog-Sensitive-Zapfwelle, werfen wir ein neues Licht auf die Rolle der Pto-Kinase-Aktivit&auml;t in Effektor-Anerkennung und Signal-Transduktion. Hier erweitern wir die Verwendung von dieser Chemikalie-genetischer Ansatz f&uuml;r eine weitere Verteidigung-&auml;hnliche Pflanze Proteinkinase, die MAP-Kinase LeMPK3. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass Analog-Sensitive aber nicht Wildtyp-Kinasen sind unnat&uuml;rlich N (6) nutzen-ge&auml;ndert ATP Entsprechungen als Phosphodonors, die f&uuml;r direkte Phosphorylierung Ziele der Kinase des Interesses tagging genutzt werden k&ouml;nnen. So Sensibilisierung der Kinasen zu Entsprechungen der klein-Molek&uuml;l-Inhibitor PP1 und ATP kann ein wirksames Instrument f&uuml;r die Entdeckung der Zellfunktionen und Phosphorylierung Substrate Pflanze Proteinkinasen werden.

Ein Chemie-genetische Ansatz f&uuml;r funktionale Analyse der Pflanze Proteinkinasen.

Pianta genomi codificano centinaia di chinasi di proteina, ma solo per una piccola frazione delle loro funzioni precise e fosforilazione sono stati identificati gli obiettivi. Recentemente, abbiamo applicato un approccio genetico-chimico per sensibilizzare la serina/treonina chinasi di pomodoro Pto per analoghi del PP1, un inibitore di piccolo-molecola ATP-competitiva e cellula permeabile. La chinasi Pto conferisce resistenza ai batteri Pst attivando la risposta immunitaria al riconoscimento specifico di effettori batteriche. Utilizzando in combinazione con la presa di forza sensibile analogico PP1 analoghi, ci gettano nuova luce sul ruolo dell&#39;attivit&agrave; della chinasi Pto nella trasduzione del segnale e riconoscimento effettrici. Qui abbiamo ampliare l&#39;utilizzo di questo approccio chimico-genetico di un&#39;altra chinasi di proteina vegetale correlati a difesa, la chinasi mappa LeMPK3. Inoltre, mostriamo che analogico-sensibili ma non selvaggio-tipo chinasi sono in grado di utilizzare innaturale N (6)-modificato analoghi ATP come phosphodonors che possono essere sfruttate per il tagging obiettivi diretti fosforilazione della chinasi di interesse. Cos&igrave;, una sensibilizzazione della chinasi di analoghi dell&#39;inibitore piccolo-molecola PP1 e ATP pu&ograve; essere un efficace strumento per la scoperta delle funzioni cellulari e substrati di fosforilazione della pianta chinasi.

Un approccio genetico-chimico per l&#39;analisi funzionale della chinasi di proteina vegetale.

&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x3054;&#x304F;&#x4E00;&#x90E8;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x6570;&#x767E;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;PP1&#x3001;ATP-&#x7AF6;&#x4E89;&#x529B;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x985E;&#x7E01;&#x4F53;&#x306B;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;PTO&#x3092;&#x611F;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x5316;&#x5B66;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x3002; PTO&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x7D30;&#x83CC;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x8A8D;&#x8B58;&#x306B;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;PST&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x3092;&#x4ED8;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x654F;&#x611F;&#x306A;PTO&#x3068;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;PP1&#x985E;&#x4F3C;&#x4F53;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3068;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;PTO&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x5149;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x5225;&#x306E;&#x9632;&#x885B;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x690D;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;MAP&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;LeMPK3&#x3053;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x5E83;&#x3052;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x3068;&#x5C0F;&#x6587;&#x5B57;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x306A;&#x304F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x304C;&#x8208;&#x5473;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30BF;&#x30AE;&#x30F3;&#x30B0;&#x76F4;&#x63A5;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x60AA;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;phosphodonors&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4E0D;&#x81EA;&#x7136;&#x306A;N&#xFF08;6&#xFF09; - &#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;ATP&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;PP1&#x304A;&#x3088;&#x3073;ATP&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x4F53;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x611F;&#x4F5C;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3084;&#x690D;&#x7269;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x690D;&#x7269;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;

&#xC2DD;&#xBB3C; &#xAC8C;&#xB188; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC218;&#xBC31; &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases &#xC544;&#xC9C1; &#xADF9;&#xD788; &#xC77C;&#xBD80;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574;&#xC11C;&#xB9CC; &#xB300;&#xC0C1; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;/&#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xB2C8; Pto PP1, ATP &#xACBD;&#xC7C1;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xD22C;&#xACFC;&#xC131; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C;&#xC758; &#xC720;&#xC0AC; &#xCCB4;&#xB97C; &#xAC10;&#xAD11; &#xC131;&#xC744; &#xD654;&#xD559; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC811;&#xADFC; &#xC801;&#xC6A9;. Pto &#xB2C8; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC778;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; Pst &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xC218; &#xC5EC;. &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; &#xAD6C;&#xBD84; Pto&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; PP1 &#xC720;&#xC0AC; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Pto &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC778;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBE5B;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC29;&#xC5B4; &#xAD00;&#xB828; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544;, &#xC9C0;&#xB3C4; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; Lempk3&#xC774; &#xD654;&#xD559; &#xC720;&#xC804; &#xBC29;&#xC2DD; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD655;&#xB300;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; &#xAD6C;&#xBD84;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; kinases &#xBD80;&#xC790;&#xC5F0; &#xC2A4;&#xB7EC;&#xC6B4; N (6)&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;-ATP &#xC720;&#xC0AC; &#xCCB4; &#xB2C8; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB300;&#xC0C1; &#xD0DC;&#xADF8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC545;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; phosphodonors&#xB85C; &#xC218;&#xC815;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, kinases &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C; PP1 &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC720;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC758; &#xBBFC;&#xAC10;&#xC131;&#xACFC; ATP &#xC218; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAC80;&#xC0C9; &#xBC0F; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xAC00; &#xB420;.

&#xC2DD;&#xBB3C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD654;&#xD559; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC811;&#xADFC;.

Genomas de plantas codificar cientos de prote&#xED;nas quinasas, sin embargo, s&#xF3;lo una peque&#xF1;a fracci&#xF3;n de ellos las funciones y objetivos precisos de fosforilaci&#xF3;n se han identificado. Recientemente, se aplic&#xF3; un m&#xE9;todo qu&#xED;mico-gen&#xE9;tico para sensibilizar a la serina de tomate / treonina kinasa Pto. a los an&#xE1;logos de PP1, un ATP a la competencia y permeable a las c&#xE9;lulas, de mol&#xE9;cula peque&#xF1;a inhibidora. La quinasa Pto. confiere resistencia a las bacterias Pst mediante la activaci&#xF3;n de la respuesta inmune en el reconocimiento espec&#xED;fico de efectores bacterianos. Mediante el uso de an&#xE1;logos de PP1 en combinaci&#xF3;n con la toma de fuerza anal&#xF3;gico-sensibles, que arrojan nueva luz sobre el papel de la actividad de la quinasa Pto. en reconocimiento de efectos y la transducci&#xF3;n de se&#xF1;ales. Aqu&#xED; ampliar el uso de este m&#xE9;todo qu&#xED;mico-gen&#xE9;tico a otra quinasa planta de defensa relacionados con la prote&#xED;na, los LeMPK3 MAP quinasa. Adem&#xE1;s, demostramos que el an&#xE1;logo sensible, pero no de tipo salvaje quinasas son capaces de usar N naturales (6)-modificada por an&#xE1;logos de ATP como phosphodonors que pueden ser explotadas para el etiquetado de los objetivos de la fosforilaci&#xF3;n de la quinasa de inter&#xE9;s. Por lo tanto, la sensibilizaci&#xF3;n de las quinasas a los an&#xE1;logos de la PP1 inhibidor de mol&#xE9;cula peque&#xF1;a y la ATP puede ser una herramienta eficaz para el descubrimiento de las funciones celulares y los sustratos de fosforilaci&#xF3;n de las prote&#xED;nas quinasas de la planta.

