A remoção do Trace Elements por Óxido de Cupric nanopartículas de urânio<em&gt; In Situ</em&gt; Recuperação sangro água e seu efeito na viabilidade celular

Resumo

Production bleed water (PBW) was treated with cupric oxide nanoparticles (CuO-NPs) and cellular toxicity was assessed in cultured human cells. The goal of this protocol was to integrate the native environmental sample into a cell culture format assessing the changes in toxicity due to CuO-NP treatment.

Resumo

Na recuperação in situ (ISR) é o método mais utilizado para a extracção de urânio nos Estados Unidos. Durante ISR, o urânio é lixiviado a partir de um corpo de minério e extraída através de troca iônica. A produção resultante de purga água (PBW) contém contaminantes, tais como arsénio e outros metais pesados. Amostras de PBW de uma instalação de urânio ISR ativo foram tratados com nanopartículas de óxido cúprico (CuO-PN). Tratamento CuO-NP de PBW reduzida contaminantes prioritários, incluindo arsênio, selênio, urânio e vanádio. Ensaio não tratado e CuO-NP PBW tratado foi usado como o componente líquido de os meios de crescimento da célula e alterações na viabilidade foram determinados por o MTT (brometo de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazólio) no rim embrionário humano (HEK 293) e carcinoma hepatocelular humano (Hep G2), células. Tratamento CuO-NP foi associada com melhora HEK e HEP viabilidade celular. As limitações deste método incluem diluição do PBW por componentes do meio de crescimento e durante osmolajuste lidade, bem como o ajuste do pH necessário. Este método é limitado no seu contexto mais amplo devido aos efeitos de diluição e mudanças no pH da PBW que é tradicionalmente acídico no entanto ligeiramente; este método poderia ter um uso mais amplo avaliando tratamento CuO-NP em águas mais neutros.

Introdução

Cerca de 20% da rede elétrica dos EUA é fornecida por energia nuclear e, em parte baseada em incentivos nacionais para aumentar a independência energética, dos EUA deverá capacidade nuclear para aumentar ^1. Crescimento mundial da energia nuclear também é esperado que continue, com grande parte do crescimento que ocorre fora os EUA ^2. A partir de 2013, 83% do urânio US foi importado, mas 952.544 toneladas métricas de reservas existem em os EUA ^3,4. Em 2013 houve 7 novas aplicações de instalações e aplicações de 14 de reiniciar / expansão entre Wyoming, Novo México, e Nebraska ^5. Em os EUA, o urânio é extraído através predominantemente na recuperação in situ (ISR) processa ^6. ISR provoca menos perturbações terra e evita a criação de decantação pilhas que podem liberar contaminantes ambientais ^7. ISR utiliza soluções de oxidantes à base de água para lixiviar de urânio a partir do corpo de minério subterrânea, após o que o urânio é extraído a partir do percolado atravésum processo de permuta de iões ^8. Para manter um balanço hídrico negativo no corpo de minério, uma parte do chorume, chamada produção sangrar água (PBW), é sangrado fora. Uma porção do PBW é descontaminada por osmose reversa (RO) e re-introduzido no processo de mineração, mas também poderiam ter PBW usos industriais ou agrícolas benéficas, se os contaminantes tóxicos pode ser reduzida para níveis aceitáveis ​​determinados por agências reguladoras e de estado para a superfície águas subterrâneas ^9. Atualmente, a maioria das instalações ISR urânio usar RO para remover contaminantes de PBW. No entanto, o processamento RO consome muita energia e produz salmoura resíduos tóxicos, o que requer disposição regulamentado.

