Modificação e funcionalização do Grupo de guanidina por precursores sob medida

Resumo

Um protocolo para a síntese de guanidinas modificada-alquilo baseados na utilização dos precursores correspondentes é apresentada.

Resumo

O grupo guanidina é um dos grupos farmacofóricos mais importantes em química medicinal. O único aminoácido que contém um grupo guanidina é arginina. Neste artigo, um método fácil para a modificação do grupo guanidina em ligandos peptidicos é fornecido, com um exemplo de ligandos de integrina de ligao a RGD. Foi recentemente demonstrado que a modificação distinto do grupo guanidina nesses ligandos permite a modulação selectiva do subtipo (por exemplo, entre os subtipos aV e α5). Além disso, uma estratégia anteriormente desconhecido para a funcionalização através do grupo guanidina foi demonstrada, e a abordagem sintética foi avaliada neste documento. As modificações aqui descritas envolvem terminalmente (N _ω) grupos guanidina alquilados e acetilados. Para a síntese, moléculas precursoras feitas por medida são sintetizados, os quais são, em seguida, submetido a uma reacção com uma amina desprotegida de modo ortogonal para transferir o prégrupo guanidina -Modified. Para a síntese de guanidinas alquilados, precursores à base de N, N '-di-Boc-1 H-pirazole-1-carboxamidina são utilizados para sintetizar compostos acilados, o precursor de escolha sendo um derivado acilado correspondente de N-Boc-S - metilisotioureia, o qual pode ser obtido em reacções de um e de dois passos.

Introdução

Entre os grupos farmacofóricos mais abundantes em ligandos naturais é o grupo guanidina, o qual está envolvido em várias interacções ^{1, 2.} Por exemplo, ele serve como um potencial dador de hidrogénio de quatro vezes em interacções de ligações de hidrogénio e está envolvido em interacções electrostáticas, tais como as pontes salinas ou interacções catiões π. Em química medicinal, este grupo é frequentemente encontrada em drogas e candidatos a fármacos ^4, embora, muitas vezes, como mimicos de guanidina ^{5, 6.} A razão para o desenvolvimento de mimicos de guanidina é a remoção do grupo guanidina ubíqua, carregado positivamente, assim como o ajuste da lipofilicidade do ligando. Em ligandos peptídicos, o único aminoácido contendo um grupo guanidina é arginina, que é, portanto, muitas vezes encontrado na região bioactiva de ligandos peptídicos.

Um muito prominent exemplo para uma família de ligandos contendo arginina é a subfamília das integrinas RGD de ligação. Em geral, as integrinas são uma classe de receptores de adesão celular, as quais assumem funções importantes em todos os organismos superiores. Algumas dessas funções envolvem a adesão celular, migração e sobrevivência das células. Assim, eles também estão envolvidos em indicações patológicos, tais como cancro e fibrose. As integrinas são proteínas transmembranares heterodiméricas que consistem de um α- e uma subunidade-β que formam 24 subtipos de integrina actualmente conhecidas; 8 deles reconhece a sequência tripeptídica Arg-Gli-Asp (RGD =) nos seus ligandos ^7. A região de ligação localiza-se na interface entre estes dois subtipos na parte extracelular, o chamado grupo de cabeça ⁸ integrina. RGD é reconhecido por duas interacções comuns: o sítio de adesão de metal-dependente de iões região (MIDAS), que está localizado na subunidade beta e que se liga ao ácido carboxílico nos ligandos (cha lateraisna de Asp); e o grupo guanidina nos ligandos, que está localizado na subunidade alfa. A maioria dos subtipos de integrina são promíscuo e partilham pelo menos uma parte da sua matriz extracelular naturais (ECM) ligandos ^9. Assim, para o desenvolvimento de ligandos de integrina artificiais, o foco principal é, além de uma elevada afinidade de ligação, a selectividade do subtipo. Recentemente, nós fomos capazes de revelar um elemento-chave para a geração de ligandos do subtipo selectivo: o grupo guanidina. Através de modificações distintos, os ligandos para o biselective αv- e α5 contendo subtipos de integrina pode ser transformado em compostos selectivos por modificações simples no grupo guanidina, o qual pode, em seguida, a discriminar diferentes α-subunidades ^10.

