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Aqui, os bioensaios projetados para monitorar o desenvolvimento de um patógeno fúngico, Colletotrichum fioriniae, na presença de extractos florais mirtilo ou arando sobre as lamelas de vidro são descritos. Água, clorofórmio e água da chuva de campo - base floral extração técnicas são detalhadas bem como introspecção como esta informação pode ser aplicada.
Para monitorar com precisão a fenologia do período de flor e a dinâmica temporal das sugestões químicas florais na fruta fungosas patógenos a apodrecer, foram desenvolvidos métodos de extração floral e lamela bioensaios utilizando Colletotrichum fioriniae. No mirtilo e amora, esse patógeno é otimamente controlado aplicando fungicidas durante o período de flor por causa da dramatização de flores na fase inicial da infecção. O protocolo detalhado aqui descreve como florais extratos (FE) foram obtidas utilizando água, clorofórmio e métodos de campo baseada em água da chuva para uso posterior em bioensaios de lamela de vidro correspondente. Cada FE serviu para fornecer um conjunto de informações diferentes: resposta de fioriniae c. a química floral mobilizada sugestões na água (à base de água), resposta de patógeno a flor e ceras de superfície de frutas (baseado em clorofórmio) e baseado no campo de monitoramento de coletados floral da água da chuva, movendo-se em vitro observações para um cenário agrícola. O FE é genericamente descrito como qualquer ou clorofórmio-à base de água, com um bioensaio apropriado descrito para compensar as diferenças inerentes entre estes dois materiais. Água da chuva que havia fugido de flores foi coletada em dispositivos exclusivos para cada cultura, aludindo à flexibilidade e à aplicação desta abordagem para outros sistemas de colheita. Bioensaios são rápidos, baratos, simples e fornecem a capacidade de gerar spatiotemporal e site-specific informações sobre a presença de compostos florais estimulatórios de várias fontes. Esta informação, finalmente, melhor informará estratégias de gestão de doença, como FE diminuir o tempo necessário para a infecção ocorrer, assim fornecendo a introspecção mudando os riscos para a infecção do patógeno sobre a estação de crescimento.
Colletotrichum fioriniae provoca uma podridão de frutos de Highbush Blueberry (Vaccinium corymbosum L.) e o grande americano Cranberry (V. macrocarpon Aiton)1,2. Este patógeno foi recentemente delineado do c. acutatum espécies complexas3,4,5,6 e é um agente causal da antracnose de mirtilo e membro da podridão fruta amora complexos, além de causar inúmeras outras plantas doenças no mundo7. C. fioriniae tem uma latente, hemibiotrophic estilo de vida8, com infecções ocorrem durante o desenvolvimento de bloom e sintoma não se tornando aparente até que a fruta está em fase final de maturação9. Em blueberry e cranberry, fruta podre é apenas adequadamente controlada com aplicações de fungicida, feitas durante o período de flor. O patógeno overwinters em mirtilo dormente broto floral escalas10 e sporulates durante a flor. Conídios são movimentados em todo o dossel através de respingo de chuva dispersão11,12 e acúmulo de inóculo tem sido fortemente correlacionado a flor período13. Resposta de espécies de Colletotrichum às flores de anfitrião não é exclusiva de Vaccinium, como flores são importantes componentes da fruta de citrino post flor caiam (PFD)14 , bem como morango antracnose15, em ambos os casos causando o patógeno para esporular. Todos esses casos destacam a necessidade de métodos eficazes avaliar a dinâmica temporal das sugestões químicas florais na c. fioriniae e outros patógenos que infectam durante a flor. Os insights fornecidos pelos métodos descritos aqui estão se tornando cada vez mais valiosos.