Existem muitos métodos de descontaminação da água, incluindo adsorventes, membranas e troca iônica. Destes, adsorção é a mais utilizada, e os recentes desenvolvimentos na síntese de nanopartículas aprimorou as capacidades de descontaminação da água à base de adsorvente processa ^10. Oxi Cupricde nanopartículas (CuO-PN) não haviam sido estudados extensivamente sobre o urânio ISR PBW, mas em estudos recentes de remoção de contaminantes da água subterrânea, CuO-NPs foram encontrados para ter propriedades únicas, incluindo não requerendo etapas de tratamento de água (pré ou pós por exemplo, o ajuste de pH ou potencial redox) e um bom desempenho em diferentes composições de água (por exemplo, em diferentes valores de pH, concentrações de sal, ou iões concorrentes) ^11. Além disso, CuO-NPs são facilmente regenerados por lixiviação com hidróxido (NaOH) de sódio, após o que a regenerada CuO-PN pode ser reutilizado. Detalhes de CuO-NP vestígio de metal recursos de filtragem de águas naturais foram previamente publicados ^11-14.

Embora útil para o tratamento da água, as nanopartículas de óxido de metal pode ser tóxico para os organismos vivos, mas a extensão da toxicidade depende, em parte, das características e componentes de nanopartículas ^10,15,16. Portanto, é importante para estudar simultaneous remoção e nanopartículas toxicidades de contaminantes antes de aplicações de campo. O estudo actual, determinada a capacidade de CuO-NPs para remover contaminantes PBW prioritárias (incluindo arsênio, selênio, vanádio e urânio), e avaliou o efeito do tratamento CuO-NP em PBW citotoxicidade.

PBW foi recolhido a partir de uma instalação de urânio ISR activo e utilizado para determinar a eficácia do tratamento com NP-CuO na remoção de contaminantes de prioridade. PBW citotoxicidade antes e após o tratamento CuO-NP também foi avaliada. PBW é uma geológica complexa mistura (industrial / ambiental) e tanto o Instituto Nacional de Saúde Ambiental e Ciência (NIEHS) e da Agência de Substâncias Tóxicas e Registro de Doenças (ASTDR) estão colocando ênfase no estudo da toxicidade de misturas ambientais relevantes, incluindo as misturas como elas existem na natureza ou industriais configurações, assim como promover a testes in vitro para dar prioridade produtos químicos para mais testes in vivo^17-19. Estudos de baixa dosagem, mistura exposições crônicas são um desafio porque a exposição crônica a uma mistura de baixa dose não produzem efeitos óbvios, pelo menos não no curto espaço de tempo da maioria dos estudos de laboratório. Do mesmo modo, a maioria dos estudos in vitro misturas químicas expor as células a uma mistura feita em laboratório definido de duas ou mais metais ^20,21. Estes estudos fornecem informações de base, mas misturas simplificados não replicar as interações antagônicas e sinérgicos complexas que podem ocorrer em uma amostra ambiental natal, onde toda a gama de componentes da mistura estão presentes.

Os objetivos deste estudo foram analisar processos de remoção de contaminantes alternativos para PBW e avaliar o efeito de (CuO-NP) tratamento em PBW citotoxicidade utilizando células humanas cultivadas. Os resultados poderiam beneficiar a indústria de urânio através do desenvolvimento de métodos mais eficientes ou ecológicos para a remoção de contaminantes. Este estudo fornecea primeira evidência de que a redução de contaminantes prioritários em PBW por CuO-NPs reduz citotoxicidade em células de mamíferos ^22.

Protocolo

Todas as amostras foram coletadas no prédio de processamento de líquido de urânio de uma instalação ISR urânio em Wyoming.

