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Resumo

Here we describe a high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) assay to quantify the immunosuppressant tacrolimus in dried blood spots using a simple manual protein precipitation step and online column extraction.

Resumo

O tacrolimus inibidor da calcineurina é a pedra angular da maioria dos protocolos de tratamento imunossupressores após transplante de órgão sólido nos Estados Unidos. Tacrolimus é uma droga estreito índice terapêutico e, como tal, exige monitorização terapêutica e ajuste de dose com base em toda a sua concentrações mínimas no sangue. Para facilitar casa droga terapêutica e monitoramento da adesão, a coleta de gotas de sangue seco é um conceito atraente. Depois de uma picada no dedo, o paciente recebe uma gota de sangue em papel de filtro em casa. Depois de o sangue é seca, que é enviado para o laboratório de análises, onde o tacrolimus é quantificada usando espectrometria de massa líquida de alta eficiência A cromatografia-tandem (HPLC-MS / MS), em combinação com um manual simples passo de precipitação de proteína e de extracção em linha da coluna.

Para a análise de tacrolimus, um disco de 6 mm é perfurado a partir do centro do local saturada de sangue. A mancha de sangue é homogeneizada utilizando um misturador de uma balaND, em seguida, as proteínas são precipitadas com metanol / 0,2 M ZnSO4 contendo o padrão interno D 2, 13 C-tacrolimus. Após agitação em vórtice e centrifugação, 100 ul de sobrenadante foi injectada numa coluna de extracção em linha e lavou-se com 5 mL / min de ácido fórmico a 0,1 / acetonitrilo (7: 3, v: v) durante 1 min. Daqui por diante, a válvula de comutação é activada e os analitos são back-lavada na coluna analítica (e separados utilizando um gradiente de ácido fórmico / acetonitrilo a 0,1%). O tacrolimus é quantificada no modo positivo de multi reacção (MRM) usando um espectrómetro de massa em tandem.

O ensaio é linear de 1 a 50 ng / ml. A variabilidade inter-ensaio (3,6% -6,1%) e precisão (91,7% -101,6%), avaliada durante 20 dias satisfazer os critérios de aceitação. A recuperação média de extração é de 95,5%. Não há carry-over, interferências de matriz e efeitos de matriz relevante. O tacrolimus é estável em manchas de sangue seco em temperatura ambiente e a +4 ° C durante 1 semana. Amostras extraídas doamostrador automático são estáveis ​​a 4 ° C durante pelo menos 72 h.

Introdução

O tacrolimus é um potente immonosuppressant 1-7 que tem uma estrutura de macrólido 8 (Figura 1). Devido a cis - isomerismo trans das ligações NC que forma dois rotâmeros em solução 9 que podem ser separados por cromatografia líquida de alta eficiência de fase inversa (HPLC) Tacrolimus é lipofilico e solúvel em álcoois (metanol: 653 g / L, etanol: 355 g / L), hidrocarbonetos halogenados (clorofórmio: 573 g / L) e éter. É moderadamente solúvel em hidrocarbonetos alifáticos (hexano: 0,1 g / L e de água (pH 3:. 0,0047 g / L) 9 A molécula não contém quaisquer cromóforo e o seu máximo de absorção de UV de 192 nm tacrolimus actua através da inibição da calcineurina. . O seu mecanismo de acção foi revisto em referências 10,11. Ele é actualmente utilizado em mais de 80% dos pacientes de transplante de órgãos sólidos nos Estados Unidos 12.

O índice terapêutico de tacrolimus é considerád para ser estreita 13. Além disso, a correlação entre doses de tacrolimus e as concentrações sanguíneas é pobre e farmacocinética é variável 14,15. A monitorização terapêutica para orientar a dosagem tacrolimus em doentes transplantados é a prática clínica, pois, em geral 16-20. O objectivo é manter as concentrações sanguíneas de tacrolimus dentro de uma gama terapêutica pré-definido. Concentrações sanguíneas Tacrolimus abaixo da gama terapêutica pode resultar numa actividade aumentada de reacções alo-imune crónica ou aguda, enquanto que as concentrações acima da janela terapêutica aumentar o risco de sobre-imunossupressão, cancro e toxicidade, como nefrotoxicidade, neurotoxicidade, hipertensão, e diabetes. A alta variabilidade intra-individual de farmacocinética de tacrolimus pode ser prejudicial tanto para órgãos transplantados e sobrevida do paciente 21,22. Enquanto a variabilidade inter-individual na farmacocinética do tacrolimus é causada principalmente por polimorfismos CYP3A5, razões para intra-individualvariabilidade incluem, mas não estão limitados a, fármaco-fármaco, com a doença da droga e droga-alimento interacções 14,15. Também a falta de adesão ao regime de imunossupressão terapêutica medicamentosa é um fator contribuinte e uma das principais razões para a perda do enxerto 23,24.