Este protocolo detalha os métodos de aquisição de extrato floral (FE) e orienta a avaliação das respostas de c. fioriniae para FE através da lamela de vidro bioensaios15,16. As técnicas de extração florais são divididas em dois tipos principais; extrações de à base de água (ativo-FE, passiva (pass -FE) e campo baseado em água da chuva (rw-FE)) e extrações de17 baseado em clorofórmio (ch-FE). Inspeção de água mobilizada floral sugestões químicas permitem as extrações à base de água. Estes tacos mobilizados são prováveis componentes importantes do Tribunal de infecção, pois FE aumenta consideravelmente a velocidade de infecção16, além de fornecer a umidade necessária para a infecção ocorrer. Além disso, eles representam uma condição mais natural como estímulo floral pode ser lavado em toda o dossel durante eventos-umectante como observadas anteriormente em blueberry e outros sistemas de colheita14,16. Extracções florais baseado em clorofórmio (ch-FE) também fornecem informações valiosas referentes a resposta do patógeno a superfície do hospedeiro ceras17,18, elucidar os estágios iniciais de crescimento de conídios uma vez depositados em suscetíveis órgãos de host (ou seja, flores, ovários e frutos em desenvolvimento). Resposta do patógeno a mudanças sazonais na superfície ceras host também pode ser monitorada usando este protocolo. Por conseguinte, bioensaios são adaptados para trabalhar com FE à base de água ou FE baseado em clorofórmio para atenuar as diferenças inerentes entre estes dois materiais.
Os dados gerados a partir de bioensaios revelaram que extrações à base de água estimulam níveis mais elevados de conidiation secundário que extrações baseado em clorofórmio onde não havia uma resposta definitiva appressorial, implicando, portanto, vários compostos presente na fé. Curiosamente, ambos dessas respostas de crescimento foram observados quando usar água da chuva que tinha funcionado fora flores de mirtilo e amora, indicando vários compostos estimulatórios pode ser lavado da superfície das flores. Assim, monitoramento para estimulação floral irá fornecer insights sobre a probabilidade de sucesso do patógeno em um sistema agrícola.
O objetivo final do presente protocolo é fornecer uma metodologia para geração de base biológica obter informações sobre patógenos fúngicos planta em resposta a sinais químicos florais, bem como metodologias de iniciação que podem utilizar esta informação floral para auxiliar na processos de gestão e tomada de decisões específicas da doença.
1. fungos isolados e suspensões de esporos
2. ativo, extratos florais à base de água (ativo -FE)15,16
Nota: Ver Figura suplementar 1, suplementar Figura 2, suplementar Figura 3e filme suplementar 1.
3. passivo , extratos florais à base de água ( passe -FE) 16
Nota: Ver filme suplementar 2.
4. baseado em clorofórmio extratos florais (ch-FE) 17
5. coleta de água da chuva de flores de mirtilo (BB rw-FE)16
Nota: O dispositivo de recolha de águas pluviais floral mirtilo consiste de um copo de pulverizador ar injetor de pulverizador pintura descartável com adaptador de conexão (Copa: BSP, adaptador: rosca macho/macho), tubos de centrífuga de 50 mL (polipropileno), parafilm e fios revestidos de plástico ( telefone padrão fio, conteúdo de vertente individual fio interno).
6. coleta de água da chuva de flores de Cranberry (CB rw-FE)
7. bioensaio usando água com base em extratos florais15,16 (ativo-FE, passar-FE, FE-rw)
Nota: Consulte a Figura 1.
8. bioensaio usando baseado em clorofórmio extrai Floral (ch-FE)17
Nota: Consulte a Figura 2.