1. Produção sangro Água (PBW)

1. Recolha dois tipos de amostras de água de uma instalação de urânio ISR: PBW e osmose (RO) água reverter. Recolhe PBW a partir de uma torneira de monitorização, após o processo de permuta iónica mas antes de descontaminação de osmose inversa. Coletar amostras RO após a PBW é descontaminada por meio de tratamento por osmose reversa.
   NOTA: lixiviant é transportado em dutos de vários campos de poços para a construção de processamento de líquido de urânio, onde é coletado em uma coluna e preparados para troca iônica. Aproximadamente 1-3% da lixiviante após a permuta de iões é removida do circuito e denominada água de exsudação de produção (PBW). PBW é reutilizada nos processos de mineração ou descontaminado / desmineralizada com filtração RO.
2. Coletar amostras de água em polietileno de alta densidade (HDPE) com espaço de cabeça zero, de acordoa procedimentos operacionais padrão para coleta de amostras e análise do Departamento de Qualidade Ambiental Wyoming (WYDEQ) ^23.
3. Medir a temperatura e pH no local e transporte de amostras em gelo para mantê-los frescos.
4. PBW armazenar a 4 ° C. Manter a solução PBW legal até depois mínimos mídia essencial (EMEM-10x) o concentrado de Eagle é adicionado durante a preparação da mídia conforme as instruções da seguinte protocolo.
   NOTA: PBW é uma solução oxidada que se vai precipitar deixada a congelar ou aquecida até à temperatura ambiente. Após diluição, a solução PBW é suficientemente diluído que não irá precipitar quando aquecido a 37 ° C antes da aplicação às células e durante a incubação.

2. Preparação de CuO Nanopartículas (CuO-PN)

1. Combinar uma solução etanólica puro contendo 250 ml de 0,2 M de CuCl ₂ • 2H ₂ O, 250 ml de 0,4 M hidróxido de sódio (NaOH), e 5 g de polietileno glicol (PEG) num balão de fundo redondo com seis milímetros bolas de vidro de borosilicato.
2. Colocar a solução em um forno de microondas modificado e permitir que ele se reagir sob refluxo à pressão atmosférica durante 10 min a 20% de potência (intervalos de 6 seg de, 24 segundos desligado).
3. Arrefece-se a solução até à temperatura ambiente (20 ° C), em seguida, decantada para tubos cónicos de 50 mL, deixando as esferas de vidro.
4. Centrifugar a solução em 50 mL em tubos cónicos de 1000 xg durante 30 min, decantou-se, e, em seguida, lava-se a CuO-PN com uma sequência de 300 ml de água quente (60-65 ° C), 100 ml de etanol, e 100 ml de acetona.
5. Seca-se a CuO-NPs até à temperatura ambiente (20 ° C) em 50 ml de tubos cónicos.
6. Raspe a CuO-NPs fora de seus tubos em um almofariz. Cobrir o CuO-NPs com folha de estanho e aquecer o CuO-PN a 110 ° C num forno para retirar o líquido restante. Combinar CuO-NPs em um lote e pesar o CuO-PN.
   NOTA: A preparação de CuO-NPs e tratamento CuO-NP de PBW foram conduzidos de água Qualdade Laboratório de Ecossistema de Ciência e Gestão da Universidade do Wyoming. CuO-NP síntese seguido o procedimento de Martinson e Reddy (2009) ^11.

3. Tratamento de PBW com CuO-NPs

1. Adicionar 50 mg (1 mg / ml) de CuO-NP para um tubo de 50 ml, seguido por 50 ml de PBW. Fecha-se o tubo e feita reagir durante 30 min num agitador orbital de bancada a 250 rpm.
2. Os tubos de amostra, centrifugar a 250 xg durante 30 min e, em seguida, filtrar o sobrenadante através de um filtro de seringa de 0,45 um. Alterar a velocidade de centrifugação e tempo podem depender da nanopartícula para assegurar o CuO-NPs de se tornar compacta no tubo de centrifugação.