Un m&#xE9;todo qu&#xED;mico-gen&#xE9;tico para el an&#xE1;lisis funcional de las prote&#xED;nas quinasas de plantas

&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; (ER)-&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x964D;&#x89E3; (&#x8BFB;&#x4E66;) &#x9014;&#x5F84;&#x6D88;&#x9664;&#x4E86;&#x4ECE;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#x7684;&#x5F02;&#x5E38;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;Cdc48p-Ufd1p-Npl4p &#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x8868;&#x793A;&#x901A;&#x8FC7;&#x53D7;&#x635F;&#x8BFB;&#x4E66;&#x5728;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x83CC;&#x5728;&#x8FD9;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x4EFB;&#x4F55;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; SSZ1 cdc48-10 &#x6291;&#x5236;&#x5668;&#x4E3A;&#x9057;&#x4F20;&#x5C4F;&#x5E55;&#x4E2D;&#x5E76;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x5B83;&#x901A;&#x8FC7;&#x591A;&#x6548;&#x6027;&#x836F;&#x7269;&#x62B5;&#x6297; (PDR) &#x7F51;&#x7EDC; Cdc48p &#x4E0A;&#x8C03;&#x3002;PSSZ1 &#x8D28;&#x7C92;&#x6062;&#x590D;&#x53D7;&#x635F;&#x8BFB;&#x4E66;-M 6myc-Hmg2 cdc48 10&#x3001; ufd1-2 &#x548C; npl4-1 &#x4E2D;&#x7684; SSZ1 &#x5220;&#x9664;&#x867D;&#x7136;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;Ssz1p &#x6FC0;&#x6D3B; Pdr1p&#xFF0C;PDR &#x4E3B;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x3002;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x4E0A;&#xFF0C;PDR1 &#x6216; RPN4 &#x53CA;&#x5176;&#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8D28;&#x7C92; cdc48-10 p &#x6C34;&#x5E73;&#x5347;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x6062;&#x590D;&#x8BFB;&#x4E66;-M cdc48-10&#x3002;Rpn4p &#x8C03;&#x8282;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x4E9A;&#x57FA;&#x548C; CDC48&#x3001; RPN4 &#x5220;&#x9664;&#x5E9F;&#x9664;&#x4E86;&#x8BFB;&#x4E66;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;Deltarpn4 &#x7684;&#x51CF;&#x5C11;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x6C34;&#x5E73;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x964D;&#x89E3;&#x6E38;&#x79BB;&#x57FA;&#x5E95;&#xFF0C;&#x800C;&#x53D7;&#x635F;&#x7684;&#x8BFB;&#x4E66;-M &#x662F;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; Cdc48p &#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6062;&#x590D;&#x4E86; pCDC48 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5DF2;&#x66F4;&#x6B63;&#x7684;&#x8BFB;&#x4E66; M Cdc48 &#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34; ufd1-2 &#x548C; npl4-1 pCDC48 &#x8D28;&#x7C92;&#xFF0C;hypomorphic &#x682A;&#x548C; pcdc48-10 &#x7C92;&#xFF0C;cdc48-10 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7ED3;&#x5408;&#x53D1;&#x73B0; pSSZ1 &#x548C; pcdc48-10 &#x90FD;&#x4E0D;&#x6062;&#x590D;&#x8BFB;&#x4E66;-L CPY *-&#x533B;&#x7BA1;&#x5C40;&#xFF0C;&#x652F;&#x6301;&#x6211;&#x4EEC; Ssz1p &#x6291;&#x5236;&#x6548;&#x679C;&#x690D; Cdc48p &#x6240;&#x5E26;&#x6765;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x3002;

Ssz1 &#x8FD8;&#x539F;&#x7531;&#x690D; cdc48 &#x8868;&#x793A;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684; cdc48-ufd1-npl4 &#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;&#x964D;&#x89E3;&#x3002;

The endoplasmic reticulum (ER)-associated protein degradation (ERAD) pathway eliminates aberrant proteins from the ER. The key role of Cdc48p-Ufd1p-Npl4p is indicated by impaired ERAD in Saccharomyces cerevisiae with mutations in any of this complex's genes. We identified SSZ1 in genetic screens for cdc48-10 suppressors and show that it upregulates Cdc48p via the pleiotropic drug resistance (PDR) network. A pSSZ1 plasmid restored impaired ERAD-M of 6myc-Hmg2 in cdc48-10, ufd1-2, and npl4-1, while SSZ1 deletion had no effect. Ssz1p activates Pdr1p, the PDR master regulator. Indeed, plasmids of PDR1 or its target gene RPN4 increased cdc48-10p levels and restored ERAD-M in cdc48-10. Rpn4p regulates transcription of proteasome subunits and CDC48, thus RPN4 deletion abolished ERAD. However, the diminished proteasome level in Deltarpn4 was sufficient for degrading a cytosolic substrate, whereas the impaired ERAD-M was the result of diminished Cdc48p and was restored by expression of pCDC48. The corrected ERAD-M in the hypomorphic strains of the Cdc48 partners ufd1-2 and npl4-1 by the pCDC48 plasmid, and in cdc48-10 cells by the pcdc48-10 plasmid, combined with the finding that neither pSSZ1 nor pcdc48-10 restored ERAD-L of CPY*-HA, support our conclusion that Ssz1p suppressing effects is brought about by upregulating Cdc48p.

Ssz1 restores endoplasmic reticulum-associated protein degradation in cells expressing defective cdc48-ufd1-npl4 complex by upregulating cdc48.

Le r&eacute;ticulum endoplasmique (re)-voie de d&eacute;gradation (ERAD) prot&eacute;ine associ&eacute;e &eacute;limine les prot&eacute;ines aberrantes de l&#39;ER. Le r&ocirc;le cl&eacute; de Cdc48p-Ufd1p-Npl4p est indiqu&eacute; par ERAD alt&eacute;r&eacute;e dans Saccharomyces cerevisiae pr&eacute;sentant des mutations dans l&#39;un de ce complexe de g&egrave;nes. Nous avons identifi&eacute; des SSZ1 dans les &eacute;crans de g&eacute;n&eacute;tiques pour cdc48-10 suppresseurs et montrer qu&#39;elle r&eacute;gule &agrave; la hausse Cdc48p via le r&eacute;seau de r&eacute;sistance (PDR) de drogue pl&eacute;iotrope. Un plasmide pSSZ1 restaur&eacute; avec facult&eacute;s affaiblies ERAD-M de 6myc-Hmg2 en cdc48-10 ufd1-2 et npl4-1, tandis que la suppression de la SSZ1 n&#39;a aucun effet. Ssz1p active Pdr1p, l&#39;organisme de r&eacute;glementation principal PDR. En effet, les plasmides de PDR1 ou de son g&egrave;ne cible RPN4 cdc48 - 10p niveaux accrus et restaur&eacute; ERAD-M cdc48-10. Rpn4p r&eacute;gule la transcription des sous-unit&eacute;s du prot&eacute;asome et CDC48, ainsi la suppression RPN4 aboli ERAD. Toutefois, le niveau de diminution du prot&eacute;asome dans Deltarpn4 &eacute;tait suffisant pour d&eacute;grader un substrat cytosolique, tandis que l&#39;alt&eacute;ration ERAD-M a &eacute;t&eacute; le r&eacute;sultat de Cdc48p diminu&eacute;e et a &eacute;t&eacute; restaur&eacute; par l&#39;expression de pCDC48. Le corrig&eacute; ERAD-M dans les souches de hypomorphic du Cdc48 partenaires ufd1-2 et npl4-1 par le plasmide pCDC48 et cdc48-10 cellules par le plasmide pcdc48-10, combin&eacute;e &agrave; la conclusion que ni pSSZ1 ni pcdc48-10 restaur&eacute;e ERAD-L du CPY *-HA, soutenir notre conclusion que Ssz1p effets suppresseur est provoqu&eacute;e par ses Cdc48p.

Ssz1 r&eacute;tablit la d&eacute;gradation de la prot&eacute;ine associ&eacute;e au r&eacute;ticulum endoplasmique dans les cellules exprimant d&eacute;fectueux complexe cdc48-ufd1-npl4 par ses cdc48.

Dem Endoplasmatischen Retikulum (ER)-assoziierten Protein Degradation (ERAD) Stoffwechselweg eliminiert aberrante Proteine aus dem ER. Die Schl&uuml;sselrolle der Cdc48p-Ufd1p-Npl4p ist gekennzeichnet durch gest&ouml;rte ERAD in Saccharomyces Cerevisiae mit Mutationen in einem dieses Komplexes der Gene. Wir SSZ1 in genetische Schirme f&uuml;r cdc48-10 Unterdr&uuml;cker identifiziert und zeigen, da&szlig; es Upregulates Cdc48p &uuml;ber das pleiotropen Droge-Widerstand (PDR)-Netz. Ein pSSZ1-Plasmid wiederhergestellt beeintr&auml;chtigt ERAD-M 6myc-Hmg2 in cdc48-10, ufd1-2 und npl4-1, w&auml;hrend SSZ1 L&ouml;schung keine Auswirkungen hatte. Ssz1p wird Pdr1p, der PDR-master-Regler aktiviert. In der Tat Plasmide PDR1 oder sein Ziel-gen RPN4 h&ouml;here cdc48 - 10P und restauriert ERAD-M cdc48-10. Rpn4p regelt die Transkription des Proteasom-Untereinheiten und CDC48, so RPN4 L&ouml;schung ERAD abgeschafft. Allerdings war die verminderte Proteasom-Ebene in Deltarpn4 ausreichend f&uuml;r ein cytosolisches Substrat, erniedrigend, w&auml;hrend das gest&ouml;rte ERAD-M das Ergebnis einer verminderten Cdc48p war und durch Ausdruck des pCDC48 restauriert. Die korrigierte ERAD-M in die hypomorphen St&auml;mme der Cdc48 Partner ufd1-2 und npl4-1 durch die pCDC48-Plasmid und cdc48-10 Zellen durch die pcdc48-10-Plasmid, kombiniert mit der Feststellung, dass weder pSSZ1 noch pcdc48-10 ERAD-L der KPJ * wiederhergestellt-HA, unterst&uuml;tzen unsere Schlussfolgerung, die Ssz1p keinesfalls unterdr&uuml;cken Effekte durch Heraufregulierung Cdc48p herbeigef&uuml;hrt wird.