9. amora baseada na fenologia extrações17
Os resultados apresentados aqui são alguns exemplos dos muitos ensaios que podem ser executados usando esta metodologia. Figura 1 é um guia ilustrado para o bioensaio de FE à base de água e é complementada pela Figura 2 , que dá seguimento para o bioensaio de FE baseado em clorofórmio. A Figura 3 fornece um guia visual para o que pode ser esperado após a avaliação microscópica de c. fioriniae a 24 h, em ambos os bioensaios e clorofórmio-à base de água (em comparação com controles SDW). Figura 4 detalha um estudo do tempo-curso de 24 h com c. fioriniae na presença da variedade de uva 'Stevens' ch-FE e dá uma referência visual para um resultado de importação desta pesquisa: FE diminuiu o tempo necessário para formar estruturas de infecção comparado a SDW. Figura 5 fornece um exemplo de dados coletados de um bioensaio de lamela usando o escoamento de águas pluviais floral amora (CB "Flor" rw-FE). A Figura 6 representa outro importante resultado: ovário floral ch-FE era muito mais estimulante do que fruta ch-FE, indicando a importância da flor do ciclo de vida de c. fioriniae. As fotos suplementares e filmes fornecem importantes elementos visuais das flores utilizadas nas extrações e a água da chuva floral coleção dispositivos/implantação, além de filmes que Visualizar o ativo e passivo - extração ( processos à base de água).
Figura 1 : Visão geral da base de água floral extrair bioensaio (FE). Este ensaio foi utilizado para extratos florais à base de água com flores tanto mirtilo e amora: active -floral extrai (ativo-FE), passivo -floral extrai (passe-FE) e escoamento de águas pluviais floral (rw-FE). A - FE parte normalmente constitui o fator experimental/variável. Por outro lado a - FE parte pode permanecer constante e inoculação pós de tempo horas/pontos pode ser avaliada. Tornou-se preferência para análise de campo 4 ampliação de X 200. Abreviaturas: Estéril deionizada, SDW; Área por campo de visão, A. , por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2 : Visão geral da base de clorofórmio floral extrair bioensaio (ch-FE). Este ensaio foi utilizado para tanto mirtilo e cranberry (fruta e flores, ovários). Apenas um tipo de mistura de tratamento aquoso foi usado neste ensaio, 1 suspensão de esporos de parte para 2 partes SDW (para manter a concentração conidiais consistente devido a evaporação de ch-FE). Este ensaio pode ser usado para comparar vários ch-FE (ceras de várias superfícies de planta), ou Múltiplo tempo pontos/horas após inoculação usando um único ch-FE. Abreviaturas: Estéril deionizada, SDW; Células de Van Tieghem [vidro], VanT. célula. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3 : Comparação visual de Colletotrichum fioriniae na presença de FE à base de água e FE-ch. No mirtilo ensaio 'Bluecrop' (ativo-FE, à base de água) (isolar fungo: BB #10) e amora 'Stevens' baseado em clorofórmio (ch-FE) (isolar fungo: CB-PMAP182) extratos florais foram comparados aos controles SDW. Um aumento dramático na conidiation secundária (anéis) e formação de apressório (setas) foram observados quando comparando conídios na presença de SDW (controle) (A) ativo-FE (B) no pós-inoculação de 24 h. No entanto, conidiation secundário não era tão evidente quando se compara o clorofórmio bioensaio SDW controle (C) ch-FE (D); em vez disso, c. fioriniae crescimento para formação de appressorial. Mostrada é uma resposta comum para cada tipo de extração, à base de água e baseado em clorofórmio, independentemente do anfitrião/floral espécies descritas. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4 : Estudo do tempo-curso (24 h) com Colletotrichum fioriniae na presença de FE-ch. Neste ensaio, um controle SDW (A-D) e amora 'Stevens' ch-FE (E-F) foram inspecionados visualmente em 0, 6, 12 e 24 h após inoculação (um exemplo de pontos de tempo variável em vez de comparar vários FE). Formação de apressório (setas) começou às 6h em ch-FE e aumentou ao longo de pontos de tempo subsequente. Este resultados escapa ao fator importante da biologia do patógeno durante o período da flor: flores reduzem o tempo necessário para formar estruturas de infecção. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 5 : Exibição gráfica de dados coletados usando rw-FE em um bioensaio. Águas pluviais executado fora flores amoras (CB "Flor" rw-FE) e águas pluviais virgem que não tinham tocado qualquer tecidos de planta amora (rw-FE "Chão") de um único evento-umectante, mais um padrão ativo, à base de água floral extracto de airela (CB ativo -FE) (controle positivo) e SDW (controle negativo) foram submetidos a um bioensaio lamela à base de água e avaliados para o crescimento de c. fioriniae . CB "Flor" rw-FE tinha o mesmo nível de formação secundária de conidiation e apressório como o padrão CB ativo-FE na inoculação após 24 h, indicando que os dispositivos de coleta foram eficazes na captura de estimulantes florais lançados durante um umectantes-evento. Conídios totais é composto de primária (depositado), conídios e recém-formado conídios secundários. Letras indicam diferenças significativas no p < 0,05 de acordo com menos diferença Fischer significativa teste (LSD); conídios em maiusculas, totais; minúsculos, apressórios. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 6 : Fenologia cranberry baseado ch-FE bioensaio, inspeção visual. Gestão de doença para a fruta apodrecer fungos frequentemente envolve aplicações de fungicida de tempo de florescer. Aqui, extratos de baseado em clorofórmio amoras (ch-FE) de vários estágios de crescimento de cranberry ('Stevens') visualmente foram avaliados para o efeito de superfície ceras em c. fioriniae no pós-inoculação de 24 h. Ovários, coletados em junho (A), frutos imaturos coletados em julho e agosto (B, C), coletados de fruta colhida em outubro (D)e um controle SDW (E) foram inspecionadas para formação de appressorial (setas). Ovário ch-FE tinha a maior magnitude da formação appressorial, indicando que esta fenologia da planta (flor) é criticamente importante para o ciclo de vida de c. fioriniae. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Suplementar Figura 1: inflorescência de mirtilo. Flores de mirtilo foram coletadas para extrações durante plena floração (abril-maio, em Nova Jersey, EUA) (mostradas 'Bluecrop'). Observe a sobreposição de corolas/ovários de flores adjacentes e a arquitetura geral da inflorescência comparada ao suplementar a Figura 2 (airela na vertical). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Suplementar Figura 2: Cranberry eretas. Flores de amora foram coletadas para extrações durante plena floração (junho-julho, em Nova Jersey, EUA) (mostradas 'Stevens'). Note-se a estágios variados flor em uma inflorescência amora única (vertical) e o gancho, gotículas de água, mantendo a forma do corolla. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Suplementar Figura 3: implantação de águas pluviais de mirtilo (flor). Concluído o dispositivo de recolha de águas pluviais floral mirtilo, colocado diretamente sob um cluster de inflorescências. Observe o arame revestido de plástico usado para orientar verticalmente o dispositivo. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Suplementar Figura 4: implantação de águas pluviais de mirtilo (tronco). Dispositivo de recolha em águas pluviais floral mirtilo concluído, colocado a meio caminho para baixo a haste entre uma inflorescência e a coroa da sarça. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Suplementar Figura 5: implantação de águas pluviais de mirtilo (coroa). Concluído o dispositivo de recolha de águas pluviais floral de mirtilo, colocado na base da sarça (coroa). Nota de fios revestidos plásticos podem ser removidos se não for necessário. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Suplementar Figura 6: implantação de águas pluviais de mirtilo (terra). Concluído o dispositivo de recolha de águas pluviais virgem, colocado adjacente de arbustos de mirtilo. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Suplementar Figura 7: implantação de Cranberry da água da chuva (close-up). Concluído o dispositivo de recolha de águas pluviais floral amora, com 2 colunas enfiadas sob os laços do fio ordenadamente cruzados. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Suplementar Figura 8: implantação de águas pluviais Cranberry. Múltiplos completaram dispositivos amora floral da água da chuva, implantados em um pântano. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Suplementar 1 filme: extratos florais ativos, à base de água (ativo -FE). Suporte de vídeo suplementar as seguintes etapas 2.3-2.5.1. Mirtilo 'Bluecrop' as flores foram usadas. Por favor clique aqui para ver este vídeo. (Botão direito do mouse para fazer o download.)