Estas considerações sugerem que casa freqüente de drogas terapêuticas e monitoramento da adesão de concentrações de tacrolimus no sangue total pode ser benéfica para garantir que os pacientes têm uma exposição de tacrolímus dentro da janela terapêutica desejada em todos os momentos. No entanto, a logística e os custos de monitorização mais frequente da terapêutica medicamentosa, pois é atual prática clínica 15 é proibitivo. Uma das razões é que o paciente tem de ver uma flebotomia para ter a amostra de sangue venoso necessária desenhada. Manchas de sangue seco surgiram recentemente como um conceito atraente 25-28. Depois de um dedo simples furar o paciente coleta uma gota de sangue em um cartão de papel de filtro especial e após o ponto de sangue tem dRied, pode ser enviado para um laboratório central para análise de tacrolimus e qualquer outro imunossupressor que o paciente possa estar a tomar actualmente. Isto tornou-se possível devido ao desenvolvimento de ensaios de LC-MS / MS altamente sensíveis e específicos para a quantificação de tacrolimus e outros imunossupressores no sangue em volumes muito pequenos, tais como manchas de sangue seco (tipicamente 20 ul de sangue 25,29-43). Outra vantagem é que os baixos estratégias de cobrança minimamente invasivas, amostra de volume, tais como manchas de sangue seco facilitar muito monitorização terapêutica e estudos farmacocinéticos em crianças pequenas 28.

Tacrolimus geralmente é medido em toda EDTA sangue venoso 15. As razões são que o tacrolimus é extensamente distribuída a células do sangue e que os estudos clínicos relataram melhor correlação entre as concentrações de tacrolimus calha no sangue do que em plasma com eventos clínicos 15,18. Em comparação, a análise de TAcrolimus em manchas de sangue seco é baseado no sangue capilar que é misturado com a matriz de papel de filtro. Isso apresenta desafios em termos de solubilização de tacrolimus e potenciais interferências com a análise LC-MS / MS. Aqui apresenta-se um ensaio estabelecido e validado com base na homogeneização da mancha de sangue seco usando um misturador de bala em combinação com um alto fluxo de amostra de coluna em linha limpar procedimento e análise por LC-MS / MS. Até hoje, este ensaio tem sido usado com sucesso para a quantificação de mais de cinco mil amostras de sangue para monitorização de tacrolimus seca aderência em ensaios clínicos.

Protocolo

Amostras de sangue identificadas-de de indivíduos saudáveis ​​eram do Hospital da Universidade de Colorado (Aurora, Colorado). O uso de amostras de banco de sangue identificou-de para estudos de validação, bem como para a preparação dos calibradores e amostras de controle de qualidade foi considerada "isentos" pelo Conselho Colorado Multi-institucional Análises (COMIRB, Aurora, Colorado).