Ssz1 stellt Endoplasmatisches Reticulum-assoziierten Proteinabbau in Zellen, die defekte cdc48-ufd1-npl4-Komplex durch Heraufregulierung cdc48 zum Ausdruck.

Il reticolo endoplasmatico (ER)-via di degradazione (ERAD) proteina associata elimina le proteine aberranti da ER. Il ruolo chiave della Cdc48p-Ufd1p-Npl4p &egrave; indicato da alterata ERAD in Saccharomyces cerevisiae con mutazioni in uno qualsiasi di questo complesso di geni. Abbiamo individuato SSZ1 in schermi genetici per soppressori di cdc48-10 e mostra che essa sopraregola le Cdc48p tramite la rete di resistenza (PDR) droga pleiotropica. Un plasmide pSSZ1 restaurato alterato ERAD-M di 6myc-Hmg2 in cdc48-10, ufd1-2 e npl4-1, mentre SSZ1 eliminazione ha avuto alcun effetto. Ssz1p attiva Pdr1p, il regolatore master PDR. Infatti, plasmidi di PDR1 o il gene bersaglio RPN4 aumentati livelli di cdc48-10 p e restaurato ERAD-M cdc48-10. Rpn4p regola la trascrizione della subunit&agrave; del proteasoma e CDC48, cos&igrave; RPN4 eliminazione abolito ERAD. Tuttavia, il livello del proteasoma diminuita in Deltarpn4 era sufficiente per degradare un substrato citosolico, considerando che la compromissione ERAD-M &egrave; stato il risultato di Cdc48p diminuita e fu restaurato da espressione di pCDC48. Il corretto ERAD-M nei ceppi di hypomorphic dei Cdc48 partner ufd1-2 e npl4-1 dal plasmide pCDC48 e in cdc48-10 celle dal plasmide pcdc48-10, combinata con la constatazione che n&eacute; pSSZ1 n&eacute; pcdc48-10 restaurato ERAD-L di CPY-Ah, sostenere la nostra conclusione che gli effetti di soppressione Ssz1p &egrave; causata da upregulating Cdc48p.

Ssz1 ripristina la degradazione delle proteine associati al reticolo endoplasmatico in cellule esprimendo difettoso cdc48-ufd1-npl4 complesso di upregulating cdc48.

&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53; (ER)-&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3; (ERAD) &#x7D4C;&#x8DEF;&#x7570;&#x5E38;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Cdc48p-Ufd1p-Npl4p &#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x969C;&#x5BB3;&#x8005; ERAD &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; SSZ1 cdc48 10 &#x30B5;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x753B;&#x9762;&#x3067;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0; Cdc48p &#x591A;&#x9762;&#x85AC;&#x5264;&#x62B5;&#x6297; (PDR) &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x7D4C;&#x7531;&#x3067;&#x3002;&#x5FA9;&#x5143; pSSZ1 &#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; ERAD-M &#x306E; 6myc &#x3078;&#x306E; Hmg2 &#x306E; cdc48 10&#x3001;ufd1 2 npl4 1 &#x969C;&#x5BB3;&#x8005; SSZ1 &#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x306B;&#x306F;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3002;Ssz1p Pdr1p&#x3001;&#x30E9;&#x30AA;&#x30B9;&#x306E;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x78BA;&#x304B;&#x306B;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; PDR1 &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; RPN4 &#x306E; cdc48 10 p &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;ERAD M cdc48-10 &#x306E;&#x5FA9;&#x5143;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Rpn4p &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068; CDC48 &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066; RPN4 &#x524A;&#x9664; ERAD &#x5EC3;&#x6B62;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB; Deltarpn4 &#x3067;&#x306F;&#x969C;&#x5BB3;&#x8005;&#x306E; ERAD M &#x6E1B;&#x5C11; Cdc48p &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;pCDC48 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5FA9;&#x5143;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3055;&#x308C;&#x305F; ERAD-M Cdc48 &#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC; ufd1 2 &#x3084; npl4-1 pCDC48 &#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5F62;&#x8CEA;&#x306E; lrp 6 &#x30CF;&#x30A4;&#x30DD;&#x30E2;&#x30EB;&#x30D5;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3068; cdc48 10 &#x7D30;&#x80DE; pcdc48 10 &#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D50;&#x5408;&#x3082; pSSZ1 &#x3082; pcdc48 10 ERAD-L &#x306E; CPY &#x203B; &#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x3068;-&#x30CF;&#x3001;Ssz1p &#x6291;&#x5236;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x9AA8;&#x6298; Cdc48p &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3055;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Ssz1 &#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x6B20;&#x9665; cdc48-ufd1-npl4 &#x8907;&#x96D1;&#x9AA8;&#x6298; cdc48 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (ER)-&#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC800;&#xD558; (ERAD) &#xD1B5;&#xB85C; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD0C8; &#xC120; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC81C;&#xAC70;. Cdc48p-Ufd1p-npl4p&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC00;&#xB9AC;&#xD0A8;&#xB2E4; Saccharomyces &#xC7A5;&#xC560; ERAD&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;&#xC774; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC640; cerevisiae&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; cdc48 10 &#xC9C4;&#xC555;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD654;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; ssz1&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC774; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xB2E4; &#xBA74; &#xBC1C;&#xD604; &#xC131; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC800;&#xD56D; (PDR) &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; upregulates Cdc48p. SSZ1 &#xC0AD;&#xC81C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xC5C6; &#xC5C8; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBCF5;&#xC6D0; pSSZ1 &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; ERAD-M 6myc-Hmg2 cdc48-10, ufd1 2, npl4-1&#xC5D0;&#xC758; &#xC7A5;&#xC560;&#xC778;. Ssz1p Pdr1p, PDR &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD130; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C;, plasmids PDR1 &#xB610;&#xB294; &#xADF8; &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; rpn4&#xC758; cdc48-10p &#xC218;&#xC900; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; cdc48-10&#xC5D0;&#xC11C; ERAD M&#xB97C; &#xBCF5;&#xC6D0;. Rpn4p &#xADDC;&#xC81C; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; subunits &#xBC0F; cdc48&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;, RPN4 &#xC0AD;&#xC81C; ERAD&#xB97C; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, deltarpn4&#xC5D0; &#xC800;&#xD558; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xC218;&#xC900; &#xC7A5;&#xC560; ERAD M &#xC800;&#xD558; cdc48p&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xACE0; Pcdc48&#xC758; &#xC2DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xB41C; &#xBC18;&#xBA74; cytosolic &#xAE30;&#xD310; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC218;&#xC815; &#xB41C; ERAD-M Cdc48 &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; ufd1-2&#xC640; pCDC48 &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; npl4-1 hypomorphic &#xC885;&#xC790; &#xBC0F; pcdc48 10 &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; cdc48 10 &#xC140; Pssz1&#xB3C4; pcdc48-10 ERAD-L CPY * &#xBCF5;&#xC6D0; &#xCC3E;&#xB294; &#xD568;&#xAED8;-&#xD558;, Ssz1p &#xC5B5;&#xC81C; &#xD6A8;&#xACFC; upregulating cdc48p&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD08;&#xB798; &#xB41C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xB860;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ssz1 upregulating cdc48&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; cdc48-ufd1-npl4 &#xACB0;&#xD568;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El ret&iacute;culo endopl&aacute;smico (ER)-v&iacute;a de degradaci&oacute;n (ERAD) prote&iacute;na asociada elimina prote&iacute;nas aberrantes de la ER. Se indica el papel clave de Cdc48p-Ufd1p-Npl4p por ERAD deteriorada en Saccharomyces cerevisiae con mutaciones en cualquiera de este conjunto de genes. Se identificaron SSZ1 en pantallas gen&eacute;ticas para supresores de cdc48-10 y demuestran que estimula Cdc48p trav&eacute;s de la red de resistencia (PDR) de drogas pleiotr&oacute;pico. Un pl&aacute;smido pSSZ1 restaurado deteriorada ERAD-M de 6myc-Hmg2 en cdc48-10 ufd1-2 y npl4-1, mientras que la eliminaci&oacute;n de SSZ1 no tuvo ning&uacute;n efecto. Ssz1p activa Pdr1p, el regulador principal de PDR. De hecho, pl&aacute;smidos de PDR1 o su gen blanco RPN4 aumentaron de los niveles de cdc48 - 10P y hab&iacute;a restaurado ERAD-M cdc48-10. Rpn4p regula la transcripci&oacute;n de las subunidades de la proteasoma y CDC48, as&iacute; RPN4 borrado suprimido ERAD. Sin embargo, el nivel de disminuci&oacute;n del proteasoma en Deltarpn4 era suficiente para degradar un sustrato citos&oacute;lico, Considerando que el deterioro ERAD-M fue el resultado de la disminuci&oacute;n Cdc48p y fue restablecido por la expresi&oacute;n de pCDC48. El corregido ERAD-M en las cepas hipom&oacute;rfica de los Cdc48 socios ufd1-2 y npl4-1 por el pl&aacute;smido pCDC48 y en c&eacute;lulas de cdc48-10 por el pl&aacute;smido pcdc48-10, combinado con el hallazgo que ni pSSZ1 ni pcdc48-10 restaurado ERAD-L de CPY *-HA, apoyar nuestra conclusi&oacute;n que Ssz1p suprimir efectos es regular Cdc48p.