Suplementar Movie 2: passiva, extratos florais à base de água (passe-FE). Suporte de vídeo suplementar seguinte etapas 3.3-3.4. Mirtilo 'Bluecrop' as flores foram usadas. Por favor clique aqui para ver este vídeo. (Botão direito do mouse para fazer o download.)
Suplementar Movie 3: implantação de dispositivos de captação de águas pluviais floral amora. Suporte de vídeo suplementar seguindo passo 6.4. Por favor clique aqui para ver este vídeo. (Botão direito do mouse para fazer o download.)
Os bioensaios para detectar a resposta c. fioriniae de extractos florais (FEs) foram desenvolvidos para a fruta mirtilo e cranberry podridão pathosystems mas podem ser facilmente adaptados a outras culturas hortícolas. O protocolo detalhado acima tem sido valiosa na aquisição de muitas importantes conjuntos de dados incluindo, mas não se limitando a: efeitos de FE em múltiplos isolados de inúmeros patógenos, tempo-curso informações referentes às fases de crescimento dos fungos na presença de vários FEs, comparação de técnicas de extração, inspeção de produtos químicos individuais na fioriniae c. crescimento e diferenciação, avaliação de órgão individual flor extrai, efeitos da temperatura na c. fioriniae , enquanto na presença de FE, efeitos de extrações de cera dependente de fenologia e efeitos florais da água da chuva. Através da utilização destas técnicas, dados gerados também deu uma compreensão muito mais clara de c. fioriniae vida dos estágios e parcialmente elucida porque o período de flor é tão crítico para o controle de muitas frutas apodrecendo patógenos.
Inicialmente, todas as flores foram processadas de forma idêntica para o ativo-FE, mas o processo de extração, mudou-se para a utilização de flores toda. Floral dissecção era demorada e teve muito pouco efeito sobre a bioatividade de FEs o resultante. No entanto, os órgãos florais individuais pode e tem sido avaliado usando este protocolo, mas muito cuidado deve ser tomado para não completamente macerar os tecidos florais (suplementar 1 filmecom precauções detalhadas no passo 2.3), como isto pode resultar em lançado compostos de fungos tóxicos/estático para o FE que poderia distorcer as avaliações microscópicas. Menos invasivas extrações como pass -FE (Supplemental Movie 2) e rw-FE são agora mais favoráveis devido a sua facilidade de aquisição. Além disso, essas técnicas de extração requerem apenas vácuo filtração para adquirir sugestões químicas florais biologicamente ativas.
As flores utilizadas em todas as extrações foram tipicamente refrigeradas para 0-3 dias antes da preparação do extrato. Um desafio do presente protocolo é de gerenciamento de tempo do volume de negócios FE (coleção campo através do armazenamento dos extratos). Isso foi agravado por numerosas amostras de várias fontes e datas. Flores congeladas não foram avaliadas de forma real, como descongeladas flores aparecem deterioradas e descoloridos. No entanto, uma vez que o FEs à base de água foram preparadas, repetidos de congelamento e descongelamento não tem mostrado nenhum efeito a bioatividade de fé, então contanto que o FE rapidamente são recongelados após preparação de bioensaio (FE viável para 3 ano de idade).
Extração baseado em clorofórmio permite a investigação de respostas do patógeno para ceras de superfície tridimensional floral/frutas em um plano bidimensional, através da evaporação do ch-FE em lamelas de vidro. No entanto, é improvável que o reais estruturas cristalinas das ceras depositadas de ch-FE são idênticas à superfície da qual foram recolhidos. Significado às técnicas suplementares devem ser implementadas se resposta fúngica a cera específica estruturas na vivo é o foco principal de investigação. Baseado em clorofórmio extrai precisa de manutenção de armazenamento mais do que as extrações à base de água. Além de manter o ch-FE extratos no escuro, a cultura de células PTFE revestida tubo tampões e parafilm envoltório precisam ser verificadas regularmente para detectar possíveis vazamentos por evaporação de vedação e substituído, se necessário.