1. Preparação de Referências e Soluções

  1. Tacrolimus compra e do padrão interno D 2, 13 C-tacrolimus a partir dos fornecedores listados na Lista de Materiais.
    1. Preparar soluções de reserva em metanol puro a uma concentração de 1 mg / ml para o tacrolimus e uma concentração de 10 ug / ml de D 2, 13 C-tacrolimus. Faça soluções de estoque de materiais de referência com base em três ponderações independentes. Soluções de banco de alíquotas e armazenar a -70 ° C ou abaixo.
  2. Solução para precipitar proteínas Preparee extrair o tacrolimus usando metanol / 0,2 M ZnSO 4 em água (7: 3, v: v). Esta solução também contém o padrão interno D 2, 13 C-tacrolimus, a uma concentração de 2,5 ng / ml e foi utilizado para a extracção de todas as amostras, excepto para a extracção de amostras em branco (por favor ver 1.3.3).
    1. Prepara-se esta solução a precipitação da proteína de fresco em cada dia de extracção e definir a expiração da solução a 12 h.
  3. Preparação da curva de calibração e de controlo de qualidade (QC) amostras
    1. Preparar soluções estoque de tacrolimus através da realização de diluições apropriadas da solução utilizando metanol puro.
    2. Para preparar os calibradores e as amostras de controlo de qualidade, pico de 20 ul de solução de reserva apropriadamente diluídas em EDTA sangue total, incuba-se a 37 ° C sob agitação suave num banho de água para permitir uma distribuição homogénea do tacrolimus para os componentes celulares do sangue durante 20 min e alíquota em 1,5 ml de pólipotubos ropylene com fundo cônico e snap-on tampas. Assegure-se que o volume relativo de solvente orgânico não exceda 5%.
    3. Mancha 50 ul de sangue inteiro cravado no meio de cada círculo sobre os cartões de filtro, utilizando uma pipeta.
    4. Secam-se as manchas de sangue em placas de filtro, à TA durante 3 h.
    5. Preparar padrões de calibração de tacrolimus no sangue humano total com EDTA, em concentrações de tacrolimus de 1, 2,5, 5, 10, 25, e 50 ng / ml. Prepare uma amostra em branco para a extração de como os padrões de calibração com a solução de precipitação de proteínas contendo o padrão interno D 2, 13 C-tacrolimus ("amostra zero").
    6. Preparar amostras QC em sangue humano total com EDTA, em concentrações de 0, 2, 4, 20, 40 ng / ml. Prepare uma amostra em branco. Em contraste com as amostras de CQ que são extraídos com precipitação contendo o padrão interno D 2, 13 C-tacrolimus, extrair esta amostra em branco com uma solução de precipitação de proteínas que faznão contêm o padrão D interno 2, 13 C-tacrolimus ("amostra em branco").
  4. Recolha de amostras clínicas
    1. Recolha manchas de sangue seco como descrito no 43,44.

2. Extração de Tacrolimus secas amostras de sangue

  1. Inspecione visualmente a mancha de sangue seco para garantir a qualidade da amostra aceitável eo volume 45.
  2. Soco centro da mancha de sangue no cartão de filtro com uma perfuração de 6 mm.
    Nota: A qualidade dos perfuradores pode ser monitorizada por pesagem. Um disco de filtro saturado perfurado pesa em média 5,02 mg ± 0,09 mg (intervalo: 4.83- 5,14 mg, n = 12).
  3. Coloque os discos em tubos de 1,5 ml de polipropileno com cônico fundo e tampas snap-on.
  4. Adicionar 20-30 balas para cada tubo.
  5. Adicionar 500 ul da solução de precipitação de proteína (metanol: 0,2 M ZnSO4, 7: 3, v: v, com 2,5 ng / ml como padrão interno) para cada tubo. Para o extração de amostras em branco, usar a solução de precipitação de proteínas sem a referência interna.
  6. Homogeneizar os discos no liquidificador bala por 1 min (velocidade máxima, a configuração "10").
  7. Agitar à TA amostras em vórtex multi-tubos (velocidade máxima, a configuração "10") durante 10 min.
  8. Centrifugar as amostras a 16.000 xg e 4 ° C durante 10 min.
  9. Transfira os sobrenadantes para frascos de HPLC de vidro equipado com uma inserção de 300 ul. Utilizar vedações teflon pré-fenda.
    Nota: Extraiu-se as amostras podem ser armazenadas a -20 ° C ou abaixo até a análise por LC-MS / MS.

3. LC-MS / MS Análise

  1. Carga de 100 ul do sobrenadante da amostra extraída para a coluna de extracção de cartucho C8 e lava-se com uma proporção de 7: 3 de ácido fórmico a 0,1% em água: acetonitrilo a um caudal de 5 ml / min durante 1 min. As ligações da válvula de comutação são apresentados na Figura 2 e o gradiente executado pela bomba de extracção na Tabela 1 .
  2. A partir de agora, ativar a válvula de comutação resultando em back-resplendor dos analitos da pré-coluna para a coluna analítica.
  3. Regule o termostato de coluna a 65 ° C.
  4. Eluir os analitos a partir da coluna analítica utilizando as taxas de fluxo e o gradiente mostrados na Tabela 1.
  5. Ligue a coluna analítica a um espectrômetro de massa em tandem através da fonte de ionização electrospray turbo. Ajustar os parâmetros-chave do espectrômetro de massa de acordo com a Tabela 2.
  6. Detectar iões positivos ([M + Na] +) no modo de reacção múltipla (MRM). Use as seguintes transições íon para quantificação: tacrolimus: m / z (massa / carga) = 826,6 → 616,2 e D 2, 13 C-tacrolimus: m / z = 829,6 → 619,2.
    Nota: O tempo total de execução é de 4,6 min.