4. Análise Elementar

1. Prepare não tratada (controle) e amostras tratadas PBW-CuO-NP por análise elementar como se segue.
2. Acidifica-se alíquotas (40 ml) de CuO-NP-tratados e não tratados com ácido nítrico PBW grau de vestígios metálicos para um pH de 2,0. Analisar alíquotas PBW acidificadas para cátions por coupl indutivamenteed plasma-espectroscopia de massa (ICP-MS), tal como descrito em Roth e Reddy (2012) ^13.
3. Preparar alíquotas unacidified (20 ml) de CuO-NP-tratados e não tratados PBW e analisar as alíquotas unacidified para aniões por cromatografia iónica (IC), como descrito em Roth e Reddy (2012) ^13.
   NOTA: As aliquotas foram analisadas pelo Departamento de Agricultura Wyoming Analytical Services, Laramie WY 82070. Uma descrição do procedimento IC ICPMS e pode ser encontrado em Reddy e Roth, (2012) ^13.

5. Preparação de Cultura de Células de mídia Usando PBW

1. Use duas controle (EMEM-1x e RO + mídia) e oito soluções de mídia teste PBW (quatro concentrações de cada PBW não tratada e mídia tratou-CuO-NP) nos estudos de viabilidade. Panorâmica das soluções são as seguintes:
   1. Para o controle de EMEM-1x, compra de mídia essencial mínimo de Eagle (EMEM-1x) com L-glutamina e bicarbonato de sódio já adicionou. Adicionar soro fetal de bovino (FBS) E antibióticos acordo com as instruções do fabricante.
      NOTA: EMEM-1x é comprado diluída para a concentração adequada para o crescimento celular e contendo L-glutamina e bicarbonato de sódio. EMEM-1x requer a adição de soro fetal bovino (FBS) e uma mistura de antibióticos de penicilina e estreptomicina (50 Ul / ml de penicilina e 50 ug / ml de estreptomicina). EMEM-1x é usado como um meio de controlo, porque é o meio de crescimento recomendado do fabricante para ambos os tipos de células utilizadas neste estudo. Concentrado de EMEM-10x é diluída com água a partir da instalação de RO ou não tratado ou tratado com CuO-NP PBW para produzir as soluções de teste. Concentrado de EMEM-10x quando comprado não contém L-glutamina ou de bicarbonato de sódio de forma que estes são adicionados para além do soro fetal bovino (FBS) e uma mistura de antibióticos de penicilina e de estreptomicina.
   2. Para a solução de controle RO usar água RO recolhidos da instalação de ISR. Use o mesmo protocolo que os meios de teste PBW única substituir 100% RO water a partir da instalação de ISR em lugar de PBW. Para diluir a água não tratada e uso solução tratada com CuO-NP RO ou ultrapura do laboratório.
   3. Diluir não tratada PBW em quatro concentrações de ensaio antes de se misturar com os componentes do meio de cultura de células. Prepare os quatro concentrações diferentes de soluções PBW não tratados misturando PBW não tratada com o RO (do laboratório) nas seguintes combinações: 100% (PBW puro sem água RO +), 75% (187,5 ml de PBW + 62,5 ml de água RO), 50% (125 ml de PBW + 125 ml de água RO) ou 25% (62,5 ml de PBW + 187,5 ml de água RO).
   4. Diluir CuO-NP-tratados PBW em quatro concentrações de ensaio antes de se misturar com os componentes do meio de cultura de células. Prepare os quatro concentrações diferentes de soluções PBW tratados com NP-CuO por mistura PBW (pré-tratado com 1 mg / ml de NP-CuO durante 30 min) com o RO (do laboratório) nas seguintes combinações: 100% (CuO- puro PBW tratados com NP + RO sem água), 75% (187,5 ml de PBW + 62,5 ml de água tratada RO-CuO-NP), 50% (125ml de CuO-NP-tratados PBW + 125 ml de água RO) ou 25% (62,5 ml de PBW tratados com CuO-NP + 187,5 ml de água RO).
2. Prepare 250 ml de RO + media, PBW não tratada + mídia e tratados com CuO-NP PBW + media concentração pela adição de 25 ml de concentrado EMEM-10x para 190 ml de 100% RO e 100%, 75%, 50% ou 25% das concentrações não tratados ou tratados com CuO-NP premade PBW criados no passo 6.1.3 e 6.1.4.
3. Ajustar o pH de cada solução para 7,4 com NaOH ou HCl.
4. Suplemento cada concentração de não tratado e tratado com CuO-NP PBW, bem como meios + RO com os seguintes componentes padrão: 25 mL (10%) de soro fetal de bovino (FBS), 2,5 ml de L-glutamina, 0,55 g de _NaHCO3 e 1,25 ml Pen / Strep (50 UI / ml de penicilina e 50 ug / ml de estreptomicina).
5. Ajustar a osmolalidade de cada concentração de PBW não tratada + meios, CuO-NP-tratados PBW + media e + RO meios para 290-310 mOsm / kg por adição de água RO e medida utilizando um osmómetro.
6. Filtrar cada solução utilizandouma unidade de filtro de vácuo de 0,22 um, e armazenar a 4 ° C.
   NOTA: Devido a pequenas variações na quantidade de água RO usado para ajustar a osmolaridade, variar as concentrações finais de mídia dentro de uma faixa de 5%, com concentrações de mídia em 56%, 44% PBW não tratada +, 29% e 16,5% e CuO-NP- tratada PBW + media concentrações a 53%, 45%, 30% e 17%.