O conceito de escoamento de águas pluviais floral de monitoramento está enraizado na ideia de promover ferramentas de monitoramento de sites específicos da doença. Os dispositivos de captação de água da chuva podem ser adaptados para muitas outras arquiteturas de planta, desde que o dispositivo de recolha capta água da chuva que tem executado fora flores. Essa abordagem fornece informações sobre ou não estímulo floral está presente no campo em um determinado momento e pode ser monitorado ao longo da temporada. Alternativamente, dispositivos de coleta podem ser implantados em vários locais do dossel para determinar até onde sugestões florais foram lavadas durante qualquer dado umectante-evento. No futuro, experiências, rw-FE ditarão quando aplicações de fungicida devem começar e quando eles podem acabar com segurança. Além disso, através da monitorização extrações de cera dependente de fenologia (protocolo seção 9), a importância do período de flor à biologia do patógeno tornou-se ainda mais evidente. Essa seção também foi incluída para demonstrar a flexibilidade destes bioensaios, fornecendo métodos que permitem a comparação lado a lado das ceras de superfície de anfitrião que são temporalmente separados. Os dados gerados usando as técnicas de extração floral e bioensaios representam indicadores tangíveis da estimulação do patógeno, classes químicas específicas importantes à biologia do patógeno e alvos de estratégias de controle futuro.
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecemos a William S. Haines, fundo de pesquisa dotado de Cranberry Sr. e a New Jersey Blueberry e Cranberry Research Council, Inc. para suporte. Agradecemos também a Jennifer Vaiciunas (orientação e preparações florais), Christine Constantelos (cultura fúngica e preparações florais), David Jones (preparações florais e extrações), Langley Oudemans (preparações florais, filmagem/fotografia), Jesse Lynch (preparações florais), Roxanne Tumnalis (apoio geral) e inúmeros estagiários de estudante/verão.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.22 µm pore size, acetate sterilizing filter | VWR | 101102-280 | Blueberry floral extract (FE) clarification |
200-1000 µl pipette with tips | - | - | Equipment, any make within range will be adequate |
40-200 µl pipette with tips | - | - | Equipment, any make within range will be adequate |
5-40 µl pipette with tips | - | - | Equipment, any make within range will be adequate |
Air spray gun disposable paint spray cup with connection adapter | Harbor Freight | 97098 | Blueberry rainwater (rw-)FE collection |
Autoclave | Amsco | 3011 | Equipment, media preparation |
Bar mesh matting (plastic mesh sheet) | Winco | BL-240 | Passive (pass)-FE collection |
Benchtop timer | Fisher Scientific | 06-662-47 | Equipment, FE preparation |
Black pressure/vacuum hose | VWR | 62994-795 | Vacuum filter component |
Buchner funnel | Coors USA | 60240 | Vacuum filter component, accepts 55 mm filter paper disks |
Bunsen burner | - | - | Equipment |
Calcium carbonate | Fisher Scientific | C64-500 | Media component |
Centrifuge | Sorvall | RC 5B Plus | Equipment |
Centrifuge tubes (15 ml) | Fisher Scientific | 05-527-90 | Equipment |
Centrifuge tubes (50 ml) | VWR | 10025-694 | Equipment, rw-FE collection |
Cheesecloth (grade 50) | Fisher Scientific | AS240 | Equipment, FE preparation |
Chloroform | VWR | JT9175-3 | Chemical, trichloromethane: assay grade, ≥ 99% pure, for molecular biology, peroxide-free |
Corn Meal Agar (CMA) | Fisher Scientific | B11132 | Pre-mix media, isolate storage on slants |
