JoVE Journal

Bioengineering

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Exposing the Airway and Excising the Vasculature and Alveolar Tissue from a Human and Pig Lung

Transcrição

Comece usando uma técnica de espalhamento com tesoura cirúrgica para expor cuidadosamente as vias aéreas do pulmão do porco obtida. Primeiro, localize a maior via aérea, que normalmente tem um diâmetro de dois a quatro centímetros. Em seguida, use um par de pinças para palpar o comprimento da via aérea até uma profundidade de uma polegada.

Finalmente, segure a tesoura cirúrgica paralela à via aérea e insira as pontas fechadas no tecido ao redor da via aérea invisível. Abra suavemente a tesoura cirúrgica para separar a membrana circundante. Retire a tesoura e evite cortar qualquer tecido.

Repita esse processo intermitentemente para continuar expondo a via aérea. Com a tesoura cirúrgica, cortar a via aérea nos pontos de ramificação e dissecar ao longo de cada ramo de forma independente. Regiões severas das vias aéreas, uma vez confiantes de que as extremidades intactas permanecerão identificáveis e facilmente localizadas.

Coloque regiões cortadas da via aérea no tubo correspondente, com o tamanho das regiões cortadas variando entre um a cinco centímetros de comprimento, e a largura variando de acordo com a localização relativa ao longo da árvore das vias aéreas. Pressione suavemente a vasculatura para expô-la e retire-a lentamente das vias aéreas. Deixe a vasculatura esticar um pouco e use uma tesoura cirúrgica para separá-la ainda mais da via aérea.

Evite aplicar muita pressão, pois pode rasgar a vasculatura. Uma vez exposto o ponto de ramificação na árvore vascular, inserir as pontas fechadas da tesoura cirúrgica logo abaixo do ponto de ramificação e entre as duas regiões de vasculatura correspondentes. Em seguida, abra lentamente a tesoura para espalhar os tecidos subjacentes.

Intermitentemente, use uma pinça para remover o tecido espalhado e qualquer outro tecido que envolva diretamente a vasculatura. Cortar a vasculatura em um ponto de ramificação quando ela cobrir regiões da via aérea ou se tornar incômoda para qualquer etapa de dissecção. Em seguida, dissecar ao longo de cada ramo independentemente.

Confirme se as duas extremidades da vasculatura permanecem identificáveis e facilmente localizadas para posterior dissecção. Em seguida, corte as regiões da vasculatura. Para excisar o tecido alveolar, localize uma região do tecido que não esteja nas proximidades da via aérea ou da vasculatura.

Aperte uma pequena região do tecido que parece ser desprovida de vasculatura ou vias aéreas e rasgue o tecido pinçado do pulmão. O tecido alveolar está amplamente presente no pulmão e deve ser removido durante toda a dissecção. Observe a região do tecido removido e confirme se é ou não tecido alveolar.

Esse procedimento foi aplicado a um modelo de pulmão humano. Uma análise por espectrometria de massa dos tecidos excisados indicou que a composição da MEC varia entre regiões individuais dos pulmões decelularizados, incluindo a MEC pulmonar total, a MEC enriquecida com alveolar, a MEC das vias aéreas e a MEC vasculatura. Em pulmões decelularizados obtidos de pacientes sem história de doença pulmonar, as proteínas associadas à membrana basal aumentaram na MEC enriquecida alveolar.

Ao mesmo tempo, a MEC das vias aéreas foi enriquecida em proteína associada à cartilagem da MEC, como o agrecan. A MAC vascular foi aumentada com fibronectina e outras proteínas solúveis da MEC associadas aos vasos sanguíneos.

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