6. Viabilidade celular

NOTA: Dado que nos rins e fígado são os órgãos alvo da toxicidade do metal pesado, empregar rim embrionário humano (HEK293) células cultivadas (HEK) e carcinoma hepatocelular humano (HepG2) células (HEP) métodos de teste ^24-26.

1. Prepara-se uma cultura de células HEK e HEP 2-3 dias antes do plaqueamento das placas de 96 poços utilizados na experiência de acordo com as instruções do fabricante.
2. Medir a viabilidade celular utilizando o ácido 3- [4, 5-dimetiltiazol-2-il] -2, brometo de 5-difeniltetrazólio (MTT).
   NOTA: O protocolo de ensaio MTT foi modificado a partir do Meerloo et al. (2011) ^27.
   1. Obter MTT em forma de pó. Adicionar salina tamponada com fosfato (PBS) para perfazer uma concentração de estoque de 50 mg / ml. Agita-se a solução durante 2 horas e depois filtra-se com um filtro de seringa de 0,45 um e alíquota de 1,5 ml em tubos de congelação seguras. Proteja tubos de luz e armazenar a 4 ° C.
3. Remover as células HEK e HEP das suas placas de cultura utilizando tripsina, centrifugar a 1000 xg durante 5 minutos e decantar a tripsina. Adicionar 5 ml de PBS e as células misturar para se obter uma solução de células única. Em seguida, aplicam-se 20 ul da solução de células única para um hemocitómetro para se obter uma contagem de células por mililitro de solução. Centrifugar as células novamente em 1000 xg durante 5 minutos e decanta-se o PBS usado para lavar as células. Adicionar a quantidade adequada de EMEM-1x a ajustar a concentração de células de 500 células / 100 uL (100 ul / poço).
4. Encha as cavidades perímetro da placa com 200 ul de PBS para controlar a evaporação.
5. Semente células a uma densidade de 500 células / poço adição de 100 ul a cada poço, excepto para as cavidades perimetrais (que não são revestidos a células).
   NOTA: densidade de sementeira de células HEK e HEP baseia-se curvas de crescimento experimentais que permitem que o pico de crescimento a ocorrer em torno de 4-5 dias. Preparar as curvas de crescimento de todas as linhas celulares para estimar a densidade de sementeira.
6. Incubar as células em 24 h a 37 ° C, o que lhes permite recuperar (forma apertados aderências à placa) antes de efectuar leituras da linha de base de MTT densidade celular.
7. Realizar as leituras da linha de base de MTT densidade celular através da remoção do meio de inoculação a partir da primeira coluna (não incluindo o perímetro) e adição de 100 ul de MTT (5 mg / ml em meio) para os poços, durante 1 h.
8. Após uma hora, remover o MTT e adicionar 100 ul de dimetilsulfóxido (DMSO) para dissolver o formazano-MTT produzido pelas células viáveis ​​(20 min).
9. Leia a densidade óptica (OD) da primeira coluna a um comprimento de onda de absorção de 570 nm, para se obter uma base deleitura linha.
   1. Use leituras de linha de base para assegurar todas as placas foram semeadas corretamente e que as células estão crescendo de forma consistente entre as placas. Remover o DMSO a partir da coluna a ser testado antes de incubação durante 24 horas a próxima.