Cotton-blue stain | Sigma-Aldrich | 61335 | Lactophenol cotton-blue stain |
Difco Agar | VWR | 90004-032 | Media component |
Drill-press | Delta | - | Equipment, rw-FE collection |
EASYpure LF Ultrapure water | Barnstead | D738 | Equipment, deionized water source |
Ethanol (95%) | - | - | Chemical |
Filter flask (500 ml) | Pyrex | No. 5340 | Vacuum filter component |
Fume hood | Hamilton | - | Equipment, chloroform usage |
Funnel (7 X 7 cm) | VWR | 60820-110 | Cranberry rw-FE collection, FE preparation |
Generic glass slide | Fisher Scientific | 22-038-101 | Bioassay conductance |
Generic plastic pump spray bottle | VWR | 16126-454 | pass-FE collection, at least 250 ml capacity |
Glass cell culture tubes | - | - | Storage of ch-FE |
Glass coverslips (22 x 22 mm) | Fisher Scientific | 12-542B | Bioassay conductance |
Glass Van Tieghem cells (hand cut glass tubes) | - | - | Chloroform (ch)-FE bioassay, (8 mm OD 6 mm ID) |
Glass-pipette (1-100 µl) | Hamilton Co. Inc. | #710 | ch-FE bioassay |
Glycerol | Sigma-Aldrich | G5516 | Lactophenol cotton-blue stain |
Hemocytometer | Bright-Line | 5971R10 | Equipment |
Lactic acid | Sigma-Aldrich | W261106 | Lactophenol cotton-blue stain |
Laminar flow hood | Labconco | 3730400 | Equipment, sterile work environment |
Metal probe (generic) | - | - | Equipment |
Microcentrifuge tubes (2 ml) | Fisher Scientific | 05-408-138 | Aqueous treatment mixture storage and preparation |
Microscope, Leica DMLB | Leica | 020-519.010 | Equipment |
Mortar (ceramic) | Coors USA | 60313 | Vacuum filter component |
Nitrile gloves | Fisher Scientific | 19-130-1597D | Flower collection |
Paper disks (cut paper towels) | Office Basics | KCC01510 | humidity control in bioassay |
Parafilm | Bemis | PM-996 | Plastic paraffin film |
Pestle (ceramic) | Coors USA | 60314 | Vacuum filter component |
Phenol crystals | Fisher Scientific | A92-100 | Lactophenol cotton-blue stain |
Plastic bags (~100 mm X 152 mm) | Uline | S1294 | Equipment, flower refrigeration |
Plastic cell culture dishes (9 cm diameter) | Fisher Scientific | FB0875712 | (Petri dish), bioassay conductance |
Polytetrafluoroethylene (PTFE) lined caps | VWR | 60927-228 | Storage of ch-FE |
Pyrex beakers (100 ml) | Pyrex | No. 1000 | Preparation of ch-FE |
Pyrex bread-pan | - | - | pass-FE collection |
Pyrex graduated cylinder | - | - | Equipment, FE preparation |
Sealed plastic container (30 mm X 13 mm X 7 mm) | - | - | Bioassay conductance |
Sharp-pointed dissecting scissors | Fisher Scientific | 8940 | Equipment, to cut cheese-cloth and paper disks |
Stainless steel mesh strainer | VWR | 470149-756 | Preparation of ch-FE |
Step drill bit (step-bit) | Dewalt | - | Equipment, rw-FE collection |
Sterile loop (combi-loop) | Fisher Scientific | 22-363-602 | Culture preparation |
Telephone wire (internal wires) | - | - | Blueberry rw-FE collection |
Test tube basket | VWR | 470137-792 | Readily available substitution for plastic mesh [strawberry] basket |
V8 Juice | Campbell's Soup Company | - | Fungal media component |
Vintage plastic mesh [strawberry] baskets | Donation | - | pass-FE collection, can substitute for test tube basket (470137-792) |
Vortex Genie (Vortex) | Fisher Scientific | 12-812 | Spore suspension preparation |
Whatman No. 1 Qualitative 55 mm circles | Whatman | 1001-055 | Vacuum filter component |
White plastic twist ties (100 mm) | Uline | S-566W | Cranberry rw-FE collection |
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