4. Quantificação

  1. Para cada prazo, gerar uma curva de calibração com base nos calibradores preparados em 1.3.5 eincluir em cada corrida analítica.
    1. Gerar uma curva de calibração locando as concentrações nominais contra o factor de resposta de analito (Peak Área [Analyte] / Área de Pico [padrão interno]) usando o software espectrômetro de massa.
    2. Encaixe os calibradores usando um ajuste quadrático em combinação com 1 / X ponderação.
  2. Para tacrolimus quantidade nas manchas de sangue seco integrar o tacrolimus e picos do padrão interno nos cromatogramas MRM extraídos. Calcular o factor de resposta para o tacrolimus (área do pico [Analito] / área de pico [padrão interno]) e comparar com a curva de calibração utilizando o software de espectrometria de massa.

Procedimentos de validação 5.

  1. Lower limite de detecção (LLOD) e limite inferior de quantificação (LIQ).
    1. Considere o menor concentração de tacrolimus com uma relação de pico-para-ruído de 4: 1, como o limite inferior de detecção (LLOD). Definir o limite inferior de quantificação (LIQ) como oconcentração mais baixa da curva de calibração com uma precisão igual ou melhor do que ± 20% de desvio a partir da concentração nominal e precisão igual ou melhor do que 20% (coeficiente de variação).
  2. Precisões intra e inter-dia e precisões.
    1. Teste a exatidão e precisão em quatro níveis de concentração de 2 ng / ml (QC1), 4 ng / ml (QC2), 20 ng / ml (QC3) e 40 ng / ml (QC4).
    2. Preparar as amostras de QC em cada dia de validação em sangue humano total com EDTA, em placas de filtro seco, extrair e analisar tal como descrito acima.
    3. Determinar exatidão e precisão intra-dia com 6 amostras por nível de concentração QC.
    4. Avaliar exatidão e precisão inter-dia ao longo de 20 dias. Meça cada nível QC com 4 amostras por dia.
    5. Analise duas curvas de calibração, juntamente com as amostras QC em cada dia.
    6. Calcule precisão intra-dia como a% da concentração nominal (seis amostras por nível de concentração, por favor, consulte o item 5.2.2). CalcUlate precisão como o coeficiente de variação (CV%).
    7. Considere exactidão intra-diária aceitável se cai na aceitação limita 85% a 115% da concentração nominal. Considere precisão intra-dia aceitável se é igual ou melhor do que um CV (coeficiente de variação) de 15%.
    8. Calcule exatidão e precisão inter-dia como a média para cada nível de concentração QC analisados ​​ao longo dos 20 dias de validação.
    9. Considere precisão média inter-dia aceitável se cai na aceitação limita 85% a 115% da concentração nominal. Considere precisão inter-dia aceitável se é igual ou melhor do que um CV (coeficiente de variação) de 15%.
  3. Exclusão de interferências da matriz.
    1. Para a exclusão das interferências que podem ser provocadas pelos sinais de matriz, analisar manchas de sangue seco em branco (8 indivíduos diferentes, de preferência 4 homens e 4 mulheres).
    2. Inspecione visualmente cromatogramas iónicos. Se picos dentro do tempo de retençãojanela de tacrolimus são detectados, integrar e comparar as suas áreas sob a curva com os de picos de tacrolimus em amostras em branco enriquecida com tacrolimus no LLOQ. A área de picos nas amostras em branco não devem exceder 15% das pessoas de tacrolimus no LLOQ.
  4. Ion supressão / aprimoramento de íons.
    1. Use um protocolo de infusão pós-coluna, conforme descrito 45 para avaliar a possibilidade de interferências de realce ion supressão / ion causada por componentes da matriz de co-eluição.
    2. Infundir o tacrolimus numa concentração de 10 ug / ml dissolvido em ácido fórmico a 0,1%: metanol (30:70, v / v) de pós-coluna a uma taxa de 10 ul / min.
      1. Conectar uma bomba de seringa através de peça em T entre a coluna analítica e a fonte de electropulverização do espectrómetro de massa.
