Micro-dissecção de cérebro de um rato para RNA ou Extração de Proteína da região específica do cérebro

Resumo

Micro dissecção de cérebro de rato em várias regiões é extremamente importante para o estudo de diferentes doenças neurodegenerativas. Este vídeo demonstra dissecção de micro-regiões do cérebro de quatro principais incluem bulbo olfatório, córtex frontal, estriado e hipocampo em tecido fresco de cérebro de rato. Dicas úteis para remoção rápida de respectivas regiões para evitar a degradação de proteínas e RNA do tecido são dadas.

Resumo

Micro dissecção de cérebro de rato em várias regiões é extremamente importante para o estudo de diferentes doenças neurodegenerativas. Este vídeo demonstra dissecção de micro-regiões do cérebro de quatro principais incluem bulbo olfatório, córtex frontal, estriado e hipocampo em tecido fresco de cérebro de rato. Dicas úteis para remoção rápida de respectivas regiões para evitar a degradação de proteínas e RNA do tecido são dadas.

Protocolo

Passo 1

Sacrificar o rato de acordo com protocolos estabelecidos. Remover o cérebro do crânio e lave-o em gelo frio DEPC tratados água Milli Q para remover qualquer vestígio de sangue de superfície.

Passo 2

Coloque no prato de metal frio. Cortar o cérebro bi meio em hemisfério direito e esquerdo.

Figura 1. As posições de corte do ponto de vista medial do hemisfério rato

Passo 3

Recolher o bulbo olfatório logo após o primeiro corte. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C.

Figura 2. Dissecção bulbo olfatório

Passo 4

Recolher o córtex frontal direito, após o segundo corte, usando uma lâmina e um Dumont No. 5 fórceps. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C.

Figura 3. Dissecção córtex frontal

Passo 5

Recolher o striatum (núcleo caudado) logo após o terceiro corte com a ajuda de duas pinças de Dumont No.5. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C.

Figura 4. Estriado dissecção (núcleo caudado)

Passo 6

Para coletar o hipocampo, coloque o lado ventral do cérebro para cima e depois remover mesencéfalo para expor o hipocampo. Dissecar o hipocampo do córtex utilizando duas pinças Dumont No.5. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C.

Figura 5. Dissecção hipocampo

Discussão

Diferentes regiões do cérebro associada com diferentes doenças neurodegenerativas. Por exemplo, córtex frontal e striatum se relacionam com a doença de Parkinson, enquanto o hipocampo se relaciona com a doença de Alzheimer. Micro-dissecção precisa do cérebro que nos permite detectar as alterações mRNA e proteína na região de doentes com mais precisão.

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Microscope	Olympus Corporation
Dissection tools			Metal plate, forceps, blade, etc. Individually wrapped with aluminum foil and heated at 180oC for eight hours to eliminate RNase. Made ice cold before use.