      NOTA: Se DMSO é deixado na placa durante a noite ele puxa a humidade a partir da coluna adjacente, provocando uma redução no volume do meio.
10. Aquecer as soluções de ensaio (isto é, o EMEM-1x, RO, PBW não tratada e soluções de mídia PBW tratados com CuO-NP) a 37 ° C num banho de água.
11. Remover o meio de inoculação a partir do resto da placa (não incluindo o perímetro ou a primeira coluna que foi utilizada para a leitura da linha de base) e substituído por 100 uL de EMEM-1x, RO + media, PBW não tratada + media concentrações ou CuO NP- As concentrações de mídia PBW tenha sido tratada com + (uma solução por placa). Incubar as células em concentrações suas soluções de teste ou de controlo para um total de sete dias (dias 2-8).
    NOTA: Há 10 placas no total: 1 EMEH-1x, 1 RO + meios, um de cada concentração PBW + meios não tratada (56%, 44%, 29% e 16,5%) e uma placa de cada concentração PBW + meios tratados com NP-CuO (53%, 45% , 30% e 17%) por experimento por linha celular.
12. Cada dia seguinte leitura MTT linha de base, remova as soluções de controle e de teste (listados na nota sob 6.11) a partir da próxima coluna da respectiva placa (por exemplo, Dia 2 media teste e controle são removidos da linha 3, poços BG; Dia 3: linha 4, BG poços, etc.) e repetir o protocolo de MTT, tal como descrito nos passos 6,7-6,9 acima.
13. Repetir o protocolo todos os dias durante sete dias. Calcular a média dos resultados de DO para cada linha (6 poços) e relatados em função do tempo para gerar uma curva de crescimento de sete dias.
14. Para avaliar o efeito de quelação de cobre sobre a viabilidade celular em CuO-NP-tratados PBW + meios seguem o mesmo procedimento tal como acima, excepto adicionar 100 | iM de D-penicilamina para controlar e soluções de ensaio antes de se adicionar as soluções para as suas respectivas placas. Execute anal dadosysis usando software de representação gráfica científica.

7. Modelagem geoquímica

1. Baixe a versão Visual MINTEQ 3.0 / 3.1 um freeware do seguinte site da http://www2.lwr.kth.se/English/Oursoftware/vminteq/ .
   NOTA: Visual MINTEQ é um modelo de equilíbrio químico do freeware para o cálculo de especiação do metal, equilíbrios de solubilidade, etc. sorção de águas naturais. Além disso, é usado para prever especiação de iões, as actividades de iões, complexos de iões e índices de saturação, que é comparado com a concentração de elementos antes e após o tratamento (resultados de espectroscopia de massa) para examinar possíveis mecanismos de remoção do elemento ^28.
2. Abra o programa e os dados de entrada de espectroscopia de massa a partir do passo 4, incluindo o pH, alcalinidade e as concentrações dos diferentes elementos, para o programa.
   NOTA: Dado que as águas subterrâneas é oxidado durante a urani situhum processo de extração, uso de espécies oxidadas de arsênico, vanádio e urânio para a entrada.

