Принципы сайт-специфического рекомбиназы (SSR) Технология

Резюме

Появление на конкретных участках рекомбиназы (SSR) технологию и Cre / жидкий кислород системы привело к многочисленным достижениям в области молекулярной биологии, а также зарекомендовал себя как ценный инструмент для оценки функции генов в трансгенных животных. Это интервью обсуждает механизм конкретного участка рекомбинации Циклизация рекомбиназы (CRE) и как использование этого фермента привело к развитию условных мутагенеза, который имеет значительные преимущества по сравнению с традиционными выбить стратегий.

Аннотация

Сайт-специфическая рекомбиназы (SSR) технология позволяет манипуляций генной структуры для изучения функций генов и стала неотъемлемым инструментом молекулярной биологии. Сайт-специфическая рекомбиназ являются белки, которые связываются с различных последовательностей ДНК-мишени. Cre / жидкий кислород система была впервые описана в бактериофагов в течение 1980-х. Cre рекомбиназы является топоизомеразы типа I, который катализирует конкретных участков рекомбинации ДНК между двумя loxP (локус X-над P1) сайтов. Cre / жидкий кислород система не требует каких-либо кофакторов. LoxP последовательности содержат различные сайты связывания для рекомбиназ Cre, которые окружают ядро ​​направленной последовательности, где рекомбинации и перестройка происходит. Когда клетки содержат loxP сайтов и выразить Cre рекомбиназы рекомбинация происходит событие. Двухцепочечной ДНК разрезается на обоих loxP сайтов Cre рекомбиназы перестроен, и лигируют («ножницы и клей"). Продукты рекомбинации событие зависит от относительной ориентации асимметричных последовательностей.

ССР технология часто используется как инструмент для исследования функции генов. Здесь интерес гена примыкает с Cre целевых сайтов loxP ("floxed"). Животные затем скрещивали с животными выражения Cre рекомбиназы под контролем тканеспецифические промоутера. В тканях, которые выражают Cre рекомбиназы он связывается с целевой последовательности и акцизов floxed гена. Контролируемые удаления гена позволяет исследовать функции генов в специфических тканях и в различных точках времени. Анализ функции гена использованием технологии ССР --- условного мутагенеза - имеет значительные преимущества по сравнению с традиционными нокауты, где ген удаления часто смертельны.