      2. Monitorizar a intensidade do sinal de MS / MS das transições MRM de tacrolimus e do seu padrão interno (m / z = 826,6 → 616,2 e m / z = 829,6 → 619,2) após a injecção de extracAs amostras em branco ted (n = 8 amostras de indivíduos diferentes).
        Nota: Na ausência de melhoria de supressão de iões / o ião de sinal causada por infusão contínua dos analitos não deve ser afectado por injecção da matriz em branco, enquanto a supressão de iões provoca uma queda do sinal e um pico de iões de reforço.
  5. Transferir.
    1. Avaliar o potencial de carry-over Ao analisar amostras extraídas em branco após os mais altos calibradores (50 ng / ml, n = 6).
    2. Inspecione visualmente cromatogramas iónicos. Se forem detectados picos dentro da janela de tempo de retenção do tacrolimus, integrar e comparar as suas áreas sob a curva com os picos de tacrolimus em amostras em branco enriquecida com tacrolimus no LLOQ. A área de picos nas amostras em branco não devem exceder 15% das pessoas de tacrolimus no LLOQ.
  6. Recuperações de extração.
    1. Determinar recuperações por comparação dos sinais dos analitos após extracção de QC sampios em todos os quatro níveis de concentração (n = 6 por concentração) com os de branco manchas de sangue seco enriquecida com os correspondentes montantes das tacrolimus após a extração.
    2. Prepare quatro conjuntos de CQ (níveis de concentração: 2, 4, 20, 40 ng / mL).
    3. Preparar outro 4 conjuntos de amostras de ensaio correspondente "recuperação" através da identificação de 50 ul de sangue total com EDTA em branco para os cartões de papel de filtro e secagem durante 2 horas.
    4. A partir de agora, tanto para o QC e em branco "amostras de teste de recuperação", cortar toda a mancha de sangue no cartão de filtro com uma tesoura e coloque os discos resultantes em um tubo cônico de polipropileno com fundo e snap-on tampa.
    5. Extraia todas as amostras.
    6. Transfira os sobrenadantes (400 uL) para frascos de vidro de HPLC.
    7. Adicionar solução estoque tacrolimus aos "corpos de prova de recuperação extraído em branco" para atingir concentrações de 2, 4, 20 e 40 ng / ml (4 ul de 200, 400, 2.000, 4.000 ng ml sol / estoque tacrolimusdoras de 400 ul de sobrenadante).
    8. Após análise por LC-MS / MS, comparar os sinais em ambas as amostras de QC e amostras de teste "recuperação" de a concentração correspondente (% de recuperação = amostras de sinal cravado antes das amostras de extracção / sinal cravado após extracção x 100).
  7. Diluição integridade.
    1. Estabelecer integridade diluição com amostras fortificadas com os analitos em 500, 250 e 100 ng / ml.
    2. Após a extração, diluir as amostras usando solução de precipitação de proteínas (1:10, n = 3 por nível de concentração).
    3. Calcular desvios em relação às concentrações nominais. Considere resultados que caem dentro de 85% -115% do valor nominal aceitável.
  8. Estabilidades.
    1. Investigar estabilidades, utilizando as amostras de CQ em todos os quatro níveis de concentração (n = 4 para cada concentração) analisada em diferentes pontos de tempo e sob as diferentes condições de armazenagem.
    2. Compare os resultados após a armazenagem, com os valores nominais. Considere resultados que caem dentro de 85% -115% do valor nominal aceitável.
    3. Estabelecer estabilidade da amostra durante 1 semana à temperatura ambiente, 1 semana a 4 ° C, 1 mês a -20 ° C e 1 mês à temperatura de -80 ° C.
    4. Teste de estabilidade congelamento-descongelamento durante três ciclos (-20 ° C). Teste amostra extraída e a estabilidade do amostrador automático por colocar as amostras no amostrador automático com termostato ajustado para 4 ° C. Injectar as amostras depois de 72 horas.