8. Concentração Inibitória 50 _(IC50)

1. Calcula-se a CI ₅₀ para os meios de comunicação PBW + concentrações não tratados e tratados com CuO-NP em primeiro lugar a viabilidade média (média OD) no dia 5 de três experiências separadas.
2. Subtrair dia cinco médias de viabilidade das PBW + mídia concentrações não tratados e tratados-CuO-NP do dia cinco médias de viabilidade de EMEM-1x para calcular as diferenças de viabilidade. Em seguida, dividir as diferenças de viabilidade por parte da viabilidade média no dia 5 em EMEM, e multiplique por 100 para obter a percentagem de inibição.
3. Subtrair a percentagem de inibição de 100 (viabilidade EMEM-1x) para obter a percentagem de viabilidade para cada PBW + media concentração não tratados e tratados com CuO-NP.
4. Entrada em software gráficos científica, definindo EMEM-1x a uma concentração de um e uma viabilidade por cento dos 100; transformar todas as concentrações no registoescala (X = Log (X)) e realizar análise de regressão não linear com menos apto quadrado.

9. Análise de Dados

1. Compare as concentrações de elementos não tratados e tratados com NP-CuO PBW com uma de duas caudas, emparelhado, T-Student.
2. Calcular as áreas sob a curva (AUC), utilizando os dados da curva de crescimento, recolhidas ao longo de sete dias, e analisar a variância com medidas repetidas de análise de variância (ANOVA), seguido por comparação de Tukey post hoc de entre todos os grupos (n = 3).
3. Calcule o IC _50, usando dados a partir do dia cinco de a curva de crescimento tanto para PBW não tratados e tratados com CuO-NP + soluções de mídia (descritos acima). Os valores de p <0,05 são considerados significativos.
   NOTA: Para efeitos de análise estatística, os valores de espectroscopia de massa de metade do limite de detecção foi atribuída aos iões de níveis de concentrações inferior a esse limite ^29.

Resultados

As concentrações dos componentes PBW e pH em não tratado e tratado com CuO-NP PBW são apresentados na Tabela 1. Martinson e Reddy (2009), relataram que o ponto de carga zero do CuO-NP é estimado em 9,4 ± 0,4. Dado que o pH era de 7,2-7,4 PBW, nestas condições, água doa protões de CuO em NPS, fazendo com que a superfície da nanopartícula para ser carregado positivamente para permitir a adsorção de espécies carregadas negativamente. Tratamento de NP-CuO removidos contaminantes prioritários...

Discussão

Estudos anteriores relataram que CuO-NPs removido arsénio das águas subterrâneas ^11,13,30,31. Este estudo suporta essas descobertas anteriores e também relata que CuO-NPs remover os contaminantes adicionais de PBW. Este estudo também confirma os relatos anteriores que CuO-NPs são eficazes na remoção de arsénio, apesar da presença de outros contaminantes potenciais e iões concorrentes ^11. Modelagem especiação previu que 97% das espécies de vanádio em PBW são carregados negativamente,...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
CuCl2	Sigma	203149
Borosilicate glass balls	VWR	26396-639	6 mm
Nitric Acid	Fisher	A509-P500	Trace metal grade
0.45 μm syringe filter	Fisher	SLHA 033S S
10x EMEM	Fisher	BW12-684F
Fetal Bovine Serum	ATCC	30-2020
L-glutamine	Fisher	BP379-100
NaHCO3	Sigma	S5761
Penicillin/Streptomycin	ATCC	30-2300
0.22 μm vacuum filter unit	Fisher	09-740-28C
HEK293	ATCC	CRL-1573
HEPG2	ATCC	HB-8065
Trypsin	Sigma	SV3003101
MTT	Sigma	M2128
D-penicillamine	Fisher	ICN15180680
96-well plates	Fisher	07-200-92
DMSO	Fisher	D12814
Spectra Max 190	Molecular Devices
Visual MINTEQ version 3.0	KTH Royal Institute of Technology
ICP-MS	Agilent		Details of instruments, models and detection limits were published in Reddy et al., 2013.
IC DIONEX DX 500	Dionex		Details of instruments, models and detection limits were published in Reddy et al., 2013.
VWR Incubator	VWR