No bolso de aV, o grupo guanidina interage lado-a através de uma ponte salina com o Asp218 bidentado ^{11, 12.} Esta interacção cum também ser observada em α5β1 (aqui, com o Asp227 em α5), mas, adicionalmente, é observado um fim-de interacção do grupo guanidina com um resíduo Gln (Gln221) lá ^13. Assim, modificou o grupo guanidina de duas formas opostas: num caso, através do bloqueio do lado-a interacção com a metilação do _δ N do grupo guanidina, e, no outro caso, com a metilação do _ω guanidina N, bloqueando a interacção fim-em. Surpreendentemente, esta pequena modificação levou a uma mudança completa selectividade nos ligandos. Para além da alquilação, um novo método de funcionalização foi introduzido nesta publicação. O método clássico de funcionalização para este tipo de ligando é pentapeptidic através da conjugação da cadeia lateral de um aminoácido que não estão envolvidos na ligação (por exemplo, K em C (RGDfK)) ^{14, 15.} Aqui,mostramos que funcionalização também é possível pela modificação da guanidina - que é crucial para a ligação - com um grupo acilo ou um ligante alquilado. A carga positiva que é essencial para a ligação é retida, e modelos sugerem que as longas pontos de cadeia para fora da bolsa de ligação, proporcionando, assim, uma possibilidade ideal para a fixação de outros ligantes e rotulagem de unidades (por exemplo, um marcador fluorescente ou um quelante para molecular imagiologia).

Neste trabalho, nós concentrar-se nos passos preparativos para a modificação do grupo guanidina em ligandos contendo arginina. Isto envolve a síntese de N-metilada _ω espécies, assim como guanidinas com unidades ligantes mais longas. As diferentes modificações compreendem grupos acilo e alquilo.

Protocolo

Nota: Todos os reagentes e solventes foram obtidos de fornecedores comerciais e foram utilizados sem purificação adicional.

Atenção: Por favor, consulte todas as folhas de dados de segurança pertinentes (MSDS) antes do uso. Utilize todos os equipamentos de segurança adequada ao realizar sínteses químicas (por exemplo, da hotte, óculos de protecção, luvas, revestimento do laboratório, calças de comprimento total, e sapatos fechados).