Resultados

Cromatogramas iónicos representativos de uma amostra em branco, uma amostra enriquecida para o limite inferior de quantificação e uma amostra do paciente são apresentados na Figura 3.

As curvas de calibração

O limite inferior de detecção foi de 0,5 ng / ml e o limite inferior de quantificação foi de 1,0 ng / ml. Cinquenta ng / ml foi escolhido como o mais alto calibrador como concentrações mais elevadas não são susc...

Discussão

Embora, como acima mencionado, o conceito de fármaco terapêutico e monitorização aderência do tacrolimus com base em manchas de sangue seco é atraente, existem desafios analíticos que ultrapassam aquelas tipicamente associados com a análise por LC-MS / MS do tacrolimus em EDTA venoso amostras de sangue inteiro. Estes incluem, mas não estão limitados a, o facto de a matriz capilar é sangue completo embebido no material de fibras de algodão do material de cartão de filtro usado aqui e o baixo volume de sangue...

Divulgações

The authors have nothing to disclose.

Agradecimentos

This work was supported by the United States Federal Drug Administration (FDA) contract HHSF223201310224C and the United States National Institutes of Health/FDA grant 1U01FD004573-01.

Materiais

NameCompanyCatalog NumberComments
TacrolimusU.S. Pharmacopeial Convention1642802
D2,13C-TacrolimusToronto Research Chemicals Inc.F370002
Red blood cellsUniversity of Colorado HospitalW20091305500 V
PlasmaUniversity of Colorado HospitalW2017130556300Q
Acetone CHROMASOLV, HPLC, ≥99,9%Sigma-Aldrich439126-4 L
Acetonitrile Optima LC/MS, UHPLC-UVThermo Fisher ScientificA955-4
Isopropanol 99.9%, HPLCFisher ScientificBP2632-4
Methanol Optima LC/MSThermo Fisher ScientificA452-4
Water Optima LC/MS, UHPLC-UVThermo Fisher ScientificW6-4
Formic acidThermo Fisher ScientificA118P-500
Phosphate-buffered saline (PBS)Sigma-AldrichD8537
Zinc sulfateThermo Fisher ScientificZ68-500
0.5 – 10 µl pipet, VoluMate LIQUISYSTEMSMettler Toledo17008649
1.5 ml Eppendorf tubeThermo Fisher Scientific02-682-550
10 – 100 µl pipet, VoluMate LIQUISYSTEMSMettler Toledo17008651
10 μl pipet tips with filter, sterileNeptuneBT 10XLS3
100 – 1,000 µl pipet, VoluMate LIQUISYSTEMSMettler Toledo17008653
100 μl pipet tips with filter, sterileNeptuneBT 100
1,000 μl pipet tips with filter, sterileMultimax2940
2 – 20 µl pipet, VoluMate LIQUISYSTEMSMettler Toledo17008650
2 ml Eppendorf tubeThermo Fisher Scientific02-681-258
20 – 200 µl pipet, VoluMate LIQUISYSTEMSMettler Toledo17008652
20 μl pipet tips with filter, sterileGeneMateP-1237-20
200 μl pipet tips with filterMultimax2938T
200 μl pipet tips with filter, sterileMultimax2936J
50 ml Falcon tubeBD Falcon352070
300 μl inserts for HPLC vialsPhenomenexARO-9973-13
Balance PR2002Mettler Toledo1117050723
Balances AX205 Delta RangeMettler Toledo1119343379
Bullet Blender HomogenizerNext AdvanceBBX24
Centrifuge Biofuge FrescoHeraeus290395
Disposable WipesPDIQ55172
Glass v ials, 4 mlThermo Fisher Scientific14-955-334
Glass vials, 20 mlThermo Fisher ScientificB7800-20
Gloves, nitrileTitan Brand Gloves44-100S
HPLC vials, 9 mm, 2 ml, clearPhenomenexARO- 9921-13
Lids for HPLC vialsPhenomenexARO- 8952-13-B
Needle, 18 G 1.5Precision Glide305196
Rack for Eppendorf tubesThermo Fisher Scientific03-448-11
Rack for HPLC VialsThermo Fisher Scientific05-541-29
Steel beads 0.9 – 2 mmNext AdvanceSSB14B
Storage boxes for freezers / refrigeratorsThermo Fisher Scientific03-395-464
Standard multi-tube vortexerVWR Scientific Products658816-115
Whatman Paper, 903 Protein Saver US 100/PKGE Whatman 2016-05
AutosamplerCTC PAL PAL.HTCABIx1
Binary pump, Agilent 1260 InfinityAgilent Technologies1260 G1312B
Binary pump, Agilent 1290 InfinityAgilent Technologies1290 G4220A
Micro vacuum degasser, Agilent 1260Agilent Technologies1260 G13798
Column oven,  Agilent 1290 with 2 position Agilent Technologies1290 G1216C
Thermostated column compartment with integrated 6 port switching valveAgilent Technologies1290 G1316C
HPLC pre-column cartridge, Zorbax XDB C8 (5 µm particle size), 4.6 · 12.5 mmPhenomenex820950-926
HPLC analytical column, Zorbax Eclipse-XDB-C8 (5 µm particle size), 4.6 · 150 mmPhenomenex993967-906
Tandem Mass Spectrometer
API5000 MS/MS with TurboIonspray sourceAB Sciex4364257
Mass spectrometry softwareAB SciexAnalyst 1.5.1

Referências

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