Princípios do site-specific Recombinase (SSR) Tecnologia

Resumo

O advento da tecnologia local específico recombinase (SSR) eo sistema Cre / lox tem levado a inúmeros avanços em biologia molecular, e provou-se como uma valiosa ferramenta para avaliar a função do gene em animais transgênicos. Esta entrevista aborda o mecanismo de recombinação sítio específica por Ciclização recombinase (CRE) e como o uso desta enzima tem levado ao desenvolvimento de mutagênese condicional, que tem vantagens significativas sobre os tradicionais knock out estratégias.

Resumo

Site-specific recombinase tecnologia (SSR) permite a manipulação da estrutura dos genes para explorar a função do gene e se tornou uma ferramenta integrante da biologia molecular. Site-specific recombinases são proteínas que se ligam a seqüências de DNA-alvo distintos. O sistema Cre / lox foi descrita pela primeira vez em bacteriófagos durante a década de 1980. Cre recombinase é uma topoisomerase tipo I que catalisa site-specific recombinação de DNA entre dois loxP (locus de X-over P1) sites. O sistema Cre / lox não requer cofatores. Seqüências distintas LoxP contêm sítios de ligação para recombinases Cre que envolvem uma seqüência núcleo direcional onde a recombinação e rearranjo ocorre. Quando as células contêm sites loxP e expressar a recombinase Cre, um evento de recombinação ocorre. Dupla fita de DNA é cortada em ambos os locais loxP pelo Cre recombinase, reorganizados, e ligados ("tesoura e cola"). Produtos do evento de recombinação depende da orientação relativa das seqüências assimétrica.

Tecnologia SSR é freqüentemente usado como uma ferramenta para explorar a função do gene. Aqui, o gene de interesse é flanqueado com Cre-alvo locais loxP ("floxed"). Os animais são então cruzados com animais expressando a recombinase Cre sob o controle de um promotor de tecidos específicos. Nos tecidos que expressam a recombinase Cre se liga a seqüências alvo e extirpa o gene floxed. Deleção do gene controlado permite a investigação da função dos genes em tecidos específicos e em momentos distintos. Análise da função do gene empregando tecnologia SSR --- mutagênese condicional - tem vantagens significativas sobre os tradicionais knock-outs onde deleção do gene é freqüentemente letal.