1. Síntese de precursores Guanidinylation

1. espécies alquilados
   1. espécies metiladas
      1. Dissolve-se 1,0 g de N, N '-di-Boc-1 H-pirazole-1-carboxamidina (3,2 mmol, 1 eq.) E 1,0 g de trifenilfosfina _(PPh3, 3,8 mmol, 1,2 eq.) Em 10 mL de seco tetra-hidrofurano (THF) num balão de fundo redondo de 50 mL sob uma atmosfera inerte usando um septo de borracha, à temperatura ambiente (RT). Adicionar 194 mL de metanol seco usando uma seringa (4,8 mmol, 1,5 eq.) E let-lo agitar temperatura ambiente.
      2. Separadamente, preparar uma solução com 747 mL de azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD, 3,8 mmol, 1,2 eq.) Em 2 mL de THF seco num frasco pequeno de vidro. Enquanto se agita, adicionar a solução de DIAD em THF gota a gota à solução de N, W-di-Boc-1 H-pirazole-1-carboxamidina N ', _PPh3, e metanol, utilizando uma seringa (ao longo de 15 min). Deixe a solução agitar durante 2 h à TA.
      3. Remover o solvente sob pressão reduzida utilizando um evaporador rotativo e dissolve-se o produto em bruto em 1 mL de diclorometano (DCM). Carregar uma coluna de flash (2,5 cm x 20 cm) com 100 g de sílica em 10% de acetato de etilo (EtOAc) em uma solução de pentano. Carregar o produto bruto dissolvido na coluna e adicionar o solvente sob pressão (1,5 bar).
      4. Recolher as fracções (sistema solvente: isocrico 10% de EtOAc em pentano), identificar o ponto composto desejado por cromatografia em camada fina (TLC), e recolhê-la (R _f = 0,4, EtOAc / pentano 1: 9, UV). Combine o desejadofracções e evapora-se o solvente sob pressão reduzida utilizando um evaporador rotativo para se obter 0,85 g do composto do título como um óleo amarelo, viscoso (rendimento de 2,6 mmol, 81%). Armazenar o composto originou à temperatura ambiente para utilização posterior.
   2. Espécies modificadas-hexilamina
      1. Dissolve-se 1,0 g de N, N '-di-Boc-1 H-pirazole-1-carboxamidina (3,2 mmol, 1,0 eq.), 0,9 g de Dde-6-amino-hexanol (3,8 mmol, 1,2 eq.), E 1,0 g de _PPh3 (3,8 mmol, 1,2 eq.) em 10 mL de THF seco num frasco de fundo redondo de 50 ml, em atmosfera inerte usando um septo de borracha, à TA.
      2. Separadamente, preparar uma solução com 747 mL de DIAD (3,8 mmol, 1,2 eq.) Em 2 mL de THF seco num frasco pequeno de vidro. Enquanto se agita, adicionar a solução de DIAD em THF gota a gota à solução de N, N '-di-Boc-1 H-pirazole-1-carboxamidina, _PPh3, e Dde-6-amino-hexanol utilizando uma seringa (ao longo de 15 min) . Deixe a solução agitar durante 2 h à TA.
      3. Remover o solvente sob pressão reduzida utilizando um evaporador rotativo e tomar o produto bruto acima em 1 mL de DCM. Carregar uma coluna de flash (2,5 cm x 20 cm) com 100 g de sílica em uma solução de pentano / EtOAc (2: 1). Aplicar o produto bruto dissolvido na coluna e adicionar solvente sob pressão (1,5 bar).