Ssz1 restaura la degradaci&oacute;n de la prote&iacute;na asociada a ret&iacute;culo endopl&aacute;smico en las c&eacute;lulas que expresan defectuoso complejo de cdc48-ufd1-npl4 de cdc48 regular.

&#x9769;&#x5170;&#x9634;&#x6027;&#x7EC6;&#x83CC;&#x6E83;&#x75A1;&#x75C5;&#x5149;&#x4F0F;&#x3002;vesicatoria &#x662F;&#x5728;&#x756A;&#x8304;&#x548C;&#x8FA3;&#x6912;&#x9ED1;&#x6591;&#x75C5;&#x7684;&#x56E0;&#x679C;&#x4EE3;&#x7406;&#x3002;&#x5341;&#x3001; &#x767D;&#x83DC;&#x578B;&#x6CB9;&#x83DC; pv&#x3002;vesicatoria &#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x8FDB;&#x5165;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F20;&#x9012;&#x6548;&#x5E94;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E09;&#x3001; &#x5206;&#x6CCC;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5341;&#x3001; &#x767D;&#x83DC;&#x578B;&#x6CB9;&#x83DC;&#x5149;&#x4F0F;&#x3002;vesicatoria &#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x76EE;&#x6807;&#x4FDD;&#x5B88;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x548C;&#x5BA1;&#x67E5;&#x8868;&#x578B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x4ECE;&#x6D4B;&#x8BD5; 21 &#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#xFF0C;14 &#x6291;&#x5236;&#x9175;&#x6BCD;&#x751F;&#x957F;&#x5728;&#x666E;&#x901A;&#x6216;&#x5E94;&#x529B;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x6D3B;&#x529B;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;XopB &#x548C; XopF2 &#x7684;&#x51CF;&#x6BD2;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x3001; AvrRxo1&#x3001; XopX &#x548C; XopE1 &#x867D;&#x7136;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; DNA &#x542B;&#x91CF;&#x548C;&#x5F62;&#x6001;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x68C0;&#x67E5;&#x6307;&#x51FA;&#x9020;&#x6210;&#x7684; XopX &#x548C; AvrRxo1 &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x902E;&#x6355;&#x5728; G0/1 &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;XopB&#x3001; XopE1&#x3001; XopF2&#x3001; XopX&#x3001; &#x6291;&#x5236;&#x751F;&#x957F;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684; AvrRxo1 &#x4E5F;&#x66FE;&#x5F15;&#x8D77;&#x8868;&#x578B;&#xFF0C;&#x5982;&#x9EC4;&#x5316;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3001; &#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x4E3B;&#x673A;&#x6216;&#x975E;&#x5BC4;&#x4E3B;&#x690D;&#x7269;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8868;&#x578B;&#x9175;&#x6BCD;&#x548C;&#x690D;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x6548;&#x5E94;&#x80FD;&#x529B;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x5176;&#x6307;&#x8BA4;&#x50AC;&#x5316;&#x6B8B;&#x7559;&#x6216;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x56FE;&#x6848;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x652F;&#x6301;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x5341;&#x3001; &#x767D;&#x83DC;&#x578B;&#x6CB9;&#x83DC;&#x5149;&#x4F0F;&#x5229;&#x7528;&#x9175;&#x6BCD;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5916;&#x6E90;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;vesicatoria &#x952E;&#x5165;&#x4E09;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x5176;&#x771F;&#x6838;&#x5206;&#x5B50;&#x76EE;&#x6807;&#x8BC6;&#x522B;&#x548C;&#x884C;&#x52A8;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;

&#x6E83;&#x75A1;&#x75C5;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE; pv&#x3002;vesicatoria &#x578B;&#x4E09;&#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x548C;&#x751F;&#x5B58;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

The gram-negative bacterium Xanthomonas campestris pv. vesicatoria is the causal agent of spot disease in tomato and pepper. X. campestris pv. vesicatoria pathogenicity depends on a type III secretion system delivering effector proteins into the host cells. We hypothesized that some X. campestris pv. vesicatoria effectors target conserved eukaryotic cellular processes and examined phenotypes induced by their expression in yeast. Out of 21 effectors tested, 14 inhibited yeast growth in normal or stress conditions. Viability assay revealed that XopB and XopF2 attenuated cell proliferation, while AvrRxo1, XopX, and XopE1 were cytotoxic. Inspection of morphological features and DNA content of yeast cells indicated that cytotoxicity caused by XopX and AvrRxo1 was associated with cell-cycle arrest at G0/1. Interestingly, XopB, XopE1, XopF2, XopX, and AvrRxo1 that inhibited growth in yeast also caused phenotypes, such as chlorosis and cell death, when expressed in either host or nonhost plants. Finally, the ability of several effectors to cause phenotypes in yeast and plants was dependent on their putative catalytic residues or localization motifs. This study supports the use of yeast as a heterologous system for functional analysis of X. campestris pv. vesicatoria type III effectors, and sets the stage for identification of their eukaryotic molecular targets and modes of action.

Expression of Xanthomonas campestris pv. vesicatoria type III effectors in yeast affects cell growth and viability.

La bact&#xE9;rie gram-n&#xE9;gative Xanthomonas campestris pv. vesicatoria est l&#x26;#39;agent causal de la maladie des taches dans la tomate et le poivre. X. campestris pv. pathog&#xE9;nicit&#xE9; vesicatoria d&#xE9;pend d&#x26;#39;un syst&#xE8;me de s&#xE9;cr&#xE9;tion de type III d&#xE9;livrant prot&#xE9;ines effectrices dans les cellules h&#xF4;tes. Nous &#xE9;mettons l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se que certains X. campestris pv. effecteurs vesicatoria cibler conserv&#xE9;es eucaryotes processus cellulaires et les ph&#xE9;notypes examin&#xE9;s induits par leur expression dans la levure. Sur les 21 effecteurs test&#xE9;s, 14 inhibent la croissance de la levure dans des conditions normales ou de stress. Test de viabilit&#xE9; a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que XopB et la prolif&#xE9;ration cellulaire XopF2 att&#xE9;nu&#xE9;e, tandis que AvrRxo1, XopX, et XopE1 &#xE9;taient cytotoxiques. L&#x26;#39;inspection des caract&#xE9;ristiques morphologiques et le contenu d&#x26;#39;ADN de cellules de levure ont indiqu&#xE9; que la cytotoxicit&#xE9; caus&#xE9;e par XopX et AvrRxo1 est associ&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;arr&#xEA;t du cycle cellulaire &#xE0; G0 / 1. Fait int&#xE9;ressant, XopB, XopE1, XopF2, XopX, et que AvrRxo1 inhib&#xE9; la croissance dans la levure a &#xE9;galement caus&#xE9; des ph&#xE9;notypes, comme la chlorose et la mort cellulaire, lorsqu&#x26;#39;elles sont exprim&#xE9;es dans les plantes h&#xF4;tes ou non h&#xF4;te soit. Enfin, la capacit&#xE9; de plusieurs effecteurs de provoquer des ph&#xE9;notypes chez la levure et les plantes d&#xE9;pend de leurs pr&#xE9;sum&#xE9;s r&#xE9;sidus catalytiques ou des motifs de localisation. Cette &#xE9;tude prend en charge l&#x26;#39;utilisation de la levure comme un syst&#xE8;me h&#xE9;t&#xE9;rologue pour l&#x26;#39;analyse fonctionnelle de X. campestris pv. vesicatoria de type III, et effecteurs ouvre la voie &#xE0; l&#x26;#39;identification de leurs cibles mol&#xE9;culaires et eucaryotes modes d&#x26;#39;action.