      4. Recolher as fracções (sistema solvente: isocrática 2: 1 pentano / EtOAc), identificar as fracções desejadas com TLC, e recolhê-las _(Rf = 0,66, 2: 1 pentano / EtOAc, UV). Combinam-se as fracções desejadas e evapora-se o solvente sob pressão reduzida utilizando um evaporador rotativo para se obter 1,6 g do composto do título como um óleo amarelo, viscoso (rendimento de 2,8 mmol, 88%). Armazenar o composto originou à temperatura ambiente para utilização posterior.
2. Espécies acilados (2 passos reaccionais)
   1. Dissolve-se 1,4 g de S hemissulfato -methylisothiuronium (10 mmol, 1,0 eq.) E 2,2 g de dicarbonato de di (terc-butil) dicarbonato (10 mmol, 1,0 eq.) Em uma vigorosamente agitaranel solução bifásica de DCM / sat. aq. De NaHCO ₃ e deixá-lo agita-se durante 24 h à TA.
   2. Separaram-se as camadas numa ampola de decantação e extrai-se a fase aquosa três vezes com DCM. Combinam-se as fases orgânicas, secam-se com Na ₂ SO _4, e remover o solvente sob pressão reduzida utilizando um evaporador rotativo. Tome-se o produto em bruto em 1 mL de hexano.
   3. Carregar uma coluna de flash (2,5 cm x 20 cm) com 100 g de sílica em uma solução de 4: 1 hexano / EtOAc. Carregar o produto bruto dissolvido na coluna. Adicionar o solvente sob pressão. Identificar as fracções desejadas com TLC (sistema solvente: 4: 1 isocrático hexano / EtOAc (detecção por UV: 254 nm), e recolher-los _(Rf = 0,30).
   4. Combinam-se as fracções desejadas e evapora-se o solvente sob pressão reduzida utilizando um evaporador rotativo para se obter 1,1 g do composto do título como um óleo amarelo, viscoso (rendimento de 5,8 mmol, 58%). Armazenar o reagente, N - (terc-butoxicarbonil) - S -methylisothiourea, à temperatura ambiente para utilização posterior.
   5. Dissolve-se 250 mg de N - (terc-butoxicarbonil) - S-metilisotioureia (1,3 mmol, 1,0 eq.) Em 10 mL de N, N- dimetilformamida seca (DMF) num balão de fundo redondo de 50 mL sob uma atmosfera inerte, a RT. Adicionar 440 uL de N, N-diisopropiletilamina (DIPEA) (2,6 mmol, 2 eq.), Utilizando uma seringa. Enquanto se agita, adicionar 245 mL de _Ac2O (5,2 mmol, 4,0 eq.) Gota a gota usando uma seringa e deixá-lo agitar durante 1 h à TA.
   6. Adicionar um excesso de metanol (2 mL) à mistura, utilizando uma seringa e deixá-lo agita-se durante 15 min à temperatura ambiente. Remover o solvente sob pressão reduzida utilizando um evaporador rotativo. Tome-se o produto em bruto em 1 ml de DCM.
   7. Carregar uma coluna de flash (2,5 cm x 20 cm) com 60 g de sílica em uma solução de 3: 1 hexano / EtOAc a 3: 1. Aplicar o produto em bruto dissolvido para a coluna. Adicionar solvente (3: 1 hexano / EtOAc) e pressão (1,5 bar). Identificar as fracções desejadas por TLC (3: 1 hexano / EtOAc, UV: 220 nm), e colLect los _(Rf = 0,62).
   8. Combinam-se as fracções desejadas e evapora-se o solvente sob pressão reduzida utilizando um evaporador rotativo para se obter 210 mg do composto do título como um sólido branco (rendimento 0,9 mmol, 70%). Armazenar o composto à temperatura ambiente para utilização posterior.

2. Síntese de Peptídeos Cíclicos Precursores

1. Carregamento e nivelamento resina TCP
   1. Adicionar 1,00 g de cloreto de (CTC) de resina 2-chlortriyl (0,9 mmol / g) e 320 mg de Fmoc-Gli-OH (1,2 eq.) Em uma seringa de plástico de 20 ml com uma frita. Prepara-se uma solução de 313 ul de DIPEA (2 eq.) Em 5 mL de DCM seco e adicioná-lo à seringa. Deixá-lo girar durante 1 hora a RT utilizando um aparelho rotativo.
   2. Enquanto isso, preparar uma solução de 2 ml de 5: 1 de metanol / DIPEA (v / v; solução capping). Adicionar a solução de capeamento para a seringa e deixá-lo girar durante mais 15 min. Lava-se a resina com DCM (5x) e DMF (3x).
2. Por desprotecção de Fmoc-resina
   1. Tratar o ligado a resina Fmoc-Gly com 20% de piperidina em DMF durante 10 min e, em seguida, durante 5 min. Lava-se a resina com DMF (3x).
3. Sobre resina de acoplamento de Fmoc-Orn (Dde) -OH
   1. Adicionar 934 mg de Fmoc-L-Orn (Dde) -OH (2 eq.), 684 mg de 1- [bis (dimetilamino) metileno] -1H-1,2,3-triazolo [4,5-b] piridínio hexafluorofosfato de 3-óxido (HATU) (2 eq.), e 245 mg de 1-hidroxi-7-azabenzotriazole (HOAt) (2 eq.) para um frasco pequeno de vidro e dissolvê-la em 5 mL de DMF. Adicionar 814 ul de DIPEA.
   2. Adicionar esta solução ao Gli Fmoc-desprotegida, lavado, e ligado a resina e deixá-lo girar durante 1 h. Lava-se a resina com DMF (3x).
4. Por desprotecção de Fmoc-resina
   1. Tratar o ligado a resina de Fmoc-Orn (Dde) -Gly com 20% de piperidina em DMF durante 10 min e, em seguida, durante 5 min. Lava-se a resina com DMF (3x).
5. Acoplamento em resina de Fmoc-Val-OH
   1. Adicionar 610 mg de Fmoc-Val-OH (2 eq.), 684 mg de HATU (2 eq.), E 245 mg de HOAt (2 eq.) Para um frasco pequeno de vidro e dissolvê-la em 5 mL de DMF. Adicionar 814 ul de DIPEA.
   2. Adicionar esta solução à Fmoc-desprotegida, lavado, e Orn ligado a resina (Dde) -Gly e deixá-lo girar durante 1 h.
6. Por desprotecção de Fmoc-resina
   1. Tratar o ligado a resina de Fmoc-Val-Orn (Dde) -Gly com 20% de piperidina em DMF durante 10 min e, em seguida, durante 5 min. Lava-se a resina com DMF (3x).
7. Em-resina N- metilação
   1. Lava-se a resina com DCM (3x). Dissolve-se 887 mg de 2-nitrobenzenossulfonilo (o -NBS-Cl, 4 eq.) Em DCM e adicionar 1,2 mL de 2,4,6-colidina (10 eq.).
   2. Adicionar a solução do péptido ligado à resina e deixou-se incubar durante 20 minutos à temperatura ambiente.
   3. Lava-se a resina com CH ₂ Cl ₂ (3x) e com THF (5x). Prepara-se uma solução com 1,18 g de _PPh3 (5 eq.) E 365 uL de metanol em THF. Adicione esta solução para oseringa.
   4. Prepara-se uma solução com 883 mL de DIAD em 2 mL de THF e adicioná-lo à seringa. Deixe que incube durante 15 min. Lava-se a resina com THF (5x) e com DMF (5x).
8. O -ns desprotecção
   1. Prepara-se uma solução com 570 mL de mercaptoetanol (10,0 eq.) E 672 uL de diazabicycloundecen (DBU) em 2 mL de DMF. Adicionar esta solução para a seringa e deixá-lo incubar durante 5 min.
   2. Repetir o passo de desprotecção e, em seguida, lava-se a resina com DMF (5x).
9. Acoplamento em resina de Fmoc-d-Phe-OH
   1. Adicionar 697 mg de Fmoc-D-Phe-OH (2 eq.), 684 mg de HATU (2 eq.), E 245 mg de HOAt (2 eq.) Para um frasco pequeno de vidro e dissolvê-la em 5 mL de DMF . Adicionar 814 ul de DIPEA.
   2. Adicionar esta solução para o péptido Fmoc-desprotegida, lavado, e ligado a resina e deixá-lo girar durante 1 h.
10. Por desprotecção de Fmoc-resina
    1. Tratar a resina-bound péptido com 20% de piperidina em DMF durante 10 min e, em seguida, durante 5 min. Lava-se a resina com DMF (3x).
11. Acoplamento em resina de Fmoc-Asp (OtBu) -OH
    1. Adicionar 741 mg de Fmoc-Asp (OtBu) -OH (2 eq.), 684 mg de HATU (2 eq.), E 245 mg de HOAt (2 eq.) Para um frasco pequeno de vidro e dissolvê-la em 5 mL de DMF. Adicionar 814 ul de DIPEA.
    2. Adicionar esta solução para o péptido Fmoc-desprotegida, lavado, e ligado a resina e deixá-lo girar durante 1 h.
12. A clivagem do péptido linear da resina
    1. Lava-se a resina com DCM (3x) e subsequentemente preparar 10 mL de uma solução de hexafluoroisopropanol (HFIP) em DCM (1: 4; v / v).
    2. Adicionar a solução para a resina e deixá-lo girar durante 15 min. Recolher a solução em um balão de fundo redondo. Repetir a clivagem e evapora-se o solvente usando um evaporador rotativo.
13. A ciclização do peptídeo linear
    1. dissolve 384 mg de _NaHCO3 (5,0 eq.) e 582 ul de azida de difenilfosforilo (DPPA) (3,0 eq.) em 50 mL de DMF e adicionar-se ao produto bruto. Deixe que agitar durante a noite ou até que nenhum péptido linear é observado com ESI-MS (10 h) ^17.
    2. Sob pressão reduzida, reduzir o solvente para um pequeno volume usando um evaporador rotativo. Prepara-se uma solução aquosa saturada de NaCl (salmoura). Usando uma pipeta de Pasteur, adicionar gota a gota o péptido ciclizado para 40 mL de solução aquosa saturada de NaCl em um tubo de centrífuga.
    3. Centrifugar a suspensão (5000 xg, 5 min) e lavar o precipitado com água de grau HPLC (2x). Liofiliza o produto.