Expression de Xanthomonas campestris pv. Vesicatoria type effecteurs III chez la levure affecte la croissance et la viabilit&#xE9; cellulaire

Das Gramnegative Bakterium Xanthomonas Campestris pv. Vesicatoria ist Erreger vor Ort Krankheit in Tomaten und Pfeffer. X. Campestris pv. Vesicatoria Pathogenit&auml;t h&auml;ngt eine Typ-III-Sekretionssystem Bereitstellung Effektor Proteine in Wirtszellen. Wir die Hypothese auf, dass einige X. Campestris pv. Vesicatoria Effektoren vorbei konserviert eukaryotischen zellul&auml;re Prozesse und untersucht Ph&auml;notypen induziert durch ihren Ausdruck in der Hefe. Aus 21 Effektoren getestet hemmte 14 Hefe Wachstum in normaler oder hoher Belastung. Entwicklungsf&auml;higkeit-Probe ergab, dass XopB und XopF2 abgeschw&auml;chte Zelle Verbreitung, w&auml;hrend AvrRxo1, XopX und XopE1 zytotoxischen waren. Inspektion von morphologischen Merkmalen und DNA-Gehalt von Hefezellen erkl&auml;rt, dass die Zytotoxizit&auml;t, die aufgrund von XopX und AvrRxo1 mit Zellzyklus Verhaftung bei G0/1 verbunden war. Interessanterweise verursachte XopB, XopE1, XopF2, XopX und AvrRxo1, das Wachstum der Hefe gehemmt auch Ph&auml;notypen, wie Chlorose und Zelle Tod, als entweder Host oder Nonhost Pflanzen ausgedr&uuml;ckt. Schlie&szlig;lich war die F&auml;higkeit von mehreren Effektoren, Ph&auml;notypen in Hefe und Pflanzen ihre vermeintliche katalytische R&uuml;ckst&auml;nde oder Lokalisierung Motiven abh&auml;ngig. Diese Studie unterst&uuml;tzt die Verwendung von Hefe als heterologe System f&uuml;r Funktionsanalyse von X. Campestris pv. Vesicatoria III Effektoren geben, und die B&uuml;hne zur Identifizierung ihrer eukaryotischen Molekulare Ziele und Wirkungsweisen.

Ausdruck von Xanthomonas Campestris pv. Vesicatoria Typ III Effektoren in Hefe wirkt sich Zelle Wachstum und Rentabilit&auml;t.

Il batterio gram-negativo Xanthomonas campestris pv. vesicatoria &egrave; l&#39;agente causale della malattia spot in pomodoro e pepe. X. campestris pv. vesicatoria patogenicit&agrave; dipende da un sistema di secrezione di tipo III fornendo proteine effettrici nelle cellule ospite. Abbiamo ipotizzato che alcuni X. campestris pv. vesicatoria effettori target conservato processi cellulari eucariotici ed esaminato fenotipi indotti dalla loro espressione in lievito. Fuori 21 effettori testati, 14 ha inibito la crescita lievito normale o condizioni di stress. Analisi di redditivit&agrave; ha rivelato che XopB e XopF2 la cella attenuata proliferazione, mentre AvrRxo1, XopX e XopE1 erano citotossici. Ispezione delle caratteristiche morfologiche e contenuto di DNA delle cellule di lievito indicato che la citotossicit&agrave; causato da XopX e AvrRxo1 &egrave; stato associato con arresto del ciclo cellulare in G0/1. &Egrave; interessante notare che, XopB, XopE1, XopF2, XopX e AvrRxo1 che ha inibito la crescita del lievito anche causato fenotipi, come clorosi e cellule morte, quando espresso in piante ospite o nonhost. Infine, la capacit&agrave; di diversi effettori di causare fenotipi del lievito e piante era dipendente da loro residui catalitici putativi o motivi di localizzazione. Questo studio supporta l&#39;uso di lievito come un sistema eterologo per l&#39;analisi funzionale di X. campestris pv. vesicatoria tipo effettori III e pone le basi per l&#39;identificazione dei loro bersagli molecolare eucariotiche e modalit&agrave; di azione.

Espressione di Xanthomonas campestris pv. vesicatoria effettori III tipo in lievito influisce sulla redditivit&agrave; e crescita cellulare.

&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9670;&#x6027;&#x7D30;&#x83CC;&#x767D;&#x8449;&#x3002; vesicatoria&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#x3068;&#x5510;&#x8F9B;&#x5B50;&#x306E;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x75C5;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; X.&#x767D;&#x8449;&#x3002; vesicatoria&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306F;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;III&#x578B;&#x5206;&#x6CCC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;X.&#x767D;&#x8449;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x7ACB;&#x3066;&#x305F;&#x3002; vesicatoria&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9175;&#x6BCD;&#x3067;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x691C;&#x67FB;&#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;21&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x3001;14&#x306F;&#x6B63;&#x5E38;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;XopB&#x3068;XopF2&#x6E1B;&#x8870;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x306F;&#x3001;AvrRxo1&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;XopX&#x3001;&#x3068;XopE1&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x5FB4;&#x304A;&#x3088;&#x3073;DNA&#x542B;&#x6709;&#x91CF;&#x306E;&#x691C;&#x67FB;&#x306F;XopX&#x3068;AvrRxo1&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x304C;G0 / 1&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x505C;&#x6B62;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;XopB&#x3001;XopE1&#x3001;XopF2&#x3001;XopX&#x3001;&#x3068;AvrRxo1&#x306F;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x975E;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30B7;&#x30B9;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x3001;&#x539F;&#x56E0;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x3068;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x89E6;&#x5A92;&#x6B8B;&#x57FA;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5C40;&#x5728;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;X.&#x767D;&#x8449;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7570;&#x7A2E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; vesicatoria III&#x578B;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A19;&#x200B;&#x200B;&#x7684;&#x3068;&#x4F5C;&#x7528;&#x6A5F;&#x5E8F;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3092;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x767D;&#x8449;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Vesicatoria&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;III&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3084;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;

&#xADF8;&#xB78C; &#xC74C;&#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; Xanthomonas campestris pv. vesicatoria&#xB294; &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xC640; &#xD6C4;&#xCD94;&#xC5D0; &#xC790;&#xB9AC; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xC778;&#xACFC; &#xB300;&#xB9AC;&#xC778;. X. campestris pv&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. vesicatoria pathogenicity &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140;&#xC73C;&#xB85C; effector &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC81C;&#xACF5; &#xC720;&#xD615; III &#xBD84; &#xBE44; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAC00;&#xC124; &#xC77C;&#xBD80; X. campestris pv. vesicatoria &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xB300;&#xC0C1; &#xC9C4; &#xD575; &#xC138;&#xD3EC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC874; &#xD558; &#xACE0; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC2DD; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xACE0;&#xAE30;. 21 &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;, &#xC911; 14 &#xC815;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC131;&#xC7A5; &#xB610;&#xB294; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC74; &#xC800;&#xD574;. &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xACF5;&#xAC1C;&#xB294; XopB &#xBC0F; XopF2 &#xAC10;&#xC1E0; &#xC140; &#xD655;&#xC0B0;, AvrRxo1, XopX, &#xBC0F; XopE1 cytotoxic &#xD588;&#xB2E4; &#xB3D9;&#xC548;. &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC810;&#xAC80; &#xBC0F; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; DNA &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xD45C;&#xC2DC; Xopx&#xC640; Avrrxo1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xCCB4;&#xD3EC; G0/1&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, XopB, XopE1, XopF2, XopX, &#xBC0F; AvrRxo1 &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0;&#xB294; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xACE0;&#xAE30;, chlorosis &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xB54C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB610;&#xB294; nonhost &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC640; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xAE30;&#xB97C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825; &#xC0C1; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xB610;&#xB294; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; X. campestris pv&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C; &#xD6A8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. vesicatoria&#xB294; III &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xB97C; &#xC785;&#xB825; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC9C4; &#xD575; &#xBD84;&#xC790; &#xD45C;&#xC801; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC0F; &#xD589;&#xB3D9;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xBB34;&#xB300;&#xB97C; &#xC124;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Xanthomonas campestris&#xC758; &#xC2DD; &#xD0DC;&#xC591;&#xAD11; &#xBC1C;&#xC804;. &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0; vesicatoria &#xC720;&#xD615; III &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La bacteria gram-negativa Xanthomonas campestris pv. vesicatoria es el agente causal de la enfermedad de las manchas en el tomate y el pimiento. X. campestris pv. patogenicidad vesicatoria depende de un sistema de secreci&#xF3;n tipo III entrega de prote&#xED;nas efectoras en las c&#xE9;lulas hu&#xE9;sped. La hip&#xF3;tesis de que alguna X. campestris pv. efectores vesicatoria orientar conservadas procesos celulares eucariotas y fenotipos examinados inducidas por su expresi&#xF3;n en levadura. De los 21 efectores han sido evaluados, 14 inhibieron el crecimiento de la levadura en condiciones normales o de estr&#xE9;s. Ensayo de viabilidad revel&#xF3; que XopB y XopF2 proliferaci&#xF3;n celular atenuada, mientras AvrRxo1, XopX, y XopE1 fueron citot&#xF3;xicos. La inspecci&#xF3;n de las caracter&#xED;sticas morfol&#xF3;gicas y contenido de ADN de c&#xE9;lulas de levadura se indica que la citotoxicidad causada por XopX y AvrRxo1 se asoci&#xF3; con la detenci&#xF3;n del ciclo celular en G0 / 1. Curiosamente, XopB, XopE1, XopF2, XopX y AvrRxo1 que inhib&#xED;a el crecimiento de la levadura tambi&#xE9;n caus&#xF3; fenotipos, como clorosis y muerte de las c&#xE9;lulas, cuando se expresan, ya sea en las plantas hospedantes o no hospedantes. Finalmente, la capacidad de varios efectores de causar fenotipos en levadura y plantas era dependiente de sus residuos catal&#xED;ticos putativo o motivos de localizaci&#xF3;n. Este estudio apoya el uso de la levadura como un sistema heter&#xF3;logo para el an&#xE1;lisis funcional de X. campestris pv. vesicatoria efectores de tipo III, y establece el escenario para la identificaci&#xF3;n de sus objetivos eucariotas moleculares y los modos de acci&#xF3;n.