3. Guanidinylation e desprotecção em Solução

1. Guanidinylation com os precursores sob medida
   1. Dissolve-se uma pequena quantidade (por exemplo, 25 mg) do péptido cíclico desprotegido ortogonalmente num pequeno volume de DMF (por exemplo, 2 mEU). Adicionar 2 eq. do precursor guanidinylation e 2 eq. de DIPEA para a solução e deixá-lo agita-se durante 2 h à TA.
   2. Monitorizar o progresso da reaco por HPLC-MS. Depois da reacção estar completa, remover o, re-dissolve-se o péptido cíclico guanidinylated solvente em acetonitrilo, e realizar a purificação por HPLC semi-preparativa ^{de 16.}
2. A remoção dos grupos de protecção ácido lábil cadeia lateral
   1. Preparar 2 ml de uma solução contendo ácido trifluoroacético (TFA), água, e triisopropilsilano (TIPS) (95 / 2,5 / 2,5; v / v / v). Adicionar esta solução para o produto purificado num pequeno frasco de vidro e deixou-agitar temperatura ambiente durante pelo menos 1 h. Observar a desprotecção completa com ESI-MS ^17.
   2. Evapora-se o solvente sob pressão reduzida para um pequeno volume. Prepare éter arrefecido com gelo e adicionar 10 ml num tubo de centrífuga de 50 mL. Precipitar o péptido desprotegido em éter arrefecido em gelo, utilizando uma pipeta Pasteur, adicionando-gota a gota. Centrifugar a suspensão (5000 xg, 5 min) para obter um pelete.
   3. Lavar o precipitado com éter arrefecido com gelo e centrifugar-lo (5000 xg, 5 min, 2x). Dissolve-se o produto em 2 mL de água de grau HPLC e purificá-lo por HPLC semi-preparativa ^{de 16.}

4. Dados e Parâmetros para purificação Analítica

1. CLAP analítica-EM-IEP
   1. Executar analítica de HPLC-ESI-MS com um espectretro de massa LCQ utilizando uma coluna C18 (tamanho de 12 nm de poro, o tamanho de partículas 3 mícrons, 125 milímetros x 2,1 milímetros) ou uma coluna C8 (tamanho de poro de 20 nm, de partícula de 5 mícrons tamanho, 250 mm x 2,1 milímetros), com _H2O (0,1% v / v ácido fórmico) / acetonitrilo (0,1% v / v ácido fórmico) como eluentes.
2. HPLC semi-preparativa
   1. Realizar HPLC semi-preparativa usando um instrumento de HPLC preparativa com uma coluna ODS-A (20 x 250 mm, 5), uma taxa de fluxo de 8 mL / min, e os gradientes linearesde H ₂ O (0,1% v / v de TFA) e acetonitrilo (0,1% v / v de TFA).