Expresi&#xF3;n de Xanthomonas campestris pv. Vesicatoria Tipo III efectores en la levadura afecta el crecimiento celular y la viabilidad

&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x50AC;&#x5316;&#x57DF;&#x7684;&#x9AD8;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#x548C;&#x4F4E;&#x6E17;&#x900F;&#x6027;&#x690D;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x6311;&#x6218;&#x76EE;&#x6807;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x5316;&#x5B66;&#x9057;&#x4F20;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x63D0;&#x9AD8;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x4E2A;&#x522B;&#x690D;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6E17;&#x900F;&#x6027;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x59A8;&#x788D;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5728;&#x542F;&#x7528; ATP &#x7ADE;&#x4E89;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x9176;&#x7684; ATP &#x7ED3;&#x5408;&#x7F51;&#x7AD9;&#x4E2D;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E86;&#x5355;&#x4E2A;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x66FF;&#x4EE3;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6E17;&#x900F;&#x6027;&#x5206;&#x5B50;&#x7136;&#x540E;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x4E13;&#x95E8;&#x9488;&#x5BF9;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x5357;&#x82A5;&#x690D;&#x7269;&#x4E0D;&#x8868;&#x793A;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x81F4;&#x654F;&#x7684;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6218;&#x7565;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x529F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x8DB3;&#x5E95;&#x548C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x662F;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x5939;&#x5C42;&#x3002;

ATP &#x7ADE;&#x4E89;&#x5206;&#x5B50;&#x4FC3;&#x4F7F;&#x690D;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x5BF9;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The highly conserved nature of the protein kinase catalytic domain and the low permeability of plant cell membranes pose a challenge to the development of specific inhibitors that target individual protein kinases in vivo. Here, we describe a chemical-genetic approach to specifically sensitize individual plant kinases to cell-permeable small molecules that do not inhibit wild-type kinases. In this approach, a single amino-acid substitution is introduced in the ATP-binding site of the enzyme enabling specific binding of ATP-competitive molecules. Cell-permeable molecules can then be used to specifically target the sensitized allele in transgenic Arabidopsis thaliana plants that do not express the wild-type form of the kinase. This strategy provides a useful tool for the functional characterization of protein kinases in planta and for the dissection of the signaling pathways in which they are involved.

Sensitizing plant protein kinases to specific inhibition by ATP-competitive molecules.

La nature hautement conserv&#xE9;e de la prot&#xE9;ine kinase de domaine catalytique et la faible perm&#xE9;abilit&#xE9; des membranes cellulaires v&#xE9;g&#xE9;tales posent un d&#xE9;fi pour le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;inhibiteurs sp&#xE9;cifiques des kinases cibles de prot&#xE9;ines individuelles in vivo. Ici, nous d&#xE9;crivons une approche chimique et g&#xE9;n&#xE9;tique &#xE0; sensibiliser sp&#xE9;cifiquement kinases v&#xE9;g&#xE9;tales individuelles &#xE0; la cellule-perm&#xE9;ables de petites mol&#xE9;cules qui inhibent ne kinases de type sauvage. Dans cette approche, un seul acide amin&#xE9; de substitution est introduit dans le site de liaison ATP de l&#x26;#39;enzyme permettant la liaison sp&#xE9;cifique de l&#x26;#39;ATP-comp&#xE9;titifs mol&#xE9;cules. Cell-perm&#xE9;ables mol&#xE9;cules peuvent alors &#xEA;tre utilis&#xE9;es pour cibler sp&#xE9;cifiquement l&#x26;#39;all&#xE8;le sensibilis&#xE9;s dans des plantes transg&#xE9;niques d&#x26;#39;Arabidopsis thaliana qui n&#x26;#39;expriment pas la forme de type sauvage de la kinase. Cette strat&#xE9;gie constitue un outil utile pour la caract&#xE9;risation fonctionnelle des prot&#xE9;ines kinases in planta et pour la dissection des voies de signalisation dans lesquelles ils sont impliqu&#xE9;s.

Sensibiliser les prot&#xE9;ines kinases v&#xE9;g&#xE9;tales &#xE0; l&#x26;#39;inhibition sp&#xE9;cifique de l&#x26;#39;ATP-comp&#xE9;titifs Mol&#xE9;cules

Die stark konservierten Natur der katalytischen Protein-Kinase-Dom&auml;ne und die geringe Durchl&auml;ssigkeit der Zellmembranen Pflanzen stellen eine Herausforderung f&uuml;r die Entwicklung von spezifischen Inhibitoren, die einzelne Proteinkinasen in-vivo Ziel. Hier beschreiben wir einen Chemikalien-genetischen Ansatz um speziell Einzelpflanze Kinasen zu Zelle-durchl&auml;ssigen kleine Molek&uuml;le zu sensibilisieren, die nicht Wildtyp Kinasen hemmen. Bei diesem Ansatz wird eine einzelne Aminos&auml;ure-Substitution in der ATP-Bindungsstelle des Enzyms aktivieren spezifische Bindung von Molek&uuml;len ATP-Wettbewerb eingef&uuml;hrt. Zelle-durchl&auml;ssigen Molek&uuml;le k&ouml;nnen dann verwendet werden, um gezielt gegen die sensibilisierten Allel in transgenen Arabidopsis Thaliana Pflanzen, die nicht die Kinase Wildtyp Form zum Ausdruck bringen. Diese Strategie stellt ein n&uuml;tzliches Werkzeug f&uuml;r die Funktionelle Charakterisierung der Proteinkinasen in Planta und die Pr&auml;paration der die Signalwege, an denen sie beteiligt sind.

Sensibilisierende Pflanze Proteinkinasen zur spezifischen Hemmung von Molek&uuml;len ATP-Wettbewerb.

La natura altamente conservata del dominio catalitico della proteina chinasi e la bassa permeabilit&agrave; delle membrane cellulari vegetali rappresentano una sfida per lo sviluppo di inibitori specifici che l&#39;obiettivo individuale chinasi in vivo. Qui, descriviamo un approccio genetico-chimico per sensibilizzare in particolare chinasi impianto individuale a cellula permeabile piccole molecole che non inibiscono le chinasi wild-type. In questo approccio, una singola amminoacido sostituzione &egrave; stato introdotto nel sito ATP-binding dell&#39;enzima attivazione specifiche dell&#39;associazione di molecole di ATP-competitivo. Cella-permeabile molecole quindi possono essere utilizzati per indirizzare specificamente l&#39;allele sensibilizzata in Arabidopsis thaliana piante transgeniche che non esprimono la forma wild-type della chinasi di. Questa strategia fornisce un utile strumento per la caratterizzazione funzionale di chinasi di proteina in planta e la dissezione delle vie di segnalazione in cui sono coinvolti.

Sensibilizzante pianta proteina chinasi di inibizione specifica di molecole di ATP-competitivo.

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x4F4E;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6027;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3078;&#x306E;&#x6311;&#x6226;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x7D30;&#x80DE;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x611F;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x5316;&#x5B66;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x7F6E;&#x63DB;&#x306F;ATP&#x7AF6;&#x5408;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;ATP&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x611F;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x306F;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x4F53;&#x4E2D;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x89E3;&#x5256;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

ATP&#x7AF6;&#x5408;&#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x611F;&#x4F5C;&#x6027;&#x690D;&#x7269;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xBCF4;&#xC874; &#xC790;&#xC5F0;&#xACFC; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC804; &#xD3EC;&#xC988;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xACF5;&#xC7A5; kinases &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; kinases &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xD22C;&#xACFC;&#xC131; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xAC10;&#xAD11; &#xD654;&#xD559; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC811;&#xADFC; &#xC124;&#xBA85;. &#xC774; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC0B0; &#xB300;&#xCCB4; &#xACBD;&#xC7C1; ATP &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; ATP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC785; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2C8; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; Arabidopsis thaliana &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD558;&#xAC8C; &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xD22C;&#xACFC;&#xC131; &#xBD84;&#xC790; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC774; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C; &#xD574; &#xBD80; planta&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Sensitizing &#xC2DD;&#xBB3C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases ATP &#xACBD;&#xC7C1;&#xB825; &#xC788;&#xB294; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC815; &#xC800;&#xD574; &#xD558;.

La naturaleza altamente conservada del dominio catal&#xED;tico de la prote&#xED;na quinasa y la baja permeabilidad de las membranas celulares de las plantas constituyen un desaf&#xED;o para el desarrollo de inhibidores espec&#xED;ficos que quinasas espec&#xED;ficas individuales de prote&#xED;nas in vivo. A continuaci&#xF3;n, describimos un m&#xE9;todo qu&#xED;mico-gen&#xE9;tico para sensibilizar espec&#xED;ficamente quinasas de plantas individuales que penetran en las c&#xE9;lulas mol&#xE9;culas peque&#xF1;as que no inhiban las quinasas de tipo salvaje. En este enfoque, una sola sustituci&#xF3;n de amino&#xE1;cidos se introduce en el sitio de uni&#xF3;n a ATP de la enzima que permite la uni&#xF3;n espec&#xED;fica de ATP-competitivos mol&#xE9;culas. Cell-permeables mol&#xE9;culas entonces se puede utilizar para apuntar espec&#xED;ficamente el alelo sensibilizado en plantas transg&#xE9;nicas de Arabidopsis thaliana que no expresan la forma de tipo salvaje de la quinasa. Esta estrategia proporciona una herramienta &#xFA;til para la caracterizaci&#xF3;n funcional de las prote&#xED;nas quinasas en planta y para la disecci&#xF3;n de las v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en el que est&#xE1;n involucrados.

Sensibilizaci&#xF3;n de quinasas de prote&#xED;nas vegetales a la inhibici&#xF3;n espec&#xED;fica de mol&#xE9;culas de ATP a la competencia

&#x7EC6;&#x83CC;&#x6548;&#x5E94;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x88AB;&#x9012;&#x9001;&#x5230;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E09;&#x5206;&#x6CCC;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282;&#x5404;&#x79CD;&#x4E3B;&#x673A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x6709;&#x5229;&#x4E8E;&#x75C5;&#x539F;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x9769;&#x5170;&#x6C0F;&#x9634;&#x6027;&#x83CC;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x8BC6;&#x522B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x7531;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x7B56;&#x7565;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x6570;&#x7EC4;&#x5220;&#x9664;&#x9175;&#x6BCD;&#x83CC;&#x88C5;&#x8FDB;&#x5355;&#x4E00;&#x7684; 96 &#x4E95;&#x677F;&#x3002;&#x6570;&#x7EC4;&#x662F;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x4F18;&#x5316;&#x8BA1;&#x7B97;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5220;&#x9664;&#x83CC;&#x682A;&#x7684;&#x5C0F;&#x6570;&#x76EE;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x6DB5;&#x76D6;&#x4E86;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x5408;&#x6210;&#x81F4;&#x547D;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7F51;&#x7EDC;&#x3002;&#x6570;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x7684;&#x5220;&#x9664;&#x83CC;&#x682A;&#x7B5B;&#x9009;&#x4E3A;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5174;&#x8DA3;&#x7EC6;&#x83CC;&#x6548;&#x5E94;&#x5BF9;&#x8FC7;&#x654F;&#x3002;&#x9AD8;&#x654F;&#x5220;&#x9664;&#x682A;&#x7136;&#x540E;&#x5206;&#x6790;&#x5176;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x81F4;&#x547D;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x6548;&#x5E94;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x8BC6;&#x522B;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x767D;&#x53F6;&#x67AF;&#x75C5;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x767D;&#x83DC;&#x578B;&#x6CB9;&#x83DC;&#x952E;&#x5165;&#x4E09;&#x6548;&#x5E94;&#x5668; XopE2&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; XopE2 &#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x548C;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x5E94;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x66F4;&#x4E00;&#x822C;&#x5730;&#x8BF4;&#xFF0C;96 &#x4E95;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5370;&#x7248;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F7F;&#x5F97;&#x7504;&#x522B;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BBF;&#x95EE;&#x4EFB;&#x4F55;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x548C;&#x4FBF;&#x5229;&#x5728;&#x77ED;&#x65F6;&#x95F4;&#x5185;&#x5927;&#x91CF;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5B83;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x7684;&#x5E73;&#x53F0;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76EE;&#x6807;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#x4E00;&#x4E2A;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x9175;&#x6BCD;&#x7684;&#x7B56;&#x7565;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7EC6;&#x83CC;&#x6548;&#x5E94;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

Bacterial effector proteins, which are delivered into the host cell via the type III secretion system, play a key role in the pathogenicity of gram-negative bacteria by modulating various host cellular processes to the benefit of the pathogen. To identify cellular processes targeted by bacterial effectors, we developed a simple strategy that uses an array of yeast deletion strains fitted into a single 96-well plate. The array is unique in that it was optimized computationally such that despite the small number of deletion strains, it covers the majority of genes in the yeast synthetic lethal interaction network. The deletion strains in the array are screened for hypersensitivity to the expression of a bacterial effector of interest. The hypersensitive deletion strains are then analyzed for their synthetic lethal interactions to identify potential targets of the bacterial effector. We describe the identification, using this approach, of a cellular process targeted by the Xanthomonas campestris type III effector XopE2. Interestingly, we discover that XopE2 affects the yeast cell wall and the endoplasmic reticulum stress response. More generally, the use of a single 96-well plate makes the screening process accessible to any laboratory and facilitates the analysis of a large number of bacterial effectors in a short period of time. It therefore provides a promising platform for studying the functions and cellular targets of bacterial effectors and other virulence proteins.

A simple yeast-based strategy to identify host cellular processes targeted by bacterial effector proteins.

Bact&#xE9;riennes prot&#xE9;ines effectrices, qui sont livr&#xE9;s dans la cellule h&#xF4;te par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire du syst&#xE8;me de s&#xE9;cr&#xE9;tion de type III, jouent un r&#xF4;le cl&#xE9; dans la pathog&#xE9;nicit&#xE9; de bact&#xE9;ries gram-n&#xE9;gatives, en modulant les processus d&#x26;#39;accueil divers cellulaires au profit de l&#x26;#39;agent pathog&#xE8;ne. Pour identifier les processus cellulaires cibl&#xE9;es par les effecteurs bact&#xE9;riens, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une strat&#xE9;gie simple qui utilise un tableau de souches de levure de suppression &#xE9;quip&#xE9;s en un seul plaque de 96 puits. Le tableau est unique en ce qu&#x26;#39;elle a &#xE9;t&#xE9; optimis&#xE9; de calcul de telle sorte que, malgr&#xE9; le petit nombre de souches de deletion, il couvre la majorit&#xE9; des g&#xE8;nes dans la levure interaction avec le r&#xE9;seau l&#xE9;talit&#xE9; synth&#xE9;tique. Les souches de suppression de la matrice sont cribl&#xE9;s pour une hypersensibilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;expression d&#x26;#39;un effecteur d&#x26;#39;int&#xE9;r&#xEA;t bact&#xE9;rienne. Les souches de deletion hypersensibles sont ensuite analys&#xE9;es pour leurs synth&#xE9;tiques interactions l&#xE9;tales pour identifier des cibles potentielles de l&#x26;#39;effecteur bact&#xE9;rien. Nous d&#xE9;crivons l&#x26;#39;identification, en utilisant cette approche, d&#x26;#39;un processus cellulaire cibl&#xE9; par le XopE2 Xanthomonas campestris effecteur de type III. Fait int&#xE9;ressant, nous d&#xE9;couvrons que XopE2 affecte la paroi cellulaire de la levure et la r&#xE9;ponse de stress du r&#xE9;ticulum endoplasmique. Plus g&#xE9;n&#xE9;ralement, l&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;une seule plaque de 96 puits rend le processus de d&#xE9;pistage accessible &#xE0; tout laboratoire et facilite l&#x26;#39;analyse d&#x26;#39;un grand nombre d&#x26;#39;effecteurs bact&#xE9;riens dans un court laps de temps. Elle fournit donc une plate-forme prometteuse pour l&#x26;#39;&#xE9;tude des fonctions et des cibles cellulaires de effecteurs bact&#xE9;riens et des prot&#xE9;ines de virulence d&#x26;#39;autres.