Resultados

O precursor peptico clico foi sintetizado como um péptido linear, ciclizado, e ortogonalmente Dde-desprotegido. Após a precipitação, a pureza do composto foi analisada com HPLC-MS (Figura 1). Para monitorizar o progresso da reacção, a análise por HPLC foi realizada após o tempo de reacção de 2 h (Figura 2).

Para resíduos maiores no grupo guanidina, o tempo de reacção de 2 h muitas...

Discussão

O precursor para guanidinylation é um derivado de péptido cíclico desprotegido ortogonalmente, (C (OrnD (OtBu) Gf (N Me) V)), que é sintetizado por um protocolo Fmoc padrão de síntese de péptidos em fase sólida (SPPS). Ornithin foi utilizada como o derivado protegido ortogonalmente, (Fmoc-Orn (Dde) -OH), que pode ser desprotegido com hidrazina em DMF, após a ciclização do esqueleto de péptido. O precursor do péptido é purificado por precipitação do composto e pela subsequente l...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
N,N′-Di-Boc-1H-pyrazole-1-carboxamidine, 98%	Sigma Aldrich	434167 ALDRICH
Triphenylphosphine, 99%	Sigma Aldrich	T84409 SIGMA-ALDRICH
Tetrahydrofuran, >99.5%	Carl Roth	4745
Tetrahydrofuran anhydrous, 99.8%	Carl Roth	5182
Methanol anhydrous, 99.8%	Sigma Aldrich	322415 SIGMA-ALDRICH
Diisopropyl azodicarboxylate, 98%	Sigma Aldrich	225541 ALDRICH
Dichlormethan, for synthesis, 99.5%	Carl Roth	8424
Silica gel for flash chromtaography	Sigma Aldrich	60738 SIGMA-ALDRICH
n-Pentane, 99%	Carl Roth	8720
n-Hexane, 99%	Carl Roth	CP47
Ethylacetate, 99.5%	Carl Roth	7338
Aminohexanol, 95%	Sigma Aldrich	A56353 ALDRICH
S-Methylisothiourea hemisulfate, 98%	Sigma Aldrich	M84445 ALDRICH
Di-tert-butyl dicarbonate, 99%	Sigma Aldrich	205249 ALDRICH
N,N-Dimethylformamid, 99.8%	Carl Roth	A529
N,N-Diisopropylethylamin, 99.5%	Carl Roth	2474
Acetic anhydrid, 99%	Carl Roth	4483
Chlortrityl resin	Carbolution	CC11006
Fmoc-Gly-OH, 98%	Carbolution	CC05014
Piperidin, 99%	Sigma Aldrich	104094 SIGMA-ALDRICH
Fmoc-Orn(Dde)-OH	Iris-Biotech	FAA1502
HATU, 99%	Carbolution	CC01011
HOAt, 99%	Carbolution	CC01004
Fmoc-Val-OH	Carbolution	CC05028
2-Nitrobenzenesulfonyl chloride, 97%	Sigma Aldrich	N11507 ALDRICH
2,4,6-Collidine, 99%	Sigma Aldrich	27690 SIGMA-ALDRICH
Mercaptoethanol, 99%	Sigma Aldrich	M6250 ALDRICH
Diazabicycloundecen, 98%	Sigma Aldrich	139009 ALDRICH
Fmoc-D-Phe-OH, 98%	Sigma Aldrich	47378 ALDRICH
Fmoc-Asp(OtBu)-OH, 98%	Carbolution	CC05008
Hexafluoroisopropanol	Carbolution	CC03056
Diphenylphosphoryl azide, 97%	Sigma Aldrich	178756 ALDRICH
TFA, 99.9%	Carl Roth	P088
Triisopropylsilan, 98%	Sigma Aldrich	233781 ALDRICH
Acetonitrile, HPLC grade	Carl Roth	HN44