Une simple &#xE0; base de levure strat&#xE9;gie pour identifier les processus cellulaires de l&#x26;#39;h&#xF4;te cibl&#xE9; par bact&#xE9;riennes prot&#xE9;ines effectrices

Bakterielle Effektor Proteine, die in der Wirtszelle &uuml;ber die Typ-III-Sekretionssystem geliefert werden, spielen eine Schl&uuml;sselrolle in der Pathogenit&auml;t von Gram-negativen Bakterien durch Modulation der verschiedenen Host zellul&auml;re Prozesse zum Vorteil des Erregers. Ermittlung der zellul&auml;re Prozesse gezielt durch bakterielle Effektoren, entwickelten wir eine einfache Strategie, die ein Array von L&ouml;schung Hefest&auml;mme passte in einer einzigen 96-Well-Platte verwendet. Das Array ist einzigartig, da es rechnerisch optimiert wurde, so dass trotz der geringen Zahl der L&ouml;schung-St&auml;mme, die Mehrzahl der Gene in der Hefe-synthetische t&ouml;dliche Interaktion-Netzwerk deckt. Die L&ouml;schung-St&auml;mme im Array werden f&uuml;r &Uuml;berempfindlichkeit auf den Ausdruck einer bakteriellen Effektor von Interesse gezeigt. Die &uuml;berempfindlich L&ouml;schung-St&auml;mme werden dann f&uuml;r ihre synthetischen t&ouml;dlichen Wechselwirkungen identifizieren potentielle Ziele der bakteriellen Effektor analysiert. Wir beschreiben die Identifikation mit diesem Ansatz, eines zellularen Prozesses gezielt durch die Xanthomonas Campestris Typ III-Effektor XopE2. Interessant ist, entdecken wir, dass XopE2 die Hefe-Zellwand und die Stressantwort Endoplasmatisches Reticulum betrifft. Generell ist die Verwendung einer einzigen 96-Well-Platte der Screening-Verfahren f&uuml;r alle Laboratorien zug&auml;nglich macht und erleichtert die Analyse einer Vielzahl von bakteriellen Effektoren in kurzer Zeit. Es bietet daher eine vielversprechende Plattform f&uuml;r das Studium der Funktionen und zellulare Ziele bakterielle Effektoren und andere Virulenz-Proteine.

Eine einfache Hefe-basierte Strategie Host zellul&auml;re Prozesse gezielt durch bakterielle Effektor Proteine zu identifizieren.

Proteine effettrici batteriche, che sono trasportate nella cellula ospite attraverso il tipo sistema di secrezione di III, un ruolo chiave nella patogenicit&agrave; di batteri Gram-negativi modulando vari processi cellulari host a vantaggio dell&#39;agente patogeno. Per identificare i processi cellulari mirati da effettori batteriche, abbiamo sviluppato una strategia semplice che utilizza una matrice di ceppi di lievito eliminazione montato in una singola piastra 96 pozzetti. La matrice &egrave; unica in quanto &egrave; stato ottimizzato informaticamente tale che nonostante l&#39;esiguo numero di ceppi di eliminazione, copre la maggior parte dei geni della rete di interazione letale sintetica lievito. I ceppi di eliminazione nella matrice sono proiettati per ipersensibilit&agrave; all&#39;espressione di un effector batteriche di interesse. I ceppi di eliminazione ipersensibili vengono poi analizzati per loro interazioni letale sintetiche identificare potenziali bersagli del effector batterica. Descriviamo l&#39;identificazione, utilizzando questo approccio, di un processo cellulare bersaglio il Xanthomonas campestris tipo effettrici III XopE2. &Egrave; interessante notare che, scopriamo che XopE2 colpisce la parete delle cellule di lievito e la risposta allo stress del reticolo endoplasmatico. Pi&ugrave; in generale, l&#39;uso di una singola piastra 96 pozzetti rende accessibile a qualsiasi laboratorio il processo di screening e facilita l&#39;analisi di un gran numero di effettori batteriche in un breve periodo di tempo. Quindi fornisce una piattaforma promettente per studiare le funzioni e i bersagli cellulari effettori batteriche e altre proteine di virulenza.

Una semplice strategia basata su lievito per identificare i processi cellulari host bersagliati di proteine effettrici batterica.

III&#x578B;&#x5206;&#x6CCC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x9001;&#x9054;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x5229;&#x76CA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x7A2E;&#x3005;&#x306E;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9670;&#x6027;&#x83CC;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x304C;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;96&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x5D4C;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x6B20;&#x5931;&#x682A;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x914D;&#x5217;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x6B20;&#x5931;&#x682A;&#x306E;&#x6570;&#x304C;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x5408;&#x6210;&#x81F4;&#x6B7B;&#x4F5C;&#x7528;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x5185;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x3092;&#x30AB;&#x30D0;&#x30FC;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8A08;&#x7B97;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x70B9;&#x3067;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x6B20;&#x5931;&#x682A;&#x306F;&#x5229;&#x76CA;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x904E;&#x654F;&#x75C7;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x904E;&#x654F;&#x6027;&#x6B20;&#x5931;&#x682A;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x81F4;&#x6B7B;&#x6027;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5206;&#x6790;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x767D;&#x8449;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;III&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;XopE2&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x8B58;&#x5225;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;XopE2&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3002;&#x3088;&#x308A;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;96&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3082;&#x7814;&#x7A76;&#x5BA4;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x884C;&#x3044;&#x3001;&#x77ED;&#x6642;&#x9593;&#x3067;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x304C;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3084;&#x4ED6;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A19;&#x7684;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x9175;&#x6BCD;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x6226;&#x7565;

&#xC720;&#xD615; III &#xBD84; &#xBE44; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC30;&#xB2EC; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; effector &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xC758; &#xD61C;&#xD0DD;&#xC744; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBCC0;&#xC870; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF8;&#xB78C; &#xC74C;&#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; pathogenicity&#xC5D0;&#xC11C; &#xD575;&#xC2EC;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB2F4;&#xB2F9;&#xD560;. &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;, &#xB2E8;&#xC77C; 96-&#xC798; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC7A5;&#xCC29; &#xD558;&#xB294; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC0AD;&#xC81C; &#xC885;&#xC790;&#xC758; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xBC30;&#xC5F4;&#xC774;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC0AD;&#xC81C; &#xC885;&#xC790;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC22B;&#xC790;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xD569;&#xC131; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC5D0; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB300;&#xB2E4;&#xC218; &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xB3C4;&#xB85D; &#xACC4;&#xC0B0; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBC30;&#xC5F4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AD;&#xC81C; &#xBCC0;&#xC885; &#xC138;&#xADE0; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACFC;&#xBBFC; &#xC99D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xC601; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACFC;&#xBBFC; &#xC0AD;&#xC81C; &#xBCC0;&#xC885; &#xC138;&#xADE0; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xB300;&#xC0C1;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xD569;&#xC131; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB2E4;&#xC74C; &#xBD84;&#xC11D; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DD;&#xBCC4;, &#xC124;&#xBA85;, &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB294; Xanthomonas&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; campestris III &#xC774;&#xD399;&#xD130; Xope2&#xB97C; &#xC785;&#xB825; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Xope2&#xC5D0; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xB2E8;&#xC77C; 96-&#xC798; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xBA74; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xACFC;&#xC815; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218;&#xC640; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC758; &#xC9E7;&#xC740; &#xAE30;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xC138;&#xADE0; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC640; &#xAE30;&#xD0C0; &#xB3C5;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xB300;&#xC0C1; &#xACF5;&#xBD80;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xAE30;&#xBC18; &#xC804;&#xB7B5; &#xC138;&#xADE0; effector &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD558;.

Prote&#xED;nas efectoras bacterianas, que se entregan en la c&#xE9;lula hu&#xE9;sped a trav&#xE9;s del sistema de secreci&#xF3;n tipo III, desempe&#xF1;an un papel clave en la patogenicidad de bacterias gram-negativas por la modulaci&#xF3;n de los procesos de acogida diferentes celulares en beneficio del pat&#xF3;geno. Para identificar los procesos celulares espec&#xED;ficos por los efectores bacterianos, hemos desarrollado una estrategia simple que utiliza una gran variedad de cepas de levadura supresi&#xF3;n instalados en una sola placa de 96 pocillos. La matriz es &#xFA;nico en que se ha optimizado computacionalmente tal que a pesar del peque&#xF1;o n&#xFA;mero de cepas de deleci&#xF3;n, que cubre la mayor&#xED;a de los genes en la levadura, sint&#xE9;tico red de interacci&#xF3;n letal. Las cepas de deleci&#xF3;n de la matriz son examinados para detectar la hipersensibilidad a la expresi&#xF3;n de un efector bacteriana de inter&#xE9;s. Las cepas de eliminaci&#xF3;n de hipersensibilidad se analizan las interacciones de sus letales sint&#xE9;ticos para identificar blancos potenciales del efector bacteriana. Se describe la identificaci&#xF3;n, la utilizaci&#xF3;n de este enfoque, de un proceso celular dirigido por el Xanthomonas campestris XopE2 tipo III efector. Curiosamente, descubrimos que XopE2 afecta a la pared celular de la levadura y la respuesta de estr&#xE9;s del ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico. M&#xE1;s generalmente, el uso de una sola placa de 96 pocillos hace que el proceso de selecci&#xF3;n al alcance de cualquier laboratorio y facilita el an&#xE1;lisis de un gran n&#xFA;mero de efectores bacterianas en un corto per&#xED;odo de tiempo. Por lo tanto, proporciona una plataforma prometedora para el estudio de las funciones y objetivos celulares de efectores bacterianos y otras prote&#xED;nas de virulencia.

Dor Salomon

Department of Plant Sciences

Tel Aviv University

Identification of Growth Inhibition Phenotypes Induced by Expression of Bacterial Type III Effectors in Yeast

Dor Salomon

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Tel Aviv University

Identification of Growth Inhibition Phenotypes Induced by Expression of Bacterial Type III Effectors in Yeast

Department of